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        外周血長鏈非編碼RNA在不同病程2型糖尿病患者的表達(dá)及與胰島β細(xì)胞功能的相關(guān)性

        2022-10-21 01:49:18胡玉花洪蕓蕓珠海市第五人民醫(yī)院內(nèi)分泌科廣東珠海519055
        吉林醫(yī)學(xué) 2022年10期
        關(guān)鍵詞:胰島素糖尿病水平

        梁 健,劉 強(qiáng),陳 燕,胡玉花,洪蕓蕓,張 燕 (珠海市第五人民醫(yī)院內(nèi)分泌科,廣東 珠海 519055)

        糖尿病作為一種慢性代謝性疾病,根據(jù)發(fā)病原因的不同可以分為1型糖尿病與2型糖尿病,其中2型糖尿病在全部糖尿病患者中占比超過90%,為最常見的糖尿病類型。2型糖尿病發(fā)生、發(fā)展的機(jī)制較為復(fù)雜,且早期癥狀較為隱匿,機(jī)體長時間處于高血糖環(huán)境中,進(jìn)而促進(jìn)冠心病、糖尿病腎病等多種并發(fā)癥的發(fā)生,影響患者生活質(zhì)量及生命健康[1]。隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展,眾多研究發(fā)現(xiàn)2型糖尿病的發(fā)生、發(fā)展可能是由于相關(guān)基因表達(dá)異常造成胰島功能異常,誘導(dǎo)相關(guān)信號通路功能發(fā)生變化,進(jìn)而造成疾病的發(fā)展[2-3]。長鏈非編碼RNA(LncRNAs)是一種功能性長鏈RNA分子,廣泛參與了心腦血管疾病、糖尿病等多種病理及生理過程的發(fā)展[4]。此外,相關(guān)研究表明[5],LncRNAs與胰島β細(xì)胞的增殖、發(fā)育以及胰島素的分泌具有重要關(guān)系,其可能參與胰島的分化發(fā)育過程。但關(guān)于LncRNAs表達(dá)水平與胰島β細(xì)胞功能的關(guān)系上不明確,本研究旨在探討 外周血LncRNAs在不同病程2型糖尿病患者的表達(dá)及胰島β細(xì)胞功能的相關(guān)關(guān)系。

        1 資料與方法

        1.1一般資料:隨機(jī)選取2020年11月-2021年11月在我院住院治療的2型糖尿病患者作為研究對象,根據(jù)患者2型糖尿病病程的不同分為<1年組24例,1~5年組18例,6~10年組20例,11~20年組24例。入組標(biāo)準(zhǔn):①所有患者均符合關(guān)于2型糖尿病的相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)[6],空腹血糖超過7.0 mmol/L或連續(xù)3次隨機(jī)測量血糖超過11.1 mmol/L;②參與研究前8 w內(nèi)未更換控制血糖的藥物;③患者生活均可自理,執(zhí)行力和理解力良好;④尊重患者的知情權(quán),且患者簽訂知情同意書;⑤本研究通過本院倫理委員會審核批準(zhǔn)。排除標(biāo)準(zhǔn):①患者伴有精神疾病史或精神障礙性疾??;②患者存在乙肝、艾滋病等嚴(yán)重感染性疾??;③患者為1型糖尿病患者;④患者伴有甲狀腺功能亢進(jìn)或其他惡性腫瘤疾??;⑤妊娠期或哺乳期患者。選取同時期在本院進(jìn)行健康體檢的25例健康受檢者作為對照組。

        1.2實(shí)時熒光定量(PCR)法:所有研究對象均抽取晨起空腹肘正中靜脈血3 ml,靜置,加入細(xì)胞裂解液充分裂解,使用低溫高速離心法以4 500 r/min在4℃條件下進(jìn)行離心,取上層清液,分別加入適量氯仿、異丙醇,混勻、靜置、離心,去除上清液,加入75%乙醇2 ml及適量磷酸鹽緩沖液,離心,使用Trizol試劑盒提取RNA,使用分光光度計(jì)檢測RNA純度。配置反轉(zhuǎn)錄體系,使用Promega M-MLV試劑盒進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄,取6 μl,加入Total RNA直至最終反應(yīng)體積為20 μl,合成cRNA,經(jīng)反轉(zhuǎn)錄生成cDNA,在20 μl體系中使用基因擴(kuò)增PCR儀以cDNA為模板,以GAPDH為內(nèi)參進(jìn)行擴(kuò)增,根據(jù)目標(biāo)基因合成引物(見表1),所有步驟均嚴(yán)格按照操作說明書進(jìn)行操作,每個樣本設(shè)置至少3個對照,多次檢測取平均值。以2-△△Ct進(jìn)行計(jì)算分析。

        表1 引物序列

        1.3觀察指標(biāo):①臨床基本資料收集:收集所有研究對象臨床基本資料,包括年齡、性別、體重指數(shù)(BMI)、血壓、吸煙史、飲酒史 等。②外周血LncRNA TUG1、LncRNA MALAT1表達(dá)水平檢測:采用PCR法檢測各組外周血LncRNA TUG1、LncRNA MALAT1表達(dá)水平并進(jìn)行記錄對比。③胰島β細(xì)胞功能相關(guān)指標(biāo)檢測:采用血糖儀檢測所有研究對象空腹血糖(FBG)水平,采用高效液相層分析法檢測糖化血紅蛋白(HbA1c)水平,采用放射免疫法檢測各組空腹胰島素(FINS)含量,采用公式計(jì)算胰島素功能指數(shù)(HOMA-β)變化。④相關(guān)性分析:采用Pearson相關(guān)性檢驗(yàn)分析外周血LncRNA TUG1、LncRNA MALAT1與胰島β細(xì)胞功能相關(guān)關(guān)系。

        2 結(jié)果

        2.1各組基本資料比較:對照組、<1年組、1~5年組、6~10年組及11~20年組年齡、性別、血壓、BMI、吸煙史、飲酒史等基本資料對比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表2。

        表2 各組基本資料比較[n(%)]

        2.2各組外周血LncRNA TUG1、LncRNA MALAT1表達(dá)水平對比:與對照組比較,<1年組、1~5年組、6~10年組及11~20年組患者外周血LncRNA TUG1、LncRNA MALAT1表達(dá)水平均明顯升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);與<1年組比較,隨著2型糖尿病患者病程的延長,外周血LncRNA TUG1、LncRNA MALAT1表達(dá)水平均逐漸升高。見表3。

        表3 各組外周血LncRNA TUG1、LncRNA MALAT1表達(dá)水平對比

        2.3各組胰島β細(xì)胞功能相關(guān)指標(biāo)對比:與對照組比較,<1年組、1~5年組、6~10年組及11~20年組患者FBG、HbA1c表達(dá)水平均明顯升高,F(xiàn)INS、HOMA-β水平均明顯降低,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);與<1年組比較,隨著2型糖尿病患者病程的延長,F(xiàn)INS、HbA1c、HOMA-β表達(dá)水平均逐漸降低,F(xiàn)BG水平逐漸升高。見表4。

        表4 各組胰島β細(xì)胞功能相關(guān)指標(biāo)對比

        2.4外周血LncRNA TUG1、LncRNA MALAT1與胰島β細(xì)胞功能相關(guān)性分析:經(jīng)Pearson相關(guān)性檢驗(yàn)分析,外周血LncRNA TUG1、LncRNA MALAT1與FINS、HbA1c、HOMA-β呈明顯負(fù)相關(guān),與FBG呈明顯正相關(guān)(P<0.05)。見表5。

        表5 外周血LncRNA TUG1、LncRNA MALAT1與胰島β細(xì)胞功能相關(guān)性分析

        3 討論

        糖尿病是一種由多種因素造成的疾病,我國糖尿病患者主要以2型糖尿病為主。隨著人們生活水平的提高及飲食習(xí)慣的改變,2型糖尿病的發(fā)病率呈逐年升高趨勢。隨著醫(yī)學(xué)科技的不斷發(fā)展,臨床上對于糖尿病的治療已取得重要進(jìn)步,但在基因?qū)用嫔先跃哂幸欢ㄏ拗?。糖尿病發(fā)病人數(shù)的增加及病情的不斷發(fā)展,不僅對患者的生活質(zhì)量甚至生命健康造成了嚴(yán)重威脅,也對患者家庭及社會造成了巨大負(fù)擔(dān)。因此,深入探討糖尿病的調(diào)控機(jī)制,延緩疾病發(fā)展進(jìn)程,降低并發(fā)癥發(fā)生情況具有重要作用。

        LncRNAs作為一種長鏈非編碼RNA,其能夠在表觀遺傳水平、轉(zhuǎn)錄水平及轉(zhuǎn)錄后水平等多種層面調(diào)控基因表達(dá),進(jìn)而廣泛參與機(jī)體各種病理生理過程[7]。胰腺是一種彌散性器官,也是調(diào)節(jié)全身葡萄糖穩(wěn)態(tài)的重要器官。胰島β細(xì)胞為機(jī)體中唯一能夠分泌胰島素的細(xì)胞,研究表明[8],2型糖尿病發(fā)生、發(fā)展的主要環(huán)節(jié)可能為由于胰島β細(xì)胞功能缺陷造成的不同程度的胰島素缺乏及胰島素抵抗。胰島β細(xì)胞功能出現(xiàn)障礙時,機(jī)體胰島素分泌不足,造成胰島β細(xì)胞數(shù)量減少,進(jìn)一步促進(jìn)了2型糖尿病的發(fā)生[9]。近年來有研究發(fā)現(xiàn)[10],LncRNAs與糖尿病的發(fā)生具有一定關(guān)系,其可能通過影響胰腺發(fā)育、胰島細(xì)胞功能以及胰腺外組織的糖代謝等從而對糖尿病的發(fā)生發(fā)展起到一定影響。本研究中通過檢測不同病程患者外周血LncRNA TUG1、LncRNA MALAT1及胰島β細(xì)胞功能的變化,結(jié)果發(fā)現(xiàn),隨著2型糖尿病患者病程的延長,外周血LncRNA TUG1、LncRNA MALAT1、FBG表達(dá)水平均逐漸升高,F(xiàn)INS、HbA1c、HOMA-β表達(dá)水平均逐漸降低。外周血LncRNA TUG1、LncRNA MALAT1及胰島β細(xì)胞功能與2型糖尿病病程具有密切關(guān)系,這可能是因?yàn)殡S著患者病程的發(fā)展,胰島β細(xì)胞負(fù)荷加重,機(jī)體血糖動態(tài)失衡,進(jìn)而影響LncRNA TUG1、LncRNA MALAT1的表達(dá)[11]。此外,本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn),外周血LncRNA TUG1、LncRNA MALAT1與胰島β功能具有相關(guān)性,均可作為反應(yīng)患者病情的重要指標(biāo)。

        綜上所述,隨著病程的延長,外周血LncRNA TUG1、LncRNA MALAT1及胰島β細(xì)胞功能出現(xiàn)變化,且外周血LncRNA TUG1、LncRNA MALAT1與胰島β功能具有一定相關(guān)性。

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