段文勝，劉益紅

(瀘州東方農(nóng)化有限公司，四川 瀘州 646300)

唑啉草酯是先正達(dá)成功開發(fā)的選擇性除草劑，主要用于牙后防除小麥和大麥田一年生禾本科雜草，其活性高，起效快，對作物安全，對環(huán)境友好，自2006年上市以來，市場已遍布全球多個國家，逐漸成為除草劑家族的大品種[1]。有關(guān)唑啉草酯含量測定方法有液相色譜法[2-3]，有資料顯示唑啉草酯分解受pH值影響較大[4]，針對檢測過程中試樣穩(wěn)定性問題未見有文獻(xiàn)報(bào)道。本文采用高效液相色譜法將唑啉草酯及其中雜質(zhì)分離，并考察了影響檢測試樣穩(wěn)定性的因素，采用外標(biāo)法準(zhǔn)確測定唑啉草酯的含量。該方法分離效果理想，重復(fù)性好，準(zhǔn)確度高，結(jié)果滿意。

1 試驗(yàn)部分

1.1 儀器及試劑 LC—20ADVP高效液相色譜儀；SPD—M20A二極管陣列檢測器；LabSolution色譜數(shù)據(jù)工作站。唑啉草酯標(biāo)準(zhǔn)品99.0%；甲醇 色譜純；乙腈 色譜純；磷酸 優(yōu)級純；超純水。

1.2 色譜條件 色譜柱：SinoChrom ODS-BP5μ 250mm×4.6mmid；流動相：甲醇/水(75/25) (每500mL流動相中含0.25g磷酸)；流速：1.0mL/min；檢測波長：UV257nm；柱溫：40℃；進(jìn)樣量：5μL。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 唑啉草酯標(biāo)準(zhǔn)溶液配制 準(zhǔn)確稱取唑啉草酯標(biāo)準(zhǔn)品約20mg(精確至0.01mg)于50mL容量瓶中，加乙腈/水(體積比5/5，含0.1%磷酸，下同)溶解，并稀釋至刻度，搖勻，備用。

1.3.2 樣品溶液的配制 準(zhǔn)確稱取唑啉草酯原藥樣品約20mg(精確至0.01mg)于50mL容量瓶中，加乙腈/水溶解，稀釋至刻度，搖勻。

1.3.3 樣品的測定 在選定的色譜條件下，分別吸取標(biāo)準(zhǔn)(樣品)溶液5μL，進(jìn)樣，重復(fù)操作，保證其相對標(biāo)準(zhǔn)偏差<0.5%，記錄唑啉草酯的峰面積，并取其平均值。樣品中唑啉草酯的質(zhì)量分?jǐn)?shù)X按下式計(jì)算。

式中：

A1—樣品中唑啉草酯峰面積平均值；

A2—標(biāo)樣中唑啉草酯峰面積平均值；

m1—稱取樣品的質(zhì)量，mg；

m2—稱取標(biāo)樣的質(zhì)量，mg；

P—唑啉草酯對照品的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，%。

2 結(jié)果與討論

2.1 色譜條件的選擇

2.1.1 色譜柱的選擇 采用通用型反相色譜柱分別對樣品進(jìn)行分離，本文對比了Hedera ODS-2柱、SinoChrom ODS-BP柱、Diamonsil C18柱不同生產(chǎn)廠家的3種色譜柱，結(jié)果發(fā)現(xiàn)在同樣的流動相條件下，無明顯區(qū)別，本文選用柱壓較低的SinoChrom ODS-BP柱。

2.1.2 流動相的選擇 采用甲醇(或乙腈)/水(或磷酸鹽緩沖液等)體系分別對唑啉草酯樣品進(jìn)行色譜分離，發(fā)現(xiàn)有機(jī)相采用乙腈唑啉草酯分離不理想，分離度差，峰形不對稱，采用甲醇可獲得較好的分離度和峰形，考慮到酸性體系有利于抑制唑啉草酯分解，在流動相中加入適量磷酸可實(shí)現(xiàn)檢測過程穩(wěn)定。所以本文選用甲醇/水做流動相，并對其配比及磷酸加入量進(jìn)行了調(diào)整，最后確定為甲醇/水(75/25)(每500mL流動相中含0.25g磷酸)，其色譜圖(圖1)。

1-溶劑；2-唑啉草酯分解雜質(zhì)；3，4，6-未知雜質(zhì)；5-唑啉草酯圖1 唑啉草酯液相色譜圖(乙腈做有機(jī)相配樣)

2.1.3 特異性及檢測波長的選擇 采用二極管陣列檢測器分別對唑啉草酯標(biāo)樣及樣品溶液進(jìn)行光譜數(shù)據(jù)采集，獲得唑啉草酯標(biāo)樣及樣品的紫外波長掃描圖(圖2、圖3)。從圖中可以看到唑啉草酯標(biāo)樣及樣品分別在202、257nm有較大吸收峰，且202nm較257nm強(qiáng)，但考慮到低波長基線干擾較大，所以本文選用257nm作為檢測波長。

圖2 唑啉草酯標(biāo)樣紫外吸收譜圖

圖3 唑啉草酯樣品紫外吸收譜圖

2.2 配樣溶液選擇 在分析條件選擇過程中發(fā)現(xiàn)試樣會緩慢分解成2#峰雜質(zhì)(圖1、圖4)，且使用甲醇做有機(jī)相配制樣品，會生成4#峰雜質(zhì)(圖4)。針對試樣不穩(wěn)定情況對乙腈體系配樣溶液進(jìn)行了選擇，準(zhǔn)確稱取同一樣品分別用乙腈、乙腈/水(5/5，含0.1%磷酸，pH值約為2.6)、乙腈/水(5/5，含0.2%磷酸，pH值約為2.3)配樣，在實(shí)驗(yàn)規(guī)定的條件下連續(xù)進(jìn)樣10次，計(jì)算唑啉草酯峰面積與分解雜質(zhì)峰面積比，以進(jìn)樣次數(shù)為橫坐標(biāo)，峰面積比為縱坐標(biāo)做圖(圖5)，由圖可以發(fā)現(xiàn)乙腈/水酸性溶液配制的試樣穩(wěn)定性較好，考慮到酸性太強(qiáng)會影響色譜柱壽命，所以本文選擇乙腈/水(5/5，含0.1%磷酸)做為配樣溶液。

1-溶劑；2-唑啉草酯分解雜質(zhì)；3，5，7-未知雜質(zhì)；4-唑啉草酯甲醇溶解產(chǎn)生雜質(zhì)；6-唑啉草酯圖4 唑啉草酯液相色譜圖(甲醇做有機(jī)相配樣)

系列1-純乙腈配樣(稱樣量：19.64mg)；系列2-乙腈/水(0.1%磷酸)配樣(稱樣量：20.46mg)；系列3-乙腈/水(0.2%磷酸)配樣(稱樣量：20.57mg)；圖5 唑啉草酯試樣穩(wěn)定性

2.3 分析方法的線性相關(guān)性試驗(yàn) 準(zhǔn)確稱取唑啉草酯標(biāo)準(zhǔn)品150mg(精確至0.01mg)于50mL容量瓶中，加乙腈/水溶解，并稀釋至刻度，搖勻(標(biāo)準(zhǔn)貯備液)。分別準(zhǔn)確吸取0、2、4、6、8、10mL，分別加入到6個50mL的容量瓶中，加乙腈/水稀釋至刻度，搖勻。根據(jù)試驗(yàn)規(guī)定 的操作方法測定，記錄唑啉草酯色譜峰面積，以唑啉草酯面積與濃度作圖，測得唑啉草酯標(biāo)準(zhǔn)曲線為Y=9 510.41C-14 923.31，r=0.999 8，表明唑啉草酯在0～590.79mg/L的濃度范圍內(nèi)呈線性(表1、圖6)。

表1 分析方法的線性相關(guān)性試驗(yàn)數(shù)據(jù)

圖6 唑啉草酯線性關(guān)系圖

2.4 分析方法的精密度試驗(yàn) 準(zhǔn)確稱取同一樣品，按試驗(yàn)規(guī)定方法，配制6份溶液，在上述實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行分析，測唑啉草酯的標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.26，RSD為0.27%(表2)。

表2 分析方法的精密度試驗(yàn)結(jié)果

2.5 分析方法的準(zhǔn)確度試驗(yàn) 分別準(zhǔn)確稱取已知含量的樣品溶液約20mg 6份，各分別加入實(shí)驗(yàn)2.3配制的唑啉草酯標(biāo)準(zhǔn)貯備液1、2、3mL，按試驗(yàn)規(guī)定的方法配成一系列溶液，測定唑啉草酯的總量，并計(jì)算回收率(表3)。

表3 分析方法的準(zhǔn)確度試驗(yàn)結(jié)果

本文建立的高效液相色譜法測定唑啉草酯含量的方法，可避免唑啉草酯在檢測過程中緩慢分解，有效保證了唑啉草酯長時(shí)間檢測試樣穩(wěn)定，使檢測結(jié)果更準(zhǔn)確，重復(fù)性更好，實(shí)踐證明是一種確實(shí)可行的好方法。