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        慢性牙周炎患者唾液中miR-22-3p、miR-378a-3p的表達(dá)與診斷價(jià)值研究

        2022-10-21 01:49:14楊貞忞袁通穗貴陽(yáng)市口腔醫(yī)院口腔頜面外科貴州貴陽(yáng)55000貴陽(yáng)市口腔醫(yī)院牙周科貴州貴陽(yáng)55000
        吉林醫(yī)學(xué) 2022年10期
        關(guān)鍵詞:檢測(cè)研究

        楊貞忞,袁通穗 (.貴陽(yáng)市口腔醫(yī)院口腔頜面外科,貴州 貴陽(yáng) 55000;貴陽(yáng)市口腔醫(yī)院牙周科,貴州 貴陽(yáng) 55000)

        慢性牙周炎是指發(fā)生在牙齦、牙骨質(zhì)等牙齒支持組織的疾病[1],其病理過(guò)程主要是由牙菌斑形成的齦上牙石或齦下牙石對(duì)牙周組織產(chǎn)生的漸進(jìn)并持續(xù)的炎性破壞[2]。有研究指出,在我國(guó)牙周炎是成人失牙的主要原因,并且患病率高于齲病,這極大降低了患者的生活質(zhì)量并增加了社會(huì)經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)[3]。由于目前臨床上缺乏有效的治療手段,臨床上更加重視如何預(yù)防慢性牙周炎的發(fā)生及其發(fā)展[4]。但慢性牙周炎的診斷方法敏感率較低,故有大量研究通過(guò)對(duì)慢性牙周炎患者齦溝液中的一些炎癥因子或者相關(guān)基因進(jìn)行檢測(cè),以期提高該病診斷陽(yáng)性率和判斷其嚴(yán)重程度[5-6]。而齦溝液存在不易采集以及容易受到污染等因素,而導(dǎo)致該方法存在一定局限性,單鏈非編碼微小RNA(miRNA)已經(jīng)在大量研究中證實(shí)在診斷、預(yù)測(cè)疾病的預(yù)后具有一定的優(yōu)勢(shì)[7-8]。本研究前期通過(guò)生物信息學(xué)方法,在GEO數(shù)據(jù)庫(kù)中挖掘在慢性牙周炎患者的唾液中表達(dá)明顯增高的miR-22-3p和miR-378a-3p,后期通過(guò)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證,擬為慢性牙周炎患者的早期診斷提供一定依據(jù)。

        1 資料與方法

        1.1一般資料:選取2019年1月~2021年6月于貴陽(yáng)市口腔醫(yī)院牙周科就診的患者90例,其中牙周組織健康者22例為對(duì)照組,慢性牙周炎68例為觀察組。納入標(biāo)準(zhǔn):①年齡≥18周歲;②除第三磨牙外余留牙≥20顆,其中有4顆磨牙;③無(wú)糖尿病等系統(tǒng)性疾?。虎軣o(wú)正畸治療史;⑤6個(gè)月內(nèi)未接受牙周治療;⑥女性未妊娠,未服避孕藥,且不在哺乳期、月經(jīng)期。本研究經(jīng)貴陽(yáng)市口腔醫(yī)院倫理委員會(huì)審查批準(zhǔn),所有患者均簽署知情同意書。對(duì)照組中男13例,女8例;年齡18~50歲,平均32歲。觀察組又分為輕度慢性牙周炎組(23例,男13例,女10例;年齡18~52歲,平均35歲)、中度慢性牙周炎組(22例,男8例,女14例;年齡33~55歲,平均41歲)、重度慢性牙周炎組(23例,男13例,女10例;年齡39~60歲,平均49歲)。

        1.2方法

        1.2.1標(biāo)本采集:觀察組所有患者在治療前進(jìn)行唾液收集,對(duì)照組在體檢時(shí)進(jìn)行唾液收集,在研究對(duì)象晨起后用表面有2%枸櫞酸的棉簽擦拭口腔,收集唾液約1 ml,在4℃離心機(jī)中3 000 r/min離心15 min,取上清液放置在-80 ℃冰箱中保存。

        1.2.2檢測(cè)方法:唾液miR-22-3p、miR-378a-3p的含量均采用實(shí)時(shí)熒光定量 PCR(RT-PCR)進(jìn)行檢測(cè),試劑盒購(gòu)自上海百蕊生物科技有限公司,RT-PCR測(cè)量?jī)x購(gòu)自德國(guó)Qiagen公司,小型高速冷凍離心機(jī)購(gòu)自德國(guó)Eppendorf公司。首先,提取唾液中總RNA,采用去除基因組反轉(zhuǎn)錄試劑盒,將待測(cè)標(biāo)本反轉(zhuǎn)錄為cDNA,采用 RT-PCR進(jìn)行檢測(cè)。本研究結(jié)果均采用2-ΔΔCt法換算miRNA的相對(duì)表達(dá)量。

        2 結(jié)果

        2.1觀察組和對(duì)照組miR-22-3p、miR-378a-3p水平比較:觀察組唾液中miR-22-3p、miR-378a-3p含量水平明顯高于對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

        表1 兩組miR-22-3p、miR-378a-3pp含量比較

        2.2觀察組各亞組miR-22-3p、miR-378a-3p水平比較:重度慢性牙周炎組患者的唾液中miR-22-3p、miR-378a-3p水平高于輕度和中度慢性牙周炎組,中度慢性牙周炎組miR-22-3p、miR-378a-3p水平高于輕度慢性牙周炎組,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

        表2 三組miR-22-3p、miR-378a-3pp含量比較

        2.3觀察組miR-22-3p、miR-378a-3p含量相關(guān)性:相關(guān)性分析結(jié)果顯示,慢性牙周炎患者中,miR-22-3p與 miR-378a-3p水平呈正相關(guān)(r=0.467,P=0.019)。

        2.4ROC曲線分析:采用ROC曲線評(píng)價(jià)血清 miR-22-3p與 miR-378a-3p及兩者聯(lián)合對(duì)慢性牙周炎的診斷價(jià)值,結(jié)果顯示miR-22-3p與 miR-378a-3p聯(lián)合曲線價(jià)值要優(yōu)于兩者單獨(dú)診斷價(jià)值。見表3、圖1。

        表3 miR-22-3p、miR-378a-3p及兩者聯(lián)合檢測(cè) ROC曲線下面積

        圖1 miR-22-3p、miR-378a-3p及兩者聯(lián)合檢測(cè)對(duì)慢性牙周炎診斷的 ROC曲線

        3 討論

        慢性牙周炎的病理生理特征為患者牙周組織存在持續(xù)的慢性炎癥反應(yīng),這不僅損害牙齒支持組織,部分病情嚴(yán)重的會(huì)導(dǎo)致牙齒脫落[9]。有研究甚至指出,隨著炎性介質(zhì)和齦下的細(xì)菌在口腔中擴(kuò)散,使得患者罹患部分癌癥的風(fēng)險(xiǎn)也隨之急劇增高[10]。因此,臨床上亟需通過(guò)敏感指標(biāo)對(duì)于慢性牙周炎進(jìn)行早期診斷和對(duì)其病情嚴(yán)重程度進(jìn)行早期預(yù)測(cè),從而通過(guò)盡早干預(yù),以期提高慢性牙周炎的治療效果和預(yù)后。目前臨床上已有不少相關(guān)研究證實(shí),患者外周血清或齦溝液中的白細(xì)胞介素同慢性牙周炎的疾病嚴(yán)重程度存在一定關(guān)系[11-12]。但目前臨床中仍無(wú)慢性牙周炎的特異性唾液標(biāo)志物。miRNA是一類小分子非編碼RNA,其參與腫瘤、心血管疾病、神經(jīng)系統(tǒng)和炎性疾病等多種疾病的發(fā)生發(fā)展[13]。國(guó)外學(xué)者發(fā)現(xiàn)大鼠牙周炎模型中外周血中miR-207、miR-495 表達(dá)上調(diào)[14],提示miRNA同牙周炎存在一定的關(guān)系,miRNA 極有可能成為慢性牙周炎新的診斷標(biāo)志物,本研究擬通過(guò)檢測(cè)患者唾液中敏感miRNA含量來(lái)診斷慢性牙周炎或者判斷其嚴(yán)重程度。

        miR-22-3p被發(fā)現(xiàn)在冠心病動(dòng)物模型中,通過(guò)靶向抑制Notch通路抑制炎性細(xì)胞因子的分泌[15],提示miR-22-3p同炎性反應(yīng)關(guān)系密切。通過(guò)對(duì)68例慢性牙周炎患者的唾液標(biāo)本檢測(cè),發(fā)現(xiàn)miR-22-3p含量較正常健康患者明顯升高,而且隨著慢性牙周炎病情的加劇其含量進(jìn)一步增高,說(shuō)明miR-22-3p同牙周炎中的炎性反應(yīng)存在一定的關(guān)系。有研究發(fā)現(xiàn),miR-378a-3p通過(guò)GSK-3β /β-catenin信號(hào)通路來(lái)調(diào)控口腔鱗狀細(xì)胞癌的增殖和凋亡[16]。本研究結(jié)果顯示慢性牙周炎患者的唾液中的miR-378a-3p含量升高,且同慢性牙周炎的病情呈正相關(guān)。此外,本研究結(jié)果還發(fā)現(xiàn)miR-22-3p和miR-378a-3p兩者含量呈正相關(guān)關(guān)系。上述結(jié)果表明miR-22-3p和miR-378a-3p可能顯著增加慢性牙周炎的患病風(fēng)險(xiǎn),可能通過(guò)加劇炎性反應(yīng)從而加劇慢性牙周炎的發(fā)生和發(fā)展。ROC曲線結(jié)果進(jìn)一步顯示miR-22-3p和miR-378a-3p兩者聯(lián)合對(duì)于慢性牙周炎的診斷價(jià)值要優(yōu)于兩者分別單獨(dú)診斷,這為臨床上診斷慢性牙周炎以及判斷其病情嚴(yán)重程度提供一定的理論基礎(chǔ),但miR-22-3p和miR-378a-3p同慢性牙周炎患者預(yù)后的關(guān)系以及具體作用機(jī)制應(yīng)進(jìn)一步研究。

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