周琳 賈莉 孫琮 劉靜

(淄博市第一醫(yī)院婦科，山東 淄博 255200)

子宮內(nèi)膜癌(EC)是臨床常見女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤之一，流行病學(xué)調(diào)查顯示，70%～75%的EC發(fā)生于絕經(jīng)后女性，高發(fā)年齡為75～79歲〔1～4〕。臨床研究表明，年齡是EC患者預(yù)后的重要影響因素，與中青年患者相比，老年患者復(fù)發(fā)率、死亡率明顯升高〔5〕。近年來，隨著醫(yī)療技術(shù)不斷改進(jìn)，老年EC患者生存時(shí)間相對延長，但淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)仍居高不下，需給予重視〔6,7〕。富半胱氨酸(Cyr)61是一種參與血管性病變、腫瘤發(fā)生發(fā)展的重要因子〔8〕。纖溶酶原激活物抑制劑(PAI)-1具有多種生物學(xué)功能，可加快腫瘤細(xì)胞黏附、遷移及侵襲過程〔9〕。miR-155在EC患者血清與組織中呈高表達(dá)狀態(tài)〔10〕。但鮮有報(bào)道Cyr61、PAI-1、miR-155在老年EC患者中的聯(lián)合檢測價(jià)值。基于此，本研究嘗試分析Cyr61、PAI-1、miR-155對老年EC診斷及評估復(fù)發(fā)的應(yīng)用價(jià)值，旨在為臨床提供循證依據(jù)。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取淄博市第一醫(yī)院2017年3月至2019年3月收治的老年EC患者108例作為觀察組，年齡60～81歲，平均(72.14±3.81)歲，體重指數(shù)(BMI)17.5～25 kg/m2，平均(21.47±1.54)kg/m2。另選取同期子宮內(nèi)膜增生患者105例作為對照1組，年齡60～80歲，平均(71.83±4.05)歲，BMI 18～25 kg/m2，平均BMI(21.63±1.61)kg/m2。健康體檢者105例作為對照2組，年齡60～79歲，平均(71.62±3.65)歲，BMI 17.0～25.5 kg/m2，平均(21.70±1.74)kg/m2。兩組一般資料相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，有可比性，且本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會審批通過。

1.2選取標(biāo)準(zhǔn) 納入標(biāo)準(zhǔn)：觀察組均經(jīng)宮腔鏡及病理學(xué)檢查證實(shí)為EC，且符合《子宮內(nèi)膜癌診斷與治療指南(第四版)》中EC相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)〔11〕，均為首次確診；對照1組均確診為子宮內(nèi)膜增生，且經(jīng)術(shù)后病理檢查證實(shí)；對照1組體檢各項(xiàng)指標(biāo)顯示正常；3組臨床資料完整，且均自愿簽訂知情同意書。

排除標(biāo)準(zhǔn)：伴有嚴(yán)重肝腎等重要臟器功能不全者；合并其他良惡性腫瘤者；參與本研究前接受放化療、免疫治療等相關(guān)抗腫瘤治療者；存在嚴(yán)重感染者；觀察組無法進(jìn)行隨訪者。

1.3方法 檢測方法：于各組入院次日、觀察組隨訪1年復(fù)查當(dāng)日采集清晨空腹靜脈血5 ml，離心處理，離心速率為3 000 r/min，離心時(shí)間為15 min，取上清液，保存于-70℃恒溫冰箱內(nèi)待檢。采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測血清Cyr61、PAI-1水平，試劑盒購自美國貝克曼庫爾特公司；采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(RT-PCR)法檢測miR-155水平，提取血清總RNA，逆轉(zhuǎn)錄，獲取cDNA，實(shí)施RT-PCR，上游引物為miR-155對應(yīng)引物，下游引物為PCR試劑盒通用引物，以U6為內(nèi)參計(jì)算miR-155表達(dá)水平，試劑盒購自賽默飛世爾科技(中國)有限公司；采用放射免疫法檢測腫瘤標(biāo)志物〔糖類抗原(CA)125、癌胚抗原(CEA)、CA199〕水平，試劑盒購自美國R&D公司，所有操作步驟嚴(yán)格遵循試劑盒說明書。

治療方法：觀察組均根據(jù)患者臨床分期、病理類型及病情狀況給予合理化治療，包括手術(shù)、放化療等抗腫瘤治療方案。并隨訪1年，統(tǒng)計(jì)復(fù)發(fā)情況。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS22.0軟件進(jìn)行t檢驗(yàn)、χ2檢驗(yàn)，符合正態(tài)分布且方差齊的計(jì)量資料相關(guān)性以Pearson分析，不符合正態(tài)分布或方差不齊的計(jì)量與計(jì)數(shù)資料相關(guān)性以Spearman分析，以受試者工作特征(ROC)曲線評價(jià)診斷價(jià)值，并進(jìn)行多元線性逐步回歸分析。

2 結(jié) 果

2.13組血清Cyr61、PAI-1、miR-155水平 觀察組血清Cyr61、PAI-1、miR-155水平顯著高于對照1組、對照2組(P<0.05)，對照1組Cyr61、miR-155顯著高于對照2組(P<0.05)。見表1。

表1 3組血清Cyr61、PAI-1、miR-155水平比較

2.2血清Cyr61、PAI-1、miR-155對子宮內(nèi)膜良惡性病變的鑒別診斷價(jià)值 根據(jù)血清Cyr61、PAI-1、miR-155水平繪制ROC曲線，Cyr61單獨(dú)診斷AUC為0.817，95%CI為0.758～0.866，Z=10.964，P<0.001，當(dāng)截?cái)嘀?217.76 μg/L時(shí)，診斷敏感度為65.74%，特異度為83.81%；PAI-1單獨(dú)診斷AUC為0.775，95%CI為0.713～0.829，Z=8.699，P<0.001，當(dāng)截?cái)嘀?14.91 μg/L時(shí)，診斷敏感度為58.33%，特異度為83.81%；miR-155單獨(dú)診斷AUC為0.739，95%CI為0.674～0.797，Z=7.102，P<0.001，當(dāng)截?cái)嘀?5.81時(shí)，診斷敏感度為53.70%，特異度為83.81%；三者聯(lián)合診斷AUC為0.898，95%CI為0.850～0.936，Z=19.524，P<0.001，診斷敏感度為77.78%，特異度為84.76%，見圖1。

圖1 血清Cyr61、PAI-1、miR-155對 子宮內(nèi)膜良惡性病變的鑒別診斷價(jià)值

2.3觀察組不同臨床特征患者血清Cyr61、PAI-1、miR-155水平 觀察組不同年齡、病理類型患者血清Cyr61、PAI-1、miR-155水平相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；不同臨床分期、分化程度、肌層浸潤、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者血清Cyr61、PAI-1、miR-155水平相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表2。

2.4血清Cyr61、PAI-1、miR-155與臨床特征的關(guān)系 Spearman相關(guān)性分析，血清Cyr61、PAI-1、miR-155與臨床分期、肌層浸潤、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)(P<0.001)，與分化程度呈負(fù)相關(guān)(P<0.001)，見表3。

表2 觀察組不同臨床特征患者血清Cyr61、PAI-1、miR-155水平比較

表3 血清Cyr61、PAI-1、miR-155與臨床特征的關(guān)系

2.5復(fù)發(fā)與未復(fù)發(fā)患者血清Cyr61、PAI-1、miR-155及腫瘤標(biāo)志物水平 隨訪1年，失訪2例，死亡5例。復(fù)發(fā)患者血清Cyr61、PAI-1、miR-155、CA125、CEA、CA199水平均顯著高于未復(fù)發(fā)患者(P<0.05)，見表4。

2.6血清Cyr61、PAI-1、miR-155與腫瘤標(biāo)志物相關(guān)性 血清Cyr61(r=0.477、0.681、0.850)、PAI-1(r=0.578、0.752、0.777)、miR-155(r=0.691、0.654、0.608)與CA125、CEA、CA199呈正相關(guān)(P<0.05)，見圖2。

表4 復(fù)發(fā)與未復(fù)發(fā)患者血清Cyr61、PAI-1、miR-155及腫瘤標(biāo)志物水平比較

圖2 血清Cyr61、PAI-1、miR-155與腫瘤標(biāo)志物相關(guān)性

2.7多元線性逐步回歸分析 多元線性逐步回歸分析，將腫瘤標(biāo)志物、臨床分期、分化程度、肌層浸潤、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等其他因素控制后，血清Cyr61、PAI-1、miR-155仍與復(fù)發(fā)顯著相關(guān)(P<0.05)，見表5。

表5 多元線性逐步回歸分析

3 討 論

2018年美國國立綜合癌癥網(wǎng)絡(luò)(NCCN)EC臨床實(shí)踐指南中，將年齡>60歲作為EC高危因素之一〔12〕。老年EC患者通常預(yù)后較差，需及早診斷、及時(shí)治療，以改善預(yù)后，降低復(fù)發(fā)與遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)，延長生存期〔13，14〕。

Cyr61是即刻早反應(yīng)基因(CCN)家族的重要成員之一，主要生物學(xué)功能為參與腫瘤新生血管形成、調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖、促進(jìn)腫瘤細(xì)胞遷移〔15〕。PAI-1屬于絲氨酸蛋白酶抑制因子家族，與腫瘤細(xì)胞生長、轉(zhuǎn)移、血管新生密切相關(guān)〔16〕。臨床證實(shí)，miRNA對多種靶基因具有調(diào)節(jié)作用，參與細(xì)胞生物學(xué)功能，加快惡性腫瘤發(fā)生與進(jìn)展〔17〕。其中，miR-155被發(fā)現(xiàn)與多種惡性腫瘤發(fā)生發(fā)展有緊密聯(lián)系〔18〕。本研究發(fā)現(xiàn)Cyr61、PAI-1、miR-155可能參與老年EC發(fā)生過程。其中，Cyr61在惡性腫瘤中參與多種信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，可上調(diào)、結(jié)合細(xì)胞膜上配體，強(qiáng)化整聯(lián)蛋白耦聯(lián)激酶活性，激活Wnt/13-catenin信號通路，從而加速EC發(fā)生〔19〕。PAI-1可誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞在細(xì)胞內(nèi)攝取復(fù)合物，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞生長、增殖，參與惡性腫瘤發(fā)生過程〔20〕。miR-155則可通過靶向抑制轉(zhuǎn)化生長因子β激活，負(fù)調(diào)控干擾素產(chǎn)物，避免漿細(xì)胞樣樹突細(xì)胞對Toll樣受體產(chǎn)生刺激過反應(yīng)，發(fā)揮抗凋亡作用，有利于腫瘤細(xì)胞生長，加快惡性腫瘤發(fā)生〔21〕。故三者均能加速腫瘤疾病發(fā)生。同時(shí)，陳玉芬等〔22〕報(bào)道顯示，血清miR-155在EC患者中具有良好診斷價(jià)值。本研究初次采用ROC曲線發(fā)現(xiàn)血清Cyr61、PAI-1、miR-155聯(lián)合檢測具有可靠輔助診斷價(jià)值，明顯優(yōu)于三者單獨(dú)檢測。故臨床可同時(shí)檢測上述指標(biāo)血清水平有利于及早確診，為把握治療時(shí)機(jī)創(chuàng)造良好條件。

本研究發(fā)現(xiàn)Cyr61、PAI-1、miR-155可能在老年EC病情進(jìn)展中發(fā)揮重要作用。推測原因，Cyr61能加快腫瘤新生血管形成，上調(diào)血管內(nèi)皮生長因子及其受體表達(dá)，促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖，激活下游靶基因，從而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖、侵襲〔23〕。有文獻(xiàn)表明，PAI-1可經(jīng)由細(xì)胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑加速腫瘤細(xì)胞遷移、增殖，還可與低密度脂蛋白受體相互作用，間接刺激JaK/STAT信號通路活化，增加腫瘤細(xì)胞移行，從而為肌層浸潤、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移提供有利條件，最終促進(jìn)腫瘤病情進(jìn)展〔24，25〕。另有研究證實(shí)，miR-155高表達(dá)的腫瘤細(xì)胞具有較強(qiáng)抗凋亡、增殖、侵襲、遷移能力，其表達(dá)水平越高，腫瘤細(xì)胞異常增殖、侵襲與轉(zhuǎn)移進(jìn)程越快〔26，27〕。故三者對老年EC病情進(jìn)展產(chǎn)生重要影響。

此外，許晶〔28〕認(rèn)為，PAI-1高表達(dá)與腫瘤不良預(yù)后顯著相關(guān)。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，血清Cyr61、PAI-1、miR-155不僅與常規(guī)腫瘤標(biāo)志物密切相關(guān)，還可能通過上調(diào)表達(dá)參與EC復(fù)發(fā)過程，增加預(yù)后不良風(fēng)險(xiǎn)，主要與三者能從不同方面、不同途徑調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞、新生血管等作用機(jī)制有關(guān)。故臨床檢測血清Cyr61、PAI-1、miR-155水平還能為臨床評估復(fù)發(fā)及預(yù)后提供有效信息，具有重要應(yīng)用價(jià)值。但本研究選取樣本量較少，且未考慮檢測方法對指標(biāo)水平的影響，需進(jìn)一步采取大規(guī)模、多中心研究，以獲取更可靠的數(shù)據(jù)支持。

綜上可知，血清Cyr61、PAI-1、miR-155聯(lián)合檢測對老年EC具有可靠輔助診斷價(jià)值，且與臨床分期、肌層浸潤、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度及腫瘤標(biāo)志物密切相關(guān)，還有助于為臨床評估復(fù)發(fā)提供參考依據(jù)。