張 毅，趙丹丹 ，莫芳芳，高思華

（1.北京開放大學(xué)，北京 100081； 2.北京中醫(yī)藥大學(xué)，北京 100029）

糖尿?。―M）是由于胰島功能低下，無法分泌足夠量的胰島素，或胰島素分泌正常，但機(jī)體對(duì)其敏感性下降所導(dǎo)致的一類內(nèi)分泌代謝性疾病。 2 型糖尿?。═2DM）為后天獲得型DM，受遺傳因素影響，與生活方式和膳食結(jié)構(gòu)密切相關(guān)。 T2DM 起病緩慢，初期以血糖升高為主要表現(xiàn)，可無明顯癥狀，多由體檢確診，隨著病程的推進(jìn)可出現(xiàn)胰島素抵抗并伴發(fā)多器官損傷和功能異常。肝臟是胰島素的重要靶器官，也是脂質(zhì)代謝的主要場所。正常情況下，機(jī)體在胰島素作用下維持脂代謝平衡，肝臟的脂質(zhì)合成和分解也處于動(dòng)態(tài)平衡狀態(tài)。 當(dāng)T2DM 發(fā)生后，脂質(zhì)代謝出現(xiàn)紊亂，過多的脂質(zhì)沉積在肝臟內(nèi)，導(dǎo)致非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）的發(fā)生［1］。 一項(xiàng) 關(guān) 于DM 的流行病學(xué)研究顯示，在DM 患者中，NAFLD的發(fā)病率逐年升高，兩者具有復(fù)雜的雙向關(guān)系［2］。在中國，NAFLD 與 T2DM 的流行趨勢相平行［3］，合并 NAFLD 的 T2DM 患者占 T2DM 患者總?cè)藬?shù)的90%［4］。 隨著研究的不斷深入，NAFLD 的發(fā)病機(jī)制從“二次打擊”學(xué)說逐漸完善進(jìn)化到“多重打擊”學(xué)說［5］。 其中，胰島素抵抗、慢性炎癥、氧化應(yīng)激等在T2DM 合并NAFLD 的發(fā)生發(fā)展中始終占有重要位置。 腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）在調(diào)節(jié)肝臟脂質(zhì)代謝方面發(fā)揮著重要作用。 AMPK 經(jīng)活化后，可通過調(diào)節(jié)脂肪代謝相關(guān)靶蛋白活性來維持肝臟脂質(zhì)穩(wěn)態(tài)［6］。 有研究表明，高脂飲食誘導(dǎo)的大鼠肝臟中磷酸化的 AMPK 表達(dá)量減少，核因子 κB（NF-κB）的表達(dá)量增多，AMPK 可能是通過調(diào)節(jié)NF-κB 的活性來減輕肝損傷的［7-8］。

高思華教授多年來致力于臟腑相關(guān)理論及中醫(yī)藥防治內(nèi)分泌疾病的研究及實(shí)踐，臨床治療T2DM經(jīng)驗(yàn)豐富，效果顯著。 高教授立足于《黃帝內(nèi)經(jīng)》，結(jié)合多年臨證經(jīng)驗(yàn)，分析、總結(jié)、歸納了臨床大量T2DM患者的病因、病機(jī)特點(diǎn)，提出“肝脾腎三臟同調(diào)，辨證治療T2DM”的觀點(diǎn)［9-10］，并在此基礎(chǔ)上創(chuàng)制了降糖消渴顆粒等系列中藥制劑。 前期實(shí)驗(yàn)證實(shí)降糖消渴顆粒具有降低T2DM 小鼠血糖、血脂，緩解胰島素抵抗，改善肝臟糖脂代謝紊亂，降低氧化應(yīng)激水平，減輕糖尿病肝損傷的作用［11-13］。 本研究擬在此基礎(chǔ)上，觀察降糖消渴顆粒對(duì)糖尿病小鼠肝臟AMPK 信號(hào)通路和NF-κB 炎癥信號(hào)通路相關(guān)因子表達(dá)的影響，從炎癥角度進(jìn)一步探討降糖消渴顆粒治療糖尿病、改善糖尿病肝臟脂肪變性的可能作用機(jī)制。

1 材料

1.1 動(dòng)物及飼料

雄性 KK-Ay 小鼠 40 只、C57BL/6J 小鼠 8 只，8周齡，購于北京華阜康生物科技有限公司［許可證號(hào)SCXK（京）2012-0001］，北京中醫(yī)藥大學(xué)屏障環(huán)境動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室飼養(yǎng)［合格證號(hào) SCXK（京）2011-0024］。 環(huán)境溫度 22～24 ℃，相對(duì)濕度（40±10）%，12 h/12 h 光照明暗周期。 飼養(yǎng)期間，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物自由進(jìn)食及飲水，高脂飼料（20.0%蔗糖、2.5%膽固醇、10.0%豬油、1.0%膽酸鈉、66.5%基礎(chǔ)飼料）及普通飼料均購自北京科澳協(xié)力飼料有限公司。

本動(dòng)物實(shí)驗(yàn)經(jīng)北京中醫(yī)藥大學(xué)醫(yī)學(xué)與實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理委員會(huì)準(zhǔn)許（倫理批號(hào)：BUCM-4-2016061701-3001）。

1.2 藥物

降糖消渴顆粒由生地黃、山萸肉、生曬人參、茯苓、丹參、黃連等10 味藥按照一定比例組成，根據(jù)制劑工藝設(shè)計(jì)的依據(jù)及處方中各藥物有效成分的化學(xué)性質(zhì)，選擇適宜的提取方法［11-13］，生藥購自河北安國藥材批發(fā)市場，經(jīng)北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院中藥科技發(fā)展部鑒定為正品，并制成顆粒，每克顆粒含5.01 g生藥。 鹽酸吡格列酮片（每片15 mg，北京太洋藥業(yè)有限公司，批號(hào)140908）。 給藥藥品均保存于4 ℃條件下，用前去離子水配制成所需濃度混懸液，超聲30 min 使其充分溶解。

1.3 主要儀器與試劑

Trizol 試劑（美國 Invitrogen 公司，批號(hào) 1382737）、SYBR Mix 試劑盒（美國 ABI 公司，批號(hào) 1501480）、PCR 引物設(shè)計(jì)合成（上海生工生物工程有限公司）、實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（RT-qPCR）檢測儀器（美國ABI 公司，型號(hào) Step One PLUS）、電動(dòng)勻漿器（德國IKA 儀器設(shè)備有限公司，型號(hào)T10BS25）、Merinton超微量紫外分光光度計(jì)［美林恒通（北京）儀器有限公司上海分公司，型號(hào)SMA 4000］、半裙邊PCR 板（美國 ABI 公司，規(guī)格：96 孔）、封板膜（美國 ABI 公司，規(guī)格：142×78 mm）。

2 方法

2.1 動(dòng)物模型制備

本實(shí)驗(yàn)所有小鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)1 周后，給予KK-Ay小鼠高脂飼料飼養(yǎng)造模，期間C57BL/6J 小鼠繼續(xù)食用普通飼料。 4 周后，禁食不禁水12 h，檢測各組小鼠空腹血糖水平，以空腹血糖≥13.9 mmol/L 為成模標(biāo)準(zhǔn)，均造模成功。

2.2 分組及給藥方法

將誘導(dǎo)成模后的糖尿病小鼠隨機(jī)分為模型組、吡格列酮組及降糖消渴顆粒低（1.75 g/kg）、中（3.50 g/kg）、高（7.00 g/kg）劑量組，每組 8 只。 8 只同周齡C57BL/6J 小鼠作為正常組，普通飼料喂養(yǎng)。 降糖消渴顆粒各組小鼠給予等體積（劑量不同，濃度有差異）中藥混懸液灌胃；吡格列酮組小鼠予6.5 mg/kg吡格列酮灌胃治療；模型組和正常組小鼠予等體積蒸餾水灌胃。 治療周期為10 周，期間每日上午灌胃 1 次。

2.3 檢測指標(biāo)與方法

2.3.1 RT-qPCR 檢測肝臟相關(guān)炎癥因子mRNA 表達(dá) 治療周期結(jié)束后，肝組織取材，4 ℃預(yù)冷的生理鹽水沖洗干凈，分裝到提前標(biāo)記好的EP 管中，液氮保存?zhèn)溆谩?檢測時(shí)，稱取100 mg 肝組織，Trizol 法提取總RNA，檢測純度及濃度后，將提取的總RNA 稀釋成0.1 μg/μL，按照反轉(zhuǎn)錄試劑盒操作說明，建立20 μL 反應(yīng)體系，反轉(zhuǎn)錄成單鏈 cDNA。 進(jìn)一步用DEPC 水 10 倍稀釋 cDNA，以 SYBR Mix（10 μL）+c DNA 模板（2 μL）+ 上/下游引物（各 1 μL）+ 無核酸酶超純水（6 μL），反應(yīng)總體積為 20 μL 的反應(yīng)體系，使用RT-qPCR 檢測儀進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)。 反應(yīng)條件如下：50 ℃，2 min；95 ℃，10 min；95 ℃，20 s；60 ℃，15 s。40 個(gè)循環(huán)，結(jié)束后 4 ℃保存。 每組取 4 個(gè)樣本，各樣本上樣設(shè)2 個(gè)復(fù)孔。 擴(kuò)增結(jié)果以CT 值表示，各樣本mRNA 表達(dá)結(jié)果以樣本中β 肌動(dòng)蛋白（β-actin）的CT值為基準(zhǔn)進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化計(jì)算，得到相對(duì)表達(dá)量，采用2-ΔΔCt計(jì)算。 ΔΔCt 計(jì)算公式如下：ΔΔCt=（Ct目的基因-Ctβ-actin）實(shí)驗(yàn)組- （Ct目的基因- Ctβ-actin）對(duì)照組。 引物序列見表 1。

表1 炎癥因子相關(guān)指標(biāo)引物序列

2.3.2 RT-qPCR 法檢測胰島素信號(hào)通路相關(guān)基因的表達(dá) 實(shí)驗(yàn)操作及結(jié)果計(jì)算方法同2.3.1，引物序列見表2。

表2 胰島素信號(hào)通路相關(guān)指標(biāo)引物序列

2.3.3 RT-qPCR 法檢測AMPK 信號(hào)通路相關(guān)基因的表達(dá) 實(shí)驗(yàn)操作及結(jié)果計(jì)算方法同2.3.1，引物序列見表3。

表3 AMPK 信號(hào)通路相關(guān)指標(biāo)引物序列

2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

實(shí)驗(yàn)結(jié)果的數(shù)據(jù)分析用SPSS 19.0 軟件進(jìn)行處理，計(jì)量資料以表示。 組間比較采用單因素方差分析。 取α=0.05 為檢驗(yàn)水準(zhǔn)。

3 結(jié)果

3.1 降糖消渴顆粒對(duì)T2DM 小鼠肝臟NF-κB、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細(xì)胞介素-1β（IL-1β）mRNA表達(dá)的影響

模型組小鼠肝組織中 NF-κB、TNF-α 的 mRNA 表達(dá)量較正常組顯著上升，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。治療后，降糖消渴顆粒中、低劑量組 NF-κB、TNF-α 的mRNA較模型組顯著下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01，P＜0.05）。 見表 4。

表4 各組小鼠肝臟 NF-κB、TNF-α、IL-1β 的 mRNA 表達(dá)（）

表4 各組小鼠肝臟 NF-κB、TNF-α、IL-1β 的 mRNA 表達(dá)（）

注：NF-κB 為核因子 κB，TNF-α 為腫瘤壞死因子 -α，IL-1β 為白細(xì)胞介素-1β，RQ 為相對(duì)表達(dá)量。 與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。

組別 劑量/（g·kg-1） 只數(shù) NF-κB TNF-α IL-1β正常組 — 8 1.07±0.39** 1.06±0.40** 1.01±0.17模型組 — 8 3.15±0.57 7.60±1.66 4.79±3.51吡格列酮組 0.0065 8 2.10±0.73 8.02±3.40 1.78±0.69降糖消渴顆粒高劑量組 7.0000 8 2.72±0.77 4.59±1.32 1.42±0.63降糖消渴顆粒中劑量組 3.5000 8 1.43±0.22** 4.09±1.14* 1.13±0.32降糖消渴顆粒低劑量組 1.7500 8 1.56±0.20** 3.03±1.90* 1.62±0.27

3.2 降糖消渴顆粒對(duì)T2DM 小鼠肝臟胰島素信號(hào)通路相關(guān)基因表達(dá)的影響

模型組T2DM 小鼠肝組織胰島素受體底物-1（IRS-1）的mRNA 表達(dá)量較正常組顯著減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。 治療后，吡格列酮組 IRS-1 mRNA 較模型組上升，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；降糖消渴顆粒高劑量組蛋白激酶Cε（PKCε）mRNA較模型組降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。 見表5。

表5 各組小鼠肝臟IRS-1、PKCε 基因表達(dá)量比較（）

表5 各組小鼠肝臟IRS-1、PKCε 基因表達(dá)量比較（）

注：IRS-1 為胰島素受體底物 1，PKCε 為蛋白激酶 Cε，RQ 為相對(duì)表達(dá)量。 與模型組比較，**P＜0.01。

組別 劑量/（g·kg-1） 只數(shù) IRS-1 PKCε正常組 — 8 1.07±0.43** 1.06±0.36模型組 — 8 0.30±0.15 1.50±0.14吡格列酮組 0.0065 8 0.76±0.16** 1.41±0.16降糖消渴顆粒高劑量組 7.0000 8 0.34±0.11 1.04±0.11**降糖消渴顆粒中劑量組 3.5000 8 0.53±0.16 1.44±0.24降糖消渴顆粒低劑量組 1.7500 8 0.60±0.21 1.39±0.22

3.3 降糖消渴顆粒對(duì)T2DM 小鼠肝臟AMPKα、過氧化物酶體增殖物激活受體α（PPARα）mRNA 表達(dá)的影響

模型組小鼠肝臟 AMPKα、PPARα 的 mRNA 較正常組小鼠均顯著下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。治療后，吡格列酮組AMPKα mRNA 較模型組顯著上升，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；降糖消渴顆粒高劑量組PPARα mRNA 較模型組顯著上升，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；降糖消渴顆粒中、低劑量組AMPKα mRNA 較模型組顯著上升，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01，P＜0.05）。 見表 6。

表6 各組小鼠肝臟AMPKα、PPARα 基因表達(dá)量比較（）

表6 各組小鼠肝臟AMPKα、PPARα 基因表達(dá)量比較（）

注：AMPKα 為腺苷酸活化蛋白激酶α，PPARα 為過氧化物酶體增殖物激活受體α，RQ 為相對(duì)表達(dá)量。 與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。

組別 劑量/（g·kg-1） 只數(shù) AMPKα PPARα正常組 - 8 1.01±0.14** 1.02±0.19**模型組 - 8 0.61±0.05 0.41±0.07吡格列酮組 0.0065 8 0.85±0.08** 0.75±0.12降糖消渴顆粒高劑量組 7.0000 8 0.68±0.09 1.43±0.71**降糖消渴顆粒中劑量組 3.5000 8 1.03±0.14** 0.78±0.21降糖消渴顆粒低劑量組 1.7500 8 0.79±0.08* 0.62±0.06

4 討論

降糖消渴顆粒是基于高思華教授“肝脾腎三臟同調(diào)，辨證治療T2DM”學(xué)術(shù)思想創(chuàng)立的系列復(fù)方之一，針對(duì)T2DM 最常見的“肝脾腎氣陰兩虛，挾熱挾瘀”證型而設(shè)［11］。 中醫(yī)學(xué)認(rèn)為肝主疏泄，可通調(diào)全身氣機(jī)，推動(dòng)氣血津液的正常運(yùn)行；脾主運(yùn)化，水谷精微在脾氣散精作用下化生為氣血，濡養(yǎng)四肢百骸，脾亦可統(tǒng)攝血液，使其在脈管內(nèi)流動(dòng)；而腎臟主藏先天之精，調(diào)控人體的生長、發(fā)育和生殖功能，并與脾胃生成的后天之精互相滋養(yǎng)、轉(zhuǎn)化。 三臟協(xié)同作用，共同維持人體氣血津精的生成、流通、輸布、轉(zhuǎn)化，任何一臟損傷，都會(huì)漸次波及其余兩臟，導(dǎo)致三臟同病的局面，引發(fā) DM［9］。 脾胃為后天之本，氣血生化之源，腎精充足則肝、脾功能正常，氣血生化有源，疏泄有常。 腎臟虛弱、脾胃功能失?；蚋问栊梗染⑹в谡］敳嫁D(zhuǎn)化，痰濁、瘀血叢生；若停留在肝臟中，則肝失調(diào)達(dá)，疏泄無能，氣郁化熱，進(jìn)一步化生痰濁、瘀血，這一過程相當(dāng)于現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的糖脂代謝紊亂狀態(tài)。

胰島素生理功能的正常發(fā)揮有賴于胰島素信號(hào)的傳導(dǎo)，胰島素抵抗（IR）作為T2DM 的重要發(fā)病機(jī)制之一，貫穿T2DM 及其并發(fā)癥發(fā)生發(fā)展的始終。 在不同的胰島素受體底物（IRS）中，IRS-1 介導(dǎo)的胰島素信號(hào)通路作用最為廣泛，當(dāng)其功能異常時(shí)，胰島素的靶組織骨骼肌、肝臟、脂肪等均可發(fā)生 IR［14］。 PKCε是PKC 家族成員之一，在肝臟中高表達(dá)。 T2DM 狀態(tài)下，脂肪被大量動(dòng)員，分解作用增強(qiáng)，過多的脂質(zhì)進(jìn)入肝臟堆積，激活PKCε，抑制IRS-1 的活性，肝臟胰島素信號(hào)通路傳導(dǎo)失常，引發(fā) IR［15-17］。 本實(shí)驗(yàn)中，模型組小鼠IRS-1 的mRNA 表達(dá)量較正常小鼠明顯下調(diào)，說明經(jīng)過高脂飲食誘導(dǎo)，實(shí)驗(yàn)小鼠出現(xiàn)了嚴(yán)重的IR。 吡格列酮上調(diào)了肝臟中IRS-1 mRNA 的表達(dá)，提示吡格列酮可改善肝臟IR。 降糖消渴顆粒對(duì)肝臟中IRS-1 mRNA 表達(dá)并未體現(xiàn)出明顯作用，可能是因?yàn)閷?shí)驗(yàn)小鼠所有胰島素靶器官都存在嚴(yán)重的IR，并不僅僅局限于肝臟內(nèi)，IRS-1 雖然在全身廣泛分布，但肝臟并不是其特異性高表達(dá)部位。 從肝臟提取的總mRNA 中，IRS-1 mRNA 含量較少，在各組實(shí)際表達(dá)量相差不大的情況下不易進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)比較。 從表達(dá)趨勢上可以分析，中、低劑量降糖消渴顆粒對(duì)IRS-1 mRNA 的表達(dá)量具有一定上調(diào)作用。本實(shí)驗(yàn)正常組小鼠PKCε mRNA 表達(dá)量組內(nèi)差異太大，對(duì)照性不佳，但從表達(dá)趨勢上可以看出糖尿病小鼠肝臟內(nèi)的PKCε mRNA 表達(dá)上調(diào)，高劑量降糖消渴顆粒下調(diào)了肝臟PKCε mRNA 表達(dá)，與模型組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 吡格列酮可通過激活過氧化物酶體增殖物激活受體γ（PPARγ）受體，增強(qiáng)IR 狀態(tài)下靶組織對(duì)胰島素的敏感性。 由于PPARγ 在肝臟中表達(dá)較少，肝組織中PPARγ 的激活不足以大幅減輕肝臟的 IR，PKCε mRNA 表達(dá)變化不明顯。 此處提示，高劑量降糖消渴顆粒下調(diào)PKCε mRNA 表達(dá)的作用可能不是通過激活PPARγ 受體來實(shí)現(xiàn)的，其作用途徑尚需進(jìn)一步研究。 此處mRNA 初篩結(jié)果不佳，因此未繼續(xù)做相關(guān)蛋白表達(dá)量的檢測。

NF-κB 是調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)的重要因子，也是氧化應(yīng)激的重要靶點(diǎn)，受內(nèi)環(huán)境中高糖、高脂的影響。T2DM 合并NAFLD，特別是非酒精性脂肪性肝炎狀態(tài)下，肝臟中NF-κB 表達(dá)顯著增加，且與疾病的嚴(yán)重程度呈正相關(guān)，NF-κB 也可能是飽和脂肪酸誘導(dǎo)肝細(xì)胞發(fā)生“脂毒性”和炎癥反應(yīng)的原因之一［18］。 在糖尿病肝損傷的發(fā)生過程中，NF-κB 可被活性氧（ROS）激活，促進(jìn) TNF-α、白細(xì)胞介素-1（IL-1）等炎癥細(xì)胞因子表達(dá)，降低細(xì)胞對(duì)胰島素的敏感性，阻礙胰島素信號(hào)向胞內(nèi)的傳遞，導(dǎo)致機(jī)體IR 發(fā)生，引發(fā)肝臟脂質(zhì)代謝紊亂。 而肝臟脂質(zhì)代謝紊亂產(chǎn)生的還原性代謝產(chǎn)物反過來加重肝臟氧化應(yīng)激反應(yīng)，進(jìn)一步激活NF-κB 介導(dǎo)炎癥反應(yīng)［19］。 TNF-α、IL-1 和 NF-κB 互相促進(jìn)分泌及合成，共同介導(dǎo)了炎癥反應(yīng)和IR 的發(fā)生。 AMPK 是治療糖尿病脂質(zhì)代謝紊亂的重要靶點(diǎn)，在肝臟的作用主要表現(xiàn)為抑制肝臟脂質(zhì)合成，促進(jìn)脂質(zhì)氧化［20］。 PPARα 受體作為脂類感受器，受AMPK 調(diào)控，在機(jī)體肝臟中特異性高表達(dá)，可以調(diào)節(jié)肝臟脂質(zhì)代謝的各個(gè)方面。 除此之外，AMPK 的激活可通過多種途徑抑制NF-κB 信號(hào)通路的激活，減少炎癥因子的表達(dá)［21］。 本實(shí)驗(yàn)中模型組小鼠肝臟中NF-κB、TNF-α 的基因表達(dá)較正常組小鼠顯著上調(diào)，說明肝臟中發(fā)生了嚴(yán)重的炎癥反應(yīng)。 降糖消渴顆粒低、中劑量組顯著下調(diào)了 NF-κB 和 TNF-α mRNA 的表達(dá)，提示降糖消渴顆粒具有良好的抗炎、減少炎癥因子分泌的作用。 肝臟中 AMPKα、PPARα mRNA的表達(dá)明顯下調(diào)，是DM 小鼠NAFLD 的重要原因之一。 降糖消渴顆粒低、中劑量組顯著上調(diào)了肝臟中AMPKα mRNA 表達(dá)，且在3.50 g/kg 劑量范圍內(nèi)，其作用體現(xiàn)出了一定的劑量依賴性。 結(jié)合炎癥相關(guān)指標(biāo)的變化，推論降糖消渴顆粒的抗炎作用可能是通過AMPKα 的調(diào)節(jié)作用實(shí)現(xiàn)的。 基因表達(dá)量的變化只能反映AMPKα 生物合成的增強(qiáng)，而其發(fā)揮作用有賴于磷酸化激活，因此，后續(xù)實(shí)驗(yàn)應(yīng)驗(yàn)證肝臟脂質(zhì)代謝關(guān)鍵位點(diǎn)的蛋白，尤其是磷酸化蛋白表達(dá)量的變化，以進(jìn)一步驗(yàn)證降糖消渴顆粒的作用。

綜上所述，降糖消渴顆?？赡苁峭ㄟ^AMPKα調(diào)節(jié)糖尿病小鼠肝臟NF-κB 信號(hào)通路以減輕炎癥反應(yīng)、緩解IR，從而改善T2DM 狀態(tài)下肝臟脂代謝紊亂造成的肝損傷；其中低、中劑量降糖消渴顆粒綜合作用較好。