楊 蘭， 曾詩琪， 熊 星， 張 婷， 江 鵬， 周曉龍

（1. 中國石化潤滑油有限公司上海研究院, 上海 200080；2. 華東理工大學(xué)化工學(xué)院石油加工系, 上海 200237）

金屬加工液在切削、軋制等金屬加工過程中主要發(fā)揮著潤滑、冷卻、清洗和設(shè)備防銹等作用[1-2]，其組成主要包括水、基礎(chǔ)油和各類化學(xué)添加劑。金屬加工液的使用費(fèi)用大約是機(jī)械車間生產(chǎn)成本的10%～20%[3]，因此，金屬加工液的使用壽命至關(guān)重要。然而在實(shí)際生產(chǎn)過程中，微生物滋生所導(dǎo)致的污染、腐敗問題一直威脅著金屬加工液的正常使用。

金屬加工液為微生物的生長提供合適的營養(yǎng)源和生長環(huán)境[4-5]，同時(shí)，微生物又可以通過多種渠道（如水、空氣、機(jī)械設(shè)備或不良的操作習(xí)慣等[6]）進(jìn)入金屬加工液。污染的金屬加工液中礦物油、乳化劑、油性劑等結(jié)構(gòu)及鍵能較弱的有機(jī)物優(yōu)先降解，從而降低金屬加工液的穩(wěn)定性[7]。另外，微生物在滋生過程中還會(huì)產(chǎn)生有機(jī)酸腐蝕機(jī)械設(shè)備和管道[8]，甚至可以通過加工過程中產(chǎn)生的氣溶膠和霧氣在空氣中傳播，因而增加操作人員的患病風(fēng)險(xiǎn)[9-10]。統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)表明，美國有近120 萬相關(guān)工人的健康受到影響[11]。在新冠疫情肆虐全球的背景下，增強(qiáng)人類對(duì)直接接觸的微生物污染源的認(rèn)知十分必要。

添加殺菌劑是金屬加工液控制微生物污染的常見手段，目前殺菌劑主要包括甲醛緩釋類、異噻唑啉酮類和酚類等[12-13]。以上殺菌劑盡管均是廣譜性殺菌劑，但是每種殺菌劑均有針對(duì)性，例如甲醛緩釋類殺菌劑抗細(xì)菌性優(yōu)于抗真菌性，而酚類殺菌劑恰恰相反[14]。與此同時(shí)，滅殺不同類型微生物所需要的殺菌劑濃度也存在差異[15]。目前，國內(nèi)鮮有針對(duì)水基金屬加工液中微生物污染的研究，實(shí)際生產(chǎn)中往往依據(jù)經(jīng)驗(yàn)向體系內(nèi)添加殺菌劑。因此，分析金屬加工液中的微生物種類對(duì)實(shí)際生產(chǎn)有著重要意義。

本文研究了從金屬加工液中分離微生物的可行方法，在不降低微生物濃度的前提下實(shí)現(xiàn)微生物從金屬加工液中的提??；并借助Illumina MiSeq 高通量測(cè)序完成對(duì)6 組金屬加工液樣本的微生物群落組成分析，確定所有樣品在門、綱、目、科、屬和種6 水平下的類型組成，得出優(yōu)勢(shì)細(xì)菌和真菌，同時(shí)討論了金屬加工液組分對(duì)微生物生長的影響。本文有助于了解微生物對(duì)金屬加工液使用壽命限制機(jī)理，且能指導(dǎo)殺菌劑的選擇和添加。

1 材料和方法

1.1 樣本采集和檢測(cè)

實(shí)驗(yàn)共采集6 組來自于不同軋鋼廠現(xiàn)場(chǎng)的金屬加工液樣本，且金屬加工液配方不完全相同，但基本組成均為水、基礎(chǔ)油和化學(xué)添加劑，其中水的質(zhì)量分?jǐn)?shù)超過90%，基礎(chǔ)油為植物油、礦物油和動(dòng)物油脂中的一種或多種，化學(xué)添加劑為油性劑、乳化劑和緩蝕劑等。樣本的相關(guān)采集信息和屬性指標(biāo)見表1。每個(gè)樣品采集3 份，將采集到的金屬加工液儲(chǔ)存于干凈的聚乙烯瓶中冷凍保存運(yùn)回實(shí)驗(yàn)室，實(shí)驗(yàn)期間所有樣本均置于3～10 ℃低溫環(huán)境下保存。樣本的使用時(shí)間為采集前該金屬加工液被連續(xù)使用的時(shí)長。

表1 樣本采集信息Table1 Details of sample collection

使用pH 計(jì)(雷磁PHSJ-4 型)檢測(cè)金屬加工液樣本中pH 值，同時(shí)利用重鉻酸鉀氧化法(國家標(biāo)準(zhǔn)HJ 828—2017)測(cè)定液相化學(xué)需氧量(COD)。

1.2 微生物分離方法及平板計(jì)數(shù)

破乳法：添加破乳劑是從油、水乳化體系中分離水相的常用手段[16]。實(shí)驗(yàn)選擇聚合氯化鋁(PAC)作為破乳劑，取20 mL 金屬加工液樣本于燒杯中，邊攪拌邊向燒杯中滴加0.5 g/L 的PAC 水溶液至出現(xiàn)明顯絮體，隨后用中速濾紙過濾，取清澈水相作為破乳法菌液。

離心法：取20 mL 金屬加工液樣本，多層紗布過濾去除雜質(zhì)，然后置于離心管中，在4 000 r/min 下離心10 min[17]。移除液相部分，將底層固相轉(zhuǎn)移至燒杯中，并使用已滅菌的磷酸鹽緩沖液(pH=7.4) 沖洗以去除殘留油分，重復(fù)離心、沖洗3 次，最后將固相分散在5 mL 緩沖液中，作為離心法菌液。

測(cè)菌片法：該系列實(shí)驗(yàn)使用德國舒美測(cè)菌片。將測(cè)菌片浸泡在金屬加工液中10 s，隨后置于30 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48 h。結(jié)束后，使用已滅菌磷酸鹽緩沖液反復(fù)沖洗測(cè)菌片表面直至菌斑脫落，將得到的液相離心、定容至5 mL，作為測(cè)菌片法菌液。

細(xì)菌平板計(jì)數(shù)：使用稀釋涂布平板法完成平板涂布，操作方法見文獻(xiàn)[18]。培養(yǎng)溫度為30 ℃，恒溫培養(yǎng)48 h 后選取30～300 個(gè)菌落的平板計(jì)算細(xì)菌濃度，設(shè)置3 組平行實(shí)驗(yàn)，取平均值。培養(yǎng)平板采用LB(Luria-Bertani)培養(yǎng)基，具體組成如下：胰蛋白胨2 g，酵母提取物1 g，氯化鈉2 g，瓊脂3.2 g，去離子水200 mL，pH 7.0～7.2[19]。

1.3 DNA 提取、PCR 擴(kuò)增和Illumina MiSeq 測(cè)序

首先依據(jù)E.Z.N.A?soil 試劑盒(美國Omega Biotek 公司)說明書對(duì)制得的菌液進(jìn)行DNA 抽提，并檢測(cè)濃度、純度和提取質(zhì)量。PCR 擴(kuò)增細(xì)菌通用引物序列為：806R(5’-GGACTACHVGGGTWTCTAAT-3’) 和338F(5’-ACTCCTACGGGAGGCAGCAG-3’)，真菌通用引物為：ITS1F(5’-CTTGGTCATTTAGAGGAAGT AA-3 ’) 和 ITS2R(5 ’-GCTGCGTTCTTCATCGATG C-3’)[20]。PCR 擴(kuò)增結(jié)束后，使用2%(質(zhì)量分?jǐn)?shù)，下同) 瓊脂糖凝膠回收產(chǎn)物，并純化、洗脫。利用QuantiFluor?-ST(美國Promega 公司) 對(duì)回收產(chǎn)物檢測(cè)定量。根據(jù) Illumina MiSeq 平臺(tái)(美國Illumina 公司)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程將純化后的擴(kuò)增片段構(gòu)建文庫[21]。

1.4 序列處理與分析

原始測(cè)序序列使用Trimmomatic 軟件質(zhì)控，使用FLASH 軟件進(jìn)行拼接優(yōu)化。使用的UPARSE 軟件（Version 7.1）根據(jù)97% 的相似度對(duì)序列進(jìn)行OTU(Operational Taxonomic Unit)聚類，并在聚類的過程中去除單序列和嵌合體。利用RDP classifier 對(duì)每條序列進(jìn)行物種分類注釋，比對(duì)Silva 數(shù)據(jù)庫（SSU123），設(shè)置比對(duì)閾值為70%[20,22]。

2 結(jié)果與討論

2.1 微生物分離方法

微生物分離過程中體系中的油份會(huì)影響DNA抽提結(jié)果。因此，必須尋求一種合適的方式將微生物從金屬加工液中分離出來，同時(shí)保證微生物濃度不降低。本文分別采用了破乳法、離心法和測(cè)菌片法3 種分離方式進(jìn)行測(cè)試，并通過對(duì)分離得到的菌液進(jìn)行細(xì)菌平板計(jì)數(shù)確定分離方式的可行性，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表2。

表2 分離前后不同樣品細(xì)菌濃度Table2 Bacterial concentration of different samples before and after separation

結(jié)果表明，相比于原液，PAC 破乳得到的菌液中細(xì)菌濃度明顯減少，說明在PAC 的靜電吸引和架橋等作用下，水相中的微生物會(huì)被誤去除。離心法保持了原有的細(xì)菌濃度，而測(cè)菌片法得到的菌液細(xì)菌濃度甚至超過原液，這是因?yàn)闇y(cè)菌片上存在微生物生長的營養(yǎng)源，實(shí)際上實(shí)現(xiàn)了對(duì)微生物的富集培養(yǎng)。

對(duì)離心法和測(cè)菌片法得到的菌液分別進(jìn)行DNA抽提和PCR 擴(kuò)增，結(jié)果表明離心法菌液擴(kuò)增結(jié)果評(píng)級(jí)為C 級(jí)，表示PCR 產(chǎn)物目的條帶太弱或未監(jiān)測(cè)到，無法進(jìn)行后續(xù)種群鑒定實(shí)驗(yàn)，推測(cè)原因可能是離心法菌液未完全去除殘留油份，導(dǎo)致DNA 抽提不理想，進(jìn)而限制PCR 擴(kuò)增結(jié)果。與之相反，測(cè)菌片法菌液擴(kuò)增評(píng)級(jí)為A 級(jí)，代表DNA 濃度高，可進(jìn)行后續(xù)種群鑒定實(shí)驗(yàn)。因此，最終選定測(cè)菌片法來實(shí)現(xiàn)微生物從金屬加工液中的分離。

2.2 微生物種類及多樣性分析

借助Illumina MiSeq 高通量測(cè)序確定金屬加工液中微生物多樣性，分析結(jié)果見表3。送檢的6 組金屬加工液樣品中均檢測(cè)出細(xì)菌；除QX2和JX 外，剩余4 組樣本未檢測(cè)出真菌。盡管檢測(cè)出真菌的樣本數(shù)少，但真菌擁有更豐富的種屬組成。

表3 金屬加工液微生物多樣性統(tǒng)計(jì)Table3 Diversity of microbial in water-based metal working fluids

2.3 金屬加工液細(xì)菌群落組成

首先在門、綱、目和科4 個(gè)水平對(duì)金屬加工液細(xì)菌群落組成進(jìn)行分析，測(cè)定結(jié)果見圖1。從圖中可以看出，這4 個(gè)水平下6 組金屬加工液的群落組成清晰明了。其中，門組成僅由變形菌門(Proteobacteria)和厚壁菌門(Firmicutes)構(gòu)成；在綱水平上只檢測(cè)到變形菌綱(Gammaproteobacteria) 和桿菌綱(Bacilli)。相對(duì)豐度上，變形菌門(Proteobacteria) 和變形菌綱(Gammaproteobacteria)占據(jù)優(yōu)勢(shì)地位。同時(shí)，在目水平上，QX1、QX2、QX3和CJ 4 組金屬加工液的優(yōu)勢(shì)細(xì)菌目保持一致，均為腸桿菌目(Enterobacterales)，而JX 和WF 的優(yōu)勢(shì)細(xì)菌目分別為伯克氏菌目(Burkholderiales)、芽孢桿菌目(Bacillales) 和假單胞桿菌目(Pseudomonadales)、乳桿菌目(Lactobacillales)。

圖1 不同水平下金屬加工液細(xì)菌群落組成Fig.1 Bacterial composition in metalworking fluid at different level

這種一致與差異并存的現(xiàn)象也在科水平上得以體現(xiàn)。QX1、QX2、QX3和CJ 4 組樣本以腸桿菌科(Enterobacteriaceae)為主，而JX 和WF 樣本分別以叢毛單胞菌科(Comamonadaceae)、芽孢桿菌科(Bacillales) 和假單胞桿菌科(Pseudomonadaceae)、氣球菌科(Aerococcaceae)作為優(yōu)勢(shì)細(xì)菌科。

在屬水平下，各樣本之間差異性測(cè)定結(jié)果見圖2。6 組金屬加工液共檢測(cè)出10 種細(xì)菌屬。QX1中檸檬酸桿菌屬(Citrobacter) 相對(duì)豐度占比達(dá)到95%，是其優(yōu)勢(shì)細(xì)菌屬。與此同時(shí)，檸檬酸桿菌屬和Unclassified_f_Enterobacteriaceae屬被發(fā)現(xiàn)同時(shí)存在于QX2、QX3和CJ 3 組樣本中，區(qū)別在于QX2和CJ 中檸檬酸桿菌屬(Citrobacter) 豐度超過50%，而QX3則是以Unclassified_f_Enterobacteriaceae屬為主體。JX 樣本的優(yōu)勢(shì)細(xì)菌屬包括叢毛單胞菌屬(Comamonas)和芽孢桿菌屬(Bacillus)。假單胞菌屬(Pseudomonas)、氣球菌屬(Aerococcus)和克雷伯氏桿菌屬(Klebsiella)構(gòu)成了WF 樣本的優(yōu)勢(shì)細(xì)菌屬。此外，也檢測(cè)出了少量的不動(dòng)桿菌屬(Acinetobacter)、普羅威登斯菌屬(Providencia)和摩根氏菌屬 (Morganella)。

圖2 屬水平下金屬加工液細(xì)菌群落組成Fig.2 Bacterial composition in metalworking fluid at genus level

種水平下細(xì)菌多樣性分析見圖3，共檢測(cè)出14 種細(xì)菌，而各樣本細(xì)菌種數(shù)與其COD 濃度呈正比，說明高有機(jī)物濃度的環(huán)境為細(xì)菌生長提供了更多能量來源。其中，QX1的優(yōu)勢(shì)細(xì)菌為弗氏檸檬酸桿菌(Citrobacter_freundii_g_Citrobacter)，相對(duì)豐度占比為95.68%。檸檬酸桿菌屬是金屬加工液的易檢出細(xì)菌[4]。除Citrobacter_freundii-g-citrobacter外，另一種檸檬酸桿菌Unclassified_g_Citrobacter在QX2、QX3和CJ 3 組樣本中被發(fā)現(xiàn)也證實(shí)了這一點(diǎn)。但是金屬加工液有機(jī)成分會(huì)對(duì)檸檬酸桿菌種類產(chǎn)生影響，例如Citrobacter_freundii具有以甘油為唯一碳源和能源的特性，而甘油可用作金屬加工液的油性劑[23-24]。因此，這種特性可能導(dǎo)致?lián)碛懈嗫衫脿I養(yǎng)源的Citrobacter_freundii能在QX1樣本中占據(jù)主體地位。此外，QX2、QX3和CJ 3 組樣本中均檢測(cè)出一種腸桿菌Unclassified_f_Enterobacteriaceae，其存在可能與3 組金屬加工液中添加沒食子酸有關(guān)。沒食子酸不僅是一種植物型緩蝕劑，同時(shí)還可被用于合成潤滑油酯類基礎(chǔ)油，然而沒食子酸是Unclassified_f_Enterobacteriaceae生長起促進(jìn)作用，造成該菌在QX2、QX3和CJ 3 組樣本中被檢測(cè)到[25-26]。JX 樣本的優(yōu)勢(shì)細(xì)菌包括水叢毛單胞菌(Comamonas_aquatica)和炭疽芽胞桿菌(Bacillus_anthracis)，兩者總豐度占比達(dá)到97.05%。其中，叢毛單胞菌也是金屬加工液中的一種易檢出細(xì)菌[15]。該菌適宜在中、堿性環(huán)境(pH=7～8)中生存，可利用環(huán)境中的有機(jī)氮作為營養(yǎng)源發(fā)生硝化作用，如金屬加工液中使用的乳化劑三乙醇胺、胺型抗氧劑N,N’-二仲丁基對(duì)苯二胺等[27]。與此同時(shí)，炭疽芽胞桿菌(Bacillus_anthracis)作為一種由革蘭氏陽性孢子形成的細(xì)菌，能夠引發(fā)人畜共患急性傳染病炭疽。由于孢子對(duì)干燥、消毒劑等常規(guī)滅殺手段具有很強(qiáng)的抵抗力，可通過金屬加工液配制水源、空氣等途徑進(jìn)入到加工體系中。炭疽芽胞桿菌繁殖體對(duì)周圍環(huán)境抵抗力與一般細(xì)菌相似，所以要求JX 金屬加工液樣本在使用過程中必須配套滅菌措施，同時(shí)提升操作人員的安全防護(hù)等級(jí)。相比于其他樣本，WF 優(yōu)勢(shì)細(xì)菌組成最為復(fù)雜，Unclassified_g_Pseudomonas(59.38%)、馬尿氣球菌(Aerococcus_urinaeequi) (18.98%)、Bioreactor_metagenome_g_Pseudomonas(9.34%)和Unclassified_g_Klebsie lla(8.97%)等4 種細(xì)菌相對(duì)豐度超過5%。其中相對(duì)豐度最高的細(xì)菌Unclassified_g_Pseudomonas隸屬于假單胞菌屬，也是一種金屬加工液中易檢出細(xì)菌屬[15]。由于該類細(xì)菌具有以礦物油中烴類物質(zhì)作為營養(yǎng)源的能力，所以導(dǎo)致其在有礦物油成分的WF 樣本中具有更強(qiáng)生存能力，從而成為該樣本下主體細(xì)菌[28]。然而，假單胞菌會(huì)將礦物油降解為其他細(xì)菌可利用的脂肪酸等中間體，所以WF 樣本中出現(xiàn)了共存細(xì)菌種類多，但豐度占比均不高的情況。

圖3 種水平下金屬加工液細(xì)菌群落組成Fig.3 Bacterial composition in metalworking fluid at species level

值得注意的是，在發(fā)現(xiàn)的14 種細(xì)菌中，除炭疽芽胞桿菌(Bacillus_anthracis)、馬尿氣球菌(Aerococcus_urinaeequi)和貝萊斯芽胞桿菌(Bacillus_velezensis)外(且這3 種細(xì)菌豐度占比有限)，其余11 種均為革蘭氏陰性菌，說明金屬加工液中檢出細(xì)菌以革蘭氏陰性菌為主。這主要是因?yàn)樵? 組金屬加工液主要用于鉻、鎳和鐵等材料的加工過程，這些金屬元素對(duì)革蘭氏陰性菌的生長有促進(jìn)作用[15]。

綜上所述，檢測(cè)出的14 種細(xì)菌均會(huì)縮短金屬加工液的使用壽命。Citrobacter_freundii、Unclassified_f_Enterobacteriaceae、Comamonas_aquatica等細(xì)菌會(huì)分解金屬加工液中油性劑、乳化劑等添加劑，從而破壞金屬加工液的穩(wěn)定性。與此同時(shí)，Unclassified_f_Enter obacteriaceae、Unclassified_g_Pseudomonas會(huì)破壞基礎(chǔ)油結(jié)構(gòu)，使其轉(zhuǎn)化為有機(jī)酸等中間體物質(zhì)并被Aerococcus_urinaeequi、Bacillus_anthracis等細(xì)菌作為營養(yǎng)源被進(jìn)一步降解。

2.4 金屬加工液真菌群落組成

6 組金屬加工液中只有QX2和JX 兩組樣本檢測(cè)出真菌，說明細(xì)菌比真菌更容易在金屬加工液中被發(fā)現(xiàn)。這是因?yàn)檎婢m宜的pH 為4.5～5.0，而金屬加工液初始環(huán)境通常為中、堿性，所以真菌一般只出現(xiàn)在細(xì)菌污染嚴(yán)重的金屬加工液中，此時(shí)由于細(xì)菌繁殖過程中產(chǎn)生了各類有機(jī)酸，導(dǎo)致金屬加工液pH 明顯下降[29-30]。因此，QX2和JX 兩組樣本具有6 組樣本中最低的pH 值，且這兩組金屬加工液使用周期較長，會(huì)存在細(xì)菌污染濃度較高的情況，進(jìn)而出現(xiàn)真菌繁殖現(xiàn)象。

門、綱、目、科4 個(gè)水平下的真菌組成如圖4 所示。在門水平下，子囊菌門(Ascomycota)，擔(dān)子菌門(Basidiomycota)，羅茲菌門(Rozellomycota) 和一種未知真菌(Unclassified_k_Fungi) 4 種真菌門被發(fā)現(xiàn)。隨著種類劃分精細(xì)度不斷提高，真菌多樣性逐步凸顯，尤其是QX2樣本，各水平下除未知真菌外其余真菌豐度差異小，種類多。而樣本JX 分別以糞殼菌綱(Sordariomycetes)、肉座菌目(Hypocreales)、赤殼菌科(Nectriaceae)作為綱、目和科3 個(gè)水平下的優(yōu)勢(shì)真菌。

圖4 不同水平下金屬加工液真菌群落組成Fig.4 Fungal composition in metalworking fluid at different level

屬水平下金屬加工液真菌組成如圖5 所示，共有15 種真菌屬被檢測(cè)出。QX2樣本的優(yōu)勢(shì)真菌屬包括未知真菌屬(Unclassified_k_Fungi)、羅茲菌屬(Unclass ified_p_Rozellomycota)、Saitozyma屬和Cutaneotrichosporon屬，相對(duì)豐度均在5%以上。而樣本JX 中只有鐮刀菌屬(Fusarium)和未知真菌屬(Unclassified_k_Fungi)豐度超過5%。

圖5 屬水平下金屬加工液真菌群落組成Fig.5 Fungal composition in metalworking fluid at genus level

種水平下真菌多樣性分析見圖6，兩組金屬加工液共攜帶了17 種真菌。盡管檢出真菌樣本數(shù)比檢出細(xì)菌樣本數(shù)少，但是后者有更多的種類。其中，QX2樣本14 種，特有真菌(其他樣本中未發(fā)現(xiàn)只在該樣本中檢測(cè)出的真菌種類)10 種；JX 樣本攜帶真菌7 種，特有真菌3 種。除未知真菌外，QX2和JX 樣本共有真菌3 種，分別為Saitozyma_sp，Rozellomycota_sp和Unclassified_g_Talaromyces，這說明真菌的生存并不受限于金屬加工液的原有成分。QX2樣本中除未知真菌外，Saitozyma_sp相對(duì)豐度占比最高，接近10%，而樣本JX 明顯以Fusarium_petroliphilum為優(yōu)勢(shì)真菌。其中，Saitozyma_sp是一種酵母菌，F(xiàn)usarium_petroliphilum是一種鐮刀菌，當(dāng)金屬加工液濃度達(dá)到一定程度時(shí)，兩種真菌的菌絲會(huì)導(dǎo)致管道、過濾系統(tǒng)堵塞，同時(shí)通過空氣傳播，威脅人體健康。

圖6 種水平下金屬加工液真菌群落組成Fig.6 Fungal composition in metalworking fluid at species level

3 結(jié) 論

微生物污染會(huì)縮短金屬加工液使用壽命，威脅操作人員健康風(fēng)險(xiǎn)，因此，探索金屬加工液中微生物多樣性組成是十分必要的。實(shí)驗(yàn)首先探究了從金屬加工液中分離微生物的可行方法，相較于破乳法和離心法，測(cè)菌片法能在提升微生物采集濃度的同時(shí)，保障后續(xù)DNA 抽提和PCR 擴(kuò)增順利進(jìn)行，實(shí)現(xiàn)微生物從金屬加工液中完美分離。

微生物多樣性鑒定確定了6 組金屬加工液中微生物的群落組成。細(xì)菌在所有樣本中被檢測(cè)出，而除QX2和JX 樣本外，剩余樣本未檢測(cè)出真菌，證明細(xì)菌比真菌更容易污染金屬加工液，真菌只存在于細(xì)菌污染嚴(yán)重的樣本中。實(shí)驗(yàn)共檢測(cè)出細(xì)菌2 門、2 綱、5 目、6 科、10 屬 和14 種，而 真 菌 為4 門、8 綱、10 目、14 科、15 屬和17 種，說明真菌具有更豐富的種屬類別。

在種水平上，細(xì)菌中弗氏檸檬酸桿菌(Citrobacter_freundii)、Unclassified_g_Citrobacter、Unclassified_f_Enterobacteriaceae、水叢毛單胞菌屬(Comamonas_aquatica)和Unclassified_g_Pseudomonas相對(duì)豐度占比較高，作為優(yōu)勢(shì)細(xì)菌存在于不同樣本中，且WF 樣本攜帶細(xì)菌種類最多，檢測(cè)出的細(xì)菌以革蘭氏陰性菌為主。金屬加工液有機(jī)組分會(huì)影響細(xì)菌類別，所有細(xì)菌通過不同途徑破壞金屬加工液的穩(wěn)定性，縮短其使用壽命。QX2樣本具有最多的真菌種類，但在種水平，除未知真菌外，其他真菌豐度接近，而JX 樣本以Fusarium_petroliphilum為優(yōu)勢(shì)真菌。