李樸超 王小文 唐 海 朱柏儒 劉全禮▲

1.包頭醫(yī)學院藥學院，內(nèi)蒙古包頭 014040；2.天士力研究院江蘇天士力帝益藥業(yè)有限公司，天津 300410

托拉塞米是一種新型長效吡啶磺酰脲類利尿劑，作用于腎小管髓袢。臨床上常用于治療心力衰竭，原發(fā)性高血壓、腎功能不全等。托拉塞米與呋塞米在治療腦出血后急性腦水腫方面相比較，托拉塞米能更有效地減少水腫體積和血腫體積，降低患者顱內(nèi)壓、減少并發(fā)癥。托拉塞米性狀為白色疏松塊狀物，最早是由德國貝林格·曼海姆（Boehringer Mannheim）公司研究開發(fā)的，1993年首先在德國上市，1994年獲美國食品藥品監(jiān)督管理局（Food and Drug Administration，F(xiàn)DA）批準，目前已在意大利、美國、英國、瑞士、加拿大、中國等多個國家銷售，該藥是現(xiàn)今市場上第4代髓袢利尿藥。托拉塞米作為第4代髓袢利尿藥，具有安全性高、排鉀作用相對較弱的特點，同時也具有高血糖、高血鉀發(fā)生率低的優(yōu)點。注射用托拉塞米質(zhì)量標準收載于2020年版《中華人民共和國藥典（二部）》（《中國藥典》），此外還收載托拉塞米片、托拉塞米膠囊。目前市售的注射用托拉塞米有關(guān)物質(zhì)I｛4-[（3-甲基苯基）氨基]-3-吡啶磺酰胺｝的含量較高，且存在凍干粉不穩(wěn)定的現(xiàn)象。因此，開發(fā)一種質(zhì)量穩(wěn)定、有關(guān)物質(zhì)I低的注射用托拉塞米十分必要。本研究通過處方篩選、工藝考察、質(zhì)量研究，為注射用托拉塞米的開發(fā)和大生產(chǎn)提供了依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器與設(shè)備

LGJ-10冷凍干燥機（北京松源華興科技發(fā)展有限公司），PZL10型軋蓋機（南京博健科技有限公司），GYHH12型液體灌裝加塞機（上海新旭發(fā)制藥機械有限公司），Thermo UtiMate 3000高效液相色譜儀（賽默飛世爾科技有限公司），XS105DU型電子分析天平[梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司]，ME2002電子分析天平（METTLER TOLEDO公司）。

1.2 試藥

托拉塞米（自制，批號：160506），碳酸氫鈉（天津市風船化學試劑科技有限公司，批號：2010103），氫氧化鈉（天津市康科德科技有限公司，批號：190722），甘露醇（昆明龍津藥業(yè)股份有限公司，批號：M52017002），托拉塞米對照品（自制，批號：160402），托拉塞米雜質(zhì)I工作標準品（自制，批號：20150308），乙腈（Merck公司，批號：JA112230），三乙胺（天津市康科德科技有限公司，批號：160214），注射用水（自制，批號：20200902）。

2 方法與結(jié)果

2.1 處方篩選的考察

通過查詢《中國藥典》，本研究對注射用托拉塞米的處方進行初步試驗。擬定本處方為托拉塞米10 mg、碳酸氫鈉20 mg、甘露醇100 mg，其中考察甘露醇和山梨醇對處方的影響，擬定另一處方為托拉塞米10 mg、碳酸氫鈉20 mg、山梨醇100 mg。在研究托拉塞米的水溶性試驗中，發(fā)現(xiàn)碳酸氫鈉對托拉塞米具有較好的助溶作用，還具有一定的穩(wěn)定作用，所以選擇碳酸氫鈉作為增溶劑。甘露醇作為制劑中常用的賦形劑，一般賦形劑的用量為藥物重量的1~50倍，而山梨醇作為甘露醇的同分異構(gòu)體，也具有與甘露醇類似的效果，所以本處方考察甘露醇和山梨醇用量分別為100 mg、150 mg時對處方的影響。

按處方配液，采用5%氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH范圍在8~10，灌裝，進行凍干，考察性狀、復(fù)溶時間，pH值和有關(guān)物質(zhì)，結(jié)果見表1。處方中加入甘露醇，山梨醇制備的凍干粉外觀為白色疏松粉末，凍干前后pH值未發(fā)生明顯改變，雜質(zhì)含量隨著時間的延長，有所增加，但均符合規(guī)定。結(jié)果表明，處方中甘露醇用量為100 mg，凍干粉復(fù)溶時間相對較短，pH值變化較小，有關(guān)物質(zhì)含量較低。所以本處方選擇甘露醇用量為100 mg。

表1 處方篩選考察結(jié)果

2.2 工藝參數(shù)的考察

2.2.1 配液溫度、pH的確定 本品為注射用托拉塞米凍干制劑，溶劑為注射用水。托拉塞米溶液在低溫和堿性條件下穩(wěn)定，在酸性和高溫條件下不穩(wěn)定?？紤]到溫度可能對注射用水溶解主藥產(chǎn)生影響，為縮短配制樣品時間，降低配制過程中的損耗，保證凍干制劑的質(zhì)量，選取5、15、25℃考察溫度，pH值范圍在8.00~10.00之間進行考察。測定有關(guān)物質(zhì)和主藥溶解時間。結(jié)果表明，溫度越高，主藥溶解時間越短；溫度越低，有關(guān)物質(zhì)較少且溶液比較穩(wěn)定，結(jié)果見表2。當pH為9.00時，有關(guān)物質(zhì)最少且符合規(guī)定（表3）。

表2 配液溫度考察

表3 不同pH條件下托拉塞米有關(guān)物質(zhì)（%）

2.2.2 脫碳工藝及過濾材料的考察 活性炭是一種具有很強吸附能力的多孔疏松物質(zhì)，常用于注射劑吸附雜質(zhì)、除熱原、增加注射液澄明度。取活性炭配置4份平行的藥液，其中一份不加活性炭，其余三份加入0.01%、0.10%、0.30%的活性炭，考察其吸附能力，是否對主藥產(chǎn)生影響，結(jié)果見表4。藥液含量隨活性炭用量的增加而降低，本工藝中不采用脫炭工藝。過濾材料可能對樣品含量產(chǎn)生一定的影響，因此，本研究考察了不同規(guī)格、不同材質(zhì)的濾膜對主藥含量的影響。按擬定處方配液，分別過0.45 μm尼龍濾膜、0.22 μm尼龍濾膜、0.45 μm聚醚砜濾膜、0.22 μm聚醚砜濾膜、0.45 μm+0.22 μm聚醚砜濾膜，將未過濾的樣品含量與過濾的樣品含量進行對比，調(diào)節(jié)pH值至相近，考察濾膜對樣品含量的影響，結(jié)果見表5。不同材質(zhì)的濾膜對樣品含量具有一定的影響，本品采用無菌過濾，為保證制劑成品的無菌性，選用0.45 μm+ 0.22 μm聚醚砜濾膜進行過濾，對樣品含量幾乎沒有影響。尼龍濾膜、聚醚砜濾膜、不銹鋼容器和硅膠墊進行相容性考察，結(jié)果見表6~8。藥液與尼龍濾膜、聚醚砜濾膜、不銹鋼容器和硅膠墊進行充分接觸4 h，有關(guān)物質(zhì)均符合規(guī)定，故藥液與濾膜、濾器無相容性問題。

表4 不同量的活性炭的吸附效果（%）

表5 不同材質(zhì)濾膜對樣品含量的影響

表6 濾芯相容性考察（尼龍濾膜）（%）

表7 濾芯相容性考察（聚醚砜濾膜）（%）

表8 濾器相容性考察（%）

2.2.3 灌裝容器的考察 近年來，低硼硅玻璃瓶常用來灌裝注射液，且多不與主藥發(fā)生反應(yīng)，本研究優(yōu)先考慮采用低硼硅玻璃瓶。本制劑產(chǎn)品選擇用5、10 ml無色低硼硅玻璃管制注射劑瓶，采用丁基溴橡膠塞進行封裝，考察包裝規(guī)格對制劑產(chǎn)品質(zhì)量的影響，結(jié)果見表9。結(jié)果顯示，選用5 ml或10 ml無色低硼硅玻璃管制注射劑瓶都不影響制劑產(chǎn)品質(zhì)量。

表9 灌裝容器考察結(jié)果

2.2.4 凍干參數(shù)考察 凍干工藝不僅受處方配比的影響，還受到裝量容器、凍干機、預(yù)凍溫度、保溫時間、干燥速率、降溫速率等的影響。通過差示掃描量熱儀和凍干顯微鏡對注射用托拉塞米制劑工藝的考察，降溫梯度考察、干燥工藝考察，最終設(shè)計了3種凍干工藝，考察凍干產(chǎn)品質(zhì)量。最終，凍干曲線3制備的注射用托拉塞米水分含量低，雜質(zhì)含量低，質(zhì)量最好，因此本研究采用凍干工藝為：制品-40℃，預(yù)凍3 h；導(dǎo)熱油升溫至0℃，保溫40~60 h；導(dǎo)熱油升溫至20℃，保溫6~8 h；最終制品在35℃，保溫6~8 h出箱（表10）。

表10 凍干參數(shù)考察結(jié)果

2.3 質(zhì)量研究

2.3.1 含量測定 含量測定和有關(guān)物質(zhì)測定照《中國藥典（三部）》通則0512項下進行測定。色譜條件為：色譜柱：月旭Ultimate C（250 mm×4.60 mm，5 μm）色譜柱，流動相：甲醇-0.10%三乙胺溶液（用磷酸調(diào)節(jié)pH值至3.50）（45∶55），流速：1.00 ml/min。檢測波長為291 nm，柱溫30℃，進樣體積為20 μl。系統(tǒng)適用性色譜圖中要求托拉塞米峰與雜質(zhì)Ⅰ峰的分離度＞5。精密量取本品裝量差異項下內(nèi)容物適量（約相當于托拉塞米20 mg），至100 ml容量瓶中，用流動相定容至刻度，搖勻，作為供試品溶液。精密稱取標準品20 mg，至100 ml量瓶中，加甲醇18 ml溶解，在加0.10%三乙胺22 ml，用流動相稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。精密量取供試品、對照品各20 μl注入液相色譜儀，按外標法計算峰面積。得202009031、202009032、202009033批樣品含量分別為100.21%，100.83%、99.82%?！吨袊幍洹芬?guī)定注射用托拉塞米含托拉塞米應(yīng)為標示量的90.00%~110.00%，pH值應(yīng)為8.50~9.50，按外標法以峰面積計算，含雜質(zhì)Ⅰ不得過標示量的0.50%，其他單個雜質(zhì)峰不得大于對照溶液主峰面積0.20%，其他各雜質(zhì)峰面積的和不得大于對照溶液主峰面積的0.50%。

2.3.2 穩(wěn)定性考察 本研究對202009031、202009032、202009033批制劑樣品進行穩(wěn)定性考察，《中國藥典》規(guī)定本品的貯藏條件為遮光，密閉保存，本研究模擬市面上的產(chǎn)品在室溫（20~25℃），相對濕度（50%~60%）條件下進行加速試驗，雖然市面上的產(chǎn)品雜質(zhì)含量符合《中國藥典》規(guī)定，但相對而言雜質(zhì)含量比較高，為了降低雜質(zhì)含量，提升產(chǎn)品質(zhì)量，本研究選擇更加嚴苛的貯藏條件，通過參考各國藥典貯藏條件，最終選擇在2~8℃條件下進行長期試驗，考察制劑樣品的性狀、pH值、含量和有關(guān)物質(zhì)。結(jié)果見表11~16。202009031制劑樣品在長期試驗、加速試驗下，水分有所增加，但均在規(guī)定范圍內(nèi)，其他考察指標無明顯變化。202009032制劑樣品在長期試驗、加速試驗期間，有關(guān)物質(zhì)略有增加，水分結(jié)果有所增加，但均在限度范圍內(nèi)，其他考察指標無明顯變化。202009033制劑樣品在長期試驗、加速試驗期間，水分結(jié)果有所增加，有關(guān)物質(zhì)略有增加，但均在限度范圍內(nèi)，其他考察指標無明顯變化?！吨袊幍洹芬?guī)定本品照水分測定法（通則0832第一法1）測定，水分不得過8.0%，此外細菌內(nèi)毒素檢查，溶液澄清度和顏色檢查、裝量差異檢查、其他檢查等均符合規(guī)定。

表11 202009031長期試驗結(jié)果

表12 202009031加速試驗結(jié)果

表13 202009032長期試驗結(jié)果

表14 202009032加速試驗結(jié)果

表15 202009033長期試驗結(jié)果

表16 202009033加速試驗結(jié)果

3 討論

本研究在助溶劑的選擇中考察了醋酸鹽、枸櫞酸鹽、磷酸鹽和碳酸氫鈉，碳酸氫鈉不僅具有助溶作用，還具有一定的穩(wěn)定作用。因此，本研究選擇了碳酸氫鈉作為助溶劑。甘露醇常用于藥物制劑中作賦形劑，本研究考察了甘露醇和山梨醇不同用量對制劑產(chǎn)品的影響，最終選擇了100 mg甘露醇作賦形劑。本制劑產(chǎn)品的功效為利尿，治療多種類型所致的水腫，而甘露醇本身具有脫水、利尿的作用，因此，不用考慮主藥與甘露醇發(fā)生反應(yīng)。

通過對工藝參數(shù)的考察，本研究發(fā)現(xiàn)配液溫度在15~25℃、pH約9.00，凍干參數(shù)總時長約60 h是降低注射用托拉塞米的關(guān)鍵因素，采用0.45 μm+0.22 μm聚醚砜濾膜，幾乎不影響產(chǎn)品質(zhì)量，灌裝容器采用5 ml 或10 ml無色低硼硅玻璃管制注射劑瓶，也不影響產(chǎn)品質(zhì)量。本研究發(fā)現(xiàn)本制劑產(chǎn)品雜質(zhì)Ⅰ含量＜0.20%（中國藥典規(guī)定＜0.50%），由此可見應(yīng)當進一步優(yōu)化藥典規(guī)定，提升產(chǎn)品質(zhì)量。在穩(wěn)定性考察試驗中，本研究發(fā)現(xiàn)溫度采用2~8℃進行長期試驗，可以大大提升產(chǎn)品質(zhì)量，降低有關(guān)物質(zhì)，這為后續(xù)制劑產(chǎn)品開發(fā)者，選擇貯藏條件提供了參考。

本研究通過處方篩選，改變工藝條件，制備出了穩(wěn)定、雜質(zhì)含量低、可行性好、高質(zhì)量的注射用托拉塞米，為實現(xiàn)工業(yè)化大生產(chǎn)提供了參考。