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        Gene Xpert MTB/RIF在川東某醫(yī)院結(jié)核病早期診斷中的應(yīng)用價(jià)值分析

        2022-09-29 07:00:46劉家瑞
        當(dāng)代醫(yī)藥論叢 2022年18期
        關(guān)鍵詞:染色法抗酸利福平

        王 翠,王 芬,劉家瑞

        (遂寧市中心醫(yī)院,四川 遂寧 629000)

        結(jié)核分枝桿菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)是引起結(jié)核?。═uberculosis,TB)的病原菌,最適于在人體血供充足、含氧量高的器官/ 組織內(nèi)生長,因此以肺部TB 最為常見。我國TB 患者的數(shù)量居全球第二位,僅次于印度[1]。世界衛(wèi)生組織TB 報(bào)告顯示,全球每年約有1040 萬新發(fā)TB 病例,但由于目前TB 實(shí)驗(yàn)室檢測方法仍為敏感性差、耗時(shí)長的抗酸染色法和固體/ 液體培養(yǎng)法,因此被明確診斷的TB 患者不足60%[2]。尋找一種新的、可對早期感染病例進(jìn)行高效、快速診斷的方法,對于提高TB 的診斷率、降低誤診率、控制TB 的播散具有重要意義。Gene Xpert MTB/RIF 技術(shù)可在120 min 內(nèi)同時(shí)檢測MTB 及利福平的耐藥性,具有快速、操作方便、生物安全要求相對低、交叉污染少等優(yōu)點(diǎn)[3]。本研究將Gene Xpert MTB/RIF 技術(shù)與抗酸染色法、固體培養(yǎng)法、熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)法進(jìn)行比較,評價(jià)Gene Xpert MTB/RIF 技術(shù)對TB 的診斷價(jià)值,為該技術(shù)在川東地區(qū)基層醫(yī)院的推廣應(yīng)用提供參考。

        1 材料與方法

        1.1 標(biāo)本來源

        收集2020 年3 月至2021 年2 月遂寧市中心醫(yī)院收治的疑似TB 患者送檢的標(biāo)本(肺泡灌洗液標(biāo)本或痰液標(biāo)本)368 份。每一份標(biāo)本均采用抗酸染色法、熒光定量PCR 法、Gene Xpert MTB/RIF 技術(shù)、固體培養(yǎng)法四種方法進(jìn)行檢測,陽性菌株送遂寧市疾控中心進(jìn)行菌種鑒定和比例法藥敏試驗(yàn)。

        1.2 檢測方法

        1.2.1 抗酸染色法 對痰涂片/ 肺泡灌洗液涂片進(jìn)行抗酸染色,并報(bào)告結(jié)果:1+、2+、3+、4+或陰性[4]。

        1.2.2 熒光定量PCR 法 標(biāo)本充分液化后提取核酸,最后置于實(shí)時(shí)熒光定量PCR 儀中進(jìn)行檢測。

        1.2.3 固體培養(yǎng)及比例法藥敏試驗(yàn) 取0.1 mL 液化后的標(biāo)本接種至中性羅氏培養(yǎng)基上(每一標(biāo)本均同時(shí)接種2 管),置于37 ℃孵箱中培養(yǎng),分別于接種第3 天和第7 天觀察菌落的生長情況,此后每周觀察一次直至第8 周。每次觀察均記錄菌落的生長及污染情況。將培養(yǎng)結(jié)果呈陽性的菌株送至遂寧市疾病預(yù)防控制中心進(jìn)行菌種鑒定并按照《結(jié)核病實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)規(guī)程》[5]進(jìn)行比例法藥敏試驗(yàn),檢測藥物為利福平、異煙肼、乙胺丁醇、鏈霉素、氧氟沙星和卡那霉素。

        1.2.4 Gene Xpert MTB/RIF 檢測 取2 mL 液化后的混合液,緩慢加入檢測匣,加樣過程中避免產(chǎn)生氣泡。將檢測匣放入檢測模塊進(jìn)行檢測,2 h 后讀取結(jié)果。Gene Xpert MTB/RIF 對MTB 的檢測結(jié)果可根據(jù)探針的Ct值判斷,5 個(gè)探針中至少有2 個(gè)探針的Ct值≤38 即為檢測到MTB,Ct值與MTB 載量的對應(yīng)關(guān) 系如下:Ct值≤16 :高;16 <Ct值<22 :中;22 ≤Ct值≤28 :低;Ct值>28 :極低。Gene Xpert

        MTB/RIF 對利福平耐藥性的檢測結(jié)果可根據(jù)MTB 特異性分子信標(biāo)早期Ct值與晚期Ct值之差,即△Ct值判斷。當(dāng)△Ct值>3.5 時(shí),提示對利福平耐藥,結(jié)果為利福平耐藥檢出;當(dāng)△Ct值≤3.5 時(shí),提示對利福平敏感,結(jié)果為利福平耐藥未檢出。

        1.3 觀察指標(biāo)

        1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

        用SPSS 22.0 軟件處理本研究中的數(shù)據(jù),計(jì)量資料用±s表示,用t檢驗(yàn),計(jì)數(shù)資料用% 表示,用χ2 檢驗(yàn),P<0.05 表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。兩種檢測方法一致性的比較采用Kappa 檢驗(yàn),Kappa 值>0.75為一致性較好。

        2 結(jié)果

        2.1 四種檢測方法的陽性檢出率

        用抗酸染色法、熒光定量PCR 法、Gene Xpert MTB/RIF 技術(shù)、固體培養(yǎng)法對368 份標(biāo)本進(jìn)行檢測的陽性檢出率分別為14.13%、34.24%、49.46%、50.82%。詳見表1。采用固體培養(yǎng)法、Gene Xpert MTB/RIF 技術(shù)和熒光定量PCR 法對368 份標(biāo)本進(jìn)行檢測的陽性檢出率均高于抗酸染色法,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。采用固體培養(yǎng)法、Gene Xpert MTB/RIF 技術(shù)對368 份標(biāo)本進(jìn)行檢測的陽性檢出率均高于熒光定量PCR 法,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。采用固體培養(yǎng)法對368 份標(biāo)本進(jìn)行檢測的陽性檢出率略高于Gene Xpert MTB/RIF 技術(shù),但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

        表1 四種檢測方法的陽性率

        2.2 GeneXpertMTB/RIF 檢測MTB 的效能分析

        對368 份標(biāo)本進(jìn)行Gene Xpert MTB/RIF 檢測,其中檢出陽性標(biāo)本182 份,陽性檢出率為49.46%。在Gene Xpert MTB/RIF 檢測結(jié)果呈陽性的標(biāo)本中,MTB 含量為低和極低者占59.34%,MTB 含量中等者占26.92%,MTB 含量為高者僅占13.74%。以固體培養(yǎng)法的檢測結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn),發(fā)現(xiàn)采用Gene Xpert MTB/RIF 技術(shù)檢測疑似TB 患者送檢標(biāo)本中MTB 的敏 感 度 為96.79%(181/187)、 特 異 度 為99.45%(180/181),陽 性預(yù)測值 為99.45%(181/182),陰性預(yù)測值為96.77%(180/186),二者的符合率為98.10% 〔(181+180)/368 〕。 進(jìn) 行 固 體 培 養(yǎng) 和Gene Xpert MTB/RIF 檢測均呈陽性的標(biāo)本有181 份,經(jīng)Kappa 檢驗(yàn),Kappa 值為0.961,提示二者的一致性好。Gene Xpert MTB/RIF 與固體培養(yǎng)檢測MTB 的結(jié)果見表2。

        表2 Gene Xpert MTB/RIF 與固體培養(yǎng)檢測MTB 的比較(份)

        2.3 GeneXpertMTB/RIF 檢測利福平耐藥性的效能分析

        以比例法藥敏試驗(yàn)結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn),發(fā)現(xiàn)采用Gene Xpert MTB/RIF 技術(shù)檢測疑似TB 患者送檢標(biāo)本利福平耐藥性的敏感度為88.89%(24/27),特異度為99.71%(340/341),陽性預(yù)測值為96.00%(24/25),陰性預(yù)測值為99.13%(340/343),二者的符合率為98.91% 〔(24+340)/368 〕。Gene Xpert MTB/RIF檢測結(jié)果為利福平耐藥的25 份標(biāo)本中,21 份標(biāo)本同時(shí)對異煙肼耐藥,占84.00%。進(jìn)行比例法藥敏試驗(yàn)和Gene Xpert MTB/RIF 檢測均呈陽性的標(biāo)本有24 份,經(jīng)Kappa 檢驗(yàn),Kappa 值為0.884,提示二者的一致性好。Gene Xpert MTB/RIF 與比例法藥敏試驗(yàn)檢測利福平耐藥性的結(jié)果見表3。

        表3 Gene Xpert MTB/RIF 與比例法藥敏試驗(yàn)檢測利福平耐藥性的比較(份)

        3 討論

        本研究中,在抗酸染色、熒光定量PCR、Gene Xpert MTB/RIF、固體培養(yǎng)四種檢測方法中,固體培養(yǎng)的陽性檢出率最高(50.82%),其次為Gene Xpert MTB/RIF(49.46%)。固體培養(yǎng)的陽性檢出率略高于Gene Xpert MTB/RIF,但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。原因可能是我院Gene Xpert MTB/RIF 檢測系統(tǒng)只配置了一個(gè)檢測倉,樣本較多時(shí)無法及時(shí)上機(jī)檢測,影響了Gene Xpert MTB/RIF 檢測的陽性率。當(dāng)標(biāo)本中抗酸桿菌數(shù)量達(dá)5000 條/mL 時(shí),抗酸染色可檢出抗酸桿菌;熒光定量PCR 的檢測限為1000 cfu/mL, 而Gene Xpert MTB/RIF 的 檢 測 限 為131 cfu/mL[6]。因此,Gene Xpert MTB/RIF 技術(shù)的陽性檢出率高于熒光定量PCR 法和抗酸染色法。本研究的結(jié)果顯示,以固體培養(yǎng)法的檢測結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn),發(fā)現(xiàn)采用Gene Xpert MTB/RIF 技術(shù)檢測疑似TB 患者送檢標(biāo)本中MTB 的敏感度為96.79%、特異度為99.45%,陽性預(yù)測值為99.45%,陰性預(yù)測值為96.77%,二者的符合率為98.10%,Kappa 值為0.961。說明Gene Xpert MTB/RIF 技術(shù)可快速、準(zhǔn)確地檢出MTB。研究表明,Gene Xpert MTB/RIF 技術(shù)僅對MTB 有特異性,與非MTB 無交叉反應(yīng)[7]。本研究中6 份標(biāo)本行固體培養(yǎng)呈陽性,但經(jīng)Gene Xpert MTB/RIF 檢測為陰性,送至遂寧市疾病預(yù)防控制中心進(jìn)行菌種鑒定,結(jié)果均非MTB。說明當(dāng)固體培養(yǎng)提示MTB 陽性而Gene Xpert MTB/RIF 檢測提示陰性時(shí),不排除非MTB 感染的可能。本研究中1 份標(biāo)本經(jīng)固體培養(yǎng)呈陰性而經(jīng)Gene Xpert MTB/RIF 檢測呈陽性,原因可能是標(biāo)本前處理過度或標(biāo)本中MTB 載量過低。Gene Xpert MTB/RIF 不僅可檢出標(biāo)本中是否存在MTB 感染,還可判斷MTB 的載量,結(jié)果以高、中、低、極低表示。本研究經(jīng)Gene Xpert MTB/RIF 檢測結(jié)果為陽性的標(biāo)本中,MTB 含量為低和極低者占59.34%,說明Gene Xpert MTB/RIF 檢測可提高M(jìn)TB 載量低/ 極低標(biāo)本的檢出率。

        本研究的結(jié)果顯示,以比例法藥敏試驗(yàn)結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn),發(fā)現(xiàn)采用Gene Xpert MTB/RIF 技術(shù)檢測疑似TB 患者送檢標(biāo)本利福平耐藥性的敏感度為88.89%,特異度為99.71%,陽性預(yù)測值為96.00%,陰性預(yù)測值為99.13%,二者的符合率為98.91%,Kappa 值為0.884。說明Gene Xpert MTB/RIF 技術(shù)與比例法藥敏試驗(yàn)的一致性好。本研究中有4 份標(biāo)本的比例法藥敏試驗(yàn)結(jié)果與Gene Xpert MTB/RIF 檢測結(jié)果不一致,其中3 份標(biāo)本經(jīng)比例法藥敏試驗(yàn)提示利福平耐藥,而經(jīng)Gene Xpert MTB/RIF 檢測提示利福平耐藥未檢出,1 份標(biāo)本經(jīng)比例法藥敏試驗(yàn)提示利福平敏感,而經(jīng)Gene Xpert MTB/RIF 檢測提示利福平耐藥檢出。原因可能是比例法藥敏試驗(yàn)使用的是經(jīng)過培養(yǎng)后的MTB,而Gene Xpert MTB/RIF 檢測使用的是患者的肺泡灌洗液或痰液等標(biāo)本,兩種方法檢測的優(yōu)勢菌群不一樣。此外,Gene Xpert MTB/RIF 僅能檢測發(fā)生在RRDR區(qū)域的突變位點(diǎn),當(dāng)利福平耐藥基因突變的位點(diǎn)位于RRDR 區(qū)域外或?yàn)槌聊蛔儠r(shí),Gene Xpert MTB/RIF檢測可能出現(xiàn)假陰性結(jié)果;而當(dāng)利福平耐藥為低水平耐藥時(shí),比例法藥敏試驗(yàn)可能出現(xiàn)假陰性結(jié)果[8-10]。

        綜上所述,Gene Xpert MTB/RIF 技術(shù)與抗酸染色法、熒光定量PCR 法等檢測方法相比,敏感度高、特異性好,可同時(shí)檢測MTB 及其對利福平的耐藥性,最重要的是,該檢測技術(shù)所用的試劑采用獨(dú)立包裝,交叉污染少,對生物安全的要求相對較低,適合在川東生物安全防護(hù)薄弱的基層實(shí)驗(yàn)室推廣使用。

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