李鵬，熊雪，向準(zhǔn)，和耀威，黃靜，王晶，劉忠玄

(貴州省生物研究所，貴州 貴陽 550009)

冬小包腳菇(Volvariella brumalisHe sp.)俗稱低溫草菇、谷樁菌，隸屬于光柄菇科(Pluteaceae)包腳菇屬(Volvariella)，是何紹昌先生在1987年發(fā)現(xiàn)的新種[1]，全國(guó)僅貴州有分布，也是包腳菇屬中唯一一個(gè)低溫出菇種類，出菇溫度4～17℃[2，3]，填補(bǔ)了該屬可食用種類均為中高溫型的缺陷，對(duì)彌補(bǔ)草菇冬季市場(chǎng)缺口具有重要意義。該菇肉質(zhì)鮮美可口，含有豐富的氨基酸和礦物元素，具有重要的市場(chǎng)價(jià)值和科研價(jià)值[4，5]。由于其野生資源較少、分離及培養(yǎng)難度大、馴化產(chǎn)量不穩(wěn)定等原因，目前僅在野外生境、形態(tài)特征、仿生栽培等方面有研究[2，6]，在高效栽培、耐低溫機(jī)制等方面仍處于空白。

土壤微生物群落是土壤生態(tài)系統(tǒng)預(yù)警和敏感性的重要指標(biāo)之一[7]，其對(duì)食用菌菌塘的形成、養(yǎng)分調(diào)節(jié)和生態(tài)系統(tǒng)物質(zhì)循環(huán)和能量流動(dòng)具有重要意義[8]。研究表明，土壤微生物對(duì)食用菌菌絲體的生長(zhǎng)、菌核的形成、子實(shí)體的發(fā)生均起著關(guān)鍵作用[9，10]。近年來，有關(guān)食用菌土壤微生物研究較少，主要集中在物種組成、結(jié)實(shí)相關(guān)性、連作障礙等方面，尚未見不同生長(zhǎng)發(fā)育時(shí)期菌基土壤微生物研究的相關(guān)報(bào)道。因此，本試驗(yàn)以貴州特有的野生冬小包腳菇菌基土壤為材料，研究其微生物群落結(jié)構(gòu)與組成、土壤理化性質(zhì)，旨在了解冬小包腳菇不同生長(zhǎng)發(fā)育時(shí)期土壤微生物群落組成和結(jié)構(gòu)、理化性質(zhì)，以期為冬小包腳菇人工馴化栽培、穩(wěn)產(chǎn)高產(chǎn)及功能微生物菌群的開發(fā)提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 樣品采集

1.1.1 子實(shí)體的采集和培養(yǎng)基 供試菌株:野外采集的冬小包腳菇子實(shí)體，經(jīng)組織分離培養(yǎng)后得到，現(xiàn)保藏于貴州省生物研究所。

分離培養(yǎng)基:馬鈴薯(去皮)200 g，稻草40 g(剪成2～3 cm段，沸水30 min)，葡萄糖20 g，蛋白胨2 g，KH2PO40.5 g，K2HPO40.5 g，MgSO4·7H2O 0.5 g，維生素B110 mg，瓊脂粉20 g，去離子水1 000 mL，pH自然。

1.1.2 土壤樣品采集 冬小包腳菇菌基土壤于2020年12月底采集自貴州省遵義市匯川區(qū)板橋鎮(zhèn)三衙莊、大溝村(海拔879～1 000 m，溫度6.5℃)。野生冬小包腳菇主要生長(zhǎng)在種植水稻后輪作種植小麥、油菜的農(nóng)田。戴無菌手套和口罩，選擇蛋形期(E1)、伸長(zhǎng)期(L2)、成熟期(M3)和自溶期(A4)的冬小包腳菇各3株(圖1)，小心挖取子實(shí)體及菌托土壤，用無菌鑷子刮取冬小包腳菇菌托表面的土壤后，置于滅菌離心管中，放入車載冰箱-20℃保存?zhèn)溆茫膊杉瘶悠?2個(gè)。去除土壤表面的雜草等雜物后，取子實(shí)體周邊半徑10 cm、深度0～10 cm的土壤，每個(gè)子實(shí)體采集1份，共12份，裝入自封袋，用于土壤理化指標(biāo)分析。

圖1 野生冬小包腳菇不同生長(zhǎng)發(fā)育期

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 冬小包腳菇菌株的分離與鑒定 采用組織分離法對(duì)冬小包腳菇子實(shí)體進(jìn)行分離，置于18℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，將培養(yǎng)得到的菌絲體進(jìn)一步純化后進(jìn)行分子鑒定。采用生工生物工程(上海)股份有限公司生產(chǎn)的Ezup柱式真菌基因組DNA抽提試劑盒提取真菌基因組DNA，并用真菌通用引物(ITS1:5′-TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3′；ITS4:5′-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3′)進(jìn)行PCR擴(kuò)增，PCR反應(yīng)體系(25 μL):基因組DNA(20～50 ng/μL)0.5 μL，10×buffer(含Mg2+)2.5 μL，dNTP(2.5 mmol/L)1 μL，Taq酶0.2 μL，正反向引物(10 μmol/L)各0.5 μL，加去離子水至25 μL。反應(yīng)程序:94℃預(yù)變性4 min；94℃變性15 s，58℃退火15 s，72℃延伸1 min，共35個(gè)循環(huán)；72℃再延伸5 min，4℃終止反應(yīng)保存。擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)1.0%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)后，送生工生物工程(上海)股份有限公司測(cè)序。

1.2.2 土壤理化指標(biāo)測(cè)定 土壤理化指標(biāo)由貴州省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)資源與環(huán)境檢測(cè)中心進(jìn)行測(cè)定。土壤全氮、全磷、全鉀、堿解氮、有效磷、速效鉀、有機(jī)質(zhì)含量和pH值分別依據(jù)NY/T 53—1987、NY/T 88—1988、NY/T 87—1988、LY/T 1228—2015、NY/T 1121.7—2014、NY/T 889—2004、NY/T 1121.6—2006、NY/T 1377—2007測(cè)定。

1.2.3 土壤樣品DNA提取和PCR擴(kuò)增 采用Soil Genomic DNA Kit試劑盒提取菌基土壤DNA，用超微量分光光度計(jì)檢測(cè)所提取DNA的濃度和質(zhì)量。利用通用引物338F(5′-ACTCCTACGGGAGGCAGCAG-3′)和806R(5′-GGACTACHVGGGTWTCTAAT-3′)擴(kuò)增細(xì)菌16S rDNA的V3～V4可變區(qū)，引物ITS1F(5′-CTTGGTCATTTAGAGGAAGTAA-3′)和ITS2R(5′-GCTGCGTTCTTCATCGATGC-3′)擴(kuò)增真菌ITS區(qū)域，PCR擴(kuò)增體系和程序同1.2.1，PCR產(chǎn)物經(jīng)1.0%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)后純化，送至上海美吉生物醫(yī)藥科技有限公司測(cè)序。

1.2.4 數(shù)據(jù)分析 利用FLASH和fastp軟件，根據(jù)PE reads之間的overlap關(guān)系，對(duì)各樣本數(shù)據(jù)進(jìn)行優(yōu)化和質(zhì)控過濾，得到有效數(shù)據(jù)。按照97%相似水平下的OTU進(jìn)行生物信息統(tǒng)計(jì)分析，將OTU與NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)比對(duì)并對(duì)OTU進(jìn)行物種注釋。利用交互式微生物多樣性云分析平臺(tái)(www.majorbio.com，上海美吉生物醫(yī)藥科技有限公司)進(jìn)行Alpha多樣性分析，包括Shannon指數(shù)、Simpson指數(shù)、ACE指數(shù)和Chao l指數(shù)；采用RDP classifier貝葉斯算法對(duì)OTU代表序列進(jìn)行分類學(xué)分析，并統(tǒng)計(jì)各樣本的物種組成和相對(duì)豐度，繪制柱狀圖和韋恩圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 冬小包腳菇子實(shí)體分子鑒定

經(jīng)PCR擴(kuò)增和序列測(cè)定，結(jié)果顯示供試冬小包腳菇菌株rDNA ITS區(qū)段長(zhǎng)度為640 bp，上傳GenBank得到登錄號(hào)為OM108495，經(jīng)Blast比對(duì)，與Volvopluteus gloiocephalus和Volvariella gloiocephala相似性較高，下載相似序列20條，并結(jié)合托光柄菇屬(Volvopluteus)、包腳菇屬(Volvariella)及光柄菇科下光柄菇屬(Pluteus)常見種序列，共同構(gòu)建冬小包腳菇系統(tǒng)發(fā)育樹。由圖2可知，該系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系可分為三大類群，包腳菇屬、托光柄菇屬和光柄菇屬各為一個(gè)類群，且冬小包腳菇屬于托光柄菇屬類群；若分為兩大類群，包腳菇屬和托光柄菇屬在同一類群，為傳統(tǒng)定義的包腳菇屬，光柄菇屬單獨(dú)為一個(gè)類群，既冬小包腳菇屬于傳統(tǒng)定義的Volvariella類群。

圖2 基于ITS序列構(gòu)建的冬小包腳菇系統(tǒng)發(fā)育樹

2.2 菌基土壤理化性質(zhì)分析

由表1可知，冬小包腳菇不同生長(zhǎng)發(fā)育期菌基土壤全氮、全磷、全鉀含量無顯著差異(P＞0.05)。土壤速效養(yǎng)分指標(biāo)堿解氮、速效鉀和有機(jī)質(zhì)均表現(xiàn)為先增加后減少的趨勢(shì)，伸長(zhǎng)期(L2)最高，自溶期(A4)最低。有效磷含量表現(xiàn)為成熟期(M3)＞伸長(zhǎng)期(L2)＞自溶期(A4)＞蛋形期(E1)，成熟期(M3)和伸長(zhǎng)期(L2)的含量顯著高于自溶期(A4)和蛋形期(E1)。冬小包腳菇菌基土壤顯弱酸性，不同生長(zhǎng)期pH值波動(dòng)較小，在6.45～7.02之間。

表1 冬小包腳菇土壤理化性質(zhì)

2.3 野生冬小包腳菇菌基土壤微生物多樣性分析

如圖3A所示，冬小包腳菇菌基土壤中共獲得2 645個(gè)細(xì)菌OTUs，4個(gè)生長(zhǎng)階段依次分別有2 590、2 579、2 579、2 578個(gè)OTUs。冬小包腳菇各生長(zhǎng)階段菌基土壤共有OTUs為2 462個(gè)，蛋形期(E1)特有14個(gè)OTUs，伸長(zhǎng)期(L2)特有6個(gè)OTUs，成 熟 期(M3)和 自 溶 期(A4)特 有1個(gè)OTU。

如圖3B所示，冬小包腳菇菌基土壤中共獲得590個(gè)真菌OTUs，4個(gè)生長(zhǎng)階段依次分別有454、473、460、444個(gè)OTUs。冬小包腳菇不同生長(zhǎng)階段菌基土壤共有OTUs為309個(gè)，蛋形期(E1)特有18個(gè)OTUs，伸長(zhǎng)期(L2)特有28個(gè)OTUs，成熟期(M3)特有8個(gè)OTUs，自溶期(A4)特有21個(gè)OTUs。

圖3 細(xì)菌(A)、真菌(B)OTU樣本分布韋恩圖

如表2所示，各樣品細(xì)菌的覆蓋度均大于98.00%，真菌覆蓋度均大于99.00%，能夠代表相應(yīng)樣本中細(xì)菌和真菌的真實(shí)信息。細(xì)菌和真菌的Shannon指數(shù)和Simpson指數(shù)在冬小包腳菇不同生長(zhǎng)發(fā)育階段間差異不顯著(P＞0.05)。從豐富度指數(shù)可以看出，細(xì)菌的ACE指數(shù)和Chao 1指數(shù)在冬小包腳菇不同生長(zhǎng)階段間差異不顯著(P＞0.05)；真菌的ACE指數(shù)和Chao 1指數(shù)在冬小包腳菇不同生長(zhǎng)階段間存在差異，整體表現(xiàn)為先增加后下降的趨勢(shì)，均在成熟期(M3)達(dá)到最大值，說明成熟期冬小包腳菇菌基土壤真菌群落最為豐富。

表2 冬小包腳菇菌基土壤微生物群落Alpha多樣性分析

2.4 野生冬小包腳菇菌基土壤微生物群落結(jié)構(gòu)分析

冬小包腳菇菌基土壤細(xì)菌共鑒定出22個(gè)綱，豐富度排名前十的綱按占比依次分別為α-變形菌綱(Alphaproteobacteria)13.36%(該值為各生長(zhǎng)階段平均值，下同)、低溫丙型變形細(xì)菌綱(Gamma-proteobacteria)11.85%、放線菌綱Actinobacteria 11.24%、厭氧繩菌綱(Anaerolineae)7.54%、Vicinamibacteria 7.50%、嗜熱油菌綱(Thermoleophilia)6.14%、酸微菌綱(Acidimicrobiia)3.15%、擬桿菌綱(Bacteroidia)2.74%、酸桿菌綱(Acidobacteriae)2.41%、芽單胞菌綱(Gemmatimonadetes)2.27%(圖4A)。隨著冬小包腳菇的生長(zhǎng)發(fā)育，菌基土壤細(xì)菌中α-變形菌綱、低溫丙型變形細(xì)菌綱、放線菌綱的占比整體表現(xiàn)為逐漸下降的趨勢(shì)，不同生長(zhǎng)發(fā)育期間其他細(xì)菌門相對(duì)豐度差異均較小。

如圖4B所示，冬小包腳菇菌基土壤真菌共鑒定出11個(gè)綱，豐富度排名前十的綱占比依次分別為糞殼菌綱(Sordariomycetes)38.76%、盤菌綱(Pezizomycetes)18.97%、被孢霉綱(Mortierellomycetes)17.03%、座 囊 菌 綱(Dothideomycetes)6.19%、錘舌菌綱(Leotiomycetes)5.87%、傘菌綱(Agaricomycetes)4.90%、羅茲菌門未確定綱(unclassified_p_Rozellomycota)2.02%、油壺菌綱(Olpidiomycetes)1.60%、被孢霉門未確定綱(unclassified_p_Mortierellomycota)1.32%、散囊菌綱(Eurotiomycetes)1.16%。各生長(zhǎng)階段，糞殼菌綱為主要優(yōu)勢(shì)類群，盤菌綱和被孢霉綱在冬小包腳菇不同生長(zhǎng)期的分布存在差異，具體表現(xiàn)為蛋形期(E1)和伸長(zhǎng)期(L2)糞殼菌綱和被孢霉綱為優(yōu)勢(shì)綱，成熟期(M3)和自溶期(A4)糞殼菌綱和盤菌綱為優(yōu)勢(shì)綱。隨著冬小包腳菇的生長(zhǎng)發(fā)育，菌基土壤真菌中糞殼菌綱和被孢霉綱占比表現(xiàn)為下降趨勢(shì)，盤菌綱整體表現(xiàn)為逐漸增加的趨勢(shì)。

圖4 土壤細(xì)菌(A)、真菌(B)綱水平上組成差異

如圖5A，在屬水平上，冬小包腳菇菌基土壤細(xì)菌群落中優(yōu)勢(shì)屬為norank_f_norank_o_Vicinamibacterales(分類學(xué)譜系中未分類的科學(xué)名稱，標(biāo)記為unclassified；分類系統(tǒng)中無該類層級(jí)的科學(xué)名稱，標(biāo)記為norank)，占比超過1.00%的屬有16個(gè)。冬小包腳菇菌蛋形期(E1)土壤中norank_f_norank_o_Vicinamibacterales、norank_f_KD4-96、unclassified_f_Intrasporangiaceae、Gaiella為優(yōu)勢(shì)細(xì)菌群落(相對(duì)豐度＞2.00%)，伸長(zhǎng)期(L2)土壤中norank_f_norank_o_Vicinamibacterales、norank_f_KD4-96、norank_f_Gemmatimonadaceae為優(yōu)勢(shì)細(xì)菌群落；成熟期(M3)菌基土壤中norank_f_norank_o_Vicinamibacterales、norank_f_Vicinamibacteraceae、norank_f_KD4-96、unclassified_f_Intrasporangiaceae為優(yōu)勢(shì)細(xì)菌群落；自溶期(A4)norank_f_norank_o_Vicinamibacterales、norank_f_67-14、Gaiella、norank_f_KD4-96為優(yōu)勢(shì)細(xì)菌群落。不同生長(zhǎng)發(fā)育期其他細(xì)菌屬相對(duì)豐度存在一定差異，norank_f_norank_o_Vicinamibacterales的相對(duì)豐度在冬小包腳菇不同生長(zhǎng)發(fā)育期菌基土壤中都超過2.00%，為共有優(yōu)勢(shì)群落。但細(xì)菌群落相對(duì)豐度都低于6.00%，且在屬水平上未知分類細(xì)菌在48.00%以上。

如圖5B，冬小包腳菇菌基土壤真菌群落優(yōu)勢(shì)屬為被孢霉屬(Mortierella)，占比超過2.00%的屬有11個(gè)。蛋形期(E1)菌基土壤中被孢霉屬、Pseudaleuria屬、瓶毛殼屬(Lophotrichus)為優(yōu)勢(shì)真菌群落(相對(duì)豐度＞10%)；伸長(zhǎng)期(L2)菌基土壤中被孢霉屬、Pseudaleuria屬為優(yōu)勢(shì)真菌群落；成熟期(M3)菌基土壤中被孢霉屬、Pseudaleuria屬、瓶毛殼屬為優(yōu)勢(shì)真菌群落；自溶期(A4)菌基土壤中被孢霉屬、Pseudaleuria屬為優(yōu)勢(shì)真菌群落。冬小包腳菇不同生長(zhǎng)發(fā)育期屬相對(duì)豐度存在一定差異，被孢霉屬和Pseudaleuria屬的相對(duì)豐度在菌基土壤中均超過10.00%，為共有優(yōu)勢(shì)群落。

圖5 土壤細(xì)菌(A)、真菌(B)屬水平上的熱圖分析

2.5 土壤真菌、細(xì)菌優(yōu)勢(shì)屬與土壤理化因子相關(guān)性分析

選擇在分類水平總豐度前8的門，評(píng)估冬小包腳菇菌基土壤細(xì)菌、真菌與環(huán)境變量之間的相關(guān)性。由表3可知，冬小包腳菇菌基土壤細(xì)菌中綠彎菌門與土壤pH值呈顯著負(fù)相關(guān)；厚壁菌門與土壤全磷、有效磷含量呈顯著正相關(guān)；擬桿菌門與土壤堿解氮含量呈顯著正相關(guān)。其他細(xì)菌群落與土壤理化性質(zhì)之間的相關(guān)性不顯著。土壤真菌優(yōu)勢(shì)門與土壤理化因子相關(guān)性分析結(jié)果顯示，羅茲菌門與土壤全氮、全鉀含量呈顯著或極顯著正相關(guān)；油壺菌門與土壤全磷含量呈顯著正相關(guān)；壺菌門與土壤全氮、全鉀、有機(jī)質(zhì)含量呈顯著或極顯著負(fù)相關(guān)；捕蟲霉門與土壤有效磷含量呈顯著正相關(guān)。

表3 土壤微生物優(yōu)勢(shì)門與土壤理化因子相關(guān)性分析

3 討論與結(jié)論

對(duì)冬小包腳菇進(jìn)行系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系研究發(fā)現(xiàn)，其屬于Volvopluteus類群，也可屬于傳統(tǒng)定義的Volvariella類群。Volvopluteus是2011年由Justo等[11，12]從傳統(tǒng)Volvariella類群中分出來的新類群，而冬小包腳菇早在1987年就已被命名。在系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系中，冬小包腳菇同粘蓋草菇親緣性較近，但兩者在子實(shí)體菌蓋顏色和發(fā)生季節(jié)等方面都存在明顯差異[13]。在不同生長(zhǎng)發(fā)育期的菌基土壤中也發(fā)現(xiàn)了一定量的Volvopluteus類群序列，這說明冬小包腳菇菌基土壤中含有大量自身菌絲，這也是冬小包腳菇出菇的前提。

微生物群落多樣性研究表明，在冬小包腳菇不同生長(zhǎng)發(fā)育階段菌基土壤真菌物種豐富度ACE指數(shù)和Chao 1指數(shù)存在明顯差異，整體表現(xiàn)為先增加后下降的趨勢(shì)，均在成熟期(M3)達(dá)到最大值。土壤細(xì)菌類群中，變形菌門的α-變形菌綱和低溫丙型變形細(xì)菌綱、放線菌門的放線菌綱和嗜熱油菌綱、綠彎菌門的厭氧繩菌綱、酸桿菌門的Vicinamibacteria綱均占明顯優(yōu)勢(shì)，與趙玉卉等[14]對(duì)野生羊肚菌Morchella vulgaris根際細(xì)菌類群的研究結(jié)果一致。變形菌門分布廣泛，是土壤中豐度最大的細(xì)菌之一，也是土壤中多種化學(xué)循環(huán)的重要參與者[15]，其可能在冬小包腳菇菌基土壤的化學(xué)循環(huán)過程具有一定的作用。真菌類群中，子囊菌門的糞殼菌綱、盤菌綱、座囊菌綱、錘舌菌綱，被孢霉門的被孢霉綱，擔(dān)子菌門的傘菌綱占明顯優(yōu)勢(shì)，主要是由于稻草還田造成農(nóng)田土壤中木質(zhì)纖維素的含量增加，促使子囊菌門和擔(dān)子菌門成為土壤真菌的優(yōu)勢(shì)類群[16]。但是菌基土壤中未定義的綱仍占有一定比例，表明菌基土壤中仍存在大量的未知細(xì)菌和真菌。

冬小包腳菇不同生長(zhǎng)發(fā)育期優(yōu)勢(shì)菌屬有一定的差異，但存在一些共有的類群。已知共有細(xì)菌類群主要有分枝桿菌屬(Mycobacterium)、棒狀桿菌屬(Rokubacteriales)、類諾卡氏菌屬(Nocardioides)、間孢囊菌屬(Intrasporangium)、鞘氨醇單胞菌屬(Sphingomonas)、節(jié)桿菌屬(Arthrobacter)、硫桿菌屬(Thiobacillus)等。間孢囊菌屬某些菌株可顯著降低土壤中鉻的毒性，能獨(dú)特地產(chǎn)堿性纖維素酶降解稻草中纖維素供冬小包腳菇生長(zhǎng)[17，18]。鞘氨醇單胞菌屬中的鞘氨醇單胞菌(Pseudomonas paucimobil)在降解環(huán)境污染物、抗氧化衰老、與植物互作等領(lǐng)域發(fā)揮重要作用[19，20]。楊倩倩等[21]對(duì)褐環(huán)乳牛肝菌(Suillus luteus)根際土進(jìn)行研究發(fā)現(xiàn)，節(jié)桿菌屬的P6菌株能高效降解土壤中的有機(jī)磷，表明食用菌可以通過影響菌基解磷細(xì)菌的種類來改善磷營(yíng)養(yǎng)狀況。菌基土壤共有的主要真菌為被孢霉屬、Pseudaleuria屬、瓶毛殼屬、綠核菌屬(Ustilaginoidea)、翅孢殼屬(Emericellopsis)、托光柄菇屬、Pseudeurotium屬等。被孢霉屬為主要優(yōu)勢(shì)真菌，可能是由于該屬大多數(shù)種類是嗜冷真菌，長(zhǎng)期施肥能導(dǎo)致農(nóng)田土壤被孢霉屬的豐度大量增加[22，23]。被孢霉屬某些類群是重要的解磷真菌，能夠從土壤中釋放磷、緩解土壤酸化、降解穩(wěn)定且難分解的有機(jī)物，對(duì)促進(jìn)養(yǎng)分循環(huán)和保持土壤肥力具有重要作用[24-26]。綠核菌屬的稻綠核菌(Ustilaginoidea virens)能侵染水稻穗部引發(fā)稻曲病，稻曲病不僅影響水稻產(chǎn)量和質(zhì)量，還可產(chǎn)生毒素威脅人畜健康[27，28]。

在冬小包腳菇生長(zhǎng)的過程中，土壤pH值逐漸減低，全氮和全磷含量表現(xiàn)為先增加后減少的趨勢(shì)，成熟期全氮和全磷含量最高，這與蘇德偉等[29]研究棘托竹生長(zhǎng)土壤養(yǎng)分的變化結(jié)果一致；土壤pH值逐漸減低可能與冬小包腳菇生長(zhǎng)發(fā)育過程中的代謝產(chǎn)物有關(guān)。在冬小包腳菇不同生長(zhǎng)階段菌基土壤中細(xì)菌豐度較高的變形菌門和放線菌門與土壤理化因子間無顯著相關(guān)性，這與李艷春等[30]對(duì)茶園間作靈芝中土壤、魏艷晨等[31]對(duì)珍珠豬毛菜根際土壤的研究結(jié)果一致。厚壁菌門與土壤全磷、有效磷含量呈顯著正相關(guān)，表明其更適合生存于磷含量較高的土壤。子囊菌門、擔(dān)子菌門與大部分土壤養(yǎng)分元素?zé)o明顯相關(guān)性，說明這類菌群對(duì)外界環(huán)境適應(yīng)性較好，可能與冬小包腳菇生長(zhǎng)在收割完水稻輪作的農(nóng)田里，水稻秸稈還田和追加農(nóng)家肥提供了其充足的養(yǎng)分有關(guān)。

本研究明確了冬小包腳菇不同生長(zhǎng)發(fā)育階段菌基土壤細(xì)菌、真菌的多樣性及群落結(jié)構(gòu)，分析了土壤和主要微生物類群的關(guān)系。下一步研究中應(yīng)選擇更為系統(tǒng)和科學(xué)的方法，研究微生物群落、環(huán)境因子與冬小包腳菇出菇關(guān)系，探索影響冬小包腳菇人工栽培的關(guān)鍵因子。