王 黎，王 琳，張麗霞，王 丹

(南京醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院檢驗(yàn)學(xué)部，江蘇 南京 210029)

糞便是由食物通過消化道消化吸收后未被吸收的食物殘?jiān)⑾婪置谖锏葮?gòu)成，其含有大量的臨床信息。糞便常規(guī)檢查作為臨床檢驗(yàn)三大常規(guī)之一，在診斷消化道出血、寄生蟲感染、炎癥、腫瘤等方面具有重要的應(yīng)用價(jià)值[1-3]。隨著儀器自動(dòng)化發(fā)展的日新月異，臨床檢驗(yàn)工作的方便、快捷，為臨床醫(yī)師提供了及時(shí)、準(zhǔn)確的診斷信息。大部分醫(yī)院檢驗(yàn)科對糞便常規(guī)檢測仍以手工操作為主，其存在氣味難聞、操作費(fèi)時(shí)費(fèi)力、生物安全性低等問題[4-5]。本研究結(jié)合2021年9月6日發(fā)布并于2022年9月1日正式實(shí)施的《中華人民共和國醫(yī)藥行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)》(YY/T 1745-2021)及本院本實(shí)驗(yàn)室的實(shí)際使用對愛威科技股份有限公司生產(chǎn)的AVE-562系列全自動(dòng)糞便分析儀進(jìn)行了詳盡評測，旨在探討其對臨床糞便常規(guī)檢測的應(yīng)用價(jià)值。

1 材料與方法

1.1材料

1.1.1標(biāo)本來源 收集2020年11月17日至12月17日本院門診及住院患者糞便常規(guī)標(biāo)本517例，以及2022年4月6-13日本院收治的胃癌、結(jié)直腸癌患者手工法糞便隱血陽性標(biāo)本各100例。全血標(biāo)本來源于實(shí)驗(yàn)室當(dāng)天血常規(guī)檢測剩余標(biāo)本(乙二胺四乙酸二鉀抗凝)，白細(xì)胞陽性標(biāo)本來源于當(dāng)天尿常規(guī)膿尿標(biāo)本。

1.1.2儀器與試劑 AVE-562全自動(dòng)糞便分析儀及配套試劑(隱血試紙條及樣本稀釋液)，全血標(biāo)本檢測儀器為Sysmex XN-10全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀，膿尿標(biāo)本檢測儀器為美國Iris Diagnostics生產(chǎn)的iQ200全自動(dòng)尿液顯微鏡系統(tǒng)。儀器法為愛威配套糞便管，人工法為普通糞便盒。顯微鏡為Olympus光學(xué)顯微鏡，涂片鏡檢所用試劑為生理鹽水。

1.1.3相關(guān)依據(jù) 《中華人民共和國醫(yī)藥行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)》(YY/T 1745-2021)、《醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則》(ISO15189：2012)、《醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和認(rèn)可準(zhǔn)則在體液領(lǐng)域的應(yīng)用說明》(CNAS-CL41：2012)、《尿液有形成分分析儀(數(shù)字成像自動(dòng)識(shí)別)》(YY/T 0996-2015)、《AVE56系列全自動(dòng)糞便分析儀用戶手冊》等。

1.2方法

1.2.1顏色、性狀識(shí)別能力 隨機(jī)取臨床新鮮糞便標(biāo)本20份(含正常和異常樣本)。通過人工目測，記錄20份標(biāo)本的顏色、性狀結(jié)果。評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)：AVE-562識(shí)別與人工目測結(jié)果符合率大于或等于80%。

1.2.2檢出限 取1份全血標(biāo)本，采用血紅蛋白(Hb)儀器檢測Hb水平為100 g/L，用AVE-562樣本稀釋液稀釋為2 000、1 000、200、20、10、1、0.5、0.3、0.2、0.1、0 μg/mL的11個(gè)不同水平樣本。將上述標(biāo)本分別檢測3次，記錄結(jié)果。評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)：是否在驗(yàn)證檢測范圍內(nèi)(0.1～1 000 μg/mL)。

1.2.3檢出率 取血、尿常規(guī)(膿尿)標(biāo)本加生理鹽水配置成紅細(xì)胞和白細(xì)胞懸液(10個(gè)/μL)10 mL(人工鏡檢確認(rèn))。將上述標(biāo)本檢測20次，并記錄結(jié)果。檢出率=檢出陽性次數(shù)/檢測次數(shù)×100%。評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)：檢出率大于或等于90%為合格。

1.2.4重復(fù)性 取血、尿常規(guī)(膿尿)標(biāo)本加生理鹽水配置成紅細(xì)胞和白細(xì)胞懸液(分別為50、200個(gè)/μL)各20 mL(人工鏡檢確認(rèn))。將上述標(biāo)本添加健康者糞便標(biāo)本適量，攪拌均勻后檢測20次，記錄結(jié)果，計(jì)算變異系數(shù)(CV)及回收率。取1份全血樣本(Hb 100 g/L)，用AVE-562樣本稀釋液將Hb稀釋為0.1 μg/mL，檢測10次，檢查是否測試結(jié)果為陰性，再用稀釋液檢測10次，檢查是否測試結(jié)果為陽性?；厥章?檢測均值/理論值×100%。評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)：CV(50～200個(gè)/μL)≤20%，CV(>200個(gè)/μL)≤15%。

1.2.5攜帶污染 配制細(xì)胞水平為5 000個(gè)/μL的紅細(xì)胞血液樣本及白細(xì)胞尿液樣本，連續(xù)檢測3次，檢測結(jié)果以i1、i2、i3表示，再將生理鹽水連續(xù)檢測3次，檢測結(jié)果以j1、j2、j3表示，計(jì)算攜帶污染率，Ci=(j1-j3)/(i3-j3)×100%，評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)：Ci≤0.05%。

1.2.6檢出符合率 用AVE-562配套糞便處理杯收集住院及門診517例患者新鮮糞便標(biāo)本，接收標(biāo)本后分裝部分到普通糞便盒。根據(jù)AVE-562操作規(guī)程對517份配套糞便管的糞便標(biāo)本進(jìn)行檢測并記錄鏡檢的檢測結(jié)果，由儀器操作培訓(xùn)合格的專業(yè)人員檢測，操作嚴(yán)格按儀器操作說明書執(zhí)行并記錄結(jié)果。手工法與儀器法為同一檢驗(yàn)人員操作，嚴(yán)格按《全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》(第4版)要求執(zhí)行[6]。潔凈玻片上加生理鹽水1～2滴，選取糞便中膿血黏液等病理成分，若無病理成分可多部位取材或人為加入病理成分(紅細(xì)胞、白細(xì)胞、真菌等)形成模擬樣本，使陽性標(biāo)本比例大于或等于30%，直接涂片檢查，厚度以能透過印刷物字跡為度。先用低倍鏡(10×)觀察全片10個(gè)視野以上，檢查寄生蟲卵、原蟲及包囊、淀粉顆粒、脂肪小滴等，再用高倍鏡(40×)觀察20個(gè)視野以上，檢查紅細(xì)胞、白細(xì)胞、靈芝孢子、真菌等，所有標(biāo)本1 h內(nèi)完成檢測。以人工鏡檢及手工檢測隱血結(jié)果為標(biāo)準(zhǔn)，采用雙盲法進(jìn)行檢測，比較2種方法的有形成分符合率及陽性檢出率。符合率=符合例數(shù)/總例數(shù)×100%，評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)：陽性符合率大于或等于80%。

1.2.7運(yùn)行速度 AVE-562滿負(fù)荷運(yùn)行完成4 h內(nèi)標(biāo)本顯微鏡檢及隱血試驗(yàn)，記錄標(biāo)本數(shù)。

1.2.8配套糞便管的運(yùn)輸 記錄517份糞便標(biāo)本通過氣動(dòng)物流或患者自行送檢有無泄漏。

1.2.9臨床適用性評價(jià) 選擇胃癌、結(jié)直腸癌患者手工法糞便隱血陽性標(biāo)本各100例，用AVE-562進(jìn)行檢測，比較糞便隱血陽性符合率。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，2種方法的一致性采用Kappa一致性檢驗(yàn)，Kappa系數(shù)小于0為一致性極差，0～0.2為微弱，>0.2～0.4為弱，>0.4～0.6為中度，>0.6～0.8為高度，>0.8～1.0為極強(qiáng)[7-8]；計(jì)數(shù)資料以率或構(gòu)成比表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1顏色、性狀識(shí)別能力 AVE-562識(shí)別與人工目測結(jié)果符合率分別為85%、 90%，符合評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，驗(yàn)證通過。

2.2檢出限 0 μg/mL管3次糞便隱血試驗(yàn)結(jié)果均為陰性，2 000 μg/mL管3次糞便隱血試驗(yàn)結(jié)果均為弱陽性，其余管均為陽性，糞便隱血試驗(yàn)檢測范圍為0.1～1 000 μg/mL，符合評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，驗(yàn)證通過。

2.3檢出率 紅細(xì)胞、白細(xì)胞檢出率均為100%，符合評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，驗(yàn)證通過。

2.4重復(fù)性 紅細(xì)胞、白細(xì)胞重復(fù)性符合評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，驗(yàn)證通過。見表1。

表1 AVE-562重復(fù)性驗(yàn)證

2.5攜帶污染 儀器檢測結(jié)果紅細(xì)胞、白細(xì)胞攜帶污染率均為0.02%，符合評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，驗(yàn)證通過。

2.6檢出符合率 AVE-562紅細(xì)胞、白細(xì)胞、真菌、隱血試驗(yàn)檢出符合率均大于或等于80%，驗(yàn)證通過。見表2。在517份標(biāo)本檢測過程中人工鏡檢法蟲卵陽性的5例標(biāo)本經(jīng)儀器檢測均為陽性，其中包括蛔蟲及鞭蟲。形態(tài)學(xué)鏡檢存在少數(shù)情況下的假陽性，如對樣本中出現(xiàn)的脂肪粒與紅細(xì)胞、食物殘?jiān)?、植物?xì)胞與蟲卵存在誤認(rèn)[9]；因鮮血便所含紅細(xì)胞數(shù)量超出性能驗(yàn)證范圍，檢測后出現(xiàn)攜帶污染。

表2 AVE-562檢出符合率驗(yàn)證

2.7運(yùn)行速度 AVE-562滿負(fù)荷運(yùn)行完成標(biāo)本顯微鏡檢及隱血試驗(yàn)整套檢測約40個(gè)/小時(shí)。

2.8配套糞便管的運(yùn)輸 517例糞便樣本皆使用愛威配套糞便管，對患者充分宣教樣本留取注意事項(xiàng)后留取好的樣本通過本院氣動(dòng)物流傳輸系統(tǒng)或患者自行送至實(shí)驗(yàn)室檢測，未出現(xiàn)標(biāo)本溢灑、污染等情況，檢測完產(chǎn)生的廢液通過實(shí)驗(yàn)室污水系統(tǒng)直接排出，生物安全性良好。

2.9臨床適用性評價(jià) 胃癌、結(jié)直腸癌各100例糞便隱血試驗(yàn)陽性患者標(biāo)本手工法與AVE-562儀器法陽性符合率分別為96%、97%，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。AVE-562儀器法結(jié)果中4例胃癌患者標(biāo)本及3例結(jié)直腸癌患者標(biāo)本糞便隱血試驗(yàn)為陰性，此7例標(biāo)本均為鮮血便，檢測中出現(xiàn)后帶效應(yīng)產(chǎn)生假陰性。

3 討 論

糞便常規(guī)檢測分為理學(xué)檢查、有形成分鏡檢、化學(xué)檢查三部分，因其無創(chuàng)且標(biāo)本易得，對消化道出血及消化道腫瘤的診斷具有重要參考價(jià)值[10-12]。目前，國內(nèi)大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室仍采用手工法糞便檢測，存在氣味不易接受、生物安全性低、交叉污染等問題。糞便有形成分分析儀通過對糞便中有形成分計(jì)數(shù)和形態(tài)學(xué)分析，提供紅細(xì)胞、白細(xì)胞、蟲卵、真菌等定量檢測結(jié)果及糞便隱血試驗(yàn)的定性檢測結(jié)果，儀器化的簡潔、高效規(guī)避了手工法糞便檢測的諸多缺點(diǎn)，標(biāo)本量大且集中的三甲醫(yī)院逐步開始使用全自動(dòng)糞便分析儀。愛威AVE-562全自動(dòng)糞便分析儀采用配套的標(biāo)本采集管、一次性有形成分計(jì)數(shù)板，對糞便的顏色、性狀、有形成分及免疫學(xué)檢測結(jié)果進(jìn)行拍照，通過圖像處理識(shí)別軟件對檢測結(jié)果進(jìn)行自動(dòng)識(shí)別。在檢驗(yàn)前質(zhì)量方面，自動(dòng)化分析儀能準(zhǔn)確控制樣本量；檢驗(yàn)后質(zhì)量方面，其成像系統(tǒng)對樣本圖像處理及存儲(chǔ)，便于臨床樣本的復(fù)檢、復(fù)核及可溯源性[13]。已有研究對全自動(dòng)糞便分析儀進(jìn)行了性能驗(yàn)證評估[10，14-16]，但大多數(shù)都在行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)發(fā)布前，且據(jù)作者所知，國內(nèi)對糞便有形成分分析儀行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)發(fā)布后的性能驗(yàn)證及評價(jià)的文獻(xiàn)報(bào)道尚不多見，本研究依據(jù)2021年9月6日發(fā)布并將于2022年9月1日正式實(shí)施的《中華人民共和國醫(yī)藥行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)》(YY/T 1745-2021)結(jié)合本院實(shí)驗(yàn)室的臨床應(yīng)用，建立了一套規(guī)范且合適的驗(yàn)證方案對儀器性能驗(yàn)證進(jìn)行評估并加以應(yīng)用，以評價(jià)儀器檢測的可靠性及臨床應(yīng)用價(jià)值。

本研究采用的AVE-562全自動(dòng)糞便分析儀通過了《中華人民共和國醫(yī)藥行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)》(YY/T 1745-2021)中對檢出率、重復(fù)性、攜帶污染、檢出符合率項(xiàng)目的性能驗(yàn)證要求，標(biāo)準(zhǔn)中對儀器顏色及性狀識(shí)別能力、檢出限、運(yùn)行速度、配套糞便管的運(yùn)輸沒有具體要求，結(jié)合實(shí)驗(yàn)室具體情況，本研究對這幾項(xiàng)進(jìn)行了評估，符合儀器說明書技術(shù)要求和臨床應(yīng)用檢測技術(shù)指標(biāo)實(shí)際要求。在顏色、性狀識(shí)別能力方面，AVE-562識(shí)別與人工目測結(jié)果符合率符合要求，表明儀器對標(biāo)本的理學(xué)檢測結(jié)果基本符合要求。形態(tài)學(xué)鏡檢中紅細(xì)胞、白細(xì)胞檢出率均為100%。通過對有形成分中紅細(xì)胞、白細(xì)胞水平的人工法和儀器法比對，得益于配套糞便采集管、智能攪拌及有形成分富集系統(tǒng)[17-18]，重復(fù)性符合評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，有形成分回收率大于或等于100%。AVE-562使用一次性計(jì)數(shù)板，有效避免了其他儀器使用的流動(dòng)計(jì)數(shù)板出現(xiàn)清洗不徹底的問題，攜帶污染符合要求。517份糞便臨床樣本分析中紅細(xì)胞、白細(xì)胞、真菌、隱血試驗(yàn)檢出符合率均大于或等于80%，Kappa值均大于0.6，與人工檢測結(jié)果呈高度一致性，且儀器法陽性檢出率稍高，作者認(rèn)為，儀器檢測對比人工檢測標(biāo)本選取量更大、更全面[19]。儀器法隱血試驗(yàn)人工判讀和儀器判讀存在13例的差異，儀器對隱血板陰、陽性的判讀與人工存在差異，且有形成分如脂肪粒與紅細(xì)胞、食物殘?jiān)?、植物?xì)胞與蟲卵存在誤認(rèn)，所以，仍需要對儀器拍攝的圖像進(jìn)行人工判讀審核后方可發(fā)出陽性報(bào)告[20]。儀器法檢測鮮血便出現(xiàn)攜帶污染現(xiàn)象，建議實(shí)際操作過程中肉眼可見的鮮血便仍采用人工法檢測。儀器運(yùn)行速度約為40個(gè)/小時(shí)，配套糞便管的運(yùn)輸無泄漏、污染等現(xiàn)象，封閉式運(yùn)行，省時(shí)省力，極大地避免了交叉污染及生物安全風(fēng)險(xiǎn)，符合臨床應(yīng)用需求。本研究對胃癌、結(jié)直腸癌患者的臨床適用性評估結(jié)果顯示，AVE-562儀器法與手工法比較，糞便隱血陽性符合率較高，AVE-562可適用于胃癌、結(jié)直腸癌患者的檢測；但儀器法檢測鮮血便出現(xiàn)后帶效應(yīng)，建議實(shí)際操作過程中肉眼可見的鮮血便仍采用人工法檢測。

綜上所述，愛威AVE-562全自動(dòng)糞便分析儀具有理學(xué)分析、有形成分分析準(zhǔn)確率和化學(xué)檢查檢出率較高等特點(diǎn)，符合《中華人民共和國醫(yī)藥行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)》(YY/T 1745-2021)相關(guān)要求，操作簡單，無交叉污染且降低了生物安全風(fēng)險(xiǎn)，在臨床應(yīng)用中與人工法的符合率較高，可用于臨床糞便常規(guī)檢測。