王聯(lián)廣，伍湘竹，周樹(shù)婭，季青梅，馬 鵬，石安憲

（昭通市綠色食品發(fā)展中心，云南昭通 657000）

不確定度為測(cè)量不確定度的簡(jiǎn)稱(chēng)。1927年，德國(guó)物理學(xué)家維納海森堡提出了測(cè)量的不確定性概念，表示測(cè)量結(jié)果的分散程度，亦是分析結(jié)果準(zhǔn)確性的可疑程度，習(xí)慣俗稱(chēng)測(cè)量的“不可靠程度”，用于表達(dá)分析測(cè)量結(jié)果優(yōu)劣的一種方式，通常在測(cè)量結(jié)果完整表達(dá)中包括測(cè)量不確定度，檢驗(yàn)檢測(cè)機(jī)構(gòu)通用要求規(guī)定檢驗(yàn)檢測(cè)出現(xiàn)檢測(cè)臨界值時(shí)也要給出不確定度[1]。不確定度分為標(biāo)準(zhǔn)不確定度和擴(kuò)展不確定度兩大類(lèi)。標(biāo)準(zhǔn)不確定度分為A類(lèi)、B類(lèi)標(biāo)準(zhǔn)不確定度。A類(lèi)是用統(tǒng)計(jì)分析方法計(jì)算，B類(lèi)是以估計(jì)的標(biāo)準(zhǔn)偏差表示，合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度即為各類(lèi)A、B類(lèi)標(biāo)準(zhǔn)不確定度的合成。擴(kuò)展不確定度為總不確定度，是合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度與置信因子k的倍數(shù)，置信因子k與概率發(fā)布關(guān)系為正態(tài)分布，k=2～3。其中，置信概率P=95.45%時(shí)，k=2；P=99.73%時(shí)，k=3；三角分布，平均分布，等。

百菌清作為一種廣譜、保護(hù)性殺菌劑，被廣泛應(yīng)用于蔬菜、水果真菌侵染的防治。昭通大白菜是當(dāng)?shù)氐慕?jīng)濟(jì)特色產(chǎn)業(yè)，但其霜霉病的發(fā)生嚴(yán)重影響其產(chǎn)量和質(zhì)量。百菌清對(duì)大白菜霜霉病的防治有重要的作用，不僅可促進(jìn)農(nóng)民增收，還可為昭通產(chǎn)業(yè)發(fā)展提供指導(dǎo)。但百菌清農(nóng)藥的不合理使用或過(guò)量使用，使得大白菜中殘留增大。為測(cè)量其在大白菜中的含量的測(cè)量不確定度，對(duì)有效監(jiān)管大白菜中百菌清殘留提供更加可靠的結(jié)果。本實(shí)驗(yàn)參考NY/T 761—2008[2]標(biāo)準(zhǔn)方法，在大白菜樣品中加入一定量的百菌清標(biāo)準(zhǔn)液，通過(guò)提取、凈化和使用氣相色譜測(cè)定以及建立不確定度測(cè)量模型，計(jì)算其不確定度值。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

大白菜，購(gòu)買(mǎi)于當(dāng)?shù)?；百菌清? 000 mg·L-1），農(nóng)業(yè)農(nóng)村部環(huán)境保護(hù)科研監(jiān)測(cè)所（天津）；正己烷、二氯甲烷（色譜純），賽默飛世爾科技（中國(guó)）科技有限公司；弗羅里矽柱（1 g/6 mL），天津博納艾杰爾科技有限公司；乙腈（分析純），國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；其他試劑均為分析純。

1.2 儀器與設(shè)備

安捷倫7890B氣相色譜儀配uECD檢測(cè)器，美國(guó)安捷倫公司；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)RE-2000B，上海亞榮生化儀器廠；電子天平DT-500B，常熟市金羊砝碼儀器有限公司；勻漿機(jī)IKA T18，艾卡有限公司；固相萃取裝QSE-240011，得泰儀器科技有限公司；MFV-36智能氮吹儀，得泰儀器科技有限公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 樣品前處理

準(zhǔn)確稱(chēng)取15.0 g大白菜均質(zhì)樣品，添加0.2 mg·kg-1百菌清，搖勻靜止30 min，加入30.0 mL乙腈，均質(zhì)2 min，過(guò)濾到4～5 g NaCl的100 mL具塞量筒中，振蕩搖勻，靜置30 min，量取10.00 mL上清液于150 mL旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)小瓶中，在40 ℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至進(jìn)干后，加入2 mL正己烷，用弗羅里矽柱凈化待測(cè)。

1.3.2 色譜條件

色譜柱：DB-5石英毛細(xì)管柱（30 m×0.32 mm×0.25 μm）；載氣：氮?dú)猓?9.999%），恒流；流量：3.0 mL·min-1；進(jìn)樣口溫度：220 ℃；檢測(cè)器溫度：300 ℃；柱溫：初溫150 ℃保持2 min，以8 ℃·min-1升至260 ℃，保持7.25 min；進(jìn)樣方式：不分流進(jìn)樣。

1.3.3 校準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液配制

用正己烷稀釋1 000 mg·L-1的百菌清配制成100 mg·L-1的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，繼續(xù)稀釋成10 mg·L的標(biāo)準(zhǔn)工作液，再用正己烷溶液配制成0.01 mg·L-1、0.05 mg·L-1、0.10 mg·L-1、0.50 mg·L-1和1.00 mg·L-1的系列百菌清校準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)溶液。

2 結(jié)果與分析

2.1 測(cè)量不確定度主要來(lái)源

測(cè)定大白菜中百菌清農(nóng)藥殘留不確定度主要來(lái)源于樣品的稱(chēng)量、試劑的體積受環(huán)境溫度變化、量筒和移液管自帶的誤差、標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)不確定度和儀器重復(fù)測(cè)定的隨機(jī)誤差等。

2.2 建立測(cè)量不確定度數(shù)學(xué)模型

樣品中被測(cè)農(nóng)藥殘留量以質(zhì)量分?jǐn)?shù)ω計(jì)，單位以mg·kg-1表示，公式為

式中：ρ為標(biāo)準(zhǔn)溶液中農(nóng)藥的質(zhì)量濃度，mg·L-1；A為樣品溶液中被測(cè)農(nóng)藥的峰面積；AS為農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)溶液中被測(cè)農(nóng)藥的峰面積；V1為提取溶劑總體積，mL；V2為吸取出用于檢測(cè)的提取溶液的體積，mL；V3為樣品定容體積，mL；m為樣品的質(zhì)量，g。

2.3 測(cè)量不確定度評(píng)定

2.3.1 天平稱(chēng)量引入的不確定度

該天平在0～50 g稱(chēng)量范圍的最大允許誤差MPE=±0.05 g[3]，其允許誤差的半峰寬為0.05，按均勻分布計(jì)算，稱(chēng)量15.0 g樣品引入的B類(lèi)相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度urel(a)=MPE/(k×15.0)=0.192 5%。

2.3.2 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度

標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)引入的不確定度urel(b)為標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書(shū)給定的擴(kuò)展不確定度以及樣品中加入標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)引入的不確定度。

（1）標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)純度引入的相對(duì)不確定度urel(b1)。標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書(shū)給出的百菌清濃度為1 000 mg·L-1，則標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)百菌清的擴(kuò)展不確定度U(b)=1.20 mg·L-1，k=2，則B類(lèi)相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度urel(b1)=U(b)/(k×1 000)=0.060 0%。

（2）標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)加入樣品中引入的不確定度urel(b2)。加入標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)引入的B類(lèi)相對(duì)不確定度urel(b2)為稀釋1 000 mg·L-1百菌清標(biāo)準(zhǔn)溶液配制成100 mg·L-1標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，繼續(xù)稀釋成10 mg·L-1標(biāo)準(zhǔn)工作液，再移取0.3 mL工作液到樣品過(guò)程中引入的不確定度。

實(shí)驗(yàn)室溫差變化為（20±5） ℃，正己烷的膨脹系數(shù)為1.26×10-3mL·℃-1，按均勻分布計(jì)算，3次使用1 mL移液管移取1 mL百菌清標(biāo)準(zhǔn)溶液，2次用正己烷定容于10 mL容量瓶，按均勻分布計(jì)算，引入的B類(lèi)相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度urel(b2-1)為

使用1 mL A級(jí)移液管移取3次標(biāo)準(zhǔn)溶液，根據(jù)《常用玻璃量具檢定規(guī)程》（JJG 196—2006）規(guī)定，1 mL A級(jí)移液管的最大允許誤差MPE=±0.007 mL，按三角分布計(jì)算[4]，其引入的B類(lèi)相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度urel(b2-2)=MPE×3/(k×1)=0.857 4%。

使用10 mL A 級(jí)容量瓶定容標(biāo)準(zhǔn)溶液2次，根據(jù)《常用玻璃量具檢定規(guī)程》（JJG 196—2006）規(guī)定，10 mL A級(jí)容量瓶的最大允許誤差MPE=±0.02 mL，按三角分布計(jì)算，其允許誤差引入的B類(lèi)相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度urel(b2-3)=MPE×2/(k×10)=1.633 0%。

加入標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)引入的B類(lèi)相對(duì)合成不確定度urel(b2)為

（3）標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)引入的不確定度urel(b)。標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)引入的B類(lèi)相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度為

2.3.3 量取乙腈引入的不確定度

使用100 mL量筒取30.0 mL乙腈引入的B類(lèi)相對(duì)不確定度urel(c)為量筒的允許誤差、乙腈體積受實(shí)驗(yàn)室溫度變化和重復(fù)移取乙腈引入。

100 mL量筒量取30 mL乙腈，按《常用玻璃量器檢定規(guī)程》（JJG 196—2006）規(guī)定，100 mL的最大允許誤差MPE=±1 mL，按均勻分布計(jì)算，則允許誤差引入的B類(lèi)相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度urel(c1)=MPE/(k×30.0)=1.924 5%。實(shí)驗(yàn)室溫差變化為（20±5） ℃，乙腈的體積膨脹系數(shù)為1.37×10-3mL·℃-1，按均勻分布計(jì)算，則由乙腈受溫度變化引入的B類(lèi)相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度urel(c2)為

重復(fù)6次移取乙腈的體積分別為38.081 3 mL、30.052 8 mL、30.142 0 mL、30.032 3 mL、30.075 7 mL和30.055 6 mL，標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.019 0 mL，則重復(fù)移取乙腈引入的A類(lèi)相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度urel(c3)為

2.3.4 移取提取液引入的不確定度

量取10.00 mL提取試液于150 mL雞心瓶中引入的B類(lèi)相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度urel(d)為乙腈體積受實(shí)驗(yàn)室溫差變化以及10 mL A級(jí)移液管允許誤差引入的不確定度。

（1）溫度變化引入的不確定度。實(shí)驗(yàn)室溫差變化為（20±5） ℃，乙腈的體積膨脹系數(shù)為1.37×10-3mL·℃-1，按均勻分布算，則由乙腈體積受溫度變化引入的B類(lèi)相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度urel(d1)為

（2）移液管引入的不確定度。使用10 mL A級(jí)移液管量取10 mL提取液，根據(jù)《常用玻璃量具檢定規(guī)程》（JJG 196—2006）規(guī)定，10 mL A級(jí)移液管的最大允許誤差MPE=±0.05 mL，按三角分布計(jì)算，其B類(lèi)相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度urel(d2)為

（3）移取10.00 mL提取液引入的B類(lèi)相對(duì)合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度urel(d)為

2.3.5 定容引入的不確定度

用15 mL離心管收集經(jīng)過(guò)弗羅里硅土小柱萃取后的試液，氮吹蒸發(fā)至小于5 mL，用正己烷定容至5.0 mL，定容引入的B類(lèi)相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度urel(e)為離心管允許誤差和正己烷體積受實(shí)驗(yàn)室溫度變化引入的不確定度。

（1）使用15 mL刻度離心管定容5 mL測(cè)試液，按《專(zhuān)用玻璃量器檢定規(guī)程》（JJG 10—2005）規(guī)定，15 mL刻度離心管的最大允許誤差MPE=±0.2 mL，按三角分布計(jì)算，定容到5 mL，其刻度離心管引入的B類(lèi)相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度urel(e1)為

（2）實(shí)驗(yàn)室溫度變化為（20±5）℃，正己烷的膨脹系數(shù)為1.26×10-3mL·℃-1，按均勻分布計(jì)算用正己烷定容到5.0 mL，其體積受溫度變化引入的B類(lèi)相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度urel(e2)為

（3）定容引入的B類(lèi)相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)合成不確定度urel(e)為

2.3.6 標(biāo)準(zhǔn)曲線引入的不確定度urel(f)

用正己烷稀釋1 000 mg·L-1的百菌清，配制成10 mg·L-1的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，再用正己烷溶液配制成0.01 mg·L-1、0.05 mg·L-1、0.10 mg·L-1、0.50 mg·L-1和1.00 mg·L-1的系列百菌清標(biāo)準(zhǔn)溶液，每個(gè)濃度3次平行進(jìn)樣的峰面積為1.491 9×103Hz、1.464 3×103Hz、1.490 0×103Hz；7.414 4×103Hz、7.533 3×103Hz、7.616 8×103Hz；1.460 3×104Hz、1.460 7×104Hz、1.469 3×104Hz；7.526 1×104Hz、7.581 1×104Hz、7.649 4×104Hz；1.435 5×105Hz、1.445 6×105Hz以及1.429 8×105Hz，擬合線性回歸方程為y=1.443 8×105x+7.142 1×102，相 關(guān) 系 數(shù)R=0.999 6，使 用 其擬 合 曲 線 校 準(zhǔn) 加 標(biāo) 濃 度 為C—=0.187 4mg·kg-1，標(biāo)準(zhǔn)曲線引入的B類(lèi)相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確度按計(jì)算。其中，a為校準(zhǔn)曲線斜率；SR為殘余標(biāo)準(zhǔn)差，b為校準(zhǔn)曲線截距；j為獲得工作曲線的測(cè)量次數(shù)；C0為被測(cè)量的濃度；C—為不同工作曲線溶液濃度的平均值（n次測(cè)試），，i為 第 幾 個(gè) 工作曲線溶液；n為工作曲線的校準(zhǔn)點(diǎn)測(cè)量次數(shù)，如工作曲線有5個(gè)校準(zhǔn)點(diǎn)，每點(diǎn)測(cè)量3次，則n=15；p為被測(cè)樣品的測(cè)量次數(shù)，如某樣品重復(fù)測(cè)量6次，p=6。

則擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線校準(zhǔn)引入的B類(lèi)相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度urel(f)為

2.3.7 樣品重復(fù)測(cè)定引入不確定度urel(g)

樣品平行測(cè)定6次的結(jié)果為0.196 2 mg·kg-1、0.195 3 mg·kg-1、0.195 6 mg·kg-1、0.175 9 mg·kg-1、0.178 0 mg·kg-1和0.183 2 mg·kg-1，6次測(cè)定平均值為0.187 4 mg·kg-1，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差s=0.009 5 mg·kg-1，平均回收率為93.70%，符合GB/T 27404—2008[6]要求,則樣品平行測(cè)定引入A類(lèi)相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度urel(g)[5]為

2.3.8 測(cè)定百菌清的合成不確定度u(ω)和擴(kuò)展不確定度U(ω)

（1）大白菜中百菌清農(nóng)藥殘留測(cè)定相對(duì)合成不確定度urel(ω)。測(cè)定大白菜中百菌清濃度為C—=0.187 4 mg·kg-1，測(cè)定百菌清引入的相對(duì)合成不確定度為

（2）大白菜中百菌清農(nóng)藥殘留測(cè)定合成不確定度u(ω)為

（3）大白菜中百菌清農(nóng)藥殘留測(cè)定擴(kuò)展不確定度U(ω)。擴(kuò)展不確定度取置信區(qū)間為95%，置信因子k=2，則擴(kuò)展不確定度U(ω)為

2.4 測(cè)定結(jié)果的表示

大白菜中百菌清農(nóng)藥殘留ω表示為

3 結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)參考標(biāo)準(zhǔn)NY/T 761—2008，在大白菜樣品加入一定量的百菌清標(biāo)準(zhǔn)液，通過(guò)乙腈溶劑提取、弗羅里矽柱凈化、氣相色譜的測(cè)定，建立了不確定度測(cè)量模型。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，稱(chēng)量引入相對(duì)不確定度0.199 2%、標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)引入相對(duì)不確定度1.846 4%、移取試液引入相對(duì)不確定度2.134 6%、定容引入相對(duì)不確定度1.633 0%、標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合引入相對(duì)不確定度3.154 6%、平行測(cè)定樣品引入相對(duì)不確定度2.069 6%，最后評(píng)定總的擴(kuò)展不確定度為0.018 4 mg·kg-1，測(cè)量結(jié)果表示為（0.187 4±0.018 4） mg·kg-1，k=2。結(jié)果表明，檢測(cè)過(guò)程步驟必須按操作規(guī)程進(jìn)行，同時(shí)提升檢測(cè)人員的檢測(cè)能力才可減少測(cè)定帶來(lái)的不確定度，以保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確度和可靠性。