鄧 青 程蔚蔚 陳 嵐

肺癌為目前常見(jiàn)惡性腫瘤，發(fā)病率與死亡率居惡性腫瘤首位[1]。肺癌根據(jù)不同組織病理類型和生物學(xué)特征分為非小細(xì)胞肺癌、小細(xì)胞肺癌兩類，其中非小細(xì)胞肺癌占肺癌80%[2]，主要有鱗癌、腺癌等類型，腫瘤細(xì)胞進(jìn)展快且易擴(kuò)散轉(zhuǎn)移。非小細(xì)胞肺癌以手術(shù)、放化療等為主要治療方式，但患者預(yù)后較差，5年生存率較低[3]。故確定與該腫瘤病理特征及預(yù)后相關(guān)機(jī)制可為臨床評(píng)估預(yù)后提供有效參考依據(jù)。高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)檢測(cè)簡(jiǎn)便快速，其水平對(duì)化療后的Ⅳ期非小細(xì)胞肺癌患者療效有預(yù)測(cè)價(jià)值。鐵為機(jī)體中細(xì)胞增殖代謝所必需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，可參與呼吸、代謝、DNA合成等過(guò)程，血清鐵蛋白為新型腫瘤標(biāo)志物，對(duì)肺癌診斷具有高度敏感性。4次跨膜蛋白超家族參與整合素介導(dǎo)黏附作用，可連接細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖轉(zhuǎn)移過(guò)程，為目前研究重點(diǎn)基因家族[4]。因腫瘤具有異質(zhì)性，其生物學(xué)行為復(fù)雜且細(xì)胞多型性[5-6]，目前無(wú)有效標(biāo)志物準(zhǔn)確反映腫瘤發(fā)生發(fā)展。本研究通過(guò)分析96例Ⅳ期非小細(xì)胞肺癌患者HDL-C、鐵蛋白、整合素α3水平，探討其與非小細(xì)胞肺癌病理特征及預(yù)后關(guān)聯(lián)，報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2019年1月至2021年1月我院收治的96例非小細(xì)胞肺癌，其中男性57例，女性39例；年齡為36～78歲；平均(61.28±11.37)歲；56例有吸煙習(xí)慣；病理類型：鱗癌37例、腺癌45例、其他14例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移38例；分化程度：低中分化65例，高分化31例。納入標(biāo)準(zhǔn)：符合《2020年CSCO小細(xì)胞肺癌診療指南》標(biāo)準(zhǔn)[7]，且經(jīng)病理檢查確診為非小細(xì)胞肺癌；參考《2017 ASCO Ⅳ期非小細(xì)胞肺癌指南解讀》標(biāo)準(zhǔn)[8]屬于Ⅳ期；接受化療，且預(yù)生存期超過(guò)6個(gè)月；對(duì)本研究知情并簽署同意書(shū)。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并其他惡性腫瘤患者；服用影響免疫功能藥物患者；嚴(yán)重臟器損傷患者；精神疾病患者。

1.2 方法

患者于初次治療前抽取清晨空腹靜脈血干燥保存，采用全自動(dòng)生化分析儀(美國(guó)Backman coulter，型號(hào)AU5400)檢測(cè)血清HDL-C水平；采用電化學(xué)發(fā)光免疫法檢測(cè)鐵蛋白水平，試劑與標(biāo)準(zhǔn)品來(lái)源于德國(guó)羅氏公司。采用免疫組化法檢測(cè)整合素α3表達(dá)，取病理組織切片后脫蠟脫水；使用過(guò)氧化氫甲醇將過(guò)氧化物酶阻斷，緩沖液抗原進(jìn)行熱修復(fù)，冷卻至室溫后，滴加一抗孵育，倒出血清后加入鼠抗人整合素α3單抗(來(lái)源于美國(guó)Santa公司)，4 ℃孵育并用PBS洗滌；加入二抗孵育。使用DAB、蘇木精先后進(jìn)行染色，用已知陽(yáng)性組織作對(duì)照，PBS替代一抗作陰性對(duì)照。

1.3 血清判斷標(biāo)準(zhǔn)

HDL-C正常范圍為0.94～2.00 mmol/L，鐵蛋白正常范圍為23.9～336.2 ng/ml。本研究將血清水平高于正常值視為陽(yáng)性，反之為陰性。

整合素α3陽(yáng)性判斷標(biāo)準(zhǔn)：光鏡下顯示黃色顆粒為陽(yáng)性細(xì)胞，由2位病理醫(yī)師經(jīng)雙盲方式閱片，每張切片隨機(jī)選5個(gè)高倍視野，計(jì)算陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)占比，不足30%則為陰性，反之呈陽(yáng)性[9]。

1.4 隨訪

隨訪時(shí)間截止到2021年7月31日，隨訪時(shí)間為6～30個(gè)月?？偵嫫?OS)是患者由登記入組至死亡、隨訪結(jié)束或失訪時(shí)間；無(wú)進(jìn)展生存期(PFS)為患者入組至病情復(fù)發(fā)、進(jìn)展、死亡及隨訪結(jié)束或失訪時(shí)間。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 20.0軟件分析數(shù)據(jù)，HDL-C、鐵蛋白、整合素α3陰陽(yáng)性表達(dá)用(%)表示，χ2檢驗(yàn)，各指標(biāo)與患者病理特征相關(guān)性采用Fisher精確法。采用Kaplan-Meier法繪制生存曲線，Log-rank檢驗(yàn)；使用Cox回歸分析各指標(biāo)對(duì)預(yù)后的影響。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 患者HDL-C、鐵蛋白、整合素α3表達(dá)情況

96例患者HDL-C陰性51例、陽(yáng)性45例；鐵蛋白陰性42例、陽(yáng)性54例；整合素α3陰性33例、陽(yáng)性63例。

2.2 患者病理特征與HDL-C、鐵蛋白、整合素α3的關(guān)系

患者性別、年齡、吸煙對(duì)HDL-C、鐵蛋白、整合素α3水平表達(dá)情況無(wú)顯著影響(P>0.05)；鱗癌、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者HDL-C、鐵蛋白、整合素α3陽(yáng)性表達(dá)更高(P<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 患者HDL-C、鐵蛋白、整合素α3表達(dá)水平與病理特征的關(guān)系/例

2.3 患者HDL-C、鐵蛋白、整合素α3水平與預(yù)后關(guān)系

采用Kaplan-Meier法分析PFS與OS生存預(yù)后，結(jié)果顯示，整體中位PFS為7.3個(gè)月，HDL-C陰性組中位PFS為8.4個(gè)月，陽(yáng)性組為4.1個(gè)月(P<0.05)；鐵蛋白陰性組中位PFS為7.8個(gè)月，陽(yáng)性組為5.2個(gè)月(P<0.05)；整合素α3陰性組中位PFS為8.1個(gè)月，陽(yáng)性組為3.9個(gè)月(P<0.05)。整體中位OS為22.1個(gè)月，HDL-C陰性組中位OS為22.5個(gè)月，陽(yáng)性組為15.9個(gè)月(P<0.05)；鐵蛋白陰性組中位OS為22.7個(gè)月，陽(yáng)性組為16.2個(gè)月(P<0.05)；整合素α3陰性組中位OS為24.7個(gè)月，陽(yáng)性組為16.4個(gè)月(P<0.05)。見(jiàn)圖1。

圖1 HDL-C、鐵蛋白、整合素α3水平與PFS、OS關(guān)系

2.4 多因素分析

將各病理參數(shù)與HDL-C、鐵蛋白、整合素α3陰陽(yáng)性表達(dá)納入Cox回歸模型分析，結(jié)果顯示，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與HDL-C、鐵蛋白、整合素α3陽(yáng)性表達(dá)為影響Ⅳ期非小細(xì)胞肺癌患者生存預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(P<0.05)。見(jiàn)表2。

表2 Cox回歸模型的多因素分析

3 討論

近年來(lái)肺癌發(fā)病與死亡率居于惡性腫瘤首位，且逐年上升[10]。早期肺癌的5年生存率可達(dá)到60%～90%，但Ⅳ期患者生存率不足20%[11]，故早期診斷治療肺癌患者對(duì)提高其預(yù)后極為重要。晚期肺癌患者已喪失手術(shù)最佳機(jī)會(huì)，主要治療以化療為主。HDL-C能反向調(diào)運(yùn)膽固醇，對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化預(yù)防具有顯著效果。HDL-C為多功能脂蛋白，能影響細(xì)胞周期中促分裂原活化蛋白激酶信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路并調(diào)控細(xì)胞凋亡，具有抗氧化、抗凋亡、調(diào)節(jié)細(xì)胞因子合成、刺激細(xì)胞分化遷移作用，水平下降對(duì)腫瘤發(fā)生發(fā)展起到重要作用[12]。在關(guān)于肺癌研究的報(bào)道中，HDL-C被認(rèn)為是非小細(xì)胞肺癌臨床預(yù)后因子[13]。癌細(xì)胞中膽固醇合成強(qiáng)于正常細(xì)胞，過(guò)量膽固醇及其合成途徑中間體使癌細(xì)胞處于高水平增殖狀態(tài)。

鐵在人體中參與氧運(yùn)輸、能量代謝、DNA合成等途徑，發(fā)揮作用依賴于機(jī)體鐵穩(wěn)態(tài)。缺鐵使血紅蛋白合成出現(xiàn)障礙而引發(fā)缺鐵性貧血，且影響含鐵酶活性，進(jìn)而影響生理功能正常發(fā)揮。但鐵過(guò)載也易損傷機(jī)體，提高腫瘤發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。大量研究表明，鐵水平上升對(duì)肝癌、乳腺癌、肺癌發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)有增加[14]。鐵蛋白能儲(chǔ)存體內(nèi)多余鐵，將其聚集于細(xì)胞中阻止鐵介導(dǎo)自由基生成。研究顯示，鐵蛋白在乳腺癌、肝癌、胰腺癌等多種癌組織中過(guò)表達(dá)；乳腺癌組織中間質(zhì)細(xì)胞鐵蛋白有較強(qiáng)表達(dá)[15]。進(jìn)一步研究顯示，富含鐵蛋白基質(zhì)細(xì)胞為腫瘤浸潤(rùn)巨噬細(xì)胞，該類細(xì)胞于局部分泌的鐵蛋白經(jīng)不依賴鐵機(jī)制對(duì)癌細(xì)胞增殖產(chǎn)生促進(jìn)作用。鐵蛋白在骨髓、臟器中的分子量較大，其蛋白質(zhì)含鐵豐富，由24個(gè)非共價(jià)鍵連接而成，鐵結(jié)合與儲(chǔ)備力較大，能為機(jī)體有效提供鐵物質(zhì)。研究顯示，血清中的鐵蛋白微量，正常情況下含量穩(wěn)定，腫瘤細(xì)胞中含量較多；鐵蛋白水平的上升，歸咎于其來(lái)源增加或清除發(fā)生障礙。非小細(xì)胞肺癌患者體內(nèi)癌細(xì)胞合成而增加鐵蛋白含量，提高血清中鐵蛋白水平，其為輔助診斷惡性腫瘤指標(biāo)。當(dāng)鐵蛋白水平下降，可能為患者失血、貧血或長(zhǎng)期腹瀉等使鐵吸收出現(xiàn)障礙[16]。血清鐵蛋白為評(píng)估癌癥患者體內(nèi)鐵負(fù)荷過(guò)量或缺乏的有效指標(biāo)。非小細(xì)胞肺癌患者不同病理類型、有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況與血清鐵蛋白水平有一定差異，說(shuō)明鐵蛋白陽(yáng)性表達(dá)可能傾向于鱗癌、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者。

整合素為細(xì)胞黏附分子中成員，包括α與β亞群的糖蛋白，為癌細(xì)胞粘附外基質(zhì)主要受體，能介導(dǎo)細(xì)胞粘附、轉(zhuǎn)移、傳導(dǎo)并調(diào)理外基質(zhì)，其中整合素α3在正常肺部組織中無(wú)表達(dá)，肺癌組織中可有部分表達(dá)，整合素介導(dǎo)的基質(zhì)中腫瘤細(xì)胞可發(fā)生擴(kuò)散、凋亡[17-18]。體外實(shí)驗(yàn)表明[19]，整合素對(duì)細(xì)胞凋亡過(guò)程有影響。本研究中整合素α3在非小細(xì)胞肺癌中表達(dá)過(guò)度，與病理類型及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等特征有關(guān)，與性別、年齡等無(wú)關(guān)，該結(jié)果說(shuō)明整合素α3異常表達(dá)參與腫瘤進(jìn)展[20]。經(jīng)Kaplan-Meier法分析顯示HDL-C、鐵蛋白、整合素α3水平與患者生存預(yù)后有一定關(guān)聯(lián)。

綜上所述，Ⅳ期非小細(xì)胞肺癌患者HDL-C、鐵蛋白、整合素α3陽(yáng)性表達(dá)較高，高水平表達(dá)預(yù)示患者預(yù)后不良，可作為評(píng)估其預(yù)后的有效輔助指標(biāo)。