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        IL-12、TGF-β1在CRSwNP組織中的表達(dá)水平及其臨床意義

        2022-10-19 02:59:34侯薇徐璐蘇濤
        海南醫(yī)學(xué) 2022年19期
        關(guān)鍵詞:鼻息肉酸性粒細(xì)胞

        侯薇,徐璐,蘇濤

        陜西中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院耳鼻喉科,陜西 咸陽 712000

        慢性鼻-鼻竇炎伴鼻息肉(chronic rhinosinusitis with nasal polyp,CRSwNP)是一種以鼻黏膜炎癥和組織重構(gòu)為典型特征的慢性疾病。既往研究統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示,該疾病在我國發(fā)病率為2%~8%[1],其發(fā)病機(jī)制可能與基因遺傳及外界環(huán)境因素影響相關(guān),患者臨床癥狀以持續(xù)性鼻塞、流涕為主要表現(xiàn),同時(shí)可能伴隨嗅覺減退和味覺喪失,嚴(yán)重時(shí)甚至引起呼吸困難或引發(fā)顱、眼部相關(guān)并發(fā)癥[2-3]。現(xiàn)階段臨床診斷CRSwNP主要依據(jù)癥狀表現(xiàn)結(jié)合鼻內(nèi)鏡檢查結(jié)果綜合判定鼻腔健康狀況,部分學(xué)者指出CRSwNP患者鼻黏膜組織發(fā)病期間受炎癥細(xì)胞浸潤,對(duì)局部組織進(jìn)行采樣并進(jìn)行免疫病理學(xué)檢測(cè),可獲取炎癥進(jìn)展信息,有助于臨床進(jìn)一步了解機(jī)體免疫機(jī)制[4]。白介素-12(interleukin-12,IL-12)參與初始T細(xì)胞向Th1細(xì)胞的分化進(jìn)程,可刺激T細(xì)胞發(fā)揮免疫功能,屬于多效細(xì)胞因子[5];轉(zhuǎn)化生長因子β1(transforming growth factor-beta1,TGF-β1)能夠調(diào)控上皮細(xì)胞的生長增殖,鼻息肉的形成和纖維化轉(zhuǎn)變可能受其影響[6]?;诖?,本研究分析CRSwNP患者鼻息肉組織中IL-12、TGF-β1表達(dá)水平,并探討其臨床意義。

        1 資料與方法

        1.1 一般資料回顧性選取2020年1月至2020年12月于陜西中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院就診的58例CRSwNP患者納入觀察組。納入標(biāo)準(zhǔn):(1)符合《中國慢性鼻竇炎診斷和治療指南》[7]相關(guān)診療標(biāo)準(zhǔn),均為首次發(fā)病,經(jīng)過鼻內(nèi)窺鏡、鼻竇CT檢查確診;(2)CRSwNP患者均于本院接受常規(guī)手術(shù)治療切除息肉,并留取息肉組織送至病理實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行檢測(cè);(3)精神及認(rèn)知正常;(4)患者臨床資料保留完整。另選擇同期于本院就診的55例慢性鼻-鼻竇炎不伴鼻息肉(chronic rhinosinusitis without nasal polyps,CRSsNP)患者納入對(duì)照組。所有患者均符合以下排除標(biāo)準(zhǔn):(1)合并哮喘或其他免疫功能異常疾??;(2)心、肺、腎、肝嚴(yán)重?fù)p傷;(3)處于妊娠期或哺乳期的女性患者;(4)合并內(nèi)分泌代謝性疾??;(5)凝血功能障礙或先天功能不足者;(6)合并其它感染性疾病;(7)合并惡性腫瘤;(8)入組前1個(gè)月未使用糖皮質(zhì)激素、免疫調(diào)節(jié)及抗炎藥物治療。觀察組患者中男性35例,女性23例;年齡21~65歲,平均(43.23±5.74)歲;病程2~15年,平均(7.68±2.13)年;既往存在吸煙史32例,無吸煙史26例。對(duì)照組患者中男性34例,女性21例;年齡20~63歲,平均(42.95±5.65)歲;病程1~14年,平均(7.17±2.05)年;既往存在吸煙史30例,無吸煙史25例。兩組患者的基線資料比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),具有可比性。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

        1.2 檢測(cè)方法觀察組患者取鼻息肉組織作為檢測(cè)樣本,對(duì)照組則刮取少量下鼻甲黏膜上皮細(xì)胞組織作為檢測(cè)樣本,分別取100 mg組織樣本,加入1 mL磷酸緩沖鹽溶液,充分絞碎制成組織勻漿,4℃條件下,以3 000 r/min的速度離心15 min,取上清液,采用酶聯(lián)免疫法測(cè)定上清液中IL-12、TGF-β1的表達(dá)水平,試劑盒均購自上海江萊生物科技有限公司,檢驗(yàn)操作嚴(yán)格按照說明書指示執(zhí)行。

        1.3 觀察指標(biāo)(1)比較觀察組與對(duì)照組患者組織中IL-12、TGF-β1的表達(dá)水平;(2)比較觀察組中不同病情嚴(yán)重程度患者L-12、TGF-β1的表達(dá)水平。采用Lund-Mackay內(nèi)鏡評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)對(duì)觀察組患者病情嚴(yán)重程度進(jìn)行分級(jí)[8],評(píng)分1~10分納入輕度組,評(píng)分11~24分納入重度組;(3)比較觀察組中不同炎性細(xì)胞浸潤比例患者L-12、TGF-β1的表達(dá)水平。取觀察組鼻息肉組織進(jìn)行石蠟包埋、切片、常規(guī)染色、脫水、封片處理,制得病理組織切片,于顯微鏡下觀察并統(tǒng)計(jì)組織內(nèi)5個(gè)不同視野區(qū)域的嗜酸性粒細(xì)胞的密度均值,將嗜酸性粒細(xì)胞浸潤比例達(dá)到10%以上的患者納入嗜酸性粒細(xì)胞組,浸潤比例達(dá)到未超過10%的患者納入非嗜酸性粒細(xì)胞組[9];(4)比較觀察組中不同預(yù)后結(jié)局患者L-12、TGF-β1的表達(dá)水平。觀察組患者術(shù)后均持續(xù)隨訪6個(gè)月,根據(jù)疾病復(fù)發(fā)情況分為復(fù)發(fā)組和未復(fù)發(fā)組,比較兩組患者組織中IL-12、TGF-β1的表達(dá)水平。復(fù)診期間鼻內(nèi)窺鏡檢查發(fā)現(xiàn)息肉病灶,經(jīng)最大化藥物治療后癥狀未見好轉(zhuǎn),即可認(rèn)定為疾病復(fù)發(fā)[10]。(5)分析IL-12、TGF-β1表達(dá)水平與組織中嗜酸性粒細(xì)胞浸潤百分比的相關(guān)性。

        1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法應(yīng)用SPSS22.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析數(shù)據(jù)。計(jì)量資料符合正態(tài)分布,以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示,組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn);變量之間的相關(guān)性采用Spearman等級(jí)相關(guān)分析。以P<0.05表明差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

        2 結(jié)果

        2.1 觀察組和對(duì)照組患者的IL-12、TGF-β1表達(dá)水平比較觀察組患者組織中IL-12、TGF-β1表達(dá)水平明顯高于對(duì)照組,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),見表1。

        表1 觀察組和對(duì)照組患者的IL-12、TGF-β1表達(dá)水平比較(±s)

        表1 觀察組和對(duì)照組患者的IL-12、TGF-β1表達(dá)水平比較(±s)

        組別觀察組對(duì)照組t值P值例數(shù)58 55 IL-12(pg/mL)42.93±10.52 33.11±9.87 5.111 0.001 TGF-β1(ng/mL)529.89±147.67 455.39±134.04 2.803 0.006

        2.2 不同病情嚴(yán)重程度患者的IL-12、TGF-β1表達(dá)水平比較依據(jù)Lund-Mackay內(nèi)鏡評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)將觀察組患者分為輕度組41例和重度組17例,輕度組患者的IL-12、TGF-β1表達(dá)水平明顯低于重度組,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),見表2。

        表2 不同病情嚴(yán)重程度患者的IL-12、TGF-β1表達(dá)水平比較(±s)

        表2 不同病情嚴(yán)重程度患者的IL-12、TGF-β1表達(dá)水平比較(±s)

        組別輕度組重度組t值P值例數(shù)41 17 IL-12(pg/mL)40.16±9.64 49.61±9.98 3.364 0.001 TGF-β1(ng/mL)515.78±65.95 563.92±57.84 2.618 0.011

        2.3 不同炎性細(xì)胞浸潤比例患者的IL-12、TGF-β1表達(dá)水平比較依據(jù)嗜酸性粒細(xì)胞浸潤比例情況觀察組患者分為嗜酸性粒細(xì)胞組36例和非嗜酸性粒細(xì)胞組22例,嗜酸性粒細(xì)胞組患者的IL-12、TGF-β1表達(dá)水平明顯高于非嗜酸性粒細(xì)胞組,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),見表3。

        表3 不同炎性細(xì)胞浸潤比例患者的IL-12、TGF-β1表達(dá)水平比較(±s)

        表3 不同炎性細(xì)胞浸潤比例患者的IL-12、TGF-β1表達(dá)水平比較(±s)

        組別嗜酸性粒細(xì)胞組非嗜酸性粒細(xì)胞組t值P值IL-12(pg/mL)47.08±10.15 36.14±10.68 3.905 0.001 TGF-β1(ng/mL)556.32±74.58 486.64±81.07 3.341 0.002例數(shù)36 22

        2.4 不同預(yù)后結(jié)局患者的IL-12、TGF-β1表達(dá)水平比較觀察組患者隨訪期間共有19例復(fù)發(fā),39例未復(fù)發(fā),復(fù)發(fā)組患者的IL-12、TGF-β1表達(dá)水平明顯高于未復(fù)發(fā)組,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),見表4。

        表4 不同預(yù)后結(jié)局患者的IL-12、TGF-β1表達(dá)水平比較(±s)

        表4 不同預(yù)后結(jié)局患者的IL-12、TGF-β1表達(dá)水平比較(±s)

        組別復(fù)發(fā)組未復(fù)發(fā)組t值P值IL-12(pg/mL)48.78±8.35 40.08±9.06 3.519 0.001 TGF-β1(ng/mL)571.29±74.84 509.72±88.65 2.606 0.012例數(shù)19 39

        2.5 IL-12、TGF-β1表達(dá)水平與嗜酸性粒細(xì)胞浸潤百分比的相關(guān)性經(jīng)Spearman等級(jí)相關(guān)性分析結(jié)果顯示,IL-12、TGF-β1表達(dá)水平均與嗜酸性粒細(xì)胞浸潤百分比呈正相關(guān)(r=0.587、0.459,P<0.05)。

        3 討論

        CRSwNP基礎(chǔ)癥狀與其他類型呼吸道感染癥狀相似,缺乏特異性表現(xiàn),僅憑借臨床癥狀表現(xiàn)難以確診病情,內(nèi)鏡檢查雖能夠明確病灶生長信息,但無法體現(xiàn)機(jī)體內(nèi)部免疫平衡狀態(tài),而鼻息肉的生長與復(fù)發(fā)受各類復(fù)雜因素影響,也給CRSwNP的臨床分型和預(yù)后預(yù)測(cè)帶來一定難度。既往研究結(jié)果表明,CRSwNP患者鼻息肉上皮細(xì)胞組織生長期間除激活免疫機(jī)制外還會(huì)分泌堿性蛋白、過氧化物酶等多種調(diào)節(jié)因子,鼻息肉術(shù)后復(fù)發(fā)率較高,15%~20%的患者需要再次接受手術(shù)治療[11]。因此,了解CRSwN發(fā)病機(jī)制對(duì)提高疾病防治效果具有積極意義。

        現(xiàn)階段,國內(nèi)外學(xué)者普遍認(rèn)為炎癥持續(xù)刺激鼻黏膜是鼻息肉發(fā)生重要機(jī)制之一。IL-12主要由單核/巨噬細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞以及B細(xì)胞分泌,可誘導(dǎo)Th0細(xì)胞向Th1細(xì)胞分化并抑制Th0細(xì)胞向Th2細(xì)胞分化,在維持Th1/Th2免疫平衡中起到重要作用[12];TGF-β1既是促炎因子,也是生長因子,主要調(diào)節(jié)細(xì)胞外基質(zhì)活動(dòng),嗜酸性粒細(xì)胞為鼻息肉組織中TGF-β1的主要來源,隨著嗜酸性粒細(xì)胞浸潤活性增加,TGF-β1分泌量隨之增加,導(dǎo)致基底膜不斷增厚,加重基質(zhì)纖維化改變[13-14]。本研究結(jié)果顯示,觀察組鼻息肉組織中IL-12、TGF-β表達(dá)水平均高于對(duì)照組,且重度CRSwNP組中IL-12、TGF-β表達(dá)水平均高于輕度CRSwNP組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),說明CRSwN患者炎癥因子呈高表達(dá),且與參與疾病進(jìn)展,原因可能為炎癥刺激下組織內(nèi)嗜酸性粒細(xì)胞浸潤程度加深,引起并加重了鼻黏膜炎性反應(yīng),細(xì)胞比率失衡。陳雪梅等[15]學(xué)者研究表明CRSwNP患者鼻息肉組織中CD69蛋白、受激活調(diào)節(jié)正常T細(xì)胞表達(dá)和分泌因子的高表達(dá)將引發(fā)一系列炎癥因子失衡,導(dǎo)致IL-12、TGF-β表達(dá)水平上升,與本研究結(jié)果一致。

        洪俊等[16]研究表明,CRSwNP患者外周血液中嗜酸性粒細(xì)胞表達(dá)水平明顯高于CRSsNP患者和健康人群,且CRSwNP患者的鼻內(nèi)鏡及CT檢查結(jié)果均與嗜酸性粒細(xì)胞表達(dá)顯著相關(guān);潘立等[17]學(xué)者研究指出,目前鼻息肉臨床組織細(xì)胞學(xué)分型中嗜酸性粒細(xì)胞型仍為最常見的類型。為明確嗜酸性粒細(xì)胞對(duì)CRSwNP進(jìn)展的具體影響,本研究通過觀察組織切片染色情況發(fā)現(xiàn),嗜酸性粒細(xì)胞組IL-12、TGF-β1的表達(dá)水平均高于非嗜酸性粒細(xì)胞組,且IL-12、TGF-β1的表達(dá)水平均與嗜酸性粒細(xì)胞浸潤百分比呈正相關(guān),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),原因可能為鼻息肉組織的生長可能進(jìn)一步強(qiáng)化外周血液中嗜酸性粒細(xì)胞的表達(dá),導(dǎo)致炎癥反應(yīng)程度放大,進(jìn)而趨化嗜酸性粒細(xì)胞向鼻黏膜部位遷移浸潤。局部組織中IL-12、TGF-β1表達(dá)水平越高,表明炎癥進(jìn)展更活躍,嗜酸性粒細(xì)胞對(duì)局部黏膜造成的損傷越嚴(yán)重,提示臨床應(yīng)針對(duì)此類患者適當(dāng)應(yīng)用抗炎藥物,避免鼻息肉持續(xù)受到不良刺激。

        CRSwNP患者的復(fù)發(fā)率較高,了解IL-12、TGF-β1與疾病預(yù)后的關(guān)系在疾病防治中關(guān)系重大。本研究發(fā)現(xiàn),復(fù)發(fā)組患者組織中IL-12、TGF-β1的表達(dá)水平均高于未復(fù)發(fā)組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。TGF-β1主要通過激活下游信號(hào)蛋白分子表達(dá)參與組織重塑和黏膜損傷修復(fù)進(jìn)程,但術(shù)后恢復(fù)期間TGF-β1的高表達(dá)也可能造成成纖維細(xì)胞過度增殖,誘發(fā)新的鼻息肉病灶生成,在局部炎癥微環(huán)境未得到有效改善的情況下,嗜酸性粒細(xì)胞生存時(shí)間延長,重新聚集浸潤會(huì)影響?zhàn)つふI掀せ瑢?dǎo)致黏膜修復(fù)進(jìn)展減緩,增大術(shù)后復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)[18]。鄭銘等[19]研究指出,炎癥細(xì)胞對(duì)RSwNP復(fù)發(fā)具有一定預(yù)測(cè)價(jià)值。

        綜上所述,IL-12、TGF-β1在CRSwNP患者鼻息肉組織中呈現(xiàn)高表達(dá)水平,隨著患者病情加重,局部組織受嗜酸性粒細(xì)胞浸潤的程度也隨之加深,進(jìn)而強(qiáng)化IL-12、TGF-β1的表達(dá),IL-12、TGF-β1呈現(xiàn)高表達(dá)水平的患者術(shù)后疾病復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)也較高。但本研究樣本量較少,且主要分析IL-12、TGF-β1與CRSwNP發(fā)生、進(jìn)展及復(fù)發(fā)的關(guān)系,具有一定的局限性;后續(xù)可以擴(kuò)大樣本量進(jìn)一步分析嗜酸性粒細(xì)胞浸潤的程度、其他細(xì)胞因子及不同生物學(xué)標(biāo)記物與疾病預(yù)后的關(guān)系。此外,還有待開展細(xì)胞研究、動(dòng)物研究驗(yàn)證相關(guān)因子對(duì)嗜酸性粒細(xì)胞浸潤的調(diào)控作用,尋找CRSwNP病情及復(fù)發(fā)標(biāo)志物的新靶點(diǎn)。

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