王一舟 岑 香 楊 慧 張志昌 李泉琦 顧昌華

（銅仁職業(yè)技術(shù)學(xué)院，貴州 銅仁 554300）

引言

黑木耳因其具有豐富的營(yíng)養(yǎng)成分和重要的醫(yī)用價(jià)值，口感脆嫩，深受喜愛(ài)，是中餐桌上的“?？汀保蛔u(yù)為“素中之王”。近年來(lái)隨著北菇南移，黑木耳的種植面積和產(chǎn)量持續(xù)攀升，僅次于香菇，成為我國(guó)第二大人工種植類食用菌。但黑木耳栽培過(guò)程中最為常見(jiàn)，直接導(dǎo)致其減產(chǎn)的一種病害—青苔病卻始終得不到有效的解決，為此，本研究基于當(dāng)前較為成熟的工廠化液體制種、接種和栽培模式，使用生物藥劑通過(guò)多種施藥手段，對(duì)黑木耳的青苔病進(jìn)行防控探索，取得初步成效。

1.研究背景

黑木耳 [Auricularia auricula（L.:Hook）Underw.]，是我國(guó)南北方常見(jiàn)木腐大型真菌，屬于擔(dān)子菌門、層菌綱、木耳目、木耳科、木耳屬，富含蛋白質(zhì)、多糖和膠質(zhì)，其營(yíng)養(yǎng)價(jià)值遠(yuǎn)高于蔬菜和水果，且對(duì)呼吸道微塵具有良好的吸附清除效果，對(duì)于長(zhǎng)期接觸粉塵的人員具有顯著保健作用。

據(jù)史料記載，我國(guó)古代人民早在2000多年前就開(kāi)始對(duì)黑木耳進(jìn)行種植，但技術(shù)僅限于自然接種，由于對(duì)自然野生環(huán)境的高度依賴，產(chǎn)量極低。直到20世紀(jì)60年代，才逐漸開(kāi)始半自然半人工栽培，即將黑木耳子實(shí)體搗碎后接種于段木進(jìn)行栽培，由于缺乏對(duì)黑木耳生長(zhǎng)規(guī)律的認(rèn)識(shí)，人工干預(yù)度很低，產(chǎn)量依舊不高。隨著純菌種技術(shù)和代料栽培技術(shù)的實(shí)現(xiàn)，以及出菇管理水平的不斷提高，到20世紀(jì)70年代有了真正意義上的人工栽培。從實(shí)現(xiàn)人工栽培后黑木耳產(chǎn)業(yè)發(fā)展迅猛，現(xiàn)在已實(shí)現(xiàn)工廠化制種。其種植模式多樣，主要有室內(nèi)吊袋栽培和大田露地全日光間隙噴霧栽培。種植范圍從早期集中在北方現(xiàn)已擴(kuò)展到南方廣大地區(qū)，種植規(guī)模的不斷擴(kuò)大和種植技術(shù)的不斷成熟，使得黑木耳的產(chǎn)量迅速提升，當(dāng)前我國(guó)黑木耳產(chǎn)量?jī)H次于香菇，是第二大食用菌產(chǎn)品，年產(chǎn)量超過(guò)700萬(wàn)噸，對(duì)我國(guó)農(nóng)業(yè)經(jīng)濟(jì)的發(fā)展起到了巨大的促進(jìn)作用。

因?yàn)槟媳狈降臍夂虿町?，黑木耳的種植存在明顯的季節(jié)性差異，北方多集中在冬春接種，夏秋采收，而南方則夏秋接種，冬春采收。在貴州銅仁地區(qū)，菇農(nóng)依據(jù)黑木耳和水稻的生長(zhǎng)特點(diǎn)，進(jìn)行黑木耳與水稻輪作，即水稻收割后起隴鋪膜，搭建簡(jiǎn)易鋼絲欄，長(zhǎng)棒以“人”字形斜靠在鋼絲上，短棒直立擺放。隴寬1.2m，可安置3根鋼絲欄，擺放6列菌棒。隴間開(kāi)溝，寬35-40cm，深20cm，鋪設(shè)噴淋管，可供人行。相較傳統(tǒng)稻田單一種植水稻，此法效果顯著，提高了農(nóng)民的經(jīng)濟(jì)收入。據(jù)統(tǒng)計(jì)，小棒可產(chǎn)黑木耳干品60g，大棒可產(chǎn)90g，每畝地可擺放1萬(wàn)棒，每個(gè)家庭可管理20畝。然而，由于青苔病的普遍滋生，消耗菌棒營(yíng)養(yǎng)，到后期嚴(yán)重阻礙了菌棒出耳，相較無(wú)青苔感染菌棒減產(chǎn)達(dá)20%，給菇農(nóng)造成大量損失，本研究正是基于這一背景開(kāi)展實(shí)施的。

2.研究意義

本研究通過(guò)三種不同處理方式探究青苔速滅對(duì)黑木耳青苔病的抑制效果，以期實(shí)現(xiàn)以下目的。一是有效抑制青苔病的蔓延，通過(guò)施加藥劑，青苔病能得到有效控制，減少對(duì)菌棒的營(yíng)養(yǎng)消耗。二是施加藥劑后增加黑木耳的產(chǎn)量，本試驗(yàn)采用3種不同施加藥劑的方法，與對(duì)照組相比較施加藥劑后增加產(chǎn)量的差異，充分說(shuō)明藥劑的促進(jìn)作用。三是篩選經(jīng)濟(jì)可行的操作方法，不同施加藥劑的方法對(duì)操作的難度要求存在差異，對(duì)于不同規(guī)模的種植戶或種植企業(yè)可采用與自身相適應(yīng)的施藥措施。

南方種植黑木耳多采用秋天擺棒，冬春季采收，冬季氣溫低，出耳量少，高產(chǎn)期集中在春季。隨著春季氣溫回升，雨水量隨之增加，雨水沿孔口進(jìn)入菌棒沉積，進(jìn)而滋生青苔病導(dǎo)致菌棒軟化腐爛，造成減產(chǎn)是普遍現(xiàn)象，但長(zhǎng)期以來(lái)未能得到有效控制。本試驗(yàn)通過(guò)施加青苔速滅對(duì)青苔病進(jìn)行有效治理能緩解上述情況，這對(duì)于黑木耳現(xiàn)代化栽培具有促進(jìn)性作用。尤其是對(duì)于廣大菇農(nóng)采用地?cái)[式栽培而言，青苔病幾乎是造成黑木耳減產(chǎn)乃至絕收的關(guān)鍵影響因素，所以本研究對(duì)提升菇農(nóng)生產(chǎn)積極性具有重要的價(jià)值。青苔速滅是生物藥劑，減少青苔對(duì)菌材營(yíng)養(yǎng)消耗的同時(shí)對(duì)環(huán)境友好，采收結(jié)束后脫袋將菌渣回填，可以提升土壤肥力。

3.黑木耳生活史

黑木耳屬于異宗結(jié)合大型真菌，子實(shí)體成熟后在耳片腹面形成子實(shí)層，子實(shí)層擔(dān)子細(xì)胞內(nèi)雙核融合形成短暫二倍體，通過(guò)減數(shù)分裂形成四個(gè)擔(dān)孢子，擔(dān)孢子彈射后，在適宜環(huán)境中萌發(fā)形成單核菌絲，即為初生菌絲?？捎H和的兩個(gè)單核菌絲進(jìn)行質(zhì)配后形成雙核菌絲，即次生菌絲。雙核菌絲通過(guò)鎖狀聯(lián)合方式進(jìn)行細(xì)胞增殖，隨后不斷生長(zhǎng)分化形成原基，原基進(jìn)一步發(fā)育形成新的子實(shí)體。

4.研究方法

4.1 菌種制作

本研究采用液體制種和接種，工藝流程為：試管種→初級(jí)搖瓶種→次級(jí)搖瓶種→發(fā)酵罐深層發(fā)酵種→接種菌棒。供試黑木耳品種為青皮1號(hào)，母種純菌絲培養(yǎng)用加富PDA培養(yǎng)基，菌絲滿管后通過(guò)液體菌種發(fā)菌擴(kuò)大培養(yǎng)，在無(wú)菌條件下進(jìn)行液體接種。

4.1.1 試管種

試管種培養(yǎng)基配方在PDA培養(yǎng)基基礎(chǔ)上改良，取麩皮30g煮沸后過(guò)濾液，加入馬鈴薯煮沸后過(guò)濾液，同蔗糖、瓊脂加入MgSO41g和VB1 10mg，超純水1000mL定容滅菌，冷卻后在無(wú)菌條件下接種，25℃恒溫避光培養(yǎng)7天。

4.1.2 初級(jí)搖瓶種

取4-6塊0.5cm見(jiàn)方的試管種菌絲體接種于初級(jí)搖瓶中，靜置3天，待液面菌絲塊長(zhǎng)至1cm大小時(shí)上床搖瓶，24-26℃，120r/min，培養(yǎng)4天，待培養(yǎng)基清亮透明，菌絲球大小均勻密集，含量達(dá)80%可接次級(jí)搖瓶種。初級(jí)搖瓶種培養(yǎng)基配方：馬鈴薯200g，葡萄糖20g，蛋白胨3g，酵母膏 2g，KH2PO42g，MgSO41g，VB1 10mg， 超純水1000mL。

4.1.3 次級(jí)搖瓶種

次級(jí)搖瓶種培養(yǎng)基配方同初級(jí)搖瓶種，向5000mL三角瓶加入培養(yǎng)基2000mL，并放入5-8顆玻璃珠，促進(jìn)液相均勻度，滅菌冷卻后接種。將初級(jí)搖瓶種按10%接種量迅速倒入次級(jí)搖瓶中，24-26℃，120r/min，培養(yǎng)4-5天，當(dāng)培養(yǎng)基清亮透明，菌絲球密集達(dá)80%以上時(shí)，可用于接種深層發(fā)酵擴(kuò)大培養(yǎng)。

4.1.4 深層發(fā)酵種

深層發(fā)酵在發(fā)酵罐中進(jìn)行，其工藝流程是：配料→裝罐→滅菌→冷卻→接種→培養(yǎng)。黑木耳液體深層發(fā)酵培養(yǎng)基采用如下配方：玉米粉4%，蔗糖3%，麩皮2%，MgSO40.1%，KH2PO40.05%， 豆 油 0.05%，VB1 0.01%。120℃滅菌40min，冷卻至培養(yǎng)溫度后接種。培養(yǎng)4-5天，隔天抽樣檢測(cè)，至培養(yǎng)液清澈，菌絲球密集濃度達(dá)80%可用于接栽培棒。

4.1.5 菌棒制作

采用木屑種小棒栽培，培養(yǎng)基配方：木屑78%，麩皮20%，蔗糖1%，石膏1%，菌棒直徑10-11cm、長(zhǎng)度22-23cm、重量1.25-1.3kg。采用窩口機(jī)裝袋，滅菌冷卻后移至接種車間，在無(wú)菌條件下液體接種。

4.2 發(fā)菌管理

避光變溫培養(yǎng)，前期溫度保持在26℃，中后期緩慢將至22℃，早期高溫有利于菌絲萌發(fā)定植，中后期相對(duì)低溫促進(jìn)養(yǎng)分積累，15天后菌絲可長(zhǎng)滿菌袋。期間定期檢查記錄環(huán)境數(shù)據(jù)，及時(shí)清理污染菌棒。菌絲長(zhǎng)滿后，分別刺大孔和小孔，大孔口直徑約0.8cm，孔數(shù)35個(gè)；小孔口直徑約0.2cm，孔數(shù)120個(gè)。移至栽培試驗(yàn)場(chǎng)，試驗(yàn)場(chǎng)用石灰水消毒。

4.3 出耳管理與采收

開(kāi)口后通氧量增加，菌絲代謝活躍度隨之加快，早期溫度控制在25℃以下，借助遮陽(yáng)網(wǎng)，適度霧噴控制溫度。此時(shí)濕度過(guò)大易感染雜菌，過(guò)于干燥會(huì)導(dǎo)致開(kāi)口處菌絲死亡，需控制在65%上下，采用見(jiàn)干見(jiàn)濕方式促進(jìn)菌絲扭結(jié)形成原基。待出芽封口后增加霧噴次數(shù)，將空氣濕度增至90%，增濕需避開(kāi)高溫時(shí)段，高溫高濕易感染雜菌。秋季晝夜溫差大，有利于集中催芽，提高出耳整齊度。持續(xù)高溫天氣不宜催芽，待溫度降至25℃以下再集中催芽。

耳片成熟后，及時(shí)采收，采大留小，按實(shí)驗(yàn)分組采收稱量干重，測(cè)量耳片大小，取算術(shù)平均值，并記錄。采收時(shí)提前前半天停止給水，采收后停止2天給水，待菌絲恢復(fù)后再繼續(xù)給水。

4.4 適宜藥劑濃度探究

設(shè)置4個(gè)實(shí)驗(yàn)組和1個(gè)對(duì)照組，加入等體積、相同濃度青苔液。實(shí)驗(yàn)組用0.1%、0.2%、0.4%、0.8%青苔速滅溶液處理。每天記錄青苔液顏色變化，比較不同藥劑濃度清除青苔所需時(shí)間，記錄至實(shí)驗(yàn)組青苔液全部澄清。

4.5 青苔速滅與菌絲生長(zhǎng)的拮抗探究

用打孔器取直徑1cm濾紙圓片，滅菌后分別用0.2%、0.4%、0.8%青苔速滅溶液浸泡5min，每個(gè)濃度取3個(gè)濾紙圓片置于接種菌絲的PDA平板上，圍繞接種點(diǎn)分布，對(duì)照組只接種不放置濾紙圓片。

4.6 藥劑處理滋生青苔的黑木耳菌棒

出兩潮耳后，菌棒開(kāi)始感染青苔病，將感染青苔病的菌棒按大、小孔分成兩組，配制0.2%青苔速滅溶液分別進(jìn)行如下3種處理：①噴灑（連續(xù)3次，每次5min）；②浸泡30min；③浸泡60min。每種處理方式大、小孔菌棒各20棒，不做處理的大、小孔菌棒各20棒作為對(duì)照，均進(jìn)行常規(guī)培養(yǎng)，比較不同處理方式的黑木耳產(chǎn)量和品質(zhì)。

5.研究過(guò)程

本探究試驗(yàn)采用液體制種、接種，通過(guò)不同方式施加藥劑探究防治效果，具體過(guò)程如圖1所示。

圖1 黑木耳青苔病藥劑防治探究過(guò)程圖

6.結(jié)果與分析

6.1 抑制試驗(yàn)與拮抗試驗(yàn)結(jié)果

抑制試驗(yàn)結(jié)果顯示，實(shí)驗(yàn)組青苔受到明顯抑制，0.2%以后效果不再變化。拮抗試驗(yàn)培養(yǎng)9天結(jié)果顯示未出現(xiàn)藥劑抑菌圈，青苔速滅對(duì)菌絲生長(zhǎng)無(wú)抑制作用。青苔速滅對(duì)菌絲生長(zhǎng)無(wú)抑制作用，但高濃度藥劑會(huì)增加對(duì)培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)的吸收，進(jìn)而影響菌絲的營(yíng)養(yǎng)吸收，故試驗(yàn)選用0.2%濃度。

6.2 產(chǎn)量與品質(zhì)的比較

6.2.1 相同處理方式下，大孔和小孔黑木耳的總產(chǎn)量及處理后增加量相當(dāng)，但不同處理方式下增加的產(chǎn)量差異明顯，其中大孔浸泡增加的產(chǎn)量最佳，小孔菌棒浸泡次之，但優(yōu)于噴灑組效果，浸泡時(shí)長(zhǎng)30min以上產(chǎn)量不再增加。以上3種方式處理后的黑木耳增加產(chǎn)量均優(yōu)于對(duì)照組產(chǎn)量，對(duì)照組大、小孔棒均增加產(chǎn)量分別為28.2g和26.3g。

表1 藥劑處理組和對(duì)照組產(chǎn)量統(tǒng)計(jì)（干重/g）

6.2.2 對(duì)產(chǎn)品形態(tài)觀察發(fā)現(xiàn)，大孔菌棒耳片較小孔耳片寬度大，前者均寬達(dá)6.6cm，后者均寬4.7cm，前者由于原基在孔口成簇著生，增加了采摘難度，且耳片連生難以分開(kāi)。

6.3 青苔病的發(fā)生和環(huán)境因子的關(guān)系

滋生青苔病的一個(gè)重要原因是打孔后遇陰雨天氣或?qū)魢娝晁畯目卓谶M(jìn)入菌棒沉積，3-5天后在菌袋陰面滋生青苔。搬運(yùn)、排場(chǎng)導(dǎo)致袋料分離，雨水沿開(kāi)口進(jìn)入袋內(nèi)也容易導(dǎo)致青苔發(fā)生。

7.小結(jié)與討論

7.1 根據(jù)調(diào)查，試驗(yàn)用菌棒常規(guī)棒均產(chǎn)量干重為60g，而試驗(yàn)組棒均產(chǎn)量為56.7g，對(duì)照組棒均產(chǎn)量為40g，僅有浸泡組產(chǎn)量與正常產(chǎn)量相當(dāng)。其原因在于出耳期遭遇5場(chǎng)大雪，長(zhǎng)期低溫后氣溫陡升至27℃，導(dǎo)致對(duì)照組青苔大量滋生，菌棒快速腐爛，嚴(yán)重減產(chǎn)。實(shí)驗(yàn)組經(jīng)藥劑處理后減少了青苔滋生，但劇烈氣溫變化對(duì)其也有較大影響。

7.2 藥劑浸泡能有效抑制青苔滋生，提高產(chǎn)量，在工廠化大規(guī)模生產(chǎn)中此途徑難以施行。另外，大孔浸泡較小孔產(chǎn)量更佳，但大孔耳片過(guò)大、連生，采摘時(shí)容易拉斷，降低了黑木耳品質(zhì)。因此，為提高品質(zhì)，控制勞動(dòng)成本，減少青苔病的發(fā)生，推薦使用小孔噴灑藥劑的方式，家庭作坊式生產(chǎn)則可使用大孔浸泡的方式，且浸泡時(shí)長(zhǎng)不宜超過(guò)半小時(shí)。

7.3 保持排場(chǎng)清潔，擺棒前用石灰水對(duì)排場(chǎng)消毒殺菌。刺孔后到菌絲恢復(fù)前環(huán)境濕度控制在40%-60%，避免陽(yáng)光直射。出菇期要求空氣濕度90%以上，不能對(duì)菌棒直接噴水，增濕應(yīng)遵循低溫期白天給水，高溫期早晚給水的原則。

8.展望

本探究通過(guò)施加生物藥劑減少了青苔病的大量滋生，進(jìn)而減少了青苔對(duì)黑木耳菌棒營(yíng)養(yǎng)的消耗，增大出耳量。雖然本實(shí)驗(yàn)用藥劑廣泛應(yīng)用于水產(chǎn)農(nóng)業(yè)中青苔病的防治，但用于食用菌栽培領(lǐng)域未見(jiàn)相關(guān)報(bào)道，在后續(xù)研究中將進(jìn)一步對(duì)施加藥劑后黑木耳子實(shí)體內(nèi)的營(yíng)養(yǎng)成分展開(kāi)分析，比較不同處理方式下?tīng)I(yíng)養(yǎng)成分可能發(fā)生的變化。