龔鳳萍，段慶虎，竹 瑋，張應(yīng)香，吳淑平，關(guān)云霄，李 杰

（信陽市農(nóng)業(yè)科學(xué)院，河南 信陽 464000）

灰樹花 [Grifola frondosa（Dicks.）Gray]又名栗蘑，日本稱其為舞茸[1]，隸屬于真菌門（Eumycota）擔(dān)子菌亞門（Basidiomycotina）異隔擔(dān)子菌綱（Hymenomycetes）無隔擔(dān)子菌亞綱（Homobasidiomycetes）非褶菌目（Aphyllophorales）多孔菌科（Polyporaceae）樹花屬（Grifola），是一種名貴的食藥兼用菌[2]?；覙浠I養(yǎng)豐富、肉質(zhì)鮮嫩、味如雞絲、脆似玉蘭，富含硒等人體必需微量元素。其所含的灰樹花多糖（以β-葡聚糖為主）是一種極好的天然免疫調(diào)節(jié)劑，在防癌、抗癌和保健方面功效顯著[3]?；覙浠ǖ氖秤脙r(jià)值和藥用價(jià)值已引起人們廣泛關(guān)注，目前作為一種高級(jí)保健品風(fēng)行日本、美國市場(chǎng)，且需求量逐年增加，市場(chǎng)開發(fā)前景廣闊。

我國在20世紀(jì)80年代開始人工馴化灰樹花。目前國內(nèi)的灰樹花規(guī)?；耘嘀饕诤颖边w西和浙江慶元，栽培模式主要是覆土出菇或一季地?cái)[接一季覆土交替出菇；也有采用秋季出菇一潮后低溫保藏，待第二年春季再覆土的方式出菇[4]。但以上方式都存在子實(shí)體因沾染泥土而被污染的問題，嚴(yán)重影響其品質(zhì)和銷售價(jià)格。而不進(jìn)行覆土，僅在地面單層擺放菌棒的出菇方式，不能實(shí)現(xiàn)菌袋100%出菇。胡汝曉[5]采用菌棒一側(cè)割口后并棒或聯(lián)棒的方法來增加菌棒營養(yǎng)促進(jìn)出菇；胡建平[6]采用第二潮菇非土覆蓋方式，用遮陽網(wǎng)、棉氈等覆蓋物保濕，能正常形成原基。根據(jù)以上研究結(jié)果推測(cè)，灰樹花需要通過增加菌袋的透氣性和空氣濕度以保證正常出菇。

食用菌的生長過程分為營養(yǎng)生長和生殖生長兩個(gè)階段。前者為后者提供營養(yǎng)物質(zhì)，只有營養(yǎng)生長階段積累足夠營養(yǎng)并達(dá)到生理成熟，方可順利出菇，并獲得較高的產(chǎn)量和較好的品質(zhì)。陳耀武等[7]發(fā)現(xiàn)，香菇（Lentinus edodes）菌絲在溫度為18℃～25℃條件下培養(yǎng)25天左右即達(dá)到生理成熟，具備出菇內(nèi)因條件，當(dāng)內(nèi)外因條件同時(shí)具備時(shí)可以順利出菇。李長喜[8]進(jìn)行了真姬菇（Hypsizygus marmoreus）栽培研究，發(fā)現(xiàn)在20℃培養(yǎng)20 d～31 d，或25℃培養(yǎng)10 d～20 d，菌絲可達(dá)到生理成熟。魏帥[9]研究表明，阿魏菇（Pleurotus nebrodensis）菌絲必須經(jīng)過低溫刺激才能達(dá)到生理成熟。因此，食用菌有菌絲生理成熟過程，且同一食用菌不同品種的生理成熟期不同。灰樹花栽培過程中常出現(xiàn)出菇不順利、形成原基時(shí)菌袋開口處極易感染雜菌等問題。推測(cè)其原因可能是菌絲未達(dá)到生理成熟，雖然能勉強(qiáng)出菇，但很難達(dá)到高產(chǎn)，是制約灰樹花大規(guī)模生產(chǎn)的關(guān)鍵因素之一。

1 材料與方法

1.1 適栽品種篩選

1.1.1 參試菌株

主要選用國內(nèi)灰樹花主產(chǎn)區(qū)的部分主推品種，參試菌株詳見表1。

表1 參試菌株信息Tab.1 Informations of the tested strains

如表1所示，共對(duì)4個(gè)菌株進(jìn)行篩選，使用各參試菌株在豫南地區(qū)進(jìn)行層架式栽培，以期篩選出適宜該地區(qū)層架式立體高效高產(chǎn)的優(yōu)良品種。

1.1.2 供試配方

以多年配方篩選結(jié)果為依據(jù)，得到原種、栽培種及生產(chǎn)栽培的優(yōu)良配方，詳見表2。

表2 栽培配方Tab.2 Formula for cultivation

如表2所示，按照各配方進(jìn)行配料。拌料時(shí)可先將棉籽殼或木屑等主料提前1～2 d預(yù)濕，使主料吸足水分；裝袋當(dāng)天加入麩皮、玉米粉等輔料；加入輔料后盡快裝袋、滅菌，防止料變酸。以上配方含水量為53%～55%。

總而言之，教育方式及學(xué)生自身等因素導(dǎo)致醫(yī)學(xué)生科研能力培養(yǎng)現(xiàn)狀不容樂觀，具體表現(xiàn)在以下幾方面：（1）科研意識(shí)缺乏；（2）科研精神不足；（3）信息獲取及利用能力匱乏；（4）科研選題能力差；（5）科研方法掌握不夠；（6）論文撰寫能力薄弱[2]。

1.1.3 料棒制作

制袋時(shí)間為11月至12月，最遲不晚于次年1月上旬，否則將影響出菇。選擇低壓高密度聚乙烯塑料袋，內(nèi)袋厚度為0.006 cm，規(guī)格（寬×長）為18 cm×60 cm；外袋厚度為0.003 cm，規(guī)格（寬×長）為19 cm×61 cm。拌料前提前2 d預(yù)濕木屑，防止因木屑芯部未濕透而難以徹底滅菌。裝袋當(dāng)天加入麩皮、生土等輔料攪拌均勻，調(diào)整含水量至53%～55%。采用機(jī)械進(jìn)行裝袋和扎口，裝袋后逐棒檢查微孔。一般料棒重量在2.7 kg～2.9 kg之間為宜，裝袋要求松緊適中，標(biāo)準(zhǔn)是用手指按壓料袋略有凹陷。盡量做到當(dāng)天裝袋當(dāng)天滅菌，每次滅菌4 000棒～6 000棒。當(dāng)?shù)讓恿蠝剡_(dá)到97℃～100℃時(shí)保持18 h～24 h，滅菌結(jié)束后燜8 h～12 h后出鍋。滅菌后的料棒及時(shí)搬進(jìn)潔凈的冷卻室，呈“井”字形擺放。待料棒冷卻至30℃以下時(shí)迅速接種，接種時(shí)菌棒溫度不可過低，否則接種后菌種不易萌發(fā)。

1.1.4 接種與發(fā)菌管理

每個(gè)品種3次重復(fù)，每個(gè)重復(fù)接種50袋，共計(jì)600袋。栽培種選用發(fā)菌滿袋后10 d～25 d、成塊性好且健壯無污染的原種。在無菌條件下，使用經(jīng)消毒的打穴器打穴接種。每棒打穴1行，共4穴；每個(gè)穴直徑為2.5 cm，深度為3.0 cm。打穴后手掰菌塊接種入穴，接種塊要按壓緊實(shí)、不懸空，同時(shí)壓下穴孔周邊薄膜。接種后加套外袋、打活結(jié)、扎口不宜過緊。之后于25℃暗光、干燥、潔凈的條件下進(jìn)行發(fā)菌管理。發(fā)菌滿袋后，將菌袋刺孔并置于出菇架上進(jìn)行出菇管理。期間需觀察并記錄參試菌株的出菇動(dòng)態(tài)，當(dāng)子實(shí)體菌蓋背面出現(xiàn)菌孔時(shí)采收，測(cè)產(chǎn)量。

1.2 菌絲生理促熟試驗(yàn)

使用菌株HSH4進(jìn)行試驗(yàn)。為探索促熟溫度對(duì)灰樹花菌絲生理成熟的影響，將發(fā)菌透料的菌袋置于18℃、22℃、25℃、28℃、32℃溫度下進(jìn)行促熟管理，每個(gè)溫度下放置10袋。分別于7 d、12 d、18 d時(shí)觀察菌絲變化及原基發(fā)育情況，18 d后全部置于出菇棚進(jìn)行常規(guī)出菇管理。

1.3 菌袋刺孔對(duì)出菇的影響試驗(yàn)

選用菌株HSH4進(jìn)行試驗(yàn)。將發(fā)菌透料的菌袋進(jìn)行刺孔（試驗(yàn)組）、割口（CK）2種處理。刺孔處理即在菌袋發(fā)菌透料后，用香菇菌棒刺孔機(jī)進(jìn)行刺孔，孔徑為0.3 cm～0.5 cm，孔深為2.0 cm，每袋刺孔36個(gè)左右）。觀察并記錄不同處理對(duì)灰樹花原基發(fā)育和出菇朵形的影響。

1.4 出菇擺放方式比較試驗(yàn)

選用菌株HSH4進(jìn)行試驗(yàn)。在菌袋發(fā)菌透料后進(jìn)行刺孔處理，然后將菌袋分別進(jìn)行地面單層擺放和層架式多層擺放，見圖1。

圖1 單層地面擺放出菇方式（A） 和層架擺放出菇方式（B）Fig.1 The method of sigle-layer ground placement for fruiting(A)and the method of layer frame placement for fruiting(B)

如圖1所示，層架式擺放菌袋的間距為8 cm～10 cm；出菇架分3組，左、右兩邊2組架子單層放1排菌棒，中間1組擺放2排，層架間距為30 cm，共計(jì)擺放4層，各組架子之間留寬度為1 m的生產(chǎn)通道。單層地面擺放菌袋的間距為8 cm～10 cm，每2排～3排預(yù)留寬度為1 m的走道，共計(jì)6排。

1.5 層架式出菇大棚的構(gòu)造

灰樹花屬于中溫菌，出菇溫度以22℃～25℃為宜，豫南地區(qū)在春末及早秋的溫度條件下均會(huì)出菇，而夏季要實(shí)現(xiàn)出菇則對(duì)出菇棚有特殊要求。根據(jù)近幾年試驗(yàn)，摸索出一個(gè)適宜灰樹花出菇管理的標(biāo)準(zhǔn)棚，該棚含上下雙層棚，即大棚套小棚。上層大棚寬為8.0 m，長為22.0 m～25.0 m，邊高2.2 m～2.3 m，頂高3.0 m～3.2 m；下層小棚寬為6.0 m，長為22.0 m～25.0 m，邊高1.6 m～1.8 m，頂高2.5 m～2.6 m。上下棚拱架高度間距50 cm以上，間距越高夏季降溫效果越好。上層棚覆蓋高密度遮陽網(wǎng)；下層棚安裝白色透光農(nóng)膜；棚底四周安裝60目防蟲網(wǎng)至卷簾卷起的最高部位，棚門口安裝緩沖門。在上層棚頂部安裝一道噴帶，每隔50厘米安裝1個(gè)噴頭，可以旋轉(zhuǎn)噴水為佳。下層棚分別在棚兩邊和頂部安裝1道噴帶，每隔1米裝1個(gè)噴頭，可以噴霧化水汽為佳。

1.6 數(shù)據(jù)處理

采用SPSS Statistics 17.0軟件的Waller-Duncan方法對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素分析，比較各組處理間差異的顯著性。

2 結(jié)果與分析

2.1 參試菌株生長發(fā)育情況

各參試菌株的菌絲生長情況詳見圖2和表3。

表3 參試菌株菌絲和子實(shí)體形態(tài)特征Tab.3 Morphological characteristics of the mycelia and fruiting bodies of the tested strains

圖2 參試菌株菌絲長勢(shì)Fig.2 Mycelial growth vigor of the tested strains

如圖2和表3所示，菌株HSH3、HSH4菌絲長勢(shì)好，出菇后菌絲仍具較強(qiáng)生理活性。菌株HSH1菌絲長勢(shì)較差，菌袋表面不能形成白色菌膜，接種穴四周出現(xiàn)退菌現(xiàn)象。菌株HSH2菌膜較菌株HSH1稍多，但也有個(gè)別穴孔出現(xiàn)退菌現(xiàn)象。在第1潮菇出菇時(shí)菌株HSH1和HSH2的菌袋吐黃水現(xiàn)象嚴(yán)重，最后在菌袋表面形成一層褐色菌皮，不再繼續(xù)出菇。菌株HSH3和HSH4的菌絲潔白健壯，出菇三潮后菌袋表面有少量褐變；在出菇前菌袋表面白色菌膜較多，尤其是接種穴附近菌膜更多。

參試菌株子實(shí)體形態(tài)特征詳見表3和圖3。

圖3 參試菌株的出菇情況Fig.3 The fruiting presentation of the tested strains

如表3和圖3所示，菌株HSH1子實(shí)體呈黃褐色，朵型較大，分枝多；菌株HSH2菌蓋呈黑褐色，朵型較大，分枝多；菌株HSH3菌蓋呈灰褐色，朵型中等，葉片向上翹，分枝較少，柄較長；菌株HSH4菌蓋呈淺灰色，朵型較大，葉片厚而寬，葉片向下伸展，分枝較少。

由于HSH1、HSH2只出菇一潮，為統(tǒng)一統(tǒng)計(jì)標(biāo)準(zhǔn)，只統(tǒng)計(jì)第1潮菇的產(chǎn)量，詳見表4。

表4 參試菌株第1潮菇產(chǎn)量Tab.4 Production of the first flush fruiting of the tested strains

如表4所示，方差分析結(jié)果顯示，4個(gè)菌株第1潮菇平均產(chǎn)量差異顯著。其中菌株HSH3產(chǎn)量最高，為403.0 g/袋，最大單菇質(zhì)量為500.0 g；其次是菌株HSH4，為337.5 g/袋；平均產(chǎn)量最低的是菌株HSH1，僅為84.5 g/袋。

綜上所述，灰樹花層架式栽培宜選擇HSH3、HSH4兩個(gè)優(yōu)良菌株。

2.2 溫度對(duì)菌絲生理促熟的影響

不同促熟溫度對(duì)灰樹花菌株HSH4原基發(fā)育的影響情況詳見表5和圖4。

如表5和圖4所示，溫度對(duì)灰樹花原基發(fā)育的影響非常明顯，菌株HSH4適宜的條件是22℃～25℃促熟12 d。其中，菌絲滿袋后22℃～25℃弱光促熟12 d即可達(dá)到菌絲生理成熟，開始出現(xiàn)原基；25℃促熟處理下原基數(shù)量較22℃促熟處理多，菌袋表面吐黃水較少。28℃～32℃暗光培養(yǎng)7 d菌袋表面分泌黃水較多，慢慢形成黃色菌皮；28℃培養(yǎng)18天開始出現(xiàn)原基?？販靥幚?8天后，將菌袋全部移入出菇棚，按自然溫度進(jìn)行出菇管理。棚中繼續(xù)培養(yǎng)18 d后，32℃處理的菌袋開始出現(xiàn)原基，18℃處理的菌袋未見原基。

圖4 不同促熟溫度下菌株HSH4菌絲生長情況Fig.4 The myceial growth conditions of starin HSH4 under different temperature treatments

表5 不同促熟溫度下菌株HSH4的原基發(fā)育情況Tab.5 The developmental condition of strain HSH4 primordium under different temperature treatments

2.3 刺孔對(duì)灰樹花出菇的影響

刺孔對(duì)灰樹花菌株HSH4的出菇的影響情況詳見圖5～圖7。

圖5 刺孔處理后形成的原基Fig.5 Primordium formed after holing treatment

如圖5和圖7所示，箭頭指示部分為原基，可以看出刺孔出菇的方式利于灰樹花原基發(fā)育與子實(shí)體分化。發(fā)菌滿袋后刺孔，菌棒氣生菌絲較多，刺孔20天后大部分穴孔出現(xiàn)饅頭狀原基。如圖6所示，未刺孔的菌袋菌膜較厚，較難形成原基，在適當(dāng)促熟處理后在袋壁出現(xiàn)多處祥云狀凸起，沿凸起邊緣劃口促進(jìn)原基生長，但無效原基較多。如圖5所示，刺孔處理的菌袋形成的原基呈現(xiàn)球形，原基分化后外形圓整，朵型好，且出菇位置較固定。

圖6 割口處理后形成的原基Fig.6 Primordium formed after cutting treatment

圖7 刺孔處理下菌株HSH4不同時(shí)期的子實(shí)體形態(tài)Fig.7 Fruit body morphology of strain HSH4 at different stages under holing treatment

2.4 不同擺放方式比較試驗(yàn)結(jié)果

不同擺放方式對(duì)灰樹花菌株HSH4的出菇的影響情況見圖8、圖9。

圖8 地面擺放出菇Fig.8 The fruiting presentation under sigle-layer ground palcement

圖9 層架式擺放出菇Fig.9 The fruiting presentation under layer-frame placement

如圖8和圖9所示，2種出菇擺放方式均可正常出菇。單層地面擺放出菇方式因菌棒接觸地面，故受環(huán)境溫濕度變化影響較小，出菇管理相對(duì)容易；弊端是，空間利用率低，夏季高溫天氣地下害蟲較多，尤其是蛞蝓、鼠婦等害蟲會(huì)對(duì)菌絲和子實(shí)體造成危害。層架式擺放出菇方式的空間利用率高，同樣面積的出菇棚，采用層架式可擺放4層，空間利用率提高近3倍，從而提高經(jīng)濟(jì)效益；其次，由于菌棒不接觸地面，有效避免了地面害蟲危害子實(shí)體，可保證菌棒品質(zhì)。但層架式出菇需要特殊的大棚，以便控制環(huán)境溫度、濕度，較地面擺放出菇的管理更為精細(xì)。

3 討論

針對(duì)灰樹花栽培中出現(xiàn)的問題，在篩選出適應(yīng)性較好、易現(xiàn)原基的菌株HSH4基礎(chǔ)上，進(jìn)行溫度促熟試驗(yàn)、菌袋刺孔試驗(yàn)、層架式出菇管理試驗(yàn)。并對(duì)栽培過程中菌絲與子實(shí)體的生長發(fā)育進(jìn)行了觀察和記錄，發(fā)現(xiàn)在溫度為25℃條件下促熟12 d對(duì)菌絲的生理成熟最為有利；出菇時(shí)采取菌袋刺孔方式對(duì)原基發(fā)育和子實(shí)體分化最為有利；層架式擺放方式可提高空間利用率，增加經(jīng)濟(jì)效益，并且可以避免地面擺放出菇的病蟲害問題。

大部分食用菌需要經(jīng)過生理促熟才能出菇整齊、一致。陳耀武[7]、李長喜等[8]報(bào)道香菇和真姬菇均需要在菌絲滿袋后進(jìn)行生理促熟才能正常出菇。靖云閣[10]研究表明，白靈菇（Pleurotus nebrodensis）在發(fā)菌滿袋后需要在17℃的低溫條件下促熟35 d，才能達(dá)到出菇整齊一致。本試驗(yàn)中結(jié)果表明，灰樹花同樣需要合適溫度促熟才能達(dá)到出菇整齊，參試菌株HSH4發(fā)菌滿袋后在溫度為22℃～25℃暗光條件下繼續(xù)培養(yǎng)12 d效果最佳，大多數(shù)菌袋會(huì)長出原基；溫度低于18℃灰樹花菌棒很難長出原基。

浙江慶元等地灰樹花出菇多采用劃口搔菌方式催菇，這種方法對(duì)環(huán)境要求很高，菌棒現(xiàn)原基后才能移入大棚進(jìn)行出菇管理，否則不能正常形成原基，還會(huì)出現(xiàn)劃口不及時(shí)造成原基分化成畸形菇的現(xiàn)象。刺孔對(duì)食用菌出菇有重要促進(jìn)作用。伍淑樹[11]研究表明，刺孔可以解決香菇爆發(fā)出菇和不出菇問題。賀國強(qiáng)及班新河[12-13]研究表明，刺孔深度、數(shù)量多少均對(duì)香菇轉(zhuǎn)色出菇有較大影響。姜寧[14]報(bào)道二次刺孔可提高香菇菌棒轉(zhuǎn)色率和子實(shí)體產(chǎn)量。本研究中通過增加定向刺孔、穴孔朝下養(yǎng)菌環(huán)節(jié)，解決了灰樹花菌棒在出菇棚內(nèi)不能100%現(xiàn)原基及原基不能正常分化的問題，管理更加省工、高效?；覙浠▽儆诤醚跣驼婢?，在菌絲生長后期菌袋內(nèi)氧氣較少，菌絲活力相對(duì)較低。試驗(yàn)通過定向刺孔后將穴孔朝下放置，養(yǎng)菌1周左右菌棒表面可產(chǎn)生大量氣生菌絲，袋壁菌絲濃白，尤其是刺孔部位形成較多菌毛，為原基形成創(chuàng)造條件。需要注意的是，待原基分化成珊瑚狀時(shí)要立即翻轉(zhuǎn)菌棒使原基在袋子上部，通過均勻的光照保證原基分化完全、朵形圓整。

通過優(yōu)良品種篩選、出菇關(guān)鍵影響因子的研究及配套管理技術(shù)的應(yīng)用，解決了灰樹花不能100%現(xiàn)原基、原基不分化、菇形差的問題。同時(shí)，層架式栽培提高了大棚利用率和灰樹花栽培的經(jīng)濟(jì)效益，此外還解決了灰樹花覆土栽培子實(shí)體沾染泥土、連作障礙、病蟲害嚴(yán)重等問題，為灰樹花產(chǎn)業(yè)可持續(xù)發(fā)展提供技術(shù)支撐。