林壯，魏秋姣，嚴(yán)玉婷，楊芳

1.珠海市中西結(jié)合醫(yī)院 檢驗(yàn)科(廣東 珠海 519020)；2.珠海市慢性病防治中心 檢驗(yàn)科(廣東 珠海 519000)；3.新疆維吾爾自治區(qū)圖木舒克市人民醫(yī)院(新疆維吾爾自治區(qū) 圖木舒克市 843901)

梅毒是一種慢性全身性性傳播疾病，主要致病原因是梅毒螺旋體感染。近幾年，梅毒開始逐年升高發(fā)病率，且發(fā)展趨勢(shì)逐漸蔓延。梅毒早期會(huì)有復(fù)雜的臨床表現(xiàn)，呈多樣性，再加上部分患者并未真實(shí)陳述自身病史及沒有科學(xué)地實(shí)行抗生素治療，會(huì)困擾醫(yī)生的診斷結(jié)果，進(jìn)而增加誤診及漏診的可能性[1]。術(shù)前給予患者梅毒篩查和確診已經(jīng)成為必備的實(shí)驗(yàn)室工作。因此，血清學(xué)檢查已經(jīng)成為梅毒診斷的關(guān)鍵依據(jù)。患者機(jī)體在受到梅毒螺旋體感染后，體內(nèi)會(huì)產(chǎn)生不同類型的抗體，一類是依據(jù)梅毒螺旋體產(chǎn)生的特異性抗體-IgM和IgG，另外一類是非特異性抗體-反應(yīng)素，該抗體是感染梅毒螺旋體后宿主細(xì)胞釋放的螺旋體表面脂質(zhì)和類脂質(zhì)的抗體[2]?；诖耍狙芯坎捎妹范韭菪w抗體明膠顆粒凝集實(shí)驗(yàn)(treponemapallidumparti-cleassay，TPPA)結(jié)合金標(biāo)法對(duì)手術(shù)患者進(jìn)行梅毒確診及療效觀察，可以有效地對(duì)梅毒進(jìn)行防治與干預(yù)，若兩種檢測(cè)方法出現(xiàn)不相符的結(jié)果，則存留血清，通過免疫印跡法(Westernbiotting，WB)進(jìn)行最后確診，既填補(bǔ)了圖市醫(yī)院不能確診梅毒的空白，又能對(duì)圖市的梅毒發(fā)病率進(jìn)行監(jiān)控，具有深遠(yuǎn)的社會(huì)效益，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象

回顧性分析新疆圖木舒克市人民醫(yī)院收治的3000例術(shù)前患者血清，研究時(shí)段在2016年8月—2019年10月，收治的受檢者是梅毒患者1300例，非梅毒患者1000例，健康體檢者700例；梅毒患者男性652例，女性648例，年齡24～69歲，平均(46.86±2.51)歲；非梅毒患者男性531例，女性469例，年齡25～70歲，平均(47.13±2.48)歲；健康體檢者男性353例，女性347例，年齡24～69歲，平均(46.86±2.51)歲。各組患者一般資料比對(duì)，無顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

1.2 方法

嚴(yán)格按照廠家試劑說明書開展實(shí)驗(yàn)：①TPPA試驗(yàn)：于室溫條件下，用稀釋液在U形板上倍比稀釋每份血清樣本，分別形成4種稀釋度,類型包括1∶5、1∶10、1∶20、1∶40，再將未致敏明膠顆粒試劑加入1∶20的稀釋血清中與致敏明膠顆粒試劑加入1∶40的稀釋血清中，震蕩混勻30秒，行2h靜置后觀察結(jié)果，陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)是未致敏粒子孔不凝集，加致敏粒子孔凝集。②金標(biāo)法試驗(yàn)：于冰箱中取出試劑盒，放置于15～30℃室溫環(huán)境下30min再做試驗(yàn)，取出20μL全血或10μL血漿或血清放置于金標(biāo)版檢測(cè)窗，之后加入稀釋液3～4滴，于5～20min內(nèi)進(jìn)行結(jié)果判讀，若在30min以上則表示結(jié)果無效。③WB法：在反應(yīng)槽中放入梅毒特異性抗體檢測(cè)條，每槽加入含5%脫脂奶粉的1mL PBS緩沖液，再將患者血清樣本50μL加入，搖床振蕩反應(yīng)3h。洗5次PBS-T洗滌液，1次保持在3分鐘左右。將1mL羊抗人IgG加入反應(yīng)槽中，搖床振蕩反應(yīng)3h，洗滌反應(yīng)槽5次。將1mL顯色底物加入至反應(yīng)槽中，反應(yīng)5～10min進(jìn)行結(jié)果觀察。

1.3 觀察指標(biāo)

(1)TPPA和金標(biāo)法檢測(cè)結(jié)果：針對(duì)梅毒、非梅毒及正常體檢者TPPA和金標(biāo)法陽(yáng)性數(shù)，評(píng)估陽(yáng)性率。

(2)疑似梅毒患者實(shí)行不同方法的檢測(cè)結(jié)果：①靈敏度=真陽(yáng)性人數(shù)/(真陽(yáng)性人數(shù)+假陰性人數(shù))×100%；②特異度=真陰性人數(shù)/(真陰性人數(shù)+假陽(yáng)性人數(shù))100%；正確指數(shù)主要評(píng)估臨床符合率。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 各組TPPA和金標(biāo)法檢測(cè)結(jié)果比較

1300名梅毒患者中，共檢測(cè)出1300名TPPA陽(yáng)性人數(shù)，陽(yáng)性率為100.00%，1250名金標(biāo)法陽(yáng)性人數(shù)，陽(yáng)性率為96.15%；1000名非梅毒患者中，未檢測(cè)出TPPA陽(yáng)性人數(shù)，陽(yáng)性率為0.00%，15名金標(biāo)法陽(yáng)性人數(shù)，陽(yáng)性率為1.50%；70名健康體檢者中，均為陰性的金標(biāo)法和TPPA結(jié)果。梅毒患者與非梅毒、健康體檢者檢測(cè)結(jié)果相比，組間差異明顯(P<0.05)，具體結(jié)果見表1。

表1 各組TPPA和金標(biāo)法檢測(cè)結(jié)果比較 [n(%)]

2.2 疑似梅毒患者實(shí)行不同方法的檢測(cè)結(jié)果比較

TPPA檢查方法的靈敏度、特異度及正確指數(shù)均高于金標(biāo)法檢測(cè)結(jié)果，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，具體結(jié)果見表2。

表2 疑似梅毒患者實(shí)行不同方法的檢測(cè)結(jié)果比較 [n(%)]

3 討論

梅毒是常見性病，傳播路徑包括血液傳播、胎傳播及性傳播。很多不正確的性交行為會(huì)將早期梅毒患者的梅毒向同伴傳播[3]。人體在受到梅毒感染后，梅毒螺旋體會(huì)以較快的速度使全身各器官被侵犯，導(dǎo)致?lián)p傷器官，可經(jīng)胎盤傳給子代，有著較大的危害性，且梅毒患者發(fā)病時(shí)間較長(zhǎng)，存在著復(fù)雜的臨床癥狀，因此很多醫(yī)生在診治期間會(huì)有誤診情況出現(xiàn)，實(shí)驗(yàn)室診斷是以血清學(xué)方法為依據(jù)。

患者機(jī)體在受到梅毒螺旋體感染后，最早產(chǎn)生特異性抗體IgM，大約出現(xiàn)在感染后的第2周，伴隨疾病發(fā)展，會(huì)緩慢升高lgG抗體，經(jīng)有效治療后會(huì)消失IgM抗體，而持續(xù)存在IgG抗體，情況嚴(yán)重下終身不消失，持續(xù)呈陽(yáng)性血清反應(yīng)。相比特異性抗體，非特異性抗體會(huì)晚出現(xiàn)2～3周[4]。TPPA的抗原是在明膠粒子上包被梅毒螺旋體Nichols株精細(xì)制作菌體成分，可同時(shí)對(duì)IgM型和IgG型抗體進(jìn)行檢測(cè)，有著較高的敏感性，可經(jīng)吸收試驗(yàn)后復(fù)檢排除其發(fā)生的非特異性凝集，有著良好的特異性，2～4周的感染期可檢測(cè)出，是現(xiàn)階段獲得大眾認(rèn)可的梅毒血清確認(rèn)試驗(yàn)[5]?？焖倜范韭菪w抗體膠體金實(shí)驗(yàn)作為梅毒確診的金標(biāo)準(zhǔn)，是將15500、17000、47000相對(duì)分子質(zhì)量重組抗原的梅毒螺旋體結(jié)合至檢測(cè)板上，依據(jù)膠體金免疫層析技術(shù)原理對(duì)血清中的梅毒特異性抗體進(jìn)行檢測(cè)?？焖傺獫{反應(yīng)素環(huán)狀卡片試驗(yàn)(rapidplas-mareagincirclecardtest，RPR)試驗(yàn)所用時(shí)間短，便于操作，伴隨病情變化會(huì)隨之改變抗體效價(jià)，會(huì)直接關(guān)系到患者的臨床癥狀與梅毒的活動(dòng)性，在給予梅毒患者臨床治療或基本處于非梅毒活動(dòng)期時(shí)，會(huì)快速下降或消失，很容易引發(fā)假陰性反應(yīng)，增加漏診率[6]。在伴有類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡等自身免疫性疾病時(shí)，RPR還可能出現(xiàn)假陽(yáng)性反應(yīng)。因此，RPR不適用于篩選試驗(yàn)梅毒。若TPPA法與金標(biāo)法的對(duì)比出現(xiàn)不相符結(jié)果，則應(yīng)將血清保留，采用WB方法進(jìn)行最后確診。陽(yáng)性標(biāo)本(兩種方法均可)行RPR滴度檢測(cè)，備案并記錄結(jié)果，以此作為比對(duì)標(biāo)準(zhǔn)，以便對(duì)確診患者的療效作出評(píng)價(jià)。

因本院地處新疆塔克拉瑪干沙漠邊緣、自然條件惡劣、氣候干燥，醫(yī)院正處在起步階段，臨床對(duì)于梅毒螺旋體致病的認(rèn)識(shí)還不夠充分，實(shí)驗(yàn)室對(duì)梅毒的檢測(cè)手段也較為單一，不能給臨床提供準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)室診斷依據(jù)，經(jīng)常造成疑似病例轉(zhuǎn)院確診且無法進(jìn)行治療隨訪，讓患者產(chǎn)生疑惑與質(zhì)疑，有時(shí)甚或加大醫(yī)患矛盾[7]。針對(duì)現(xiàn)有情況，本院建立了完整而有效的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)系統(tǒng)，對(duì)術(shù)前患者進(jìn)行規(guī)范的梅毒篩查。不僅能夠確診陽(yáng)性患者，而且能夠進(jìn)行療效觀察。并在梅毒這一傳染病方面，做到防治結(jié)合，配合疾控部門對(duì)當(dāng)?shù)氐拿范镜陌l(fā)病率進(jìn)行監(jiān)測(cè)。本次試驗(yàn)結(jié)果顯示，1300名梅毒患者中，TPPA和金標(biāo)法分別呈100.00%和96.15%的陽(yáng)性率；1000名非梅毒患者中，TPPA和金標(biāo)法分別呈0.00%和1.50%的陽(yáng)性率；70名健康體檢者中，均為陰性的金標(biāo)法和TPPA結(jié)果。TPPA檢查方法比金標(biāo)法檢測(cè)的靈敏度、特異度及正確指數(shù)更高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)?？梢?，采用TPPA方法診斷，可提升診斷準(zhǔn)確率，保持較高的可信度。采取TPPA檢測(cè)法確認(rèn)檢測(cè)，需花費(fèi)較高成本，且需較長(zhǎng)的步驟周期，不適用于大規(guī)模檢測(cè)，且不能判定梅毒的療效，需結(jié)合RPR做滴度檢測(cè)觀察療效切實(shí)可行，保證診斷效果，提升特異性與敏感性。

相關(guān)研究[8]表明，梅毒患者血清中的特異性抗體檢測(cè)使用ELISA方法與TPPA法均可獲得良好結(jié)果，且無需花費(fèi)較高的實(shí)際成本，便于操作，可采用全自動(dòng)酶標(biāo)儀實(shí)行自動(dòng)化操作，適用于篩選大批量標(biāo)本梅毒患者，但ELISA方法會(huì)出現(xiàn)假陰性反應(yīng)。TPPA法由于需要花費(fèi)較高成本，操作程序較多，需消耗較長(zhǎng)時(shí)間，不適用于篩選大量標(biāo)本，更多地應(yīng)用于確診試驗(yàn)[9]。正是因?yàn)門PPA經(jīng)檢查可獲取良好的特異性和較高的敏感度，能夠穩(wěn)定試劑，無需專門儀器，主要以肉眼判定結(jié)果，適用于直接確認(rèn)和篩查梅毒患者。TPPA檢測(cè)出的陽(yáng)性患者更多的是梅毒現(xiàn)癥感染者，是實(shí)行臨床治療的主要指標(biāo)，本研究臨床資料也證實(shí)了這一點(diǎn)。但還需要依據(jù)臨床體征、癥狀及不潔性行為史確定診斷結(jié)果。特別是老年患者，伴有基礎(chǔ)性疾病的可能性較大，會(huì)引誘機(jī)體產(chǎn)生抗梅毒螺旋體的非特異性或特異性抗體，導(dǎo)致金標(biāo)法和TPPA試驗(yàn)引發(fā)現(xiàn)假陽(yáng)性反應(yīng)。因此，若老年患者否定疾病接觸史和發(fā)病史，梅毒抗體試驗(yàn)陽(yáng)性不可解釋為曾經(jīng)或正在感染梅毒者，患者感染梅毒螺旋體判斷結(jié)果不可將陽(yáng)性結(jié)果作為絕對(duì)依據(jù)，應(yīng)與臨床結(jié)果相結(jié)合進(jìn)行綜合分析。梅毒患者治療期間需患者的性伴侶共同檢測(cè)，實(shí)行足療程、足劑量治療，進(jìn)而促進(jìn)患者治愈。

綜上所述，TPPA方法對(duì)圖木舒克市手術(shù)患者進(jìn)行梅毒確診，可保證診斷效果，且TPPA法比金標(biāo)法假陽(yáng)性更少，可采用TPPA法確診梅毒并結(jié)合RPR做滴度檢測(cè)觀察療效切實(shí)可行，有效填補(bǔ)了圖市實(shí)驗(yàn)室確診梅毒的空白，將會(huì)產(chǎn)生良好的社會(huì)效益。