張多加 張明明 王婷婷 張春蘭 郭 瀅 吳效科 李慕白

(1 黑龍江中醫(yī)藥大學附屬第一醫(yī)院婦一科,哈爾濱,150040; 2 黑龍江中醫(yī)藥大學,哈爾濱,150040)

多囊卵巢綜合征(Polycystic Ovary Syndrome,PCOS)是一種婦科常見的內分泌代謝異常疾病,是導致患者無排卵性不孕的常見原因。研究顯示超過70%的PCOS患者表現為胰島素抵抗(Insulin Resistance,IR)和(或)高胰島素血癥[1]。盡管肥胖被普遍認為是IR的重要促成因素,但有研究顯示,患有PCOS的肥胖女性和非肥胖女性均可伴有胰島素敏感性降低[2]。高胰島素血癥和胰島素抵抗同樣可引起PCOS患者生殖內分泌紊亂[3]。一項在全國22家醫(yī)療分中心收集1 000例不育的PCOS患者的大樣本流行病學調查顯示,血清空腹胰島素及穩(wěn)態(tài)模型胰島素抵抗指數(Homeostatic Model Assessment for Insulin Resistance,HOMA-IR)水平與經過促排卵誘導的PCOS患者的生育結局密切相關,并認為血清胰島素水平可預測PCOS患者的包括排卵、受孕、妊娠及活產率等生育結局，主要研究結果發(fā)表在美國JAMA雜志上[4-5]。研究顯示,卵泡內過量的雄激素,具有阻礙優(yōu)勢卵泡發(fā)育的作用[6]。另外,伴有IR的PCOS患者竇卵泡生長顯示受阻[7]。高胰島素血癥和IR主要通過干擾卵泡發(fā)育,導致PCOS排卵功能障礙。

小檗堿(Berberine),又稱黃連素,含多種異哇琳類生物堿,歸中焦脾胃經,具有清熱燥濕的作用，可有效增加胰島素敏感性,改善胰島素抵抗。宋代《太平圣惠方》中治療消渴病的177首方劑常用的10味藥,黃連就居于前3味。系統(tǒng)評價中藥單體小檗堿對PCOS女性生殖內分泌和代謝的影響的研究發(fā)現,雖然沒有確鑿的證據表明小檗堿可以提高PCOS婦女的活產率或妊娠率,但認為小檗堿有助于恢復正常的內分泌和生育能力[8-9]。同時發(fā)現,在改善IR方面,小檗堿與二甲雙胍作用相似,而在改善體脂分布、降低雄激素水平及改善血脂方面,小檗堿優(yōu)于二甲雙胍;與安慰劑和不治療比較,小檗堿與降低黃體生成素(Luteinizing Hormone,LH)水平相關,且和二甲雙胍比較,在降低LH/促卵泡素(Follicle Stimulating Hormone,FSH)水平方面有顯著優(yōu)勢[9]。十一五“科技支撐計劃”項目在全國19個分中心收集880例PCOS患者,以小檗堿、來曲唑進行隨機雙盲對照試驗,觀察排卵率、妊娠率、活產率等妊娠結局,首次發(fā)現小檗堿治療PCOS的6個月活產率為22%(44/214),小檗堿聯合來曲唑的療效達到34%(74/215),療效水平類似現代醫(yī)學一線促排卵藥物枸櫞酸氯米芬。研究成果發(fā)表在Lancet和Fertil Steril上[10-11]。有研究表明,PCOS患者服用小檗堿3個月后,全身胰島素抵抗有所改善[12]。與二甲雙胍比較,小檗堿有助于恢復PCOS婦女的生殖內分泌水平和生育能力,并且不良反應更少,因此,小檗堿似乎是用于改善PCOS患者生殖代謝紊亂和增強生育能力的有效且安全的藥物[9]。

小檗堿對于PCOS的治療靶點在于單磷酸AMP活化蛋白激酶(Adenine Monophosphate Activated Protein Kinase,AMPK)[13-15],但是并不清楚其對胰島素信號通路的調控機制,因此,本實驗基于AMPK/哺乳動物雷帕霉素靶蛋白(Mammalian Target of Rapamycin,mTOR)通路研究小檗堿對PCOS卵巢局部胰島素信號通路轉導障礙的改善,同時從生殖內分泌、卵巢組織形態(tài)學方面的變化,探究小檗堿改善卵巢局部IR的機制。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動物 選取60只清潔型雌性Sprague-Dawley(SD)大鼠,6～7周齡,體質量160～170 g,由哈爾濱光大動物養(yǎng)殖中心提供,生產許可證號碼:SCXK9(黑)2018-003。飼養(yǎng)條件保持在18～22 ℃的室溫和50%～60%的濕度下,在無特定病原體(Specific Pathogen Free,SPF)環(huán)境中,12 h暗/光周期。所有大鼠都隨意接受正常食物和自來水。所有實驗程序均經黑龍江中醫(yī)藥大學動物護理和使用委員會批準(倫理審批號:2019061801)。

1.1.2 藥物 鹽酸小檗堿片(東北制藥集團沈陽第一制藥有限公司,批號:2190612);鹽酸二甲雙胍片(格華止)(中美上海施貴寶制藥有限公司,批號:H20023370);生物合成人胰島素注射液(諾和靈,諾和諾德公司,丹麥,批號:J20171005);注射用絨促性素(麗珠集團麗珠制藥廠,批號:200309)。

1.1.3 試劑與儀器 酶聯免疫吸附試驗(Enzyme Linked Immunosorbent Assay，ELISA)檢測試劑盒大鼠胰島素(Insulin,INS,貨號:DECO3003)、總睪酮(Testosterone,T,貨號:DECO2994)、雄烯二酮(Androstenedione,ASD,貨號:DECO2996)、17α-羥孕酮(17α-hydroxyprogesterone,17α-OHP,貨號:DECO2998)、黃體生成素(LH,貨號:DECO2410)、促卵泡素(FSH,貨號：DECO2320)、性激素結合球蛋白(Sex Hormone Binding Globulin,SHBG,貨號:DECO2771)ELISA試劑盒均購自上海舜冉生物科技有限公司,兔抗大鼠磷酸化哺乳動物雷帕霉素靶蛋白絲氨酸-2481(pSer2481-mTOR)單克隆抗體(貨號:ab137133)、兔抗大鼠磷酸化AMP活化蛋白激酶蘇氨酸-172α(α-pT172-AMPK)單克隆抗體(貨號:2535T)、兔抗大鼠糖原合酶激酶3β(Glycogen Synthase Kinase3β,GSK3β)單克隆抗體(貨號:8885T)均購自美國Cell Signaling Technology公司,兔抗大鼠磷酸化蛋白激酶B絲氨酸-473(Phospho-Ser473-protein Kinase B,pSer473-AKT)單克隆抗體(Abcam公司,英國,貨號:ab81283),實時熒光PCR試劑盒(KAPA Biosystems公司,南非,貨號:KK4601)。光學顯微鏡(NIKON公司,日本,型號:Eclipse ci),離心機(賽默飛公司,美國,型號:Sorvall ST 40,SCILOGEX),生化分析儀(邁瑞公司,型號:BS200),酶標分析儀(Tecan公司,瑞士,型號:Infinite F50),SDS電泳儀(Bio-rad公司,美國,型號:042BR13724),包埋機武漢俊杰電子有限公司,型號:JB-P5),凝膠成像系統(tǒng)(Bio-Rad公司,美國,型號:Universal hood II),StepOne Plus實時定量聚合酶鏈式反應儀(ABI公司,美國,型號:ABI7500)。

1.2 方法

1.2.1 分組與模型制備 SD大鼠適應性喂養(yǎng)1周后,采用隨機數字表法隨機分為空白組(15只)和PCOS模型組(45只)。PCOS模型組大鼠從造模第1天起,頸背部皮下注射胰島素(Insulin,INS)0.5 IU,1次/日,此后每日遞增0.5 IU,遞增至6.0 IU/d后,保持該注射劑量至造模結束;造模第14天起,每只大鼠皮下注射人絨毛膜促性腺激素(Human Chorionic Gonadotropin,HCG)6 IU/d,2次/d(上午、下午各3 IU/次),至造模結束,共9 d?？瞻捉M每日給予普通飼料喂食,頸背部皮下注射等劑量生理鹽水,共22 d。

1.2.2 給藥方法 采用隨機數字表法將PCOS模型組大鼠隨機分為模型組(15只)、小檗堿組(15只)、二甲雙胍組(15只)。小檗堿組給予小檗堿混懸液灌胃(170 mg/kg·d);二甲雙胍組給予二甲雙胍混懸液灌胃(200 mg/kg·d);空白組和模型組每日給予等體積生理鹽水灌胃。各組均連續(xù)灌胃31 d。

1.2.3 檢測指標及方法

1.2.3.1 大鼠動情周期檢測 造模結束后,隨機選取大鼠進行陰道涂片,觀察陰道上皮角化程度,連續(xù)觀察3個動情周期。

1.2.3.2 口服葡萄糖耐量試驗(Oral Glucose Tolerance Test,OGTT) 用藥干預結束后,各組大鼠禁食12 h后,空腹采血,之后口服3 g葡萄糖,并開始計時,分別于服糖后60 min、120 min、180 min分別采血,檢測血清葡萄糖水平。

1.2.3.3 大鼠血清性激素和糖脂代謝水平檢測 用藥干預結束后,所有大鼠禁食12 h,次日清晨對動情周期處于間期的大鼠進行眼眶靜脈取血,分離血清,于-80 ℃冰箱中儲存。之后斷頸處死各組大鼠。計算HOMA-IR:HOMA-IR=空腹血糖(mmol/L)×空腹胰島素(Fasting Insulin,FINS)(mIU/L)/22.5。使用生化分析儀檢測血清中三酰甘油(Triacylglycerol,TG)、低密度脂蛋白膽固醇(Low Density Lipoprotein Cholesterol,LDL-C)、高密度脂蛋白膽固醇(High Density Lipoprotein Cholesterol,HDL-C)和總膽固醇(Total Cholesterol,TC)水平。采用ELISA法檢測大鼠血清中FINS、LH、FSH、T、ASD、17α-OHP和SHBG水平,嚴格按照試劑盒說明書操作。

1.2.3.4 蘇木精-伊紅(Hmatoxylin-eosin,HE)染色法檢測大鼠卵巢組織形態(tài)學變化 摘取各組大鼠卵巢組織,一側卵巢于液氮中靜置30 min后,于-80 ℃冰箱保存,另一側卵巢以甲醛固定液固定,常規(guī)石蠟包埋,切片?？瞻捉M、模型組、小檗堿組和二甲雙胍組4組卵巢組織切片中每張切片挑選3個100倍視野對卵泡進行截圖,于光學顯微鏡下觀察。截圖時保證每張照片的背景光一致。應用Image-Pro Plus 6.0軟件以100倍標尺為標準,選取合適的視野,每張圖片分別測量卵泡5處顆粒層厚度(mm)并計算出平均值。

1.2.3.5 卵巢組織相關靶基因蛋白表達檢測 以蛋白質印跡法(Western Blotting,WB)檢測卵巢組織α-pT172-AMPK、pSer2481-mTOR、pSer473-AKT、GSK3β蛋白表達水平。將卵巢組織進行蛋白提取、裂解,得到總蛋白產物,進行蛋白含量測定、配膠、電泳、轉膜,洗滌后封閉2 h;加入一抗,孵育過夜;次日用洗滌緩沖液(Tris Buffered Saline Tween,TBST)洗滌后加入二抗,孵育40 min;充分洗滌后,化學發(fā)光,顯影,使用凝膠圖像處理系統(tǒng)分析灰度值,其結果用待測蛋白與內參β-actin的灰度值比值表示。

1.2.3.6 卵巢組織葡萄糖轉運蛋白4 mRNA表達檢測 實時熒光聚合酶鏈式反應法(Polymerase Chain Reaction,PCR)檢測卵巢組織中葡萄糖轉運蛋白4(Glucose Transporter 4,GLUT4)mRNA的表達。取凍存的卵巢組織進行總RNA提取、電泳、反轉錄,使用ABI 7500熒光定量PCR儀、采用2-△△Ct法進行數據的相對定量分析。引物信息見表1。

表1 引物序列表

2 結果

2.1 動情周期比較 造模結束后,光鏡下觀察大鼠陰道涂片,可見陰道上皮細胞持續(xù)處于以大量白細胞為主的動情間期,提示造模后大鼠動情周期紊亂,PCOS大鼠造模成功。藥物干預后,小檗堿組和二甲雙胍組大鼠動情周期恢復。

2.2 各組大鼠卵巢組織形態(tài)學變化觀察 鏡下可觀察到,空白組大鼠卵巢可見各發(fā)育時期的卵泡,顆粒細胞形態(tài)完整,排列整齊;與空白組比較,模型組大鼠卵巢各級發(fā)育期卵泡明顯消退,卵泡顆粒細胞層厚度明顯減少(P<0.05),囊性擴張卵泡和閉鎖卵泡數量明顯增加;與模型組比較,小檗堿組和二甲雙胍組大鼠卵巢中可見各發(fā)育時期的卵泡,卵泡顆粒細胞層厚度明顯增加(P<0.01,P<0.05),囊性擴張卵泡和閉鎖卵泡數量明顯減少。見圖1,表2。

表2 各組大鼠卵巢卵泡顆粒細胞層厚度比較

圖1 各組大鼠卵巢組織形態(tài)學變化比較(HE染色)

2.3 各組大鼠血清性激素水平的比較 與空白組比較,模型組大鼠血清性激素中T、LH、LH/FSH、17α-OHP、ASD水平顯著升高,SHBG水平顯著下降,差異均有統(tǒng)計學意義(均P<0.01);與模型組比較,小檗堿組大鼠血清性激素中T、LH、LH/FSH、17α-OHP、ASD水平顯著降低,SHBG水平顯著升高,差異均有統(tǒng)計學意義(均P<0.01);與模型組比較,二甲雙胍組T水平下降(P<0.05),LH、LH/FSH、17α-OHP、ASD水平明顯下降(均P<0.01),SHBG水平顯著升高(P<0.01);與二甲雙胍組比較,小檗堿組LH和ASD水平顯著降低,SHBG水平顯著升高,差異均有統(tǒng)計學意義(均P<0.01)。見表3。

表3 各組大鼠血清性激素水平比較

2.4 各組大鼠糖脂代謝水平的比較

2.4.1 各組糖代謝水平比較 與空白組比較,模型組OGTT試驗各時段血糖水平、FINS和HOMA-IR水平顯著升高(P<0.05,P<0.01);與模型組比較,小檗堿組和二甲雙胍組OGTT試驗各時段血糖水平、FINS和HOMA-IR水平顯著降低(P<0.05,P<0.01)。見表4。

表4 各組大鼠糖代謝水平比較

2.4.2 各組脂代謝水平比較 與空白組比較,模型組血清TG、LDL-C、TC水平明顯升高,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01),HDL-C水平明顯降低,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01);與模型組比較,小檗堿組和二甲雙胍組血清TG、LDL-C、TC水平明顯降低,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01);與二甲雙胍組比較,小檗堿組無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。見表5。

表5 各組大鼠血脂水平比較

2.5 各組大鼠卵巢組織靶基因蛋白表達比較 與空白組比較,模型組大鼠卵巢組織AMPK的Thr 172位點和AKT的Ser473位點磷酸化水平顯著降低,mTOR的Ser2481位點磷酸化水平和GSK3β蛋白表達水平顯著升高,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01);與模型組比較,小檗堿組大鼠卵巢組織AMPK的Thr 172位點和AKT的Ser473位點磷酸化水平顯著升高,mTOR的Ser2481位點磷酸化水平和GSK3β蛋白表達水平顯著降低,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。見圖2～3。

圖2 各組卵巢組織靶蛋白表達情況

圖3 各組大鼠卵巢組織中靶蛋白表達水平比較

2.6 各組大鼠卵巢組織GLUT4 mRNA表達水平比較 與空白組比較,模型組大鼠卵巢組織中GLUT4 mRNA表達水平明顯降低,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01);與模型組比較,小檗堿組和二甲雙胍組大鼠卵巢組織中GLUT4 mRNA表達水平明顯升高,差異均有統(tǒng)計學意義(均P<0.01)。見圖4。

圖4 各組大鼠卵巢組織中GLUT4 mRNA表達水平比較

3 討論

本研究采用了INS聯合HCG法成功制備PCOS大鼠模型,與Poretsky等[16]和Yang等[17]的造模結果相似,PCOS組大鼠出現動情周期延長;生殖內分泌紊亂;胰島素抵抗和高胰島素血癥,糖脂代謝障礙;光鏡下觀察到卵巢形態(tài)結構的改變。而在采用小檗堿或二甲雙胍治療后,上述狀態(tài)得以糾正。

3.1 小檗堿恢復PCOS大鼠卵巢卵泡形態(tài)學發(fā)育 本研究中,應用小檗堿治療后,卵巢正常卵泡發(fā)育形態(tài)學得到恢復。卵巢組織中各級發(fā)育期卵泡復現,囊性擴張卵泡消退,卵泡顆粒細胞厚度明顯增厚。卵巢局部的高雄激素及高胰島素環(huán)境可明顯干擾卵泡的正常發(fā)育。既往研究表明,卵巢局部高雄激素水平可干擾卵泡的生長和發(fā)育[18],降低顆粒細胞之間的連接,損害卵泡生長[7]。而胰島素對卵泡的生長發(fā)育同樣起重要作用。過量的胰島素,可導致顆粒細胞分化紊亂,卵泡的發(fā)育停止[19]。高胰島素水平還可導致游離胰島素樣生長因子-1(Insulin-like Growth Factor 1,IGF-1)水平升高[20],高水平的游離IGF-I可下調卵泡液中游離IGF-2的水平[21],從而不能促進顆粒細胞的增殖和FSH誘導雌激素產生[22]。在本研究中,小檗堿調節(jié)卵巢局部胰島素信號通路的轉導,改善卵巢局部高胰島素及高雄激素水平,故而恢復顆粒細胞增殖,促進卵泡發(fā)育,恢復了卵巢的正常組織形態(tài)。

3.2 小檗堿改善PCOS大鼠生殖內分泌紊亂 本研究結果顯示,應用小檗堿治療后,PCOS大鼠T、ASD和17α-OHP高水平狀態(tài)有所恢復。這表明,小檗堿具有降雄作用,可能是由于小檗堿改善了胰島素信號通路轉導障礙,從而改善胰島素敏感性的原因。有研究發(fā)現,胰島素是導致卵巢雄激素分泌增加的原因,胰島素可協同LH,刺激卵泡膜細胞中17α-羥化酶/17,20裂解酶(17α-hydroxylase/17,20 Lyase,CYP17)的表達,導致卵巢產生過量的雄激素[23]。PCOS患者體內,高水平胰島素可直接刺激卵巢分泌過量雄激素[24],研究顯示采用胰島素增敏劑二甲雙胍治療后,高胰島素水平降低的同時,高雄激素水平也得到改善[25]。17α-OHP是合成ASD和T的前體物質[26],較高水平的17α-OHP代表合成更多的ASD以及T,導致更嚴重的雄激素水平升高[27]。本研究認為,小檗堿降低了PCOS大鼠空腹胰島素和血清LH水平,因而改善了卵巢局部17α-OHP、ASD以及T的過多生成。另外,應用小檗堿后,PCOS大鼠的血清LH水平下降,這與小檗堿對PCOS女性生殖內分泌和代謝影響的系統(tǒng)評價相一致,研究顯示,與安慰劑和不治療比較,小檗堿與降低LH水平相關,與二甲雙胍比較,在降低LH/FSH水平方面有顯著優(yōu)勢[8]。我們認為下丘腦胰島素抵抗與LH的過量分泌有關。位于下丘腦弓狀核的吻肽(Kisspeptin,Kp)神經元細胞分泌的Kp多肽類激素,其靶器官是下丘腦的促性腺激素釋放激素(Gonadotrophic Releasing Hormone，GnRH)神經細胞,是GnRH和LH脈動釋放的關鍵調節(jié)劑[28]。研究顯示合并月經稀發(fā)的PCOS患者血清Kp濃度及脈沖頻率均明顯增高[29]。Kp與糖代謝途徑息息相關。胰高血糖素樣肽-1(GLP-1)顯著增加GT1-7 GnRH的神經元和胎鼠腦的原代培養(yǎng)物中Kisspeptin-1 mRNA的表達[30]。健康人靜脈注射Kp可促進靜脈葡萄糖負荷后胰島素分泌,并調節(jié)血清代謝物。與此相一致,在體外人類胰島細胞的培養(yǎng)中加入不同濃度的Kp,可劑量依賴地增強胰島B細胞胰島素的分泌[31]。我們認為,小檗堿改善血清高胰島素水平,調節(jié)下丘腦胰島素抵抗狀態(tài),故而降低了PCOS大鼠的LH水平。

3.3 小檗堿改善PCOS大鼠糖脂代謝紊亂 采用小檗堿治療后的PCOS大鼠糖脂代謝紊亂得到糾正。結果顯示,小檗堿可明顯降低OGTT試驗各時段血糖水平和HOMA-IR水平,這可能與小檗堿的作用通路有關。多項研究認為小檗堿以AMPK為作用靶點[13-15]。有研究指出,小檗堿通過AMPK和促分裂原活化的蛋白激酶(Mitogen Activated Protein Kinase,MAPK)通路刺激在大鼠骨骼肌中葡萄糖的攝取,從而降低血糖水平[32]。還有研究已證實AMPK磷酸化后,可以促進糖酵解、抑制糖異生,增加組織細胞對葡萄糖的代謝及胰島素敏感性[33]。本研究的結果證實,小檗堿通過調節(jié)AMPK的活性后,對磷脂酰肌醇-3-激酶(PhosphatidyLinositol-3-kinase,PI3K)蛋白激酶B/蛋白激酶B(AKT)胰島素信號通路具有調控作用,改善其轉導障礙,恢復下游GLUT4的表達,改善糖代謝。

研究顯示,PCOS患者血脂異?；疾÷矢哌_76.1%[34]。當PCOS發(fā)生胰島素抵抗時,脂肪組織中脂肪分解受到抑制[19]。胰島素可抑制三酰甘油脂肪酶(脂質動員的關鍵限速酶)的激活,導致脂質動員和三酰甘油合成增加[35]。研究發(fā)現小檗堿可通過c-Jun氨基末端激酶(c-jun N-terminal Kinase,JNK)途徑,降低血清LDL[36],或激活AMPK[37],抑制人類肝細胞的脂質合成,從而改善脂代謝。本研究中,小檗堿可增強胰島素敏感性,激活AMPK,改善脂代謝,降低血脂水平。

3.4 小檗堿改善PCOS大鼠卵巢局部胰島素信號通路的轉導 通過小檗堿治療后,PCOS大鼠卵巢局部胰島素信號通路轉導障礙得到調控,改善局部胰島素抵抗,有效地促進了葡萄糖代謝。與Zhang等[38]的研究結果有類似之處,該研究通過來曲唑制造PCOS大鼠模型,對卵巢組織中PI3K、AKT和GLTU4蛋白水平進行檢測,發(fā)現應用小檗堿后,PI3K、AKT和GLTU4蛋白水平顯著升高。但小檗堿改善卵巢局部PI3K/AKT轉導障礙的機制尚不清楚。我們認為,小檗堿的作用靶點為AMPK基因。有研究表明,AMPK能夠通過結節(jié)性硬化癥復合物腫瘤抑制基因2(Tuberous Sclerosis Complex tumor suppressor gene 2,TSC2)tuberous sclerosis complex 2 tumor suppressor gene(TSC2),從而抑制mTOR的表達[39]。胰島素抵抗與mTOR活性增加相關[40]。研究發(fā)現,飲食誘導的IR動物模型的骨骼肌和肝臟中mTOR呈異常激活狀態(tài)[41]。mTOR活化后可磷酸化其下游分子核糖體蛋白S6激酶1(Ribosomal-protein S6 Kinase,S6K1),進而可導致胰島素受體底物(InsulinReceptor Substrates，IRS)-1磷酸化水平升高,抑制下游的PI3K與IRS-1的結合[42-43],減弱AKT蛋白的激活,影響PI3K/AKT信號通路的轉導[44]。同樣,AKT磷酸化減少,增加GSK3β蛋白的表達,促進糖原合成酶(Glycogen Synthetase,GS)磷酸化而抑制糖原合成[45]。本研究中,應用小檗堿后,卵巢局部AMPK被激活,mTOR活性受到抑制,AKT的Ser473磷酸化水平升高,GSK3β蛋白表達水平下降,GLUT4表達明顯增加,說明小檗堿通過AMPK/mTOR途徑調控胰島素信號通路轉導。

本研究結果顯示,小檗堿恢復PCOS大鼠生殖內分泌狀態(tài),改善高胰島素血癥,調節(jié)糖脂代謝水平,恢復卵巢正常形態(tài),究其原因,可能與小檗堿作用于AMPK/mTOR靶點,調控了卵巢局部胰島素信號PI3K/AKT/GLUT4通路的轉導障礙有關,故改善卵巢局部胰島素抵抗,糾正了卵巢局部的卵泡發(fā)育障礙及性激素分泌異常。