萬 霞 陳 萍 廖悅?cè)A

廣東省江門市中心醫(yī)院病理科，廣東江門 529000

[關(guān)鍵字] 宮頸腺癌；人乳頭瘤病毒感染；P16；P53；Ki-67；CycilinD1

在所有醫(yī)護(hù)人員和學(xué)者的共同努力下，宮頸癌防治取得了明顯進(jìn)步，特別是宮頸鱗癌[1]。但宮頸腺上皮病變的防治仍存在困難。宮頸腺上皮病變和前階段病變，往往發(fā)生在宮頸腺體或?qū)m頸管內(nèi)隱窩位置，所以陰道鏡檢查和宮頸脫細(xì)胞學(xué)檢查[2]均無法更好地獲得病變組織。與宮頸鱗癌進(jìn)行比較，臨床在診斷宮頸腺上皮病變方面的標(biāo)準(zhǔn)較為薄弱，判定其組織形態(tài)學(xué)，仍為目前所面臨的重點(diǎn)問題。目前已公認(rèn)為人乳頭瘤病毒（human papillomavirus，HPV）感染為誘發(fā)宮頸癌的主要因素[3]，且已證實(shí)HPV感染與宮頸鱗癌病變有密切關(guān)系，但HPV感染是否與宮頸腺癌發(fā)生有密切關(guān)系，目前暫未達(dá)到統(tǒng)一定論，且宮頸腺癌形態(tài)分類具有一定復(fù)雜性。所以，急切需對宮頸腺癌分子生物學(xué)和病因做出探討，以更好地防治宮頸腺癌，為臨床診治宮腺癌提供方向和指導(dǎo)意義。本研究旨在分析P53、Ki-67、CyclinD1、P16與宮頸腺癌發(fā)生之間的關(guān)系，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料及方法

1.1 一般資料

選取江門市中心醫(yī)院2012年1月至2020年12月確診80例宮頸原位腺癌及浸潤性腺癌患者作為觀察組，并選取80名檢查健康者為對照組。觀察組：年齡30～78歲，平均（56.26±4.21）歲；HPV陽性71例，陰性9例；HPV相關(guān)性腺癌41例，非HPV相關(guān)性腺癌39例。對照組：年齡31～79歲，平均（56.38±4.25）歲；HPV陽性16例，陰性64例。兩組一般資料比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞ 0.05），具有可比性。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)后實(shí)施，研究對象均簽署知情同意書。

納入標(biāo)準(zhǔn)：①觀察組各患者均得到病理檢查、影像學(xué)方式等綜合確診；②均可提供完整、詳細(xì)的就診記錄。排除標(biāo)準(zhǔn)：①病灶已出現(xiàn)轉(zhuǎn)移者；②合并其他癌性病變者，如乳腺癌、肺癌、肝癌等；③精神、智力等因素影響研究方案無法配合者。

1.2 方法

宮頸腺癌組織學(xué)標(biāo)本用免疫組化標(biāo)記法檢測。將標(biāo)本做脫蠟、水化處理，高壓加熱，加入抗原修復(fù)液，將內(nèi)源性過氧化物酶進(jìn)行阻斷，加入抗體（鼠抗人P53單克隆抗體、鼠抗人P16單克隆抗體、鼠抗人Ki-67單克隆抗體、濃縮型兔抗人CyclinD1單克隆抗體）后，再進(jìn)行顯色、復(fù)染、脫水、透明、封片等處理。

子宮頸脫落細(xì)胞標(biāo)本采用廣東凱普生物科技股份有限公司生產(chǎn)的21種HPV亞型檢測試劑盒（PCR+膜雜交法）進(jìn)行檢測，并用組化方式檢測P16指標(biāo)。

1.3 觀察指標(biāo)及評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

細(xì)胞核、細(xì)胞膜或細(xì)胞質(zhì)中出現(xiàn)棕黃色顆粒則判定為陽性信號[4]。P16、CyclinD1、Ki-67、P53陽性判定標(biāo)準(zhǔn)，P16[5]：細(xì)胞核中出現(xiàn)陽性信號，或細(xì)胞核合并胞質(zhì)，未出現(xiàn)陽性著色則判定為陰性（-），棕褐色則為陽性（+++）、棕黃色則為陽性（++）、黃色則為陽性（+）。CyclinD1[6]：棕黃色顆粒處于細(xì)胞核中。Ki-67[7]：細(xì)胞核中出現(xiàn)陽性信號，細(xì)胞增殖指數(shù)通過陽性細(xì)胞百分比數(shù)進(jìn)行判定，＞30%則為腫瘤性病變，≤30%為良性病變。P53[8]：陽性：≥60%彌漫；陰性：＜5%。比較HPV感染陽性和陰性組P53、Ki-67、CyclinD1陽性率和宮頸腺癌發(fā)生率。

標(biāo)本檢驗(yàn)均由醫(yī)院3名工作時(shí)間≥5年的專業(yè)醫(yī)生負(fù)責(zé)，若發(fā)生分歧則根據(jù)判定標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行討論。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，組間比較采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料用[n（%）]表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，以P＜ 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組P16、CyclinD1、Ki-67、P53陽性率比較

觀察組 P16、CyclinD1、Ki-67、P53陽性率高于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜ 0.05），見表1。

表1 P16、CyclinD1、Ki-67、P53陽性率比較[n（%）]

2.2 HPV感染陽性和陰性組P16、P53、Ki-67、CyclinD1陽性率和宮頸腺癌發(fā)生率比較

HPV 感染陽性組 CyclinD1、Ki-67、P53、P16陽性率及宮頸腺癌發(fā)生率高于HPV感染陰性組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜ 0.05），見表2。

表2 HPV感染陽性和陰性組P53、Ki-67、CyclinD1、P16陽性率和宮頸腺癌發(fā)生率比較（x ± s）

2.3 不同類型宮頸腺癌患者P16、CyclinD1、Ki-67、P53陽性率比較

HPV相關(guān)性腺癌患者P16、CyclinD1、Ki-67、P53陽性率高于非HPV相關(guān)性腺癌患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜ 0.05），見表3。

表3 不同類型宮頸腺癌患者P16、CyclinD1、Ki-67、P53陽性率比較[n（%）]

3 討論

宮頸癌為我國目前女性第二大惡性腫瘤，每年新發(fā)病例大約有52萬[9]。此為臨床婦科惡性腫瘤中較為常見的一種，主要類型包含腺細(xì)胞癌、鱗狀細(xì)胞癌；其中，宮頸鱗癌占比達(dá)80%～85%，腺癌達(dá)10%～15%[10]。早期研討如何篩查宮頸癌均致力于分析HPV檢測和細(xì)胞形態(tài)學(xué)評估。此方式用于早期檢出宮頸癌中，其檢出率非常高，所以宮頸鱗狀細(xì)胞癌發(fā)生率得到了明顯控制。但將其用于篩查宮頸腺癌病變中，其作用非常有限，隨著近年宮頸腺癌發(fā)病率逐年增高，多在年輕女性和宮頸上皮內(nèi)瘤變中發(fā)生[11]。現(xiàn)臨床缺乏篩查宮頸腺癌的有效方式，且隨著人們性觀念變化和社會(huì)發(fā)展，宮頸癌發(fā)病日益年輕化，宮頸腺癌發(fā)病則更加年輕化，對女性身體健康造成嚴(yán)重威脅。同時(shí)，臨床治療宮頸腺癌的方式也與宮頸鱗癌有所不同，所以，迫切需分析宮頸腺癌分子生物學(xué)和病因?qū)W，進(jìn)而預(yù)防病變發(fā)生，為臨床診治疾病和明確診斷、疾病發(fā)生機(jī)制提供新思路[12]。P16屬于細(xì)胞基因，參與調(diào)控細(xì)胞周期，對細(xì)胞分裂和增殖有負(fù)調(diào)節(jié)作用[13]。測定P16基因是否出現(xiàn)變化對判定患者病灶易感性和評估病灶預(yù)后存在較大意義。P16蛋白為P16基因編碼產(chǎn)物，在細(xì)胞核中，此對細(xì)胞分裂周期關(guān)鍵酶CDK4抑制因子。并CDK4活性有抑制效果，進(jìn)而抑制細(xì)胞轉(zhuǎn)至S期，若確實(shí)P16基因，則會(huì)出現(xiàn)功能缺失，CDK4無法得到抑制，進(jìn)而造成細(xì)胞出現(xiàn)惡性增殖，促進(jìn)病灶發(fā)生。CyclinD1與CDK6、CDK4形成復(fù)合物，并為此類物質(zhì)的調(diào)節(jié)亞基[14]，G1轉(zhuǎn)變至S期不可缺少的則為以上兩種周期蛋白依賴性激酶。目前已公認(rèn)CyclinD1屬于原癌基因，過度表達(dá)可造成細(xì)胞增殖紊亂，進(jìn)而發(fā)生惡性病變。P53屬抑癌基因，在發(fā)生腫瘤細(xì)胞和病變發(fā)展中均發(fā)揮了重要作用。P53基因定位在機(jī)體染色體17p13.1，包含突變型、野生型，正常狀況主要體現(xiàn)為野生型[15]。P53蛋白主要由氨基酸組成，現(xiàn)已認(rèn)定P53異常表達(dá)與腫瘤病變和疾病預(yù)后不理想存在明顯關(guān)系[16]。Ki-67為核蛋白，屬于細(xì)胞增殖標(biāo)記物，此在細(xì)胞增殖G2、G1、M、S期均有表達(dá)，但在靜止期G0階段無表達(dá)。此指標(biāo)高低與宮頸腺癌轉(zhuǎn)移、疾病預(yù)浸潤程度、分化程度有密切關(guān)系。

觀察組P16陽性檢出率為93.75%、CyclinD1陽性檢出率為90.00%、Ki-67陽性檢出率為92.50%、P53陽性檢出率為91.25%，高于對照組的 15.00%、26.25%、23.75%、20.00%；HPV 感 染陽性組CyclinD1陽性率為82.76%、Ki-67陽性率為95.40%、P53陽性率為70.11%、P16陽性率為80.46%，宮頸腺癌發(fā)生率為86.21%，高于HPV感染陰性組的 10.96%、39.73%、20.55%、13.70%、6.85%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜ 0.05）。證實(shí)了宮頸腺癌中P16、P53、Ki-67及CyclinD1均呈高表達(dá)，同時(shí)宮頸腺癌發(fā)病與HPV感染存在密切關(guān)系。HPV屬于DNA病毒，通過黏膜進(jìn)入到人體靶細(xì)胞，并整合DNA到染色體之上，對宿主細(xì)胞產(chǎn)生破壞，進(jìn)而讓組織發(fā)生癌變反應(yīng)。此外，本研究結(jié)果還顯示，HPV相關(guān)性腺癌患者P16陽性率為85.37%、CyclinD1陽性率為78.05%、Ki-67陽性率為73.17%、P53陽性率為82.93%，高于非HPV相關(guān)性腺癌患者的 66.67%、53.85%、46.15%、58.97%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜ 0.05），提示HPV感染的宮頸腺癌患者機(jī)體P16、P53、Ki-67、CyclinD1陽性率偏高，因此，在此后防控宮頸腺癌中，應(yīng)重視預(yù)防HPV感染。但有關(guān)不同類型宮頸腺癌患者體內(nèi)P16、P53等指標(biāo)的具體影響機(jī)制，此后還需進(jìn)一步深入研討。

綜上所述，P16、P53、Ki-67及CyclinD1在宮頸腺癌中呈高表達(dá)，宮頸腺癌發(fā)病與HPV感染存在密切關(guān)系，并與P16、P53、Ki-67、CyclinD1表達(dá)有關(guān)，臨床可將此四項(xiàng)指標(biāo)作為篩查宮頸腺癌的指標(biāo)。