一、主要研究背景

疼痛是一種不愉快的感覺，起始于軀體感覺神經元對傷害性熱、機械和化學等刺激的反應。尋找選擇性靶向沉默傷害性神經元的新策略將有助于鎮(zhèn)痛新療法的研發(fā)。天然毒素是選擇分子試劑的豐富來源，能夠靶向調節(jié)神經元的功能。近來研究發(fā)現(xiàn)，細菌產物可作用于感覺神經元而調控感染誘發(fā)的疼痛和咳嗽。該研究的目的是識別細菌產物作用于DRG 感覺神經元上的受體，并研究相關細菌產物是否調節(jié)疼痛。通過轉錄組數(shù)據(jù)分析，研究者發(fā)現(xiàn)DRG 內Na

1.8

神經元上的ANTXR2 分子，是炭疽毒素的高親和受體。炭疽毒素是炭疽桿菌的主要毒素，包含PA（保護性抗原）、LF（致命因子）和EF（水腫因子）三種蛋白，構成兩種二分體毒素：致命毒素 (LT = PA + LF) 和水腫毒素(ET = PA + EF)。中毒時，PA 與炭疽毒素受體結合，并在內吞小泡上打孔，LF 和EF 通過其N 端結構域與PA 打的孔隙結合而進入細胞。LF 是鋅指金屬蛋白酶，可剪切絲裂原激活蛋白 (MAP) 激酶、炎癥小體感受器Nlrp1 和磷酸肌醇-3 激酶的調節(jié)亞基p85α和p85β。EF 是鈣和鈣調蛋白依賴的腺苷酸環(huán)化酶(AC)，可將ATP 轉化為cAMP。

PA 有兩個結構同源受體：ANTXR1 (TEM8)和ANTXR2 (CMG2)。PA 與ANTXR2 的親和力比ANTXR1 高很多，ANTXR2 缺失小鼠對炭疽毒素和炭疽桿菌感染具有抵抗力，表明ANTXR2 是炭疽毒素在體內的主要功能受體。

炭疽毒素除了作為病原菌，還可用作運送系統(tǒng)而將功能性分子物質運送到靶細胞（如癌細胞）的胞質中。把外源分子連接到LF 的N 端結構域(LF

)，就能通過PA 打的孔隙被傳遞到細胞內，可以運送與蛋白結合的各種分子、非常規(guī)的多肽和核酸等。此功能支持把炭疽毒素系統(tǒng)作為靶向神經元技術。

該研究發(fā)現(xiàn)ANTXR2 在神經系統(tǒng)中有著異乎尋常的表達模式：在大部分CNS 神經元中缺失，而富集在DRG 的Na

1.8

神經元中。在多個小鼠模型中，ET 鞘內注射靶向DRG 神經元可以抑制熱痛和機械痛，鎮(zhèn)痛作用依賴于Na

1.8

或Advillin

神經元上的ANTXR2 表達。ET 減弱了DRG 神經元到脊髓背角的神經傳遞功能。炭疽毒素系統(tǒng)將多種非自身蛋白運送到感覺神經元，具有作為輸送鎮(zhèn)痛蛋白質平臺的潛力。

二、主要研究結果

1. ANTXR2 表達于Nav1.8+ DRG 神經元上

通過基于流式分選的小鼠DRG 神經元的轉錄組數(shù)據(jù)分析，發(fā)現(xiàn)

在Na

1.8 品系小鼠(Scn10a

) 神經元富集，且比在parvalbumin品系鼠(Pvalb-cre

) 的本體感受神經元高5倍；通過小鼠DRG 神經元的單細胞RNA 測序，發(fā)現(xiàn)

在表達

(Na

1.8)、

、

(CGRP)、

和

(TrkA) 傷害感受器中表達最高。

對金融資產的重分類，可以有：將以公允價值計量的金融資產重分類為以攤余成本計量的金融資產、以攤余成本計量的金融資產重分類為以公允價值計量的金融資產以及兩類以公允價值計量的金融資產之間的相互分類三種類型的六種業(yè)務。對于不同類型金融資產的重分類，其會計處理在新準則中都有相關的規(guī)定，以下通過粵信公司購入KY公司債券這一案例，分別探討三種類型金融資產之間進行重分類的會計處理方法。

RNAscope（RNA 原位雜交）實驗證實，小鼠DRG 中存在

轉錄本，在中、小直徑神經元中表達最高，大多數(shù)

細胞表達

，只有小部分

細胞表達

；

廣泛表達在人軀體感覺神經元中，包括介導傷害感受的

、

和

/

神經元；

主要表達在中、小直徑的DRG 神經元中；人

RNA 在DRG 的RNA 中比腦組織RNA的表達水平高。以上分析表明Antxr2 在人和小鼠軀體感覺神經元中都有表達，包括傷害性感受器。

2. LT 和ET 誘發(fā)DRG 細胞信號

LT 處理體外培養(yǎng)DRG 細胞導致顯著的MEK3分裂和p38 磷酸化降低，而單獨給予LF 對MEK3分裂和p38 磷酸化都沒有影響，表明PA 是LF 進入細胞內所必需的；僅給予ET 可使cAMP 水平升高；聯(lián)合給予特定濃度的PA，EF 誘導cAMP 增高的EC

在46 pM。以上研究結果表明，炭疽毒素可以作用于培養(yǎng)的DRG 細胞，以依賴于PA 的方式干預細胞內信號。

3. ET 鞘內注射的鎮(zhèn)痛作用

給藥方法是單獨給予2 μg PA，或2 μg PA + 2 μg LF 或EF，注射體積為5 μl。結果發(fā)現(xiàn)，ET 鞘內注射顯著升高機械痛閾值和熱痛潛伏期，可持續(xù)數(shù)小時；ET 作用是可重復的，在第1 次注射2 天后，再次鞘內注射ET 同樣可以升高機械痛閾值，而且第2 次給藥的鎮(zhèn)痛作用更強，這可能是由于ET 誘導了ANTXR2 上調。

加強對醫(yī)護人員健康促進專項培訓,把健康促進成為一種常態(tài)性的工作來開展,將健康促進和健康教育有效納入醫(yī)療服務工作中,提供系統(tǒng)化的就診、入院和出院健康教育及康復指導,醫(yī)患溝通取決于治療疾病的成敗,好的醫(yī)患溝通可以使醫(yī)護人員較快地了解患者的病情,及時準確地采取有效的治療措施。加強醫(yī)患溝通,醫(yī)院成立老付熱線、護患連心廊、健康驛站、健康教育微信平臺等,有利于醫(yī)務人員與患者、家屬進行交流和溝通,并通過報紙、媒體、網絡向公眾開展健康知識傳播、科普知識宣傳、預防保健等,受到社會各界廣泛贊譽。

ET 2 h 腹腔內注射實驗鼠對傷害性熱刺激和機械刺激（包括熱板、冷板和針刺等）的反應減弱；Randall-Selitto 誘發(fā)反應也減弱，但在注射后5 h恢復正常；輕觸覺也受到影響，可能由于ANTXR2在部分Aβ 和Aδ 低閾值機械感覺神經元中有表達；ET 鞘內注射對熱痛閾和機械痛閾的影響無性別差異。

ET 鞘內注射2 h 后（2 h 腹腔內注射），DRGs中cAMP 水平升高，24 h 后恢復到基線水平；在脊髓水平，ET 2 h 腹腔內注射使cAMP 水平出現(xiàn)一個明顯的小幅增加，可能是傷害感受器的cAMP 升高，但只是占整個脊髓組織小部分；而cAMP 的變化在后爪足底組織中沒有被檢測到。

4. 感覺神經元ANTXR2 介導ET 的鎮(zhèn)痛作用

在Na

1.8

傷害性感覺神經元中(

Scn10a

/

Antxr2

)條件敲除

（經驗證DRG 中

全長轉錄本的表達減少），與同窩對照鼠比較，ET的鎮(zhèn)痛作用明顯減弱；

Scn10a

/

Antxr2

鼠體外培養(yǎng)的DRG 細胞給予ET 后，cAMP 的合成也減少。Na

1.8

神經元中ANTXR2 的缺失不影響多數(shù)疼痛模式的基礎閾值，但對福爾馬林誘發(fā)的第二時相疼痛產生輕微的抑制作用，不影響角叉菜膠誘發(fā)的機械痛敏。表明ANTXR2 不影響傷害性疼痛的基礎閾值，但對ET 的鎮(zhèn)痛作用至關重要。

電生理研究發(fā)現(xiàn)，當注入小或中等電流時，給予ET 的DRG 神經元的興奮性增強，而神經元的靜息膜電位或輸入電阻沒有明顯改變；在ET 處理的神經元中記錄到的電壓激活鈣電流，與對照組比較無顯著性差異；在培養(yǎng)的DRG 細胞中，給予ET 也不影響KCl 誘導的CGRP 釋放。

5. ET 誘導小鼠和人iPSC（誘導多能干細胞）神經元中的PKA 信號

通過研究DRG 神經元中PKA 的激活情況，發(fā)現(xiàn)ET 穩(wěn)步增加DRG 神經元亞群的PKA-II 活性，2 h 達飽和水平，其EC

在皮摩爾水平；而單獨應用EF 或PA 則沒有作用；單獨應用PA、LF 或LT 都不影響PKA-II 活性；通過鑒定對ET 反應的DRG 神經元亞群，發(fā)現(xiàn)在所有傷害性神經元和非傷害性神經元中均可檢測到PKA 活性，但程度不同；對ET 的反應與CaMKIIα 和Na

1.8 的表達正相關，與NF200 表達不相關；同F(xiàn)sk 比較，ET 不增加非神經元細胞中的pRII 水平?？傊珽T 在數(shù)小時內可劑量依賴性的激活感覺神經元和傷害性感受器內的PKA。

搓搓腳。在沐足過程中，可用雙手按摩、揉搓腳背及腳心，以左手勞宮穴摩擦右腳底涌泉穴，右手勞宮穴摩擦左腳底涌泉穴，直到產生溫熱感為止。

通過定量DRG 冰凍切片上的神經元，揭示ET可在體誘導大量DRG 神經元中的PKA-II 激活；當基于小分子的分化方案將人類iPSCs 分化為具有傷害感受器表型的感覺神經元后，以EC

在皮摩爾水平的ET 進行刺激，即可升高pRII，表明人感覺神經元可能是炭疽毒素的靶標。

6. ET 調節(jié)神經活性和鎮(zhèn)痛的誘導

在

Avil

/

ANTXR2

鼠，ET 的鎮(zhèn)痛效應幾乎被消除。與

Scn10a

/

Antxr2

條件敲除鼠比較，

Avil

/

Antxr2

鼠表現(xiàn)出更顯著的減弱，可能是因為有少量的Antxr2

Na

1.8

神經元參與鎮(zhèn)痛作用。在內皮細胞內條件敲除

的

Cdh5

/

Antxr2

鼠和在髓系免疫細胞條件敲除Antxr2 的

Lyz2

/

Antxr2

鼠，ET 的鎮(zhèn)痛作用沒有受到顯著的影響。表明神經元內的ANTXR2 對ET 鎮(zhèn)痛作用至關重要，而內皮細胞和髓系免疫細胞幾乎不參與ET 的鎮(zhèn)痛作用。

阿片受體拮抗劑納曲酮和納洛酮或CB1 拮抗劑/反向激動劑Rimonabant 對ET 的鎮(zhèn)痛作用沒有顯著的影響，化學交感神經切除鼠給予ET 仍然表現(xiàn)出明顯的鎮(zhèn)痛作用。另一種可能是，細胞外分泌的cAMP 轉化成腺苷，作用于傷害性感受器上的腺苷受體而產生鎮(zhèn)痛作用，但系統(tǒng)性給予泛腺苷受體拮抗劑CGS15943 并不影響ET 升高的熱痛閾。

ET 2 h 后對DRG 的轉錄組檢測分析發(fā)現(xiàn)轉錄組變化明顯，包括

、

和

等上調和幾種信號通路的改變（如磷酸化水平下調）。DUSP1 是一種可阻斷與疼痛相關的MAPK 通路的磷酸酶，用DUSP1/DUSP6 拮抗劑BCI 藥理方法抑制DUSP1 不影響ET 的鎮(zhèn)痛作用。雖然以上研究沒有明確DUSP1 的具體功能，但足以證明注射ET 數(shù)小時內可誘發(fā)體內DRG 的內在轉錄改變。

辣椒素鞘內注射刺激初級傳入的中樞分支，觀察pERK 磷酸化水平。結果發(fā)現(xiàn)鞘內注射后再注射辣椒素，可增加背角pERK 陽性細胞數(shù)；而先注射ET 再注射辣椒素可顯著減少pERK 陽性細胞數(shù)。

7. ET 鞘內注射誘導DRG 轉錄改變

概念的掌握不等同于記憶名詞，原理、概念表達的簡潔性、正確性，結論的準確性尤其重要。所以地理教師要弄清楚知識的來龍去脈，掌握其確切的概念和規(guī)律，精心組織教學語言解讀，確定怎樣開頭，怎樣過渡，怎樣結尾。只有概念精準思路井然有序，講解才會條理清晰，學生在重點難點等關鍵問題上才能得到透徹的理解。

8. ET 減弱DRG 中樞末梢的神經傳遞

據(jù)了解，目前石柱縣共整合涉農資金建立財政投入股權化資金8000萬元，全面推行農業(yè)項目財政資金股權分紅。截至目前，全縣已組織實施股權收益扶貧項目167個，帶動貧困戶四千余戶。

該研究進一步采用電生理實驗觀察ET 刺激背根是否可引起脊髓背角I 層神經元興奮性突觸后電流 (EPSCs) 的變化。給予ET 可緩慢減少C 纖維介導的EPSCs 達37%±4%，而配對脈沖比沒有顯著變化；在給予或不給予1 μM 河豚毒素的情況下記錄微小EPSCs (mEPSCs)，應用ET 前后每個細胞mEPSCs 的頻率和振幅的中位數(shù)無顯著性差異；由于多數(shù)mEPSCs 似乎來源于脊髓中間神經元，對初級傳入神經囊泡釋放的貢獻很小，相對于ET 導致EPSCs 大量減少，對mEPSCs 的影響卻很小，這與前面的實驗結果相一致，即ET 作用于初級傳入神經元的ANTXR2 而發(fā)揮作用。以上研究結果表明ET 抑制了從C 纖維到脊髓背角I 層神經元的突觸傳遞，并抑制了I 層神經元的激活。

9. ET 鞘內注射抑制神經病理性痛和炎性痛

小鼠SNI 神經病理性痛模型中，ET 鞘內注射阻斷機械痛敏，但單獨給予PA、EF 或LT 沒有作用；ET 可使同側和對側機械痛閾值都升高，也升高同側和對側DRG 內cAMP 水平；ET 還減輕了福爾馬林誘發(fā)的第一時相和第二時相疼痛；在角叉菜膠誘發(fā)的小鼠炎性痛模型中，鞘內注射ET 阻斷了機械痛敏，此鎮(zhèn)痛作用依賴于Na

1.8

神經元上的ANTXR2 表達；此外，在福爾馬林和角叉菜膠模型中，ET 的鎮(zhèn)痛作用在性別上無差異。

10. 編輯炭疽毒素將分子物質運送到DRG 神經元

使用LF

-DTA 試劑，利用其白喉毒素A 鏈(DTA) 抑制哺乳動物細胞中的蛋白質翻譯，PA +LF

-DTA 的EC

在皮摩爾級可阻斷培養(yǎng)的DRG 細胞的翻譯，并使細胞死亡，單獨使用LF

-DTA 無以上作用，表明LF

-DTA 需通過PA 才能特異性進入細胞；進一步編輯把LF

連接到EF 的C 端催化結構域 (EF

)，形成嵌合體LF

-EF

，PA + LF

-EF

在DRG 細胞中使cAMP 水平劇烈升高。

在國際貿易交易中，交易企業(yè)和交易單位是國際貿易交易的主體，減少國際貿易風險，要對雙方交易國家做好充分調研，減少可預見性的風險損失，提高風險的預見性，完善國際貿易體系。

11. 炭疽毒素運送BoNT/A LC 可阻斷疼痛

體內實驗研究PA + LF

系統(tǒng)運送肉毒神經毒素LC 是否緩解疼痛時，發(fā)現(xiàn)SNI 小鼠每天3 次鞘內注射PA + LF

-LC/A

，可顯著緩解疼痛，而不影響體重和運動功能；利用離體小鼠膈神經半橫膈(mPNHD) 實驗進一步研究PA + LF

-LC/A

對運動神經元的潛在脫靶效應，結果發(fā)現(xiàn)相對于BoNT/A呈濃度依賴性降低肌肉收縮力，單獨給予同等濃度的PA + LF

-LC/A

和LF

-LC/A

則不影響肌肉收縮力。以上結果表明應用PA + LF

炭疽毒素系統(tǒng)在體內能特異性靶向感覺功能和痛覺。

綜上所述，該研究證明ANTXR2 是一個富含于傷害性感覺神經元中的ET 受體，與ET 結合可調控神經信號傳導和疼痛。ET 誘導DRG 神經元中的Camp/PKA 信號，阻斷小鼠的神經傳導并發(fā)揮鎮(zhèn)痛作用，并優(yōu)先作用于小直徑傷害性感覺神經元；除天然炭疽毒素外，PA + LF

系統(tǒng)還將三種不同的酶體運送到DRG 神經元，體現(xiàn)了此輸送平臺的靈活性和可調節(jié)性。