王運(yùn)盛，王叢菊，徐 ，范昕淋，趙素芬，蔣 鵬，國欣欣，盧 巖★

（1.北京動(dòng)物園管理處，北京 100044；2.圈養(yǎng)野生動(dòng)物技術(shù)北京市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 100044；3.歐樂堡動(dòng)物王國，山東 德州 251104）

疾病防治在野生動(dòng)物飼養(yǎng)管理工作中占有舉足輕重的作用和意義。然而，在野生動(dòng)物疾病診斷工作中，病理學(xué)技術(shù)的應(yīng)用現(xiàn)階段還較為薄弱。近年來，隨著國內(nèi)圈養(yǎng)野生動(dòng)物數(shù)量的增加以及野生動(dòng)物診療工作的深入，野生動(dòng)物發(fā)病率呈現(xiàn)逐年上升的跡象。如何將病理學(xué)診斷盡快應(yīng)用于野生動(dòng)物疾病診斷中，成為了現(xiàn)階段需要關(guān)注的問題。麋鹿屬于國家一級(jí)保護(hù)動(dòng)物，世界自然保護(hù)聯(lián)盟（IUCN）物種紅色名錄將其瀕危等級(jí)定為野外滅絕（EW），原產(chǎn)于中國，是中國特有珍稀瀕危物種。北京動(dòng)物園獸醫(yī)院于2022年初收到外單位死亡麋鹿樣本，通過組織病理學(xué)方法對(duì)麋鹿進(jìn)行病理學(xué)診斷，以期為今后麋鹿的病理學(xué)診斷提供對(duì)應(yīng)思路和基礎(chǔ)資料。

1 材料與方法

1.1 病料（病例概述） 麋鹿，雌性，2021年5月29日出生于歐樂堡動(dòng)物王國，臨床表現(xiàn)為食欲差、弓腰；糞便潛血、稀軟；鼻頭干燥。治療過程中曾使用速可生、拜有利、復(fù)合維生素B、安痛定、止血敏等未見好轉(zhuǎn)，最后死亡。死前極度虛弱、消瘦。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 血樣化驗(yàn)室診斷 麋鹿發(fā)病后進(jìn)行血樣采集，采血前1天進(jìn)行隔離觀察，禁食16h，采血后進(jìn)行外周血生化檢測(cè)。

1.2.2 病理樣本采集 麋鹿死后立即解剖，取材后內(nèi)臟組織迅速投入10%的福爾馬林液，進(jìn)行病理組織切片前處理。

1.2.3 H.E.染色 石蠟切片分別經(jīng)二甲苯I、II脫蠟5min，之后浸入無水乙醇/二甲苯（1：1）混合液中5min，依次經(jīng)無水乙醇I、無水乙醇II、95%乙醇、85%乙醇、75%乙醇、50%乙醇梯度復(fù)水，下行至雙蒸水中，蘇木精染色10 min，1%鹽酸酒精分色數(shù)秒，水洗返藍(lán)15min，再依次通過50%乙醇、75%乙醇、85%乙醇、95%乙醇梯度脫水后，伊紅染色1 min，95%乙醇洗滌3次，再經(jīng)無水乙醇I、II各5min，二甲苯I、II各透明5min，最后用中性樹膠封片。切片放置于37℃溫箱內(nèi)過夜烘干后鏡檢。光學(xué)顯微鏡下觀察麋鹿組織病理學(xué)變化情況。

2 結(jié)果與分析

2.1 麋鹿血液生化指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果 經(jīng)化驗(yàn)室診斷發(fā)現(xiàn)麋鹿肌酐（432.7）、尿素氮（25.79）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（525）指標(biāo)顯著高于參考范圍，其余指標(biāo)基本在參考范圍上下浮動(dòng)。結(jié)合動(dòng)物臨床癥狀，麋鹿疑似出現(xiàn)急性腎炎與肝功能不全（見表1）。

表1 麋鹿生化參數(shù)檢測(cè)

2.2 麋鹿臨床剖檢病觀察 麋鹿尸重70kg，舌左右側(cè)和舌根有潰瘍?cè)?。心肌塌陷，心外膜可見點(diǎn)狀出血，心肌質(zhì)軟，心包積液約50mL。氣管內(nèi)較為干燥，肺表面可見出血，邊緣氣腫。瘤胃內(nèi)可見食糜，胃底有大面積出血斑。小腸粘膜出血。肝臟腫大，背膜顏色不均，質(zhì)地較脆，脾臟質(zhì)軟，按壓有捻發(fā)感，表面可見出血。腎污黃色，表面有多個(gè)潰瘍?cè)睿I臟腫大，皮髓質(zhì)界限不清（見圖1）。

圖1 麋鹿臨床剖檢觀察

2.3 麋鹿病理變化 鏡下觀察，麋鹿腸道結(jié)構(gòu)完整，腸絨毛上皮輕微出血（圖2A）。脾組織水腫明顯，脾背膜增厚，白髓可見生發(fā)中心明顯；高倍鏡下白髓內(nèi)淋巴細(xì)胞腫脹（圖2B）。肺組織結(jié)構(gòu)完整，肺間質(zhì)輕微增寬，肺間質(zhì)充血、出血，可見少量淋巴細(xì)胞（圖2C）。腎組織水腫、輕微出血，腎小囊間隙增寬，腎小囊內(nèi)可見蛋白滲出。腎小管內(nèi)可見少量蛋白滲出（圖2D）。心肌輕微出血，心肌細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整，心肌間可見少量絮狀滲出（圖2E）。肝組織淤血，脂肪變性明顯，高倍鏡下肝細(xì)胞腫脹，肝索變窄，肝細(xì)胞內(nèi)可見脂滴（圖2F）。

3 診斷

經(jīng)組織病理學(xué)診斷，送檢麋鹿患有腸絨毛出血、脾增生、肺水腫、心肌滲出、亞急性腎小球腎炎、脂肪肝。結(jié)合臨床剖檢觀察以及動(dòng)物背景資料，該麋鹿由于營養(yǎng)不良，引起脂肪肝以及腎小球腎炎的發(fā)生，最后導(dǎo)致死亡。

4 討論

作為重要的物質(zhì)代謝器官，肝臟對(duì)脂類的消化、吸收、分解、合成及運(yùn)輸過程中起重要作用。一旦發(fā)生肝功能不全，首先會(huì)引起糖類代謝異常，導(dǎo)致肝糖原減少，機(jī)體代償性的將體內(nèi)脂肪分解，運(yùn)至肝臟。由于大量脂類物質(zhì)在肝臟含量增高，導(dǎo)致脂肪肝的發(fā)生。病情進(jìn)一步發(fā)展，將會(huì)引發(fā)門靜脈循環(huán)障礙與膽汁淤積。門靜脈循環(huán)障礙導(dǎo)致胃腸道粘膜出現(xiàn)水腫、淤血、甚至出血與潰瘍。從而引起胃腸道功能的改變，表現(xiàn)為食欲不振、營養(yǎng)不良以及消瘦的而膽汁淤積后，膽汁鹽會(huì)對(duì)心臟傳導(dǎo)系統(tǒng)產(chǎn)生毒性刺激，最終引起心力衰竭，而心力衰竭又會(huì)引起肺水腫，進(jìn)一步加重病情惡化。

圖2 麋鹿病理學(xué)觀察

腎小球腎炎是以腎小球的炎癥病理變化為診斷依據(jù)的腎炎。病變通常開始于腎小球，根據(jù)病理變化，腎小球腎炎主要分為三類，即：急性腎小球腎炎、亞急性腎小球腎炎和慢性腎小球腎炎。腎小球腎炎在病理學(xué)診斷可以觀察到腎小球腫脹、出血、滲出；腎小囊中可見上皮細(xì)胞、白細(xì)胞、紅細(xì)胞、纖維素等物質(zhì)；以及腎間質(zhì)出現(xiàn)纖維化表現(xiàn)。急性腎小球腎炎與亞急性腎小球腎炎在臨床剖檢中的區(qū)別主要體現(xiàn)在腎外觀上：急性腎小球腎炎表現(xiàn)為腎腫大、充血，俗稱“大紅腎”；亞急性腎小球腎炎表現(xiàn)為腎腫大、色澤蒼白或淡黃色，俗稱“大白腎”；慢性腎小球腎炎則為腎縮小，質(zhì)地變硬，俗稱“皺縮腎”。腎小球腎炎的發(fā)展會(huì)引起腎功能不全，若無有效治療，最后會(huì)導(dǎo)致尿毒癥的發(fā)生。

作為大型鹿類動(dòng)物，麋鹿是我國特有的濕地物種，麋鹿屬哺乳綱，偶蹄目，鹿科，麋鹿屬。目前，麋鹿在我國境內(nèi)種群數(shù)量已達(dá)到8000余只，國內(nèi)建立的麋鹿保護(hù)場(chǎng)所也超過50個(gè)。因此，隨著麋鹿種群規(guī)模的不斷擴(kuò)大，與麋鹿相關(guān)的疾病診治工作壓力也逐年增加。而在麋鹿患病后的診斷工作中，由于物種本身的特殊性以及可參考的資料過少，診治工作更多的需要依靠臨床獸醫(yī)個(gè)人經(jīng)驗(yàn)。同時(shí)，缺乏專業(yè)的野生動(dòng)物病理診斷工作，也嚴(yán)重制約了麋鹿診斷技術(shù)進(jìn)一步完善。在本文中，死亡麋鹿的肝、腎病理變化最為明顯；脂肪肝、慢性腎小球腎炎的發(fā)生導(dǎo)致麋鹿肝、腎功能的不全，由于上述器官病情的發(fā)展，麋鹿出現(xiàn)心力衰竭、心包積液、肺水腫、以及胃腸道出血、營養(yǎng)不良等臨床病理變化。最后導(dǎo)致了麋鹿的死亡。

5 結(jié)論

本研究采用病理學(xué)技術(shù)，結(jié)合臨床病理變化及系統(tǒng)病理學(xué)觀察，對(duì)死亡麋鹿進(jìn)行病理學(xué)診斷，分析得出死亡麋鹿患有脂肪肝、肺水腫。此病例的完成，為今后野生動(dòng)物相關(guān)疾病的診斷以及治療工作提供了較為可靠的病理經(jīng)驗(yàn)和方案。