陳建豪，買吾蘭，段進(jìn)剛，張國(guó)新，坤巴哈斯，楊夷平，楊 康，阿達(dá)來(lái)提，古麗巴哈，馬春江

（新疆哈密市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，新疆 哈密市 839000）

口蹄疫(foot-and-mouth disease，F(xiàn)MD)是由口蹄疫病毒引起的一種感染偶蹄目動(dòng)物的急性、熱性、接觸傳染性動(dòng)物疫病，感染患畜出現(xiàn)高熱、特征性水皰，幼畜出現(xiàn)出血性胃腸炎和心肌炎[1]?？谔阋卟《居?個(gè)血清型:A、C、O、SAT1、SAT2、SAT3、AsiaI型。該病是世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（OIE）規(guī)定必須報(bào)告的傳染病之一，我國(guó)列為一類動(dòng)物疫病，嚴(yán)重危害畜牧業(yè)健康發(fā)展。目前，口蹄疫在世界范圍內(nèi)廣泛流行，疫苗免疫仍然是控制該病的最有效措施[2，3]。盡管在新型疫苗和佐劑改良等方面的研究取得了顯著的進(jìn)步，但在全球范圍內(nèi)使用最多的口蹄疫疫苗還是口蹄疫全病毒滅活疫苗[4]。

為研究口蹄疫和小反芻獸疫疫苗聯(lián)合免疫對(duì)動(dòng)物的保護(hù)情況，掌握不同廠家口蹄疫疫苗臨床免疫效果，本試驗(yàn)在哈密市某規(guī)模羊場(chǎng)和牛場(chǎng)開展口蹄疫O型、A型二價(jià)滅活苗免疫效果的研究，以期客觀的評(píng)價(jià)不同廠家口蹄疫疫苗質(zhì)量，為免疫程序的優(yōu)化和免疫方案的制定提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試劑和疫苗

口蹄疫O型抗體液相阻斷ELISA檢測(cè)試劑盒，批號(hào)：20210922101-7；口蹄疫A型抗體液相阻斷ELISA檢測(cè)試劑盒，批號(hào)20210926103-4，試劑生產(chǎn)廠家均為蘭州獸研生物科技有限公司；三種牛羊口蹄疫O型、A型二價(jià)滅活苗和小反芻獸疫疫苗均源于2021年自治區(qū)招標(biāo)采購(gòu)中標(biāo)廠家。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物

選取哈密轄區(qū)某規(guī)模羊場(chǎng)30日齡左右、同一品種、體質(zhì)均勻的羔羊80只，平均分為4組；選取某規(guī)模牛場(chǎng)90日齡左右、同一品種、體質(zhì)均勻的犢牛45只，平均分為3組，各場(chǎng)實(shí)驗(yàn)期間飼養(yǎng)管理方法一致。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 免疫分組

按照重大動(dòng)物疫病強(qiáng)制免疫方案和疫苗說(shuō)明書進(jìn)行免疫注射，首免當(dāng)天前3組實(shí)驗(yàn)羊分別免疫E、F、G三個(gè)不同廠家的口蹄疫二價(jià)滅活疫苗，同時(shí)免疫小反芻獸疫疫苗，第4組實(shí)驗(yàn)羊免疫G廠家疫苗，不免疫小反芻獸疫疫苗，所有實(shí)驗(yàn)羊28 d后強(qiáng)化免疫口蹄疫疫苗。實(shí)驗(yàn)牛首免當(dāng)天3組分別免疫E、F、G三個(gè)不同廠家的口蹄疫二價(jià)滅活疫苗，28 d后強(qiáng)化免疫。疫苗免疫后隨時(shí)觀察并記錄試驗(yàn)動(dòng)物的臨床表現(xiàn)。

1.3.2 樣品采集

分別于首免當(dāng)天、一免后28 d和強(qiáng)化免疫后28 d每組采集血液樣品15份，無(wú)菌分離血清后-20℃保存。

1.3.3 樣品檢測(cè)與判定

口蹄疫O型和A型病毒抗體均采用液相阻斷ELISA檢測(cè)方法進(jìn)行檢測(cè)，根據(jù)試劑盒使用說(shuō)明判定口蹄疫O型和A型抗體合格率。判定標(biāo)準(zhǔn)：當(dāng)抗體效價(jià)≥1:128，被檢血清判為抗體合格，當(dāng)抗體效價(jià)＜1:128，被檢血清判為抗體不合格。

2 結(jié)果與分析

2.1 羊口蹄疫O型免疫抗體檢測(cè)結(jié)果

首次免疫當(dāng)天各組口蹄疫O型抗體處于較低水平，E組抗體合格率為15%，平均抗體效價(jià)為1:35.20，抗體F、G1、G2組抗體合格率為20%，抗體效價(jià)分別為1∶62.40、1∶73.60和1∶60.80。一免后28 d，抗體效價(jià)由高到低分別為F組（1∶145.07）、E組（1:142.93）、G1（1∶106.67）和G2（1∶104.53），合格率分別為66.67%、46.67%、46.67%和53.33%。二免后28 d，四組實(shí)驗(yàn)口蹄疫O型抗體合格率均為100%，抗體效價(jià)由高到低分別為F組（1∶588.80）、E組（1∶512.00）、G1組（1∶418.13）和G2組（1∶315.73），結(jié)果如表1所示。

表1 羊口蹄疫O型免疫抗體檢測(cè)結(jié)果

2.2 羊口蹄疫A型免疫抗體檢測(cè)結(jié)果

首次免疫當(dāng)天各組口蹄疫A型病毒抗體處于較低水平，抗體合格率為10%～30%，抗體效價(jià)在1:33.60和1∶73.60之間。一免后28 d，抗體效價(jià)由高到低分別為F組（1∶160）、G1（1∶85.33）、G2（1∶77.87）和E組（1∶69.33），合格率分別為66.67%、26.67%、40.00%和20.00%。二免后28 d，抗體效價(jià)由高到低分別為F組（1∶302.93）、G1組（1∶290.13）、G2組（1∶262.40）和E組（1∶177.07），抗體合格率分別為93.33%、100%、86.67%和73.33%。見(jiàn)表2。

表2 羊口蹄疫A型免疫抗體檢測(cè)結(jié)果

2.3 ?？谔阋逴型免疫抗體檢測(cè)結(jié)果

首次免疫當(dāng)天各組口蹄疫O型病毒抗體合格率為0%，抗體效價(jià)分別為1∶12.27、1∶19.73和1∶24.00。一免后28 d，E組O型抗體效價(jià)為1:165.33，抗體合格率為46.67%，F(xiàn)組O型抗體效價(jià)為1∶125.87，抗體合格率為40.00%，G組O型抗體效價(jià)為1:110.93，抗體合格率為53.33%。二免后28 d，E組O型抗體效價(jià)為1∶554.67，抗體合格率為100%，F(xiàn)組O型抗體效價(jià)為1∶441.60，抗體合格率為86.67%，G組O型抗體效價(jià)為1∶610.13，抗體合格率為93.33%，結(jié)果如表3所示。

表3 ?？谔阋逴型免疫抗體檢測(cè)結(jié)果

2.4 ?？谔阋逜型免疫抗體檢測(cè)結(jié)果

首次免疫當(dāng)天各組口蹄疫A型病毒抗體合格率為0%，抗體效價(jià)分別為1∶11.20、1∶10.13和1∶18.13。一免后28 d，E組A型抗體效價(jià)為1∶77.87，抗體合格率為33.33%，F(xiàn)組A型抗體效價(jià)為1∶162.13，抗體合格率為40.00%，G組A型抗體效價(jià)為1∶192.00，抗體合格率為53.33%。二免后28 d，E組A型抗體效價(jià)為1∶358.40，抗體合格率為86.67%，F(xiàn)組A型抗體效價(jià)為1:819.20，抗體合格率為100%，G組A型抗體效價(jià)為1∶599.47，抗體合格率為93.33%，結(jié)果如表4所示。

表4 牛口蹄疫A型免疫抗體檢測(cè)結(jié)果

3 討 論

目前，在我國(guó)口蹄疫主要流行O型和A型2個(gè)血清型，O型Mya-98毒株和PanAsia毒株以及A型Sea-97 G2毒株，均為周邊國(guó)家（地區(qū)）流行的毒株[5-7]。在西亞和南亞等主要流行地區(qū)動(dòng)物防疫水平較差，引發(fā)疫情的毒株較為復(fù)雜，傳播流行較為廣泛，國(guó)內(nèi)存在田間傳播路徑不明，跨省調(diào)運(yùn)動(dòng)物頻繁，疫苗免疫良莠不齊等[8]問(wèn)題，都為我國(guó)口蹄疫的防控增添了困難。一旦外來(lái)病流入，缺乏足夠的重視和準(zhǔn)備，必將造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失，所以多種毒株的疫苗儲(chǔ)備、新型疫苗的研發(fā)、田間實(shí)驗(yàn)的驗(yàn)證對(duì)疫情的防控、撲滅起到非常重要的作用。

吳建華等[9]通過(guò)將2018年口蹄疫和小反芻獸疫疫苗傳統(tǒng)免疫方法免疫與2019年、2020年聯(lián)合免疫方法免疫相比較，結(jié)果顯示，2019年和2020年口蹄疫和小反芻獸疫的免疫抗體合格率均有所提升。米耀云等[10]開展口蹄疫疫苗、小反芻獸疫疫苗和山羊傳染性胸膜肺炎疫苗分點(diǎn)同時(shí)免疫實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明3種疫苗聯(lián)合免疫時(shí)都獲得了良好的免疫效果。本實(shí)驗(yàn)中口蹄疫疫苗單獨(dú)免疫組G1組與口蹄疫和小反芻獸疫疫苗聯(lián)合免疫G2組進(jìn)行比較，聯(lián)合免疫組與單獨(dú)免疫組免疫抗體效價(jià)和抗體合格率都較為相近，且都沒(méi)明顯的免疫副反應(yīng)發(fā)生，表明口蹄疫和小反芻獸疫疫苗聯(lián)合免疫具有良好的免疫效果和較好的安全性。因此開展多種疫苗聯(lián)合免疫，分析評(píng)估疫苗免疫效果和安全性，對(duì)于節(jié)約人力、物力成本，增強(qiáng)動(dòng)物福利，提高免疫效率，都具有重要的推廣和指導(dǎo)意義。

楊國(guó)麗等[11]對(duì)公?？谔阋逴-AsiaI型二價(jià)滅活疫苗跟蹤監(jiān)測(cè)顯示，種公牛口蹄疫O型免疫效果優(yōu)于AsiaI型。鄧飛[12]等對(duì)羊進(jìn)行口蹄疫O-AsiaI型二價(jià)滅活疫苗免疫試驗(yàn)表明，三個(gè)廠家的疫苗免疫后均是O型抗體水平高于AsiaI型抗體水平。本實(shí)驗(yàn)中利用液相阻斷ELISA檢測(cè)口蹄疫O型、A型抗體時(shí)，羊口蹄疫O型抗體合格率和抗體效價(jià)明顯高于A型抗體合格率和抗體效價(jià)，不同疫苗各組之間O型抗體效價(jià)也高于A型抗體效價(jià)。?？谔阋逴型與A型抗體合格率和抗體效價(jià)相比，其中E組和G組疫苗口蹄疫O型抗體效價(jià)高于A型抗體效價(jià)，O型抗體效價(jià)組間差異不明顯（P＞0.05）；F組A型抗體效價(jià)高于O型抗體效價(jià)，A型抗體效價(jià)組間差異較大（P＜0.05）。分析原因可能是二價(jià)滅活疫苗抗原自身的免疫原性存在差異，對(duì)于不同動(dòng)物抗體產(chǎn)生水平差異可能較為明顯。

實(shí)驗(yàn)表明，三個(gè)廠家生產(chǎn)的口蹄疫O型、A型二價(jià)滅活疫苗都能較好的刺激動(dòng)物機(jī)體產(chǎn)生抗體，沒(méi)有明顯的免疫副反應(yīng)。一免后28 d，抗體合格率和抗體效價(jià)依舊不高，必須進(jìn)行強(qiáng)化免疫。二免后28 d口蹄疫O型、A型抗體效價(jià)均能達(dá)到較高水平，抗體合格率符合農(nóng)業(yè)部70%以上的要求，但不同廠家疫苗免疫效果依然存在一定的差異。通過(guò)綜合比較三種口蹄疫O型、A型二價(jià)滅活疫苗免疫牛羊后的抗體效價(jià)和抗體合格率，G組疫苗的免疫抗體合格率最高，O型、A型抗體效價(jià)較為均衡，免疫效果較好。通過(guò)開展口蹄疫O型、A型二價(jià)滅活疫苗免疫效果評(píng)價(jià)，量化評(píng)估不同廠家疫苗質(zhì)量，可以很好的指導(dǎo)實(shí)際生產(chǎn)，選擇優(yōu)質(zhì)疫苗，保證免疫效果和質(zhì)量。

當(dāng)然，影響疫苗免疫效果的因素有很多，如免疫技術(shù)、疫苗質(zhì)量、動(dòng)物品種等，在很多外部條件同等的情況下，動(dòng)物個(gè)體之間的差異也會(huì)造成很大影響。這就需要通過(guò)持續(xù)的抗體水平監(jiān)測(cè)，了解本場(chǎng)動(dòng)物抗體消長(zhǎng)規(guī)律，制定適合本場(chǎng)的最佳免疫程序，做到科學(xué)精準(zhǔn)防控。

4 結(jié) 論

口蹄疫和小反芻獸疫疫苗聯(lián)合免疫，具有良好的免疫效果和較好的安全性?？谔阋叨r(jià)滅活疫苗抗原自身的免疫原性存在差異，對(duì)于不同動(dòng)物抗體產(chǎn)生水平差異可能較為明顯。綜合比較三種口蹄疫O型、A型二價(jià)滅活疫苗免疫牛羊后的抗體效價(jià)和抗體合格率，G組疫苗免疫效果較好。