李世明，胡燕杰，張麗

(內(nèi)蒙古維克生生物技術(shù)股份有限公司，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010109)

近些年來(lái)，隨著各類(lèi)動(dòng)物疾病的發(fā)病率不斷提高，諸如禽流感、布氏桿菌病、口蹄疫、非洲豬瘟等疫病，這對(duì)動(dòng)物的健康構(gòu)成了嚴(yán)重威脅，在此背景下，也使畜牧業(yè)受到不小的經(jīng)濟(jì)損失。因此，加強(qiáng)對(duì)動(dòng)物重大疫病的預(yù)防和管控已經(jīng)勢(shì)在必行，制備相應(yīng)的動(dòng)物血清屬于開(kāi)展實(shí)驗(yàn)室診斷的基礎(chǔ)，以新生牛血清為例，其屬于動(dòng)物疫苗生產(chǎn)期間細(xì)胞培養(yǎng)基中的重要成分，只有添加相應(yīng)比例的血清成分，才能夠?yàn)榧?xì)胞生長(zhǎng)提供所需的激素及生長(zhǎng)因子[1]。現(xiàn)階段，市場(chǎng)上使用的新生牛血清產(chǎn)品較為繁多，總體上具有質(zhì)量差異大、來(lái)源廣泛、檢驗(yàn)方式落后等問(wèn)題，對(duì)后續(xù)動(dòng)物疫苗的生產(chǎn)帶來(lái)不利影響，這也導(dǎo)致新生牛血清的應(yīng)用效果、動(dòng)物來(lái)源的安全性存在隱患。因此，探討強(qiáng)化對(duì)動(dòng)物血清制備的質(zhì)量控制極為關(guān)鍵。

1 新生牛血清質(zhì)量的重要性分析

牛血清采自新鮮的牛血液，在經(jīng)過(guò)自然層析、離心后可得到去除了血細(xì)胞、纖維蛋白的淡黃色透明的上清液。上清液的這種制作方式主要目的是提供基本營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、激素和各種生長(zhǎng)因子、結(jié)合蛋白、促接觸和伸展因子，使細(xì)胞貼壁免受機(jī)械損傷，對(duì)培養(yǎng)中的細(xì)胞起到某些保護(hù)作用。牛血清屬于一種淺黃色澄清、無(wú)溶血、無(wú)異物，稍黏稠的液體，含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長(zhǎng)因子、激素、無(wú)機(jī)物等，這些物質(zhì)對(duì)促進(jìn)細(xì)胞的生長(zhǎng)或抑制生長(zhǎng)活性起到生理平衡作用。在進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，必須確保新生牛血清的質(zhì)量，基于牛血清的相關(guān)成分，要明確其對(duì)細(xì)胞所產(chǎn)生的影響。其中，結(jié)合動(dòng)物血清的應(yīng)用狀況，以新生牛血清較為常見(jiàn)，它可以在組織培養(yǎng)、細(xì)胞培養(yǎng)中發(fā)揮重要作用[2]。

在醫(yī)學(xué)科學(xué)研究不斷進(jìn)步的前提下，對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)所用的血清質(zhì)量提出了更為嚴(yán)格的要求，實(shí)踐階段更加重視相應(yīng)材料的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，遵循《中華人民共和國(guó)藥典》通則3604 新生牛血清檢測(cè)要求。在對(duì)新生牛血清檢測(cè)期間，要關(guān)注pH、滲透壓、摩爾濃度、蛋白質(zhì)含量、血紅蛋白、細(xì)菌內(nèi)毒素等方面的檢查，基于《中華人民共和國(guó)獸藥典》(簡(jiǎn)稱《中國(guó)獸藥典》)中“新生牛血清”規(guī)定，pH 在7.00～8.50、滲透壓在250～330 mOsmol/kg、總蛋白含量在35～50 g/L、血紅蛋白≤200 mg/L、內(nèi)毒素≤10 EU/mL；在實(shí)施無(wú)菌檢測(cè)、支原體檢測(cè)時(shí)，需滿足陰性標(biāo)準(zhǔn)；執(zhí)行病毒檢測(cè)時(shí)，不得檢出牛病毒性腹瀉病毒(bovine viral diarrhea virus，BVDV)、牛腺病毒(bovine adenovrus，BAV)、牛細(xì)小病毒(bovine parvovirus，BPV)、牛副流感病毒3 型(bovine parainfluenza virus type 3，BPIV3)、牛呼腸病毒(bovine reoviruses，BReV)、牛輪狀病毒(bovine rotavirus，BRV)[3]。此外，新生牛血清能夠?yàn)榧?xì)胞增殖提供養(yǎng)分，在診斷試劑方面也有用武之地，例如，針對(duì)近些年來(lái)出現(xiàn)的非洲豬瘟病毒、新型冠狀病毒等，可以為對(duì)應(yīng)病毒的各類(lèi)體外診斷試劑盒生產(chǎn)提供幫助。需要注意的是，針對(duì)國(guó)內(nèi)外牛血清的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，在實(shí)際應(yīng)用期間存在差異，國(guó)內(nèi)外牛血清質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)對(duì)比見(jiàn)表1。

2 動(dòng)物疫苗生產(chǎn)用的新生牛血清管理時(shí)出現(xiàn)的問(wèn)題

基于“全國(guó)新生牛血清質(zhì)量管理研討會(huì)”的會(huì)議精神，相關(guān)管理部門(mén)明確了我國(guó)牛血清生產(chǎn)企業(yè)的現(xiàn)狀和未來(lái)的發(fā)展要求，并對(duì)《全國(guó)牛血清生產(chǎn)企業(yè)達(dá)標(biāo)檢查手冊(cè)》進(jìn)行修訂。調(diào)查發(fā)現(xiàn)，當(dāng)前市場(chǎng)上應(yīng)用到的新生牛血清來(lái)源并不固定，質(zhì)量也處于參差不齊的狀態(tài)，加上不同批次的質(zhì)量、檢測(cè)方法等存在明顯的差異，均會(huì)對(duì)動(dòng)物疫苗的生產(chǎn)質(zhì)量帶來(lái)嚴(yán)重影響[4]。在較為嚴(yán)重的情況下，甚至?xí)捎诋a(chǎn)品污染、質(zhì)量不佳而導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)不合格，會(huì)極大程度上增加生產(chǎn)成本，對(duì)動(dòng)物疫苗質(zhì)量構(gòu)成威脅。因此，有效控制新生牛血清的質(zhì)量、保證應(yīng)用效果已經(jīng)成為解決動(dòng)物疫苗安全問(wèn)題的關(guān)鍵。

2.1 新生牛血清的來(lái)源廣泛且質(zhì)量差異大

結(jié)合應(yīng)用狀況，發(fā)現(xiàn)現(xiàn)階段使用的新生牛血清主要來(lái)自農(nóng)場(chǎng)或者奶牛場(chǎng)淘汰的公牛牛犢，受限于地域環(huán)境、采集時(shí)間、采集方法等，最終獲得的新生牛血清質(zhì)量存在較大差別[5]。即使是同一農(nóng)場(chǎng)，每頭牛的健康狀況也并不相同，在缺乏健康診斷及健康追溯的條件下，難以保證新生牛血清的質(zhì)量。此外，針對(duì)新生牛血清供應(yīng)、采集多應(yīng)用“初制血清”，對(duì)應(yīng)的地點(diǎn)、范圍并不固定，這在某種程度上表明國(guó)家監(jiān)管部門(mén)很難對(duì)其實(shí)施統(tǒng)一化管理，增大了血清采集規(guī)范化執(zhí)行的難度。另外，新生牛血清原料的供應(yīng)商整體上暴露出雜、亂、差的特點(diǎn)，并且缺乏嚴(yán)謹(jǐn)?shù)馁|(zhì)量控制、監(jiān)測(cè)等作為支持，加上生產(chǎn)人員技術(shù)能力不足、設(shè)備配置簡(jiǎn)單等，均會(huì)對(duì)質(zhì)量控制造成負(fù)面干擾。

2.2 新生牛血清的生產(chǎn)質(zhì)量控制難度較大

第一，生產(chǎn)方式落后且操作不規(guī)范。整個(gè)過(guò)程較為粗放，所用設(shè)施設(shè)備較為簡(jiǎn)單，也難以保證該區(qū)域環(huán)境的整潔度。即使在采用自動(dòng)灌裝的條件下，也可能導(dǎo)致新生牛血清被微生物所污染。第二，新生牛血清的批次差異大。由于其采集源頭較為廣泛，并且獲得的血清成分明顯存在差別，不同批次甚至是相同批次的血清所具有的特征也具有誤差，其最終能夠維持或促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)的效果存在差異。有時(shí)，生產(chǎn)廠家為了提高利潤(rùn)，可能會(huì)將不同批次的血清簡(jiǎn)單混合，這也會(huì)呈現(xiàn)出血清質(zhì)量存在明顯差異的狀況，增大了對(duì)動(dòng)物疫苗生產(chǎn)質(zhì)量控制的難度。第三，有關(guān)新生牛血清質(zhì)量檢驗(yàn)項(xiàng)目并不完善。針對(duì)牛血清供應(yīng)的廠家而言，其中不乏有小型企業(yè)，這些企業(yè)沒(méi)有過(guò)硬的實(shí)力，配備的檢測(cè)設(shè)備并不完善，且很難控制新生牛血清的源頭質(zhì)量。第四，傳染源的檢測(cè)手段相對(duì)落后。由于對(duì)傳染源的檢測(cè)方式偏于落后，導(dǎo)致牛血清的供應(yīng)商很難及時(shí)診斷出血清中是否存在相關(guān)的病毒性抗體，這也對(duì)后期動(dòng)物疫苗生產(chǎn)帶來(lái)隱患。第五，偶然存在的造假情況。在涉及到經(jīng)濟(jì)效益時(shí)，有些商家為了降低對(duì)應(yīng)的生產(chǎn)成本，不惜采用以次充好的手段，這也明顯降低了新生牛血清的質(zhì)量。同時(shí)，在實(shí)際使用期間，還可能存在相應(yīng)標(biāo)簽和質(zhì)量不符合的狀況。

2.3 使用新生牛血清時(shí)缺乏對(duì)供應(yīng)商進(jìn)行管理與檢測(cè)

第一，在采購(gòu)新生牛血清時(shí)，部分企業(yè)更加注重從價(jià)格的低廉性出發(fā)，通常會(huì)對(duì)質(zhì)量有所忽視。涉及到對(duì)供應(yīng)商的檢測(cè)與控制時(shí)，主要停留在早期階段的物料檢驗(yàn)過(guò)程，未曾對(duì)生產(chǎn)期間的質(zhì)量加以控制。在具體實(shí)踐期間，很難及時(shí)、精確地掌握對(duì)應(yīng)廠家的血清采集過(guò)程，甚至包括源頭、生產(chǎn)質(zhì)量監(jiān)測(cè)都未曾進(jìn)行了解與監(jiān)督，對(duì)相關(guān)物料的質(zhì)量管理表現(xiàn)為被動(dòng)性特點(diǎn)[6]。第二，當(dāng)前企業(yè)會(huì)按照《中華人民共和國(guó)生物制品原輔料質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)規(guī)程》來(lái)執(zhí)行，但涉及到的對(duì)應(yīng)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)屬于質(zhì)控的最低標(biāo)準(zhǔn)，如果企業(yè)直接將其視作依據(jù)，就可能會(huì)出現(xiàn)新生牛血清管理質(zhì)量不嚴(yán)格的問(wèn)題，這也反映出企業(yè)可能存在缺乏完善性內(nèi)控質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的情況。第三，部分新生牛血清的檢測(cè)周期較長(zhǎng)，有關(guān)檢測(cè)項(xiàng)目較為復(fù)雜，導(dǎo)致成本偏高。因此，企業(yè)為了降低所需費(fèi)用，就可能會(huì)故意減少需檢測(cè)的項(xiàng)目，在此條件下，就難以滿足檢測(cè)的完善性需求，無(wú)法對(duì)關(guān)鍵環(huán)節(jié)實(shí)施嚴(yán)密把控。

3 動(dòng)物疫苗生產(chǎn)用的新生牛血清管理策略

3.1 提升行業(yè)監(jiān)管力度，保證新生牛血清的生產(chǎn)、銷(xiāo)售及使用均滿足規(guī)范

在具體操作中，需要加強(qiáng)對(duì)新生牛血清的生產(chǎn)管理，從系統(tǒng)化、規(guī)范化建設(shè)方面出發(fā)，保證監(jiān)管控制的合理性與有效性。同時(shí)，維持好新生牛血清市場(chǎng)，在經(jīng)過(guò)全面檢查且滿足最終的資格條件后，才能向其發(fā)放對(duì)應(yīng)的資格認(rèn)證書(shū)。最終，生產(chǎn)新生牛血清的廠家只有獲得相應(yīng)的生產(chǎn)許可證、產(chǎn)品文號(hào)以后才有資格實(shí)施對(duì)新生牛血清的采集、生產(chǎn)與銷(xiāo)售。

3.2 積極提高對(duì)新生牛血清采集源頭的質(zhì)量管控

從源頭層面出發(fā)，重視對(duì)新生牛血清采集源頭的控制，對(duì)采集地點(diǎn)、范圍等予以確定，并按照相應(yīng)法律法規(guī)要求，確保該采集區(qū)已經(jīng)過(guò)獸藥監(jiān)管部門(mén)的登記與審核，并滿足批準(zhǔn)采集實(shí)施條件。同時(shí)，在對(duì)新生牛犢進(jìn)行血清采集前，還需要經(jīng)過(guò)健康統(tǒng)計(jì)與追溯調(diào)查，結(jié)合專(zhuān)業(yè)獸醫(yī)實(shí)施衛(wèi)生檢疫的結(jié)果，最終判斷其是否滿足條件。只有上述條件均滿足，并經(jīng)過(guò)完善化的檢疫流程、獲得相應(yīng)的檢測(cè)結(jié)果后，才具備提供新生牛血清的條件。

3.3 嚴(yán)格落實(shí)新生牛血清的質(zhì)量管理控制標(biāo)準(zhǔn)

研究發(fā)現(xiàn)，針對(duì)生產(chǎn)新生牛血清的廠家依舊存在未曾準(zhǔn)確執(zhí)行新生牛血清質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)的情況，在具體操作過(guò)程中，為了盡可能降低成本，有時(shí)甚至可能省略部分項(xiàng)目的檢查，這必然會(huì)增加新生牛血清質(zhì)量安全風(fēng)險(xiǎn)。因此，為了避免上述現(xiàn)象的發(fā)生，需要加強(qiáng)對(duì)其質(zhì)量的監(jiān)督，并制定出明確的處罰規(guī)定。在執(zhí)行期間，以《中國(guó)生物制品規(guī)程》《中國(guó)生物制品主要原輔材料質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)》為依據(jù)，加強(qiáng)對(duì)新生牛血清的質(zhì)量管控。從國(guó)家層面出發(fā)，則應(yīng)提升行業(yè)的監(jiān)管力度，嚴(yán)格按照操作規(guī)范去落實(shí)對(duì)新生牛血清生產(chǎn)過(guò)程的監(jiān)督與檢測(cè)。此外，在對(duì)新生牛血清展開(kāi)研究時(shí)，要從其血清成分、是否存在病毒等方面出發(fā)，保證研究過(guò)程更為深入，不斷提升新生牛血清的質(zhì)量，使其滿足國(guó)家質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)要求。根據(jù)國(guó)內(nèi)牛血清的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，依據(jù)《中華人民共和國(guó)藥典》三部(2020 版)通則(3604 新生牛血清檢測(cè)要求)，對(duì)胎牛血清質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)主要參考第九版《歐洲藥典》(EP 9.0)和《美國(guó)藥典》(USP 40)胎牛血清相關(guān)規(guī)定。在對(duì)牛血清進(jìn)行檢測(cè)期間，包括以下項(xiàng)目：①理化檢測(cè)；②微生物檢測(cè)(細(xì)菌、真菌、支原體、噬菌體)；③病毒檢測(cè)；④細(xì)胞增殖檢測(cè)，保障血清品質(zhì)[7]。以牛血清中的常見(jiàn)病毒為例，其檢測(cè)項(xiàng)目見(jiàn)表2。

3.4 科學(xué)構(gòu)建供應(yīng)商審核機(jī)制、規(guī)范對(duì)血清供應(yīng)商的質(zhì)量管控

對(duì)使用新生牛血清的企業(yè)而言，則結(jié)合企業(yè)實(shí)際情況，科學(xué)建立起更為嚴(yán)格的供應(yīng)商管理機(jī)制，確保在選擇新生牛血清時(shí)做到有據(jù)可依。第一，在選擇和確定新生牛血清供應(yīng)商時(shí)，要確保物料采購(gòu)、生產(chǎn)部門(mén)、質(zhì)量管理部門(mén)人員共同參與，完成篩選與審核。在對(duì)血清供應(yīng)商進(jìn)行審查時(shí)，從企業(yè)的生產(chǎn)能力、質(zhì)量管理、人員配置、物料管理等多方面出發(fā)，保證該供應(yīng)商足夠可靠且具備相關(guān)資質(zhì)，并盡可能與之建立起長(zhǎng)久性的合作關(guān)系。第二，在確定好供應(yīng)商后，還需提前對(duì)相關(guān)樣品實(shí)施檢驗(yàn)和試用。通常來(lái)講，企業(yè)可向新生牛血清生產(chǎn)廠家獲取不同批次的樣品，用以檢驗(yàn)上述血清是否滿足質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，并依據(jù)最終的試用結(jié)果決定是否采購(gòu)。第三，使用企業(yè)可優(yōu)先向牛血清供應(yīng)商提供自身所需標(biāo)準(zhǔn)，正常狀態(tài)下，企業(yè)自身使用的牛血清質(zhì)量甚至要超過(guò)國(guó)家規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)，為了保證生產(chǎn)出來(lái)的新生牛血清滿足使用要求，應(yīng)控制檢測(cè)、包裝儲(chǔ)存、運(yùn)轉(zhuǎn)等各個(gè)流程的質(zhì)量，積極消除生產(chǎn)及運(yùn)送過(guò)程中存在的隱患。第四，對(duì)新生牛血清的生產(chǎn)廠家實(shí)施定期或者不定期的檢查，通過(guò)前往現(xiàn)場(chǎng)對(duì)工作環(huán)境進(jìn)行監(jiān)督考察，了解生產(chǎn)企業(yè)的質(zhì)量保障體系，觀察生產(chǎn)記錄、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)是否按照規(guī)范執(zhí)行，掌握客戶反饋意見(jiàn)的處理結(jié)果，并結(jié)合上述內(nèi)容予以綜合性評(píng)估，以便實(shí)現(xiàn)優(yōu)選供應(yīng)商、確定合理的采購(gòu)比例。

3.5 建立健全血清質(zhì)量監(jiān)測(cè)項(xiàng)目、保證檢驗(yàn)流程的完善性

為了確保供動(dòng)物疫苗生產(chǎn)所用的新生牛血清能夠滿足標(biāo)準(zhǔn)，要積極建立健全的血清質(zhì)量監(jiān)測(cè)項(xiàng)目，在操作期間嚴(yán)格遵從獸藥GMP 的相關(guān)規(guī)定，確保隨機(jī)抽樣達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)[8]。另外，從企業(yè)內(nèi)部而言，還應(yīng)當(dāng)建立起內(nèi)控質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，保證各檢測(cè)項(xiàng)目足夠完善。基于新生牛血清的檢驗(yàn)，主要涉及到蛋白質(zhì)含量、支原體、大腸桿菌等方面的檢測(cè)，并確保其擁有支持細(xì)胞增殖的能力。針對(duì)上述不同項(xiàng)目，可按照隨機(jī)抽樣方法分別檢查，不斷提高檢測(cè)水平并確保檢驗(yàn)的規(guī)范性。此外，針對(duì)已放置一定時(shí)間的新生牛血清，在使用前通常要進(jìn)行綜合性判斷，例如，先從外觀來(lái)判斷是否出現(xiàn)較多沉淀、血清過(guò)于渾濁等情況，若存在上述情況就應(yīng)舍棄。若外觀檢測(cè)沒(méi)有問(wèn)題，則還需要實(shí)施蛋白質(zhì)變性檢測(cè)、振蕩后觀察液體變化等，有效確保檢驗(yàn)流程的完善性，為動(dòng)物疫苗生產(chǎn)提供安全支持。

4 結(jié)語(yǔ)

綜上所述，在明確新生牛血清的重要性后，為了強(qiáng)化其質(zhì)量控制，可以采用提升行業(yè)監(jiān)管力度，保證新生牛血清的生產(chǎn)、銷(xiāo)售及使用均能夠滿足規(guī)范，積極提高對(duì)新生牛血清采集源頭的質(zhì)量管控，嚴(yán)格落實(shí)新生牛血清的質(zhì)量管理控制標(biāo)準(zhǔn)，科學(xué)構(gòu)建供應(yīng)商審核機(jī)制、規(guī)范對(duì)血清供應(yīng)商的質(zhì)量管控，建立健全的血清質(zhì)量監(jiān)測(cè)項(xiàng)目、保證檢驗(yàn)流程的完善性等方法，充分確保新生牛血清質(zhì)量滿足要求，為動(dòng)物疫苗生產(chǎn)帶來(lái)幫助。