李明鑒，楊漢梅，詹固，俞佳，王迪▲

(1.成都中醫(yī)藥大學(xué) 醫(yī)學(xué)技術(shù)學(xué)院，四川 成都 611137；2.成都中醫(yī)藥大學(xué) 西南特色中藥資源國家重點實驗室，四川 成都 611137；3.成都中醫(yī)藥大學(xué) 民族醫(yī)藥學(xué)院，四川 成都 611137)

中醫(yī)藥作為中華文明和中華民族的瑰寶，其不僅蘊含著中國優(yōu)秀的傳統(tǒng)文化，更為人們的健康保駕護(hù)航。習(xí)近平總書記講到：要深入發(fā)掘中醫(yī)藥寶庫中的精華，更好地推進(jìn)中醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)化、現(xiàn)代化，讓中醫(yī)藥走向世界[1]。要闡明中醫(yī)藥理論的物質(zhì)基礎(chǔ)，實現(xiàn)中醫(yī)藥現(xiàn)代化，需要明確中藥的化學(xué)成分和有效組分。然而，目前多數(shù)中藥的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)仍不明確。

研究表明，中藥的體內(nèi)代謝產(chǎn)物與其藥效物質(zhì)基礎(chǔ)密切相關(guān)，對闡明中藥的藥理活性成分和作用機(jī)理、明確其藥物生物轉(zhuǎn)化過程、揭示其藥物代謝途徑和機(jī)制具有重要指導(dǎo)意義[2]。由于中藥多為復(fù)方，其化學(xué)成分是一個非常復(fù)雜的分子系統(tǒng)，為其活性成分及其體內(nèi)代謝產(chǎn)物的鑒定帶來了巨大挑戰(zhàn)[3]，建立一種符合中醫(yī)藥理論的數(shù)據(jù)處理新策略對于中藥活性成分體內(nèi)外代謝產(chǎn)物的確證研究顯得尤為重要。

近年來，隨著質(zhì)譜技術(shù)的飛速發(fā)展，中藥藥效物質(zhì)基礎(chǔ)的闡明已有突破性進(jìn)展，其中高分辨率質(zhì)譜(High-Resolution Mass Spectrometry,HRMS)不僅具有靈敏度高、檢測動態(tài)范圍寬、化學(xué)結(jié)構(gòu)信息鑒定強(qiáng)等特點，而且還可以與色譜技術(shù)相結(jié)合，更好地實現(xiàn)化學(xué)成分的分離與鑒定，可以為中藥體內(nèi)外成分表征提供有力支撐[4-5]。本文將HRMS常用的數(shù)據(jù)處理策略應(yīng)用于中藥體內(nèi)外代謝產(chǎn)物檢測與鑒定進(jìn)行系統(tǒng)綜述，以期建立一種高效、可靠、準(zhǔn)確的符合中醫(yī)藥理論的中藥活性成分體內(nèi)代謝產(chǎn)物確證的新策略。

1 高分辨率質(zhì)譜(HRMS)介紹

HRMS主要由真空系統(tǒng)、進(jìn)樣系統(tǒng)、離子源、質(zhì)量分析器、檢測器以及數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)幾部分構(gòu)成，其原理與其他類型質(zhì)譜幾無差別，都是先將物質(zhì)離子化，按照質(zhì)荷比進(jìn)行分離，最后通過檢測各離子峰強(qiáng)度從而達(dá)到檢測目的[6-7]，如圖1所示。目前常用的高分辨質(zhì)譜按照質(zhì)量分析器工作原理主要包括飛行時間質(zhì)譜、離子阱質(zhì)譜、磁質(zhì)譜等；按照離子源工作原理主要有點子轟擊質(zhì)譜、大氣壓化學(xué)電離質(zhì)譜、快原子轟擊質(zhì)譜等[8]。

圖1 質(zhì)譜儀的儀器構(gòu)造示意圖

與低分辨質(zhì)譜相比，HRMS能夠更加準(zhǔn)確地測定前體離子和碎片離子的質(zhì)量，有利于結(jié)構(gòu)解析；同時，HRMS能夠預(yù)測它們的化學(xué)元素組成，為代謝產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)鑒定提供有力支撐。HRMS與色譜聯(lián)合使用(LC-HRMS)是目前中藥體內(nèi)外代謝產(chǎn)物鑒定的強(qiáng)有力手段，同時亦是用于快速確定已知化合物以及從中藥提取物或體內(nèi)生物樣本中鑒定未知化合物的首選方法[7]。鑒于此，本文整理總結(jié)了基于HRMS的數(shù)據(jù)采集和數(shù)據(jù)處理策略在中藥化學(xué)成分及其代謝產(chǎn)物識別和鑒定中的解析流程圖(如圖2所示)。

圖2 HRMS的數(shù)據(jù)采集和數(shù)據(jù)處理策略在中藥化學(xué)成分及其代謝產(chǎn)物的識別和鑒定中的解析流程圖[25]

2 基于HRMS的中藥體內(nèi)代謝產(chǎn)物鑒別策略

2.1 HRMS結(jié)合代謝物預(yù)測軟件的鑒別策略

代謝物預(yù)測軟件作為一種靶向鑒別方法，在中藥單體成分和中藥復(fù)雜體系辨識中的應(yīng)用越來越多，一般與高分辨質(zhì)譜的數(shù)據(jù)處理策略結(jié)合使用，旨在提高中藥化學(xué)成分和其代謝物的鑒別效率[9]。常用的代謝物預(yù)測軟件有Peak view、MetabolitePilot TM、UNIFI等。

許璐等[10]以經(jīng)典古方開心散類方定志小丸為研究對象，采用 UPLC-Q-TOF-MSE 技術(shù)并結(jié)合Metabolynx代謝產(chǎn)物分析軟件辨識其主要化學(xué)成分在抑郁模型小鼠血液、膽汁、尿液、糞便中的代謝產(chǎn)物，結(jié)果共鑒定出27個代謝產(chǎn)物，同時亦對體內(nèi)代謝途徑進(jìn)行系統(tǒng)分析。近年來，黎田兒等[11]為鑒別出白頭翁皂苷B7的代謝產(chǎn)物，采用超高效液相色譜-三重四級桿線性離子肼復(fù)合質(zhì)譜法檢測大鼠灌胃白頭翁皂苷B7后糞便中的代謝產(chǎn)物，結(jié)合Peak View 1.2軟件進(jìn)行分子式的擬合,共鑒定了除原型藥物及其同分異構(gòu)體外的23個代謝產(chǎn)物。廖翠平[12]以黃蘆木作為研究對象，采用離體糞便溫孵法,將正常大鼠的糞菌液與黃蘆木提取物在體外37℃恒溫厭氧壞境中共同培養(yǎng),分析黃蘆木主成分被腸道菌群孵育24 h后的體外代謝情況,采用UPLC-Q-TOF-MS/MS技術(shù)與Peakview數(shù)據(jù)處理軟件對黃蘆木化學(xué)物質(zhì)組進(jìn)行體內(nèi)外代謝研究。結(jié)果從腸道菌群孵育液中檢測出了7個代謝產(chǎn)物。袁文琳等[13]基于HRMS結(jié)合UNIFI數(shù)據(jù)分析軟件的預(yù)測功能，對黃酮類成分馬卡因在大鼠體內(nèi)的代謝產(chǎn)物進(jìn)行研究。通過大鼠體內(nèi)代謝和肝微粒共孵育方法，對馬卡因在大鼠體內(nèi)可能的代謝產(chǎn)物和代謝途徑進(jìn)行系統(tǒng)分析，最終從大鼠的血漿、尿液和糞便中鑒定了馬卡因經(jīng)過大鼠口服后在體內(nèi)代謝的10個產(chǎn)物。

HRMS與代謝物分析軟件相結(jié)合，可以快速高效地對中藥及其復(fù)方中的主要化學(xué)成分及其代謝產(chǎn)物進(jìn)行鑒定；但也存在一些弊端，由于中藥成分復(fù)雜，體內(nèi)代謝多樣化，有時在體內(nèi)除了一些常規(guī)代謝途徑外，還可能存在如結(jié)構(gòu)重排，環(huán)氧化等特殊類型的代謝反應(yīng)，常規(guī)代謝物預(yù)測軟件很難對此類化合物進(jìn)行有效預(yù)測[14]。

2.2 提取離子流鑒別策略

提取離子流圖(Extracted Ion Chromatogram,EIC)鑒別策略作為一種靶向代謝物鑒別方法，可適用于已知生物轉(zhuǎn)化反應(yīng)的代謝產(chǎn)物鑒別。研究者可提前建立代謝物數(shù)據(jù)庫(包括精確分子量、前體離子以及碎片離子等信息)，通過設(shè)定質(zhì)荷比范圍搜索已建立的數(shù)據(jù)庫化合物在總離子流圖中的存在情況，然后通過HRMS采集得到的二級碎片信息進(jìn)行比對確證[15]。蘭薇等[16]采用高效液相色譜-靜電場軌道阱高分辨質(zhì)譜技術(shù)分析了六神丸醇提物的入血成分和代謝產(chǎn)物，通過提取各化學(xué)成分的精確質(zhì)荷比以及二級碎片信息，采用自動對比、對照品對比等方法進(jìn)行鑒別確認(rèn)，共鑒定出9個原型入血成分和19個代謝產(chǎn)物。俞洪華[17]等應(yīng)用UPLC-Q-TOF-MS和提取離子流技術(shù)對葛根提取物灌胃給藥后的大鼠血清中代謝成分進(jìn)行比較研究，將空白血清與含藥血清的二級碎片離子信息和總離子流圖進(jìn)行對比分析，推測得到25個代謝產(chǎn)物。高霞等[18]考察6種皂苷類成分在離體大鼠腸道菌群內(nèi)代謝轉(zhuǎn)化的情況,采用LC-Q-TOF-MS/MS對代謝產(chǎn)物進(jìn)行分析,比較加藥孵育樣品和空白對照樣品的總離子流以及色譜峰的多級碎片離子和準(zhǔn)分子離子,分析皂苷類成分在大鼠中可能的代謝產(chǎn)物，最終發(fā)現(xiàn)6種皂苷類成分在大鼠腸道菌群作用下發(fā)生代謝轉(zhuǎn)化,其中三七皂苷R1被代謝為5個主要產(chǎn)物。

EIC鑒別策略的優(yōu)勢在于能夠基本消除內(nèi)源性物質(zhì)和其他離子的背景干擾，但是只適用于對已知成分的鑒定，無法發(fā)現(xiàn)新的代謝物，且對于研究者來說工作量較大[19]。

2.3 質(zhì)量虧損過濾技術(shù)鑒別策略

高分辨質(zhì)譜質(zhì)量虧損過濾技術(shù)(Mass Defect Filter,MDF)主要是根據(jù)目標(biāo)成分與類似物具有相近的質(zhì)量虧損的特點，對采集的數(shù)據(jù)進(jìn)行分析處理，可從復(fù)雜背景中對中藥化學(xué)成分和其代謝產(chǎn)物進(jìn)行鑒定。MDF技術(shù)經(jīng)常用于中藥中同類型或相似結(jié)構(gòu)化合物的鑒定，同時也可用于單體化合物體內(nèi)代謝物鑒定。目前，隨著MDF技術(shù)的不斷發(fā)展，已在常規(guī)的基礎(chǔ)上發(fā)展了逐級 MDF 技術(shù)、多點篩查 MDF技術(shù)、多重 MDF 技術(shù)等新技術(shù)[20]。

Zhang等[21]采用逐級MDF技術(shù)對柑橘中多甲氧基黃酮進(jìn)行篩選，首先總結(jié)黃酮類化合物結(jié)構(gòu)特點，確定分子量范圍以及取代基規(guī)律，設(shè)定質(zhì)量虧損范圍，最終從柑橘中鑒定了81個化合物。高芯等[22]借助質(zhì)量虧損過濾技術(shù)，提取數(shù)據(jù)中黃酮類成分相關(guān)特征離子，通過TOF-MS精確分子量歸屬各離子的元素組成及離子類型。根據(jù)它們的相關(guān)性合并推測其可能源自同一個化合物的準(zhǔn)分子離子和碎片離子，依據(jù)不少于2個準(zhǔn)分子離子的出現(xiàn)從而篩選確認(rèn)出目標(biāo)化合物。Gao[23]使用了質(zhì)量缺陷過濾(MDF)和碎片過濾技術(shù)處理，對GXSTC粉體中的化合物(體外)以及健康大鼠和心臟病模型大鼠口服后的活性成分(體內(nèi))進(jìn)行了表征。程慧玲等[24]采用高分辨質(zhì)譜結(jié)合多重質(zhì)量虧損過濾技術(shù)(Multiple Mass Defect Filter,MMDF)對大鼠血漿中的大黃素代謝產(chǎn)物進(jìn)行辨識，首先對可預(yù)知的大黃素代謝產(chǎn)物進(jìn)行提取，然后采用MMDF技術(shù)將可預(yù)知的代謝產(chǎn)物與大黃素作為模板化合物，通過窄范圍過濾對未知的代謝產(chǎn)物進(jìn)行分析鑒定，結(jié)果通過此方法快速鑒定了大黃素的18個代謝物，其中3個為首次發(fā)現(xiàn)，為大黃素體內(nèi)研究提供借鑒。此方法代謝物鑒定流程總結(jié)如圖3所示。

圖3 采用MMDF技術(shù)的代謝物鑒定流程

MDF技術(shù)在一定程度上可以快速地對中藥化學(xué)成分的化合物群進(jìn)行篩選，但是由于中藥成分復(fù)雜，不同化合物間含量差異較大，因此在篩選代謝物群時，會存在因目標(biāo)成分含量低，過濾后質(zhì)譜信號亦較低，最終導(dǎo)致被基線噪音掩蓋的缺陷。

2.4 特征離子過濾技術(shù)鑒別策略

中藥有效組分化合物特征性結(jié)構(gòu)信息主要由特征產(chǎn)物離子或中性丟失分子提供，產(chǎn)物離子過濾(Product Ion Filtration,PIF)和中性丟失過濾(Neutral Loss Filtering,NLF)主要依賴化合物MS/MS譜的有效性和裂解規(guī)律相似性識別結(jié)構(gòu)相似的成分[25]。一般是總結(jié)中藥中代表性成分的質(zhì)譜裂解規(guī)律，進(jìn)而歸納結(jié)構(gòu)相似類成分共有的碎片離子信息(產(chǎn)物離子或中性丟失)，然后對中藥中同類物進(jìn)行搜索。近年來，許多學(xué)者常用此技術(shù)來辨識具有相同碳骨架的化學(xué)成分，如生物堿類、黃酮類等。

Qiao等[26]通過采用特征離子過濾技術(shù)(PIF、NLF)從中藥黃芩提取物中鑒定了7種類型共132個化合物，其中59個化合物為首次報道。周慧等[27]采用體外肝微粒體孵育代謝方法結(jié)合高分辨質(zhì)譜特征離子過濾技術(shù)建立了馬兜鈴酸及其體外代謝產(chǎn)物的鑒定方法，結(jié)果發(fā)現(xiàn)馬兜鈴酸Ⅰ和馬兜鈴酸Ⅱ在體外代謝中主要發(fā)生硝基還原和去甲基反應(yīng)，而馬兜鈴酸產(chǎn)生毒性作用的主要原因就是由于硝基還原反應(yīng)所產(chǎn)生的馬兜鈴內(nèi)酰胺類化合物。此方法對于闡明馬兜鈴酸的毒理有十分重要意義。Ma等[28]首先對三萜皂苷的裂解途徑以及規(guī)律進(jìn)行總結(jié)，在此基礎(chǔ)上采用特征產(chǎn)物離子和中性丟失過濾技術(shù)歸納總結(jié)三萜皂苷對照品的裂解規(guī)律，進(jìn)而利用診斷離子、特征產(chǎn)物離子和中性丟失過濾策略，從預(yù)知子提取物中共鑒定了 85 種三萜皂苷類化合物。李芳[29]采用UHPLC-Q-TOF/MS鑒定隱綠原酸在大鼠體內(nèi)的代謝產(chǎn)物。在給予大鼠隱綠原酸后,通過采集血液和糞便進(jìn)行檢測，根據(jù)相應(yīng)的相對分子質(zhì)量、質(zhì)譜裂解規(guī)律、特征碎片離子以及對照品比對,分析鑒定出47個代謝產(chǎn)物。張立等[30]建立了HPLC-LTQ-Orbitrap的數(shù)據(jù)采集方法，通過采用特征離子提取的數(shù)據(jù)處理策略，分析鑒定了大鼠在給藥大黃后，在體內(nèi)的原形成分和代謝產(chǎn)物，從而闡明了大黃體內(nèi)代謝的機(jī)制。

2.5 質(zhì)譜樹狀圖相似度過濾技術(shù)鑒別策略

質(zhì)譜樹狀圖相似度過濾技術(shù)(Mass Spectral Tree Similarity Filter Technique,MTSF)可以在復(fù)雜體系中搜索和鑒定低濃度的目標(biāo)化合物，其檢測的基本思路是首先建立質(zhì)譜樹狀圖數(shù)據(jù)庫(含藥物和已知代謝物)，以其為篩選模板，將生物樣本檢測到的質(zhì)譜數(shù)據(jù)與之進(jìn)行相似度比較，從而挖掘潛在代謝產(chǎn)物[22]。MTSF技術(shù)可與MDF技術(shù)進(jìn)行優(yōu)勢互補，為復(fù)雜生物基質(zhì)中快速、準(zhǔn)確、全面辨識中藥體內(nèi)藥效物質(zhì)和其代謝產(chǎn)物提供有利手段。金瀅等[31]成功運用高分辨質(zhì)譜多級質(zhì)譜技術(shù)聯(lián)合MTSF技術(shù)，對淫羊藿提取物體內(nèi)成分和代謝產(chǎn)物進(jìn)行鑒定，結(jié)果從給藥后的大鼠血漿、尿液、糞便及膽汁樣品中共鑒定了11類112個代謝物。王喆[32]采用MTSF技術(shù)對銀杏葉提取物在大鼠體內(nèi)的代謝產(chǎn)物進(jìn)行鑒定，結(jié)果共鑒定了18種原型成分和21種代謝產(chǎn)物，通過對代謝產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)類型進(jìn)行歸納分析，推測出銀杏葉提取物在體內(nèi)發(fā)揮藥效作用的物質(zhì)基礎(chǔ)。Ying[33]等采用MSTF技術(shù)，建立了一種中藥體內(nèi)成分代謝產(chǎn)物鑒定的新策略，在大鼠體內(nèi)共發(fā)現(xiàn)5種黃酮類單體(淫羊藿苷A，淫羊藿苷B，淫羊藿苷C，保活苷I和淫羊藿苷)以及淫羊藿中藥提取物中的115種代謝產(chǎn)物，并推測了淫羊藿黃酮的代謝途徑。王彩虹[34]采用高效液相色譜-高分辨質(zhì)譜聯(lián)用結(jié)合MTSF技術(shù)對淫羊藿中的5種主要黃酮類成分在大鼠體內(nèi)代謝產(chǎn)物進(jìn)行了分析鑒定，并推測出其代謝途徑。

與其他技術(shù)相比，MTSF技術(shù)在發(fā)現(xiàn)代謝產(chǎn)物方面優(yōu)于NLF和PIF技術(shù)，可對代謝物進(jìn)行多模板搜索，從而為代謝物和主要成分之間搭建橋梁，有利于鑒別傳統(tǒng)中藥復(fù)雜的代謝產(chǎn)物；同時此技術(shù)亦可對多步生物轉(zhuǎn)化反應(yīng)生成的未知代謝物進(jìn)行辨識。但是，在用此技術(shù)時的弱點就是需要人為來區(qū)分排除假陽性數(shù)據(jù)，比較費時費力。

2.6 HRMS結(jié)合多元統(tǒng)計分析鑒別策略

多元統(tǒng)計分析策略一般包括主成分分析(Principal Component Analysis,PCA)、最小二乘法分析(Partial Least Squares Discrimination Analysis,PLS-DA)、偏最小二乘判別分析(Orthogonal Partial Least Squares Discrimination Analysis,OPLS-DA)等。PCA能夠反應(yīng)各個組別之間數(shù)據(jù)離散程度，PLS-DA在加入分組信息后，能夠強(qiáng)化組間差異，減少組內(nèi)差異。通過 OPLS-DA 可對組間差異貢獻(xiàn)較大的組分進(jìn)行有效篩選，在生物樣本中可篩查出潛在的代謝物[35]。高分辨質(zhì)譜所得到的原始數(shù)據(jù)首先要經(jīng)過數(shù)據(jù)處理軟件或代謝組學(xué)軟件進(jìn)行峰識別、對齊以及與代謝物數(shù)據(jù)庫匹配等標(biāo)準(zhǔn)化處理后，方可導(dǎo)入到多元統(tǒng)計分析軟件進(jìn)行鑒別分析，從而篩選出中藥體內(nèi)代謝物。目前常用的數(shù)據(jù)處理軟件有MAVEN、Compound Discoverer、MetaboAnalyst等，多元統(tǒng)計分析軟件主要以Simca-P 為主[36]。

Qiao等[37]通過總結(jié)萜烯類成分質(zhì)譜裂解規(guī)律，確定了特征離子過濾信息，在此基礎(chǔ)上，結(jié)合多元統(tǒng)計學(xué)策略對姜黃中的萜烯類成分進(jìn)行鑒定分析，最終從姜黃中辨識了846個萜烯類成分，其中包含2個潛在新化合物。Li等[38]通過HRMS結(jié)合多元統(tǒng)計分析鑒別策略對中成藥滋腎丸進(jìn)行大鼠血清藥物化學(xué)研究，首先將HRMS得到的給藥組和對照組的原始數(shù)據(jù)導(dǎo)入Progenesis QI 2.0中，進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化處理，然后采用OPLS-DA對血漿中外源性成分進(jìn)行篩選，將VIP>1的組分的準(zhǔn)確分子量以及碎片離子導(dǎo)入UNIFI 數(shù)據(jù)庫進(jìn)行匹配，最終辨識出22個原型成分和11個代謝產(chǎn)物，此方法的建立為進(jìn)一步明確滋腎丸藥效物質(zhì)基礎(chǔ)提供有力參考。Luo等[39]基于LC-MS技術(shù)，鑒定了梔子厚樸湯在大鼠血漿中的代謝產(chǎn)物。所有樣品數(shù)據(jù)均經(jīng)校準(zhǔn)，并通過XCMS和MetAlign組合選擇峰值，以收集三維數(shù)據(jù)集。通過多元統(tǒng)計分析將大鼠血漿中的外源性成分與內(nèi)源性成分區(qū)分開來。金苗苗等[40]借助PCA鑒定給藥大鼠糞便代謝物，成功識別出大鼠口服白樺脂酸后經(jīng)生物轉(zhuǎn)化的代謝物，從而建立了鑒定白樺脂酸體內(nèi)代謝物的有效檢測方法。婁港歸[41]采用高分辨質(zhì)譜PCL和OPLS-DA對玫瑰石斛和鐵皮石斛的葉片和莖進(jìn)行分析，研究石斛部位間和種間代謝產(chǎn)物的差異，得出兩種石斛間主要差異成分為玫瑰石斛堿B、玫瑰石斛啶堿等。

HRMS結(jié)合多元統(tǒng)計分析對中藥代謝物鑒別策略的優(yōu)勢在于能夠快速排除生物樣本內(nèi)源性物質(zhì)干擾，快速篩選出外源性成分，與代謝物數(shù)據(jù)匹配，進(jìn)而實現(xiàn)對中藥復(fù)雜體系體內(nèi)代謝的快速辨識。

2.7 同位素標(biāo)記鑒別策略

HRMS結(jié)合同位素標(biāo)記鑒別策略一般適用于中藥單體活性成分，通過對其進(jìn)行同位素標(biāo)記(如18 O、13 C等)后給藥，通過同位素之間的特征性質(zhì)量差進(jìn)而對代謝產(chǎn)物進(jìn)行追蹤。Gao等[42]通過高分辨質(zhì)譜結(jié)合Metabo-lynx軟件對進(jìn)行體外孵育代謝的姜黃素進(jìn)行了18 O標(biāo)記，從而對代謝產(chǎn)物進(jìn)行追蹤，共鑒定了3個代謝產(chǎn)物。Liu等[43]采用13 C對厚樸酚進(jìn)行標(biāo)記，對大鼠血漿、糞便和尿液中的代謝產(chǎn)物進(jìn)行追蹤，結(jié)果共獲取67個代謝產(chǎn)物。汪戎錦[44]在研究刺五加葉治腦卒中尿液代謝組學(xué)時，用靶向官能團(tuán)的試劑標(biāo)記樣本，使具相同官能團(tuán)的代謝物產(chǎn)生衍生代謝物。采用液質(zhì)聯(lián)用結(jié)合同位素標(biāo)記結(jié)合的方法,對體內(nèi)羧酸類亞代謝組和胺類亞代謝組進(jìn)行全面分析。此鑒別方法的弊端就是它僅適用于單體活性成分，對于成分繁多的中藥，采用同位素標(biāo)記鑒別代謝產(chǎn)物還比較困難。

2.8 多技術(shù)整合聯(lián)用的代謝物鑒別策略

中藥及其復(fù)方具有多成分、多靶點、多途徑的特征，在防治疾病方面具有其明顯的特色和優(yōu)勢，但同時由于中藥進(jìn)入體內(nèi)的成分?jǐn)?shù)量多，多靶點協(xié)同作用，使其有效成分鑒定過程變得復(fù)雜[45]。目前越來越多的學(xué)者采用高分辨質(zhì)譜多種數(shù)據(jù)處理技術(shù)整合策略對中藥體內(nèi)成分進(jìn)行辨識。

Mi等[46]采用多元統(tǒng)計分析和代謝物預(yù)測軟件相結(jié)合的手段對中藥復(fù)方丹梔片在大鼠體內(nèi)的代謝產(chǎn)物進(jìn)行鑒別，共鑒別了119個代謝物，兩種代謝物鑒別策略聯(lián)用極大地提高了代謝物鑒別的效率，而且相比單純采用代謝物預(yù)測軟件，還明顯降低了代謝物遺漏的可能性。Wang等[47]將MDF技術(shù)、EIC技術(shù)以及同位素標(biāo)記等代謝物鑒別策略進(jìn)行整合，從中成藥益心舒膠囊大鼠給藥后的血漿、尿液和糞便中共鑒定了184種代謝物，其中包括62個代謝物。蔡芳[48]等采用超高效液相色譜-四極桿-軌道阱質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)，將質(zhì)量虧損過濾、中性丟失、診斷碎片離子過濾等技術(shù)互相融合，分析腎間質(zhì)纖維化大鼠的血清大黃素代謝物，鑒定得出大鼠體內(nèi)大黃素的11種代謝物。此方法有效地減少定性分析過程中干擾離子和基質(zhì)的影響，提高代謝物定性分析的準(zhǔn)確性和效率。田婷婷[49]在研究有抗癌作用的活性成分冬凌草甲素代謝物時，采用UPLC-Q-TOF-MS/MS技術(shù)，融合提取離子、質(zhì)量虧損過濾、子離子過濾、中性過濾四種數(shù)據(jù)處理策略進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，得到精準(zhǔn)的代謝物分子質(zhì)量，鑒定出大鼠口服冬凌草甲素之后的尿液代謝物。

對于中藥復(fù)方體內(nèi)代謝物表征，由于進(jìn)入體內(nèi)化學(xué)成分過多，且受內(nèi)源性成分干擾，導(dǎo)致其鑒定過程十分困難，因此，利用高分辨質(zhì)譜多種數(shù)據(jù)處理策略進(jìn)行整合聯(lián)用能夠快速、高效、準(zhǔn)確地對中藥體內(nèi)化學(xué)成分及其代謝產(chǎn)物進(jìn)行鑒定。

3 結(jié)語

中藥及其復(fù)方的有效組分和體內(nèi)代謝產(chǎn)物的研究可為中藥藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究提供強(qiáng)有力支撐，推動中藥現(xiàn)代化。但是由于中藥成分復(fù)雜，且在體內(nèi)代謝路徑存在不可預(yù)知性，因此，如何在數(shù)量巨大的生物樣本信息中辨識目標(biāo)組分，是目前對中藥體內(nèi)代謝研究的重點和難點。本文歸納并梳理了近年來采用高分辨質(zhì)譜多種數(shù)據(jù)處理策略對中藥有效組分和體內(nèi)代謝產(chǎn)物的鑒別方法。各種數(shù)據(jù)處理策略皆具有各自的利弊，如使用高分辨質(zhì)譜結(jié)合代謝物預(yù)測軟件雖可快速鑒別中藥及其復(fù)方中的主要化學(xué)成分及其代謝產(chǎn)物，但因中藥進(jìn)入體內(nèi)的代謝途徑存在不可預(yù)測性，導(dǎo)致其代謝物鑒定存在遺漏。在未來的中藥代謝產(chǎn)物鑒定工作中，可以建立一種符合中醫(yī)藥理論的多種數(shù)據(jù)處理策略整合聯(lián)用的新技術(shù)，多種技術(shù)策略優(yōu)勢互補，從而提高鑒別效率和準(zhǔn)確性，為闡明中醫(yī)藥理論的物質(zhì)基礎(chǔ)、實現(xiàn)中醫(yī)藥現(xiàn)代化提供新的技術(shù)手段。