姜家康,牛澤基,姜慶輝,周云波,鄒香妮,遲文成

(1. 黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院，黑龍江 哈爾濱 150040；2. 黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，黑龍江 哈爾濱 150040)

癌因性疲勞(cancer-related fatigue、CRF)定義為在臨床上與癌癥或癌癥治療相關(guān)的令患者痛苦、持續(xù)、主觀的身體上或者情緒上的認知疲勞或疲憊感，與近期活動不成比例，休息或睡眠后不能得到緩解，是臨床上癌癥患者最常見的不良反應(yīng)之一[1-2]。在臨床上，任何癌癥在其發(fā)生發(fā)展及治療過程中均可發(fā)生CRF，40%的癌癥患者在診斷時、90%接受放療和80%接受化療的患者均經(jīng)歷過[3-4]。Bower[5]認為CRF的發(fā)病機制與下丘腦-垂體-腎上腺軸失調(diào)(HPA軸)、細胞免疫、腫瘤治療前、治療中和治療后的炎癥等有關(guān)，并受遺傳風(fēng)險、心理和生物行為風(fēng)險因素的影響。臨床上的非藥物治療如體育鍛煉及功能康復(fù)補充和替代療法醫(yī)從性差，持續(xù)時間較長，而藥物治療常引起失眠、心悸、焦慮等一系列不良反應(yīng)[6-7]。因此，臨床上需要較為安全有效的CRF治療藥物。人參作為黑龍江省的道地藥材，首載于《神農(nóng)本草經(jīng)》：“補五臟、安精神、定魂魄、止驚悸……”現(xiàn)代藥理研究證明人參在抗疲勞方面具有調(diào)節(jié)中樞神經(jīng)系統(tǒng)、刺激HPA軸、抗氧化和抗炎等作用[8]。陸宏隆[9]在對人參及人參類藥物治療CRF的研究結(jié)果表明人參能有效減輕患者的疲乏程度，改善患者功能狀態(tài)且無不良反應(yīng)。徐大玉[10]通過實驗證實人參中的人參皂苷Rg3通過激活A(yù)MPK改善CRF。黃精首見于《名醫(yī)別錄》；記載其具有“補中益氣……安五藏”之功用。黃精中的黃精總多糖、薯蕷皂苷元等在抗炎、抗氧化、抗腫瘤、提高免疫力方面療效確切[11]。黃精在臨床上也應(yīng)用于治療CRF[12]。目前對于CRF的相關(guān)研究多傾向于臨床療效分析，在人參-黃精藥對協(xié)同作用于CRF的機制不甚明確，尚無系統(tǒng)性研究發(fā)表。網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)最早由Andrew L Hopkins 在Nature Biotechnology 雜志中提出并系統(tǒng)描述，通過網(wǎng)絡(luò)中的多靶點及藥物間其協(xié)同作用，廣泛應(yīng)用于從系統(tǒng)層次和整體角度挖掘藥物對多種疾病的作用或機制[13]。中藥具有悠久歷史，可以利用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)基于大數(shù)據(jù)精確分析中藥的藥效基礎(chǔ)，為篩選中藥有效成分和靶點提供了一種從系統(tǒng)角度和分子水平的新研究方法。分子對接采用計算機軟件進一步探究關(guān)鍵化合物和核心靶點之間的結(jié)合方式，同時評估兩者的結(jié)合潛力。本研究采用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)和分子對接技術(shù)研究人參-黃精治療CRF的潛在靶點和協(xié)同機制，為臨床應(yīng)用提供理論參考和依據(jù)。

1 資料與方法

1.1人參-黃精的活性成分以及靶點預(yù)測 在中藥系統(tǒng)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫(Traditional Chinese Medicine Database and Analysis Platform,TCMSP,https://tcmsp-e.com/)，根據(jù)吸收、分布、代謝和排泄(ADME)和藥物相似性(drug likeness,DL)、口服生物利用度(oral bioavailability,OB)，篩選OB≥30%、DL≥0.18的藥物活性成分。整理篩選出來的活性成分的“Mol ID”，在TCMSP數(shù)據(jù)庫中“Related Targets”庫中檢索相對應(yīng)的“Mol ID”靶點信息，從而得到人參-黃精的全部潛在靶點基因。然后將其導(dǎo)入UniProt數(shù)據(jù)庫(https://www.uniprot.org/)，設(shè)置篩選條件為“Human”，限定結(jié)果為“Reviewed(已驗證)”，將所有蛋白質(zhì)靶點名稱轉(zhuǎn)換為基因名。

1.2CRF相關(guān)疾病靶點檢索 分別在GeneCards(https://www.genecards.org/)和人類孟德爾遺傳在線數(shù)據(jù)庫(Online Mendelian Inheritance in Man Database OMIM)(https://www.omim.org/)，以“cancer related fatigue、cancer-related fatigue”為關(guān)鍵詞進行搜索，收集CRF所有相關(guān)的基因靶點信息，去重，得到疾病靶點信息。

1.3藥物-疾病共同靶點 將藥物靶點和疾病靶點分別導(dǎo)入Venny2.1.0在線網(wǎng)絡(luò)平臺(https://bioinfogp.cnb.csic.es/)，繪制Venn圖，獲得藥物-疾病的交集靶點基因。

1.4構(gòu)建核心靶點PPI網(wǎng)絡(luò) 運用STRING在線數(shù)據(jù)庫(https://www.string-db.org/cgi/)對篩選出的核心靶點進行蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡(luò)(Protein-Protein Interaction,PPI)分析，將蛋白種類設(shè)置為“homo sapiens”，最低相互作用閾值設(shè)為“highest confidence”(0.7)，并刪除游離的靶點。下載TSV格式文件，導(dǎo)入Cytoscape3.7.2軟件，運用網(wǎng)絡(luò)拓撲學(xué)原理繪制PPI網(wǎng)絡(luò)，然后根據(jù)Degree值篩選關(guān)鍵靶點。

1.5靶點的生物富集分析和通路注釋解釋 將篩選得到的交集靶點基因輸入DAVID 6.8(https://david.ncifcrf.gov/)在線網(wǎng)站，進行基因本體(GO)功能富集分析與京都基因和基因組百科全書(KEGG)通路注釋分析。設(shè)定物種選為“Homo.sapiens”提交，以“P-Value< 0.01”為篩選條件。使用微生信在線平臺(http://www.bioinformatics.com.cn/)將GO富集分析中細胞組分(cellular component,CC)、分子功能(molecular function,MF)、生物過程(biological process,BP)排名前10名的分析結(jié)果制作水平條形圖，將KEGG通路注釋分析中與癌癥相關(guān)的通路繪制氣泡圖進行展示。運用Hiplot生物醫(yī)學(xué)可視化平臺(https://hiplot.com.cn/)展示多靶點基因共同作用于同一通路的調(diào)控機制，制作KEGG弦圖。

1.6構(gòu)建中藥-有效成分-靶點-KEGG通路網(wǎng)絡(luò) 將KEGG通路注釋分析中與癌癥相關(guān)的通路和與之相關(guān)的基因靶點、活性成分以及藥物用Excel整理，制作“Note Work”和“Type”文件，分別導(dǎo)入Cytoscape3.7.2軟件。即得到人參-黃精治療CRF的中藥-有效成分-靶點-KEGG通路網(wǎng)絡(luò)圖。

1.7關(guān)鍵活性成分與靶點的分子對接驗證 分子對接是一種預(yù)測蛋白質(zhì)和配體結(jié)合能力和連接類型的計算工具。它可以計算和預(yù)測活性蛋白位點配體的構(gòu)象和方向。將PPI網(wǎng)絡(luò)中Degree值較高的5個關(guān)鍵靶點和中藥-有效成分-靶點-KEGG通路網(wǎng)絡(luò)中Degree值排名靠前的6個有效成分進行分子對接實驗。對接具體步驟為：從TCMSP數(shù)據(jù)庫中下載配體(有效成分)的mol2格式文件，從RCSB PDB數(shù)據(jù)庫(https://www.rcsb.org/)中獲得受體(關(guān)鍵靶點)的3D分子結(jié)構(gòu)的pdb文件。將受體和配體通過Autodock Tools軟件進行去水、加氫鍵、計算電荷等處理后統(tǒng)一轉(zhuǎn)化為pdbqt格式，然后設(shè)置適當(dāng)?shù)暮凶哟笮?，使用Vina依次對接，獲得結(jié)合自由能，并驗證其親和力。自由能越小，親和力越高，對接結(jié)果越好。將結(jié)果輸出為.dlg文件并上傳到PyMOL軟件以建立3D模型。結(jié)合能可作為對接評分以評估有效成分與關(guān)鍵靶點的蛋白質(zhì)-配體結(jié)合潛力。

2 結(jié) 果

2.1人參-黃精的活性成分以及靶點預(yù)測 以“人參”“黃精”為關(guān)鍵詞，通過TCMSP數(shù)據(jù)庫中檢索共得到34個活性成分符合標(biāo)準，其中人參有22個、黃精有12個。然后再于“Related Targets”中檢索并刪除無潛在靶點基因的藥物成分，最后得到人參-黃精可納入研究的活性成分分別為17個和8個，并得到一個共同交集成分“MOL000358”(見表1)。得到每個活性成分對應(yīng)的所有基因靶點，導(dǎo)出數(shù)據(jù)，經(jīng)過UniProt校正、去重、篩選并剔除未識別靶蛋白及非人源基因，最終得到人參-黃精有效成分對應(yīng)的118個藥物靶點。然后使用Cytoscape軟件構(gòu)建“成分-靶點”網(wǎng)絡(luò)(見圖1)，靶點的大小隨Degree值變化。圖中Degree值較高的靶點包括PTGS2(Degree=17)、PTGS1(Degree=15)、ADRB2(Degree=11)等；Degree值較高的成分包括山柰酚(MOL000422，Degree=50)、黃芩素(MOL002714，Degree=29)、β-谷甾醇(MOL000358，Degree=27)、豆甾醇(MOL000449，Degree=23)、原阿片堿(MOL000787，Degree=20)等。

圓形節(jié)點代表藥物活性成分MOLID，其中紫色來源于人參；紅色來源于黃精黃色菱形節(jié)點表示藥物起作用的靶基因，節(jié)點大小反映其活性

表1 人參-黃精主要活性成分及基本信息

2.2CRF相關(guān)疾病靶點檢索與獲取疾病-藥物共同靶點 通過OMIM、GeneCards數(shù)據(jù)庫檢索“cancer related fatigue”，由于GeneCards數(shù)據(jù)庫中基因較多，以“Relevance score”大于中位數(shù)(>5.600)的基因作為目標(biāo)靶點，得到2 228個靶基因，結(jié)合OMIM中獲得1140個靶基因，去除重復(fù)值后得到最終得到3 694個疾病靶基因。將藥物靶基因和疾病靶基因?qū)隫enny2.1.0平臺，繪制Venn圖(見圖2)，獲得93個CRF與藥物的交集基因。

圖2 疾病-藥物Venn圖

2.3構(gòu)建核心靶點PPI網(wǎng)絡(luò) 將篩選出的93個交集靶點導(dǎo)入STRING數(shù)據(jù)庫進行PPI關(guān)系分析，去除孤立靶點，將TSV文件導(dǎo)入Cytoscape3.7.2軟件進一步計算所有納入節(jié)點的度值(Degree)、中間中心性(Betweenness Centrality,BC)、緊密中心性(Closeness Centrality,CC)，計算上述所有值的中位數(shù)。PPI網(wǎng)絡(luò)共包含76個節(jié)點和410條邊(見圖3)。網(wǎng)絡(luò)圖中的節(jié)點代表蛋白質(zhì)，度值表示連接到同一節(jié)點的線數(shù)，用于評估網(wǎng)絡(luò)中每個節(jié)點的重要性。每條邊代表蛋白質(zhì)之間的相互作用關(guān)系，線越多，關(guān)聯(lián)程度越大。拓撲學(xué)結(jié)果分析表示，Degree值中位數(shù)為8，BC中位數(shù)為0.003 496 27，CC中位數(shù)為0.447765185，將低于上述參數(shù)的靶點剔除。最后滿足上述靶點的共27個，然后以Degree值排序，選取排名前5個，包括6個核心靶點AKT1、JUN、TNF、TP53、CASP3、IL-1β，可能提示這6個靶點在人參-黃精治療CRF中發(fā)揮的作用最強，是分子調(diào)控網(wǎng)絡(luò)的中的關(guān)鍵靶點(見表2)。

菱形節(jié)點代表26≥Degree值≤37的靶點；三角形節(jié)點代表17≥Degree值≤25的靶點；V形節(jié)點代表9≥Degree值≤16的靶點；圓形節(jié)點代表1≥Degree值≤8的靶點

表2 人參-黃精藥對治療癌因性疲勞關(guān)鍵靶點及其基本信息

2.4靶點的生物富集分析和通路注釋解釋 將上述的93個關(guān)鍵靶點導(dǎo)入DAVID數(shù)據(jù)庫進行GO富集分析與KEGG通路注釋分析，共得到234個GO富集分析及87條信號通路。其中生物過程(BP)168個，細胞組成(CC)21個，分子功能(MF)45個。GO富集分析顯示(見圖4)，關(guān)鍵靶點主要通過細胞(核、質(zhì)、膜)、胞漿、線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)等細胞組分參與對RNA 聚合酶Ⅱ啟動子對轉(zhuǎn)錄的正調(diào)控、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、對藥物的反應(yīng)、脂多糖、凋亡過程反應(yīng)等生物學(xué)過程，并發(fā)揮蛋白質(zhì)結(jié)合、酶結(jié)合、特定DNA結(jié)合等分子功能，進而發(fā)揮治療CRF的作用。KEGG通路注釋分析表明(見圖5)，19條通路與人參-黃精治療CRF有關(guān)。氣泡圖中氣泡大小與富集的集團數(shù)目相關(guān)，顏色隨“P-Value”大小變化，顏色越紅，P值越大。KEGG弦圖顯示，核心靶點AKT1、JUN、TP53等主要調(diào)控癌癥途徑通路(hsa05200)；MAPK8、TNF、IL-1β等主要調(diào)控TNF信號通路(hsa04668)；AKT1、CASP3、MAPK14等主要調(diào)控腫瘤蛋白多糖通路(hsa05205)；AKT1、RELA、TP53等主要調(diào)控PI3K-Akt信號通路(hsa04151)，NF-κB信號通路(hsa04064)是炎癥通路的焦點。在納入的靶點基因中AKT1、TP53、RELA參與調(diào)控的信號通路最多，分別為13、10、10，可能與其他靶點產(chǎn)生較強的相互作用。

圖4 癌因性疲勞與人參-黃精藥對共同靶點GO功能富集分析結(jié)果

弦圖上半圓表示信號通路、下半圓表示靶點，連線表示靶點與通路之間的聯(lián)系

2.5構(gòu)建中藥-有效成分-靶點-KEGG通路網(wǎng)絡(luò) 為了闡明人參-黃精作用于CRF的潛在機制，通過Cytoscape構(gòu)建中藥-有效成分-靶點-KEGG通路組成的復(fù)雜網(wǎng)絡(luò)。該網(wǎng)絡(luò)顯示了藥物、成分、關(guān)鍵靶點與信號通路之間的關(guān)系，包含83個節(jié)點和300條邊，顯示了這19條信號通路的詳細信息。通過該網(wǎng)絡(luò)分析，網(wǎng)絡(luò)中連接節(jié)點的邊越多，提示對應(yīng)節(jié)點的重要程度越高(見圖6)。

淺藍色代表藥物；綠色代表人參的活性成分；深藍色代表黃精的活性成分；黃色代表二者共有的活性成分；紅色代表靶點；紫色代表通路

2.6關(guān)鍵活性成分與靶標(biāo)的分子對接驗證 基于Degree值排名，選擇有效成分山柰酚、黃芩素、β-谷甾醇、豆甾醇、原阿片堿與關(guān)鍵靶點AKT1、JUN、TNF、TP53、CASP3、IL-1β進行對接?；谖墨I報道，通常結(jié)合能<-5.0 kcal/mol提示分子之間具有較強的結(jié)合活性[14]。分子對接結(jié)果顯示：5種有效成分與上述靶點對接的結(jié)果結(jié)合能均<-5.0 kcal/mol，說明他們之間的結(jié)合能力均較好，其中IL-1β與原阿片堿的結(jié)合能最好。并通過計算對接自由能合計得分，IL-1β總分最低(-40 kcal/mol)，說明與有效成分結(jié)合效果最好。見表3及圖7。

圖7 關(guān)鍵靶點IL-1β、TP53、TNF與核心成分結(jié)合最佳構(gòu)象

表3 人參-黃精藥對有效成分與關(guān)鍵靶點結(jié)合自由能 kcal/mol

3 討 論

中醫(yī)古籍沒有明確的關(guān)于CRF的記載，根據(jù)其臨床表現(xiàn)可歸于“虛勞”范疇。CRF不單獨起病，多因腫瘤或治療損傷人體正氣，則脾胃亦傷，病久損其腎氣，則脾腎兩虛，氣血不榮，最終臟腑氣血陰陽俱虛[15]?！疤搫凇弊钤缫娪凇督饏T要略》，病機以虛為本，或本虛標(biāo)實，或虛中夾實，故臨床治療應(yīng)以補虛為基本原則，注重調(diào)整臟腑功能，補益氣血[16]。人參與黃精皆味甘，甘則能補、能緩、能和，歸脾、肺、腎經(jīng)，均有健脾益腎，補氣潤肺補虛之用，則可認為人參-黃精有潛在治療CRF的作用。

本研究運用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)從人參-黃精藥對中篩選得到24個活性成分，93個重要靶點，通過“藥物-活性成分-靶點”網(wǎng)絡(luò)得到山柰酚、黃芩素、β-谷甾醇、豆甾醇和原阿片堿等是“人參-黃精”治療CRF的主要活性成分。β-谷甾醇是人參和黃精共有的活性成分，通過內(nèi)質(zhì)網(wǎng)-線粒體軸增強活性氧的產(chǎn)生和鈣內(nèi)流，使線粒體膜電位的喪失和促凋亡信號產(chǎn)生，改變腫瘤細胞的信號通路，抑制腫瘤細胞聚集、生長和轉(zhuǎn)移[17]，同時隨濃度變化促進細胞凋亡[18]，也可以通過調(diào)節(jié)TP53基因加速腫瘤細胞凋亡[19]。山柰酚、豆甾醇和原阿片堿是來自人參的活性成分。山柰酚作為一種典型的抗疲勞成分，具有很強的抗氧化活性和清除自由基的作用[20-21]，并在腫瘤細胞凋亡、血管生成、轉(zhuǎn)移和炎癥方面具有廣泛的靶向作用[22]。豆甾醇通過抑制TNF-α、VEGFR-2和p-Akt、PCL和FAK的表達，有效地抑制腫瘤內(nèi)皮細胞生長[23]，通過阻斷Akt-mTOR信號通路誘導(dǎo)胃癌細胞凋亡和自噬[24]。原阿片堿通過線粒體途徑以半胱天冬酶依賴式抑制腫瘤細胞的活力并誘導(dǎo)其凋亡，并能抑制PI3K-Akt通路和Caspase-3的激活[25]。黃芩素是來自黃精的活性成分,通過清除體內(nèi)自由基，保護細胞膜系統(tǒng)的完整性，防止脂質(zhì)氧化加劇，從而緩解疲勞[26]，并能誘導(dǎo)腫瘤細胞凋亡和自噬，使細胞周期停滯，從而抑制腫瘤細胞的增殖和侵襲[27]。在這5個活性成分中，屬于人參的活性成分有4個，從網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)角度推測人參-黃精藥對在CRF的治療中，人參起主要作用，黃精可增加人參的療效。

PPI網(wǎng)絡(luò)分析提示藥物靶點與CRF靶點間具有復(fù)雜的相互作用關(guān)系。將調(diào)控網(wǎng)絡(luò)中靶點以Degree值排序得到AKT1、JUN、TNF、TP53、CASP3、IL-1β等重要靶點，初步分析重要靶點主要對細胞凋亡、轉(zhuǎn)移、炎癥等的調(diào)節(jié)有關(guān)。AKT1是一種原癌基因，參與細胞生長、增殖和血管生成等生物過程，并可以作為靶向治療PI3K-Akt通路的抑制劑[28]；TP53和JUN是重要的抑癌基因，是癌癥基因靶向治療的新方向[29-30]。TP53可誘導(dǎo)細胞周期停滯和細胞凋亡，并且突變型TP53可作為預(yù)測患者預(yù)后的分子標(biāo)記物[31]。沈煬等[32]研究發(fā)現(xiàn)在膀胱癌中的JUN表達顯著低于正常組織，但膀胱癌患者的預(yù)后中，JUN低表達的卻遠優(yōu)于高表達。CASP3 具有誘導(dǎo)細胞凋亡的作用，其誘導(dǎo)細胞凋亡的作用與體內(nèi)CASP3的水平有關(guān)。Lin等[33]研究發(fā)現(xiàn)五味子甲素A可以降低慢性疲勞小鼠大腦中海馬神經(jīng)元裂解的CASP3的表達水平，通過抑制海馬神經(jīng)元的凋亡來改善小鼠疲勞。TNF-α、IL-1β作為一種炎性細胞因子，當(dāng)受到應(yīng)激反應(yīng)后過度釋放，會影響HPA軸并使其功能減退[34]。Yang等[35]研究發(fā)現(xiàn)慢性疲勞綜合征與TNF-α的上升和IL-1β的下降密切相關(guān)。Himbert等[36]的研究發(fā)現(xiàn)在大腸癌患者中炎癥的生物標(biāo)志物(TNF-α、IL-6、IL-1β)與疲勞評分成正相關(guān)。Zhu等[37]發(fā)現(xiàn)參芪注射液可能通過抑制荷瘤小鼠外周免疫細胞產(chǎn)生的促炎細胞因子，從而改善CRF。這與研究報道提出的炎癥在CRF的發(fā)生機制中起著重要作用的觀點所吻合[38]?；煏|發(fā)腫瘤或免疫細胞產(chǎn)生和分泌炎性細胞因子，從而誘導(dǎo)產(chǎn)生CRF[39]?；熀笃诟锌沙掷m(xù)10年以上，同時促炎細胞因子水平居高不下，影響中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能和其他行為癥狀[5，40]。外周組織中TNF-α水平升高是影響大多數(shù)癌癥患者或接受癌癥治療患者疲勞嚴重程度的重要預(yù)測因素[41]。總結(jié)發(fā)現(xiàn)炎癥因子是影響CRF的關(guān)鍵因素。

進一步分析GO生物信號通路發(fā)現(xiàn)，生物過程主要與RNA聚合酶Ⅱ啟動子對轉(zhuǎn)錄的正調(diào)控、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、凋亡過程等有關(guān)；分子功能可能涉及蛋白質(zhì)結(jié)合、酶結(jié)合、特定DNA結(jié)合等；細胞(核、質(zhì)、膜)、線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)等細胞組分等在治療過程中的變化值得關(guān)注。KEGG通路分析發(fā)現(xiàn)人參-黃芪治療CRF中與癌癥相關(guān)的通路有19條，主要包括癌癥途徑、TNF、MAPK、蛋白多糖、PI3k-Akt、HIF-1、NF-κB、P53等信號通路，其中癌癥途徑富集數(shù)值最高。TNF信號通路中的TNFR1主要參與細胞調(diào)節(jié)過程，TNF-α水平在氧化應(yīng)激產(chǎn)生時顯著升高,誘導(dǎo)參與氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)過程的IL-1β、IL-6細胞因子的產(chǎn)生[42]。MAPK通路被生長因子、不同類型的壓力或炎性細胞因子提供的刺激激活，可導(dǎo)致細胞增殖、分化、發(fā)育、炎癥或凋亡，也可以在腫瘤耐藥中起到作用[43]。PI3K-Akt信號通路參與多種癌癥的治療，廣泛存在于細胞中，可以調(diào)控細胞的生長、增殖、凋亡、代謝、腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移[44]。人參皂苷Rb1可能通過激活PI3K-Akt通路，減輕炎癥和氧化應(yīng)激反應(yīng)來改善患者的疲勞狀態(tài)[45-46]。NF-κB是介導(dǎo)免疫炎癥反應(yīng)的核心物質(zhì)，通過調(diào)節(jié)興奮性和抑制性的神經(jīng)遞質(zhì)，調(diào)節(jié)突觸信息傳遞，調(diào)節(jié)突觸可塑性和調(diào)節(jié)中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能基因參與中樞性疲勞的發(fā)生和發(fā)展[47]，也可以通過circRNAs參與疲勞的發(fā)生和發(fā)展[48]。以上通路研究表明人參-黃精可通過藥物-成分-靶點-通路網(wǎng)絡(luò)，通過抑制細胞生長、促進凋亡以及炎癥反應(yīng)發(fā)揮治療CRF的作用。

分析對接結(jié)果顯示活性成分與核心靶點結(jié)合能均<-5.0 kcal/mol，結(jié)合位點存在穩(wěn)定的氫鍵，其中最穩(wěn)定的是原阿片堿與IL-1β(-8.5 kcal/mol)，原阿片堿能和IL-1β的LYS-26、ARG-13殘基形成氫鍵作用，說明人參-黃精的活性成分與核心靶點能夠穩(wěn)定結(jié)合，起到治療CRF的作用。

綜上所述，人參-黃精藥對CRF的治療中可能涉及不同靶點和通路，并在癌細胞的凋亡、轉(zhuǎn)移以及炎癥因子等發(fā)揮治療作用，延緩CRF的進展，體現(xiàn)了中醫(yī)藥治療的多成分、多靶點、多通路協(xié)同的特點。

利益沖突：所有作者均聲明不存在利益沖突。