彭華，張式一

（1.湖南交通工程學(xué)院，湖南衡陽 421001；2.南華大學(xué)附屬第一醫(yī)院，湖南衡陽 421001）

癌是最常見的惡性腫瘤，也是許多國家人口死亡的主要原因之一。隨著現(xiàn)在生活節(jié)奏加快，以及大環(huán)境的改變，肺癌的發(fā)病率和死亡率在許多國家都居高不下，如此高的死亡率，早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早治療是提高患者生存率的根本所在。肺癌發(fā)病的因素較多，包括外在因素、內(nèi)在遺傳因素，外在因素主要包括環(huán)境、飲食、生活習(xí)慣等，有研究表明，很大一部分女性不吸煙，但也有罹患肺癌的危險，那么，環(huán)境和生活方式是誘發(fā)女性發(fā)生肺癌的主要原因[1]。內(nèi)在遺傳因素，一直是眾多學(xué)者研究的熱點問題，不同人群對致癌物的易感性不同，而且遺傳因素可能在癌癥病因中起重要作用，有研究表明肺癌親屬后代發(fā)病的概率會高于普通人群，有學(xué)者提出發(fā)病具有遺傳易感性[2]。ATM基因是一個位于11q23號染色體上的共濟抑制劑，編碼是一個由3056個氨基酸組成的350-KDa蛋白，對電離輻射或其他DSB誘導(dǎo)劑極為敏感，屬于PI3K樣絲氨酸的3－激酶（PI3K）蛋白/蘇氨酸蛋白激酶（PIKK）家族。目前，家族遺傳易感性被越來越多的人重視，ATM基因是導(dǎo)致共濟失調(diào)毛細血管擴張癥的致病基因，與許多人類癌癥有關(guān)，然而，有學(xué)者表明，該基因多態(tài)性在肺癌發(fā)生中的作用有一定的探索。Hushan Yang等[3]采用病例對照研究方法對556名高加索非小細胞肺癌（NSCLC）患者和556對照組進行分析，發(fā)現(xiàn)年齡，性別和吸煙情況與肺癌的發(fā)生發(fā)展可能存在相關(guān)性。本研究采用SNP敏感性分子開關(guān)技術(shù)檢測ATM基因rs175048、rs227060兩位點多態(tài)性，來探討兩位點單核苷酸多態(tài)性與肺癌患者吸煙、年齡、性別、腫瘤家族史等的相關(guān)性。

一、材料與方法

（一）研究對象

本研究收集2021年10月到2022年3月衡陽地區(qū)某醫(yī)院樣本，在患者知情同意下，采集肺癌患者血液120例，男76例，女44例，正常對照組為健康人群120例，男60例，女60例。收集研究對象的相關(guān)信息，如年齡、性別、吸煙史、腫瘤家族史等相關(guān)資料。

（二）實驗方法

采集外周靜脈血2ml，乙二胺四乙酸（EDTA）抗凝，使用上海天根生物工程有限公司提供的試劑盒，提取外周血游離DNA，-20°保存。采用SNP敏感性分子開關(guān)[4]（on-off switch）技術(shù)對兩位點進行基因分型，rs175048A/T：正向引物1（F1）5’-TGCCTAGAAAATAAGCTA-3’，正向引物2（F2）5’TGCCTAGAAAATAAGCAA 3’，反向引物（R）5’-TCAACACTGCATTACCTC-3’；rs227060C/T正向引物1（F1）5’- AATACTCAAAAGCTTCTC -3’，正向引物2（F2）5’-AATACTCAAAAGCTTCTT -3’，反向引物（R）5’-TACTTCCATTATTTCTTG -3’。聚合酶鏈反應(yīng)體系（PCR）：采用25ul反應(yīng)體系，包括模板DNA 1.5ul、正反向引物各1ul、公共引物1ul、去離子水9ul、2*Pfu Mix 12.5ul。反應(yīng)條件：94℃預(yù)變性3min，94℃變性30s，55℃退火30s，72℃延伸30s，共35個循環(huán)，最后72℃延伸5 min，取PCR產(chǎn)物5ul，PCR擴增的產(chǎn)物經(jīng)2.0%的瓊脂糖凝膠進行電泳。

（三）統(tǒng)計學(xué)處理

所有數(shù)據(jù)采用SPSS 26.0統(tǒng)計軟件處理。兩樣本間均數(shù)的比較采用T檢驗，計數(shù)資料的比較采用卡方檢驗（χ2），多樣本間均數(shù)的比較采用單因素方差分析。P＜0.05時具有統(tǒng)計學(xué)意義。利用非條件Logistic回歸模型對肺癌危險因素進行分析，發(fā)病風(fēng)險即比值（OR值）及其95%置信區(qū)間（95%CI），所有顯著性檢驗均采用雙側(cè)概率檢驗。

二、結(jié)果

（一）病例組與對照組的一般資料分析

肺癌發(fā)生發(fā)展跟年齡、家族史、吸煙史有關(guān)，年齡（P＝0.007）、腫瘤家族史（P＝0.001）、吸煙史（P＝0.013），那么在兩組資料間均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表1。

表1 臨床病例一般資料分析[n（%）]

（二）兩位點多態(tài)性與肺癌危險因素的關(guān)系

在rs175048位點中發(fā)現(xiàn)AA、TT、AT三種基因型，其中分布頻率最高的為AT基因型；在rs227060位點中發(fā)現(xiàn)CC、CT、TT三種基因型，其中分布頻率最高的為CT基因型?；蛐皖l率分布在兩組別中均有統(tǒng)計學(xué)差異（P＜0.05）。見表2。對肺癌危險因素（性別、年齡、吸煙史、腫瘤家族史）利用非條件Logistic回歸分析，結(jié)果顯示，rs175048、rs227060多態(tài)位點的基因型與性別在病例組與對照組間無明顯差異（P＞0.05），表明性別可能不影響兩位點多態(tài)性對肺癌的發(fā)病風(fēng)險；而年齡、吸煙史、腫瘤家族史在兩組間的差異則有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），表明年齡和腫瘤家族史等可能影響rs175048、rs227060位點多態(tài)性對肺癌的發(fā)病風(fēng)險。見表3。

表2 兩位點基因型分布情況[n（%）]

表3 ATM基因多態(tài)性位點與肺癌相關(guān)危險因素分析

三、討論

肺癌的發(fā)生發(fā)展跟環(huán)境因素和遺傳因素密不可分，患者的主要表現(xiàn)為聲音嘶啞、持續(xù)發(fā)熱、胸悶、咳嗽等，聲音嘶啞是肺癌患者早期的表現(xiàn)[5]。根據(jù)病情進展，肺癌的發(fā)病機制并未十分明確，但是眾所周知，長期接觸有毒有害氣體，也是最重要的危險因素。那么根據(jù)誘因不同，早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早治療，一直是腫瘤治療有力的依據(jù)。所以易感基因?qū)Ψ伟┑脑缙谠\斷篩查，是十分有必要的。ATM基因rs175048、rs227060兩位點多態(tài)性在多種腫瘤中都存在，如乳腺癌、非小細胞肺癌、兒童白血病等疾病。對于中國人來說，肺癌的發(fā)病率每年都在增加，那么找到肺癌的發(fā)病機制，是當(dāng)今研究的熱點問題。有學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)肺癌占腫瘤發(fā)病率的40%，女性的發(fā)病率較高，尤其是從未吸煙的女性，那么食用油煙、燃料煙、被動吸煙和職業(yè)暴露被認(rèn)為是中國女性中可能的危險因素，主要是基于中國人的傳統(tǒng)飲食習(xí)慣、生活方式和社會環(huán)境[6]。毫無疑問，環(huán)境和遺傳因素是重要的影響因素。本研究對120例病例樣本的腫瘤家族史、吸煙史、年齡等相關(guān)因素進行分析，運用非條件 Logistic 回歸分析rs175048、rs227060兩位點多態(tài)性相關(guān)的肺癌危險因素，結(jié)果表明，rs175048、rs227060位點多態(tài)性對肺癌的發(fā)病風(fēng)險會受吸煙史的影響，這與Zhang L在肺癌的發(fā)病風(fēng)險研究結(jié)果一致[7]。本研究選擇ATM基因作為研究對象，ATM蛋白的異常已被認(rèn)為與許多癌癥的病因有關(guān)。ATM蛋白作為一種多功能蛋白激酶，可通過自磷酸化調(diào)控細胞周期，在DNA損傷、修復(fù)以及編排中發(fā)揮關(guān)鍵作用。本研究進一步分析ATM基因rs175048、rs227060兩位點在病例組和對照組基因型分布特點，結(jié)果通過SNP檢測發(fā)現(xiàn)，rs175048檢測出AA、AT、AT三種基因型，頻率分別為20.8%、47.5%、31.7%，其中AT分布頻率較高；rs227060檢測出CC、CT、TT三種基因型，頻率分別為36.7%、51.7%、11.6%，其中CT分布頻率較高，病例組與對照組相比有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。有研究顯示，漢族人群肺癌的發(fā)病風(fēng)險與ATM基因多態(tài)性相關(guān)。而本次研究發(fā)現(xiàn)，ATM基因rs175048、rs227060位點的TT基因型存在相關(guān)性，攜帶AT、CC基因型的個體發(fā)生肺癌的風(fēng)險比較低，這提示肺癌的發(fā)病風(fēng)險與ATM基因多態(tài)性兩位點遺傳因素可能存在相關(guān)性。

綜上所述，ATM基因rs175048、rs227060兩位點單核苷酸多態(tài)性與肺癌的發(fā)生存在一定的相關(guān)性，但本研究可能存在一些局限性，主要病例樣本數(shù)少，其遺傳背景單一，導(dǎo)致研究結(jié)果可能具有部分偶然性。因此，利用SNP敏感性分子開關(guān)技術(shù)對肺癌易感基因的篩查，為臨床腫瘤早期診斷、早期篩查，提供了良好的醫(yī)學(xué)背景，并對肺癌發(fā)病風(fēng)險評估奠定了良好的基礎(chǔ)。