趙建剛,唐濤,張建能,郭潔,王朝暉,*
1.暨南大學(xué)生態(tài)學(xué)系,廣州 510632
2.熱帶亞熱帶水生態(tài)工程教育部工程研究中心,廣州 510632
5-氮雜-2’-脫氧胞嘧啶核苷,又稱地西他濱(decitabine,DAC),屬于脫氧胞苷類似物,是一種DNA甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑,可通過抑制DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶,逆轉(zhuǎn)甲基化過程。作為一種人類用藥,其常用于治療骨髓增生異常綜合征和急性髓系白血病[1],且有研究證實(shí),DAC高濃度時(shí)具有細(xì)胞毒性,低濃度時(shí)具有去甲基化作用[2]。近年來作為一種DNA甲基化抑制劑,DAC已開始應(yīng)用于農(nóng)業(yè)生產(chǎn)、園藝[3]等領(lǐng)域,隨著它們使用范圍的擴(kuò)大、使用頻率的增加,其進(jìn)入水體的機(jī)會(huì)也越來越大,若處理不當(dāng),其極有可能傳播至水體中,在食物鏈中積累,危害生物,破壞水生態(tài)系統(tǒng)的平衡。
DNA甲基化是一種常見的生物表觀遺傳修飾現(xiàn)象,植物可通過基因甲基化和去甲基化對(duì)基因表達(dá)進(jìn)行調(diào)控[4],從而調(diào)節(jié)植物生長及其對(duì)環(huán)境的適應(yīng)能力。DNA甲基化常用于研究高等植物,如擬南芥(Arabidopsisthaliana)[5]、水稻(Oryzasativa)[6]、小麥(Triticumaestivum)[7]和花椰菜(Brassicaoleracea)[8]等,其對(duì)高等植物的生長與發(fā)育有著重要的影響,如株高、開花和結(jié)果等[9],且已有多項(xiàng)研究結(jié)果表明DNA甲基化能提高植物對(duì)于不利條件的耐受能力,如水稻的耐鹽能力[6]、馬鈴薯(Solanumtuberosum)的耐旱能力[10-11]等。藻類作為水生態(tài)系統(tǒng)的初級(jí)生產(chǎn)者,其種類多樣性和初級(jí)生產(chǎn)量會(huì)直接影響水生態(tài)系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)與功能,而目前DNA甲基化對(duì)水生態(tài)系統(tǒng)影響特別是對(duì)藻類的毒性研究報(bào)道較少[12-14]。
塔瑪亞歷山大藻(Alexandriumtamarense)和血紅哈卡藻(Akashiwosanguinea)是2種常見的海洋赤潮甲藻,廣布于溫帶和亞熱帶海域,其大量增殖引發(fā)的赤潮會(huì)導(dǎo)致多種海洋生物的死亡,其中塔瑪亞歷山大藻能產(chǎn)生麻痹性貝類毒素(paralytic shellfish poisoning,PSP)[15],且它產(chǎn)生的PSP毒素在已知赤潮毒素中毒性最強(qiáng)、分布最廣、威脅性最大。本研究以2種典型赤潮甲藻為研究對(duì)象,研究不同濃度DAC對(duì)藻細(xì)胞生長的影響,并進(jìn)一步揭示藻細(xì)胞內(nèi)抗氧化系統(tǒng)對(duì)不同DAC濃度的響應(yīng);通過考察DAC對(duì)2種海洋甲藻的毒性和致毒機(jī)理,進(jìn)而評(píng)估DAC對(duì)海洋初級(jí)生產(chǎn)力的潛在影響,為海洋生態(tài)系統(tǒng)保護(hù)提供科學(xué)依據(jù)。
研究所用的塔瑪亞歷山大藻和血紅哈卡藻均取自于暨南大學(xué)生態(tài)學(xué)系藻種室;所用的DAC為分析純,CAS號(hào)為320-67-2,純度99%,購自江蘇艾康生物醫(yī)藥研發(fā)有限公司。使用由“HEKA CORAL”天然海鹽配制的f/2去硅培養(yǎng)基培養(yǎng),調(diào)節(jié)培養(yǎng)液鹽度(30±1)‰,pH 7.6±0.1;培養(yǎng)條件為:溫度(20±1) ℃,光照強(qiáng)度150 μE·m-2·s-1,光暗比為L∶D=12 h∶12 h。
根據(jù)預(yù)備實(shí)驗(yàn)結(jié)果,得到對(duì)藻細(xì)胞生長具有梯度抑制作用的濃度組。設(shè)置了5個(gè)實(shí)驗(yàn)組和1個(gè)對(duì)照組,每組設(shè)3個(gè)重復(fù),DAC濃度依次為0(對(duì)照組)、0.01、0.05、0.1、0.5和1 mmol·L-1。
實(shí)驗(yàn)在規(guī)格為150 mL的三角瓶中進(jìn)行,先加入100 mL培養(yǎng)基,再加入已到達(dá)對(duì)數(shù)生長期的初始密度分別為0.33×104cells·mL-1和1.34×104cells·mL-1的血紅哈卡藻和塔瑪亞歷山大藻藻液。添加DAC母液配制成設(shè)定濃度的試驗(yàn)液,實(shí)驗(yàn)條件與甲藻的培養(yǎng)條件一致。實(shí)驗(yàn)周期為96 h,在實(shí)驗(yàn)進(jìn)行前(0 h)及培養(yǎng)的24、48和96 h取樣,對(duì)藻細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù),并制備藻細(xì)胞勻漿用于抗氧化指標(biāo)的測(cè)定。
可溶性蛋白的測(cè)定用南京建成生物工程研究所試劑盒進(jìn)行測(cè)定,具體操作依照試劑盒說明書步驟進(jìn)行。在96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中分別加入待測(cè)細(xì)胞勻漿(測(cè)定管)和蒸餾水(對(duì)照管)各10 μL,然后按順序加入測(cè)試盒相關(guān)的反應(yīng)試劑,旋渦混合器(Vortex-5,上海達(dá)姆實(shí)業(yè)有限公司,中國)充分混勻后于恒溫箱37℃孵育40 min,于波長562 nm處,用酶標(biāo)儀(MK3,Thermo,美國)測(cè)定各孔吸光度值??扇苄缘鞍诐舛纫詍g·10-6cells表示。
SOD活性的測(cè)定用南京建成生物工程研究所試劑盒進(jìn)行測(cè)定,具體操作依照試劑盒說明書步驟進(jìn)行。在15 mL測(cè)定管中分別加入待測(cè)細(xì)胞勻漿(測(cè)定管)和蒸餾水(對(duì)照管)各50 μL,然后按順序加入測(cè)試盒相關(guān)的反應(yīng)試劑,旋渦混合器充分混勻后于生化培養(yǎng)箱(SHH-250,上海予卓儀器有限公司,中國)37℃孵育40 min,然后加入按測(cè)試盒要求配好的顯色劑2 mL,混勻后室溫放置10 min,最后取200 μL至96孔細(xì)胞培養(yǎng)板,于波長550 nm處,用酶標(biāo)儀測(cè)定各孔吸光度值。
SOD活性單位定義:每毫克組織蛋白在1 mL反應(yīng)液中SOD抑制率達(dá)50%時(shí)所對(duì)應(yīng)的SOD量為一個(gè)SOD活性單位(U),SOD活性以單位細(xì)胞酶活性U·10-6cells來表示。
GSH含量的測(cè)定利用南京建成生物工程研究所試劑盒進(jìn)行測(cè)定,具體操作依照試劑盒說明書步驟進(jìn)行。取100 μL細(xì)胞勻漿與100 μL測(cè)試盒試劑(沉淀劑)混勻,用高速離心機(jī)(5804R,Eppendorf,德國)以轉(zhuǎn)速3 500 r·min-1離心10 min,取上清液待測(cè),向96孔細(xì)胞培養(yǎng)板加入待測(cè)上清液(測(cè)定孔)、沉淀劑(空白孔)和20 μmol·L-1標(biāo)準(zhǔn)品(標(biāo)準(zhǔn)孔)各100 μL,然后按順序加入測(cè)試盒相關(guān)的反應(yīng)試劑,充分混勻后室溫靜置5 min,于波長405 nm處,用酶標(biāo)儀測(cè)定各孔吸光度值。藻細(xì)胞內(nèi)GSH含量以nmol·10-6cells表示。
MDA含量的測(cè)定用南京建成生物工程研究所試劑盒進(jìn)行測(cè)定,具體操作依照試劑盒說明書步驟進(jìn)行。在15 mL測(cè)定管中分別加入待測(cè)細(xì)胞勻漿(測(cè)定管和對(duì)照管)、無水乙醇(空白管)和10 nmol·mL-1標(biāo)準(zhǔn)品(標(biāo)準(zhǔn)管)各100 μL,然后按順序加入測(cè)試盒相關(guān)的反應(yīng)試劑,旋渦混合器混勻,保鮮膜扎緊管口并用刺針刺一小口,95℃水浴40 min,取出后流水冷卻,用高速離心機(jī)以轉(zhuǎn)速4 000 r·min-1離心10 min,取200 μL上清液至96孔細(xì)胞培養(yǎng)板,于波長532 nm處,用酶標(biāo)儀測(cè)定各孔吸光度值。MDA活性以nmol·10-6cells來表示。
1.7.1 特定生長率
μ(d-1)=(ln(N2/N1))/(t2-t1)
式中:N2和N1分別為t2和t1時(shí)的藻細(xì)胞數(shù)量。
1.7.2 抑制率
IR=(1-Nt/N0)×100%
式中:IR為抑制率(%),Nt為培養(yǎng)96 h后實(shí)驗(yàn)組的藻細(xì)胞密度(cells·mL-1),N0為同樣時(shí)間對(duì)照組的藻細(xì)胞密度(cells·mL-1)。
1.7.3 96 h半效應(yīng)濃度(EC50)
生長抑制百分率(EC)是指對(duì)藻細(xì)胞特定生長率的抑制百分率,其計(jì)算公式為:
EC=(μc-μt)/μc×100%
式中:μc是對(duì)照組96 h內(nèi)的特定生長率,μt是各實(shí)驗(yàn)組96 h內(nèi)的特定生長率。EC50值采用抑制生長百分率的概率單位-濃度對(duì)數(shù)直線回歸法進(jìn)行計(jì)算。
利用Microsoft Excel 2013對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì),結(jié)果均為平均值±標(biāo)準(zhǔn)差。利用SPSS 20.0軟件中的單因素方差分析(One-way ANOVA)的多重比較(LSD法)對(duì)不同培養(yǎng)條件下藻細(xì)胞內(nèi)各抗氧化指標(biāo)進(jìn)行差異顯著性分析。
經(jīng)過96 h培養(yǎng)后,2種甲藻細(xì)胞密度雖有不同程度的增長,但均受到了DAC的抑制,其中對(duì)血紅哈卡藻的抑制效果更明顯。DAC濃度在0~0.5 mmol·L-1濃度范圍內(nèi)塔瑪亞歷山大藻呈現(xiàn)出一定的濃度-效應(yīng)關(guān)系。暴露96 h后,當(dāng)DAC濃度位于0~0.5 mmol·L-1區(qū)間時(shí),DAC濃度越高,其對(duì)塔瑪亞歷山大藻的抑制效果越強(qiáng),而濃度范圍在0.5~1 mmol·L-1時(shí),DAC對(duì)塔瑪亞歷山大藻的抑制效果有所減弱(圖1(a))。在DAC暴露下,血紅哈卡藻的生長受到明顯抑制,各實(shí)驗(yàn)組在96 h時(shí)的藻細(xì)胞密度顯著低于對(duì)照組(P<0.05),且DAC濃度越高,其對(duì)血紅哈卡藻的抑制作用越強(qiáng)(圖1(b))。
圖1 不同濃度地西他濱(DAC)對(duì)2種甲藻生長的影響注:(a)塔瑪亞歷山大藻;(b)血紅哈卡藻。Fig.1 The growth of two algae under the exposure of decitabine (DAC) with different concentrationsNote:(a) Al. tamarense;(b) Ak. sanguinea.
通過概率單位-濃度對(duì)數(shù)直線回歸法進(jìn)行計(jì)算,得出DAC對(duì)血紅哈卡藻生長的96 h-EC50為0.0016 mmol·L-1(0.37 mg·L-1),對(duì)塔瑪亞歷山大藻的96 h-EC50為0.116 mmol·L-1(26.47 mg·L-1)。根據(jù)《新化學(xué)物質(zhì)危害評(píng)估導(dǎo)則》(HJ/T154—2004)[16]中的評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)(表1),DAC對(duì)血紅哈卡藻的急性毒性屬于極高毒性等級(jí),對(duì)塔瑪亞歷山大藻的急性毒性屬于中毒性等級(jí)。
表1 生態(tài)毒理學(xué)危害性分級(jí)[16]Table 1 Classification of ecotoxicology hazard[16]
2.2.1 可溶性蛋白
2種甲藻細(xì)胞可溶性蛋白含量隨DAC處理濃度和處理時(shí)間的差異而不同,整體上DAC對(duì)2種甲藻細(xì)胞可溶性蛋白含量有較明顯的促進(jìn)作用,其中對(duì)血紅哈卡藻的促進(jìn)效果更明顯(圖2)。實(shí)驗(yàn)期間塔瑪亞歷山大藻對(duì)照組的可溶性蛋白含量基本無變化;DAC處理組中的0.01 mmol·L-1和0.1 mmol·L-1組呈現(xiàn)出先升后降的趨勢(shì),分別在24 h和48 h達(dá)到峰值;而0.05 mmol·L-1組是波狀上升,0.5 mmol·L-1和1.0 mmol·L-1這2個(gè)高濃度組的可溶性蛋白含量則呈穩(wěn)步上升趨勢(shì),均在96 h時(shí)達(dá)到最大值;96 h時(shí),各中、高濃度處理組(>0.1 mmol·L-1)的可溶性蛋白含量均顯著高于對(duì)照組(P<0.01,圖2(a))。隨時(shí)間延長,血紅哈卡藻細(xì)胞對(duì)照組的可溶性蛋白含量略有波動(dòng),DAC處理組中的0.01 mmol·L-1和0.05 mmol·L-1這2個(gè)低濃度組整體上呈現(xiàn)出先下降(0~24 h)后上升(24~96 h)的趨勢(shì),而其余3個(gè)中、高濃度實(shí)驗(yàn)組則呈現(xiàn)穩(wěn)步上升的趨勢(shì);96 h時(shí)對(duì)照組血紅哈卡藻細(xì)胞的可溶性蛋白含量顯著低于1 mmol·L-1組(P<0.01),顯著低于其他處理組(P<0.05,圖2(b))。
圖2 不同濃度DAC對(duì)2種甲藻可溶性蛋白含量的影響注:(a)塔瑪亞歷山大藻,(b)血紅哈卡藻;同一時(shí)間不同DAC濃度條柱上的不同字母表示同一時(shí)間不同濃度處理組間差異顯著,P<0.05。Fig.2 The content of soluble protein in two algae under the exposure of DAC with different concentrationsNote:(a) Al. tamarense,(b) Ak. sanguinea;different letters at different DAC concentrations in the same time indicate significant differences,P<0.05.
2.2.2 超氧化物歧化酶(SOD)活性
隨著實(shí)驗(yàn)的進(jìn)行,塔瑪亞歷山大藻對(duì)照組的SOD活性逐漸下降,而各DAC處理組則呈現(xiàn)出先升后降的趨勢(shì):均在24 h時(shí)達(dá)到各組相對(duì)峰值,然后逐漸下降且都在96 h時(shí)達(dá)到最小值;96 h時(shí)對(duì)照組的SOD活性顯著高于各中、低DAC濃度組(<0.1 mmol·L-1,P<0.05),而與中、高濃度組無顯著差異(圖3(a))。與塔瑪亞歷山大藻不同,DAC對(duì)血紅哈卡藻細(xì)胞的SOD活性有一定的促進(jìn)作用,實(shí)驗(yàn)過程中血紅哈卡藻對(duì)照組的SOD活性略有升高,但變化不顯著(P>0.05),而各處理組則均呈現(xiàn)先升后降且在24 h時(shí)達(dá)到頂點(diǎn)的趨勢(shì);96 h時(shí)血紅哈卡藻對(duì)照組的SOD活性顯著低于0.05 mmol·L-1和1 mmol·L-1組(P<0.05),而略低于其他實(shí)驗(yàn)組(圖3(b))。
圖3 不同濃度DAC對(duì)2種甲藻細(xì)胞超氧化物歧化酶(SOD)活性的影響注:(a)塔瑪亞歷山大藻,(b)血紅哈卡藻;同一時(shí)間不同DAC濃度條柱上的不同字母表示同一時(shí)間不同濃度處理組間差異顯著,P<0.05。Fig.3 Superoxide dismutase (SOD) activity in two algae under the exposure of DAC with different concentrationsNote:(a) Al. tamarense,(b) Ak. sanguinea;different letters at different DAC concentrations in the same time indicate significant differences,P<0.05.
2.2.3 谷胱甘肽(GSH)含量
DAC對(duì)藻細(xì)胞GSH生成具有促進(jìn)作用,且對(duì)血紅哈卡藻細(xì)胞GSH的促進(jìn)作用更為明顯(圖4)。整體上塔瑪亞歷山大藻各組藻細(xì)胞GSH含量呈現(xiàn)先升后降、在24 h時(shí)達(dá)到最大值的趨勢(shì),其中對(duì)照組與0.01 mmol·L-1和0.05 mmol·L-1這2個(gè)低濃度組的變化規(guī)律一致,而0.5 mmol·L-1和1 mmol·L-1這2個(gè)高濃度組的變化規(guī)律相似;96 h時(shí)對(duì)照組的GSH含量顯著低于3個(gè)中、高濃度實(shí)驗(yàn)組(P<0.05)(圖4(a))。DAC顯著促進(jìn)了血紅哈卡藻細(xì)胞GSH含量的生成,整體上各處理組與對(duì)照組的GSH含量變化一致,呈現(xiàn)出穩(wěn)步升高、且均在96 h時(shí)達(dá)到最大值的趨勢(shì),96 h時(shí)血紅哈卡藻對(duì)照組的GSH含量顯著低于除0.01 mmol·L-1組之外的其他各濃度組(P<0.01,圖4(b))。
圖4 不同濃度DAC對(duì)2種甲藻細(xì)胞谷胱甘肽(GSH)含量的影響注:(a)塔瑪亞歷山大藻,(b)血紅哈卡藻;同一時(shí)間不同DAC濃度條柱上的不同字母表示同一時(shí)間不同濃度處理組間差異顯著,P<0.05。Fig.4 Variation of glutathione (GSH) content in two algae under the exposure of DAC with different concentrationsNote:(a) Al. tamarense,(b) Ak. sanguinea;different letters at different DAC concentrations in the same time indicate significant differences,P<0.05.
2.2.4 丙二醛(MDA)含量
藻細(xì)胞MDA含量是指示細(xì)胞內(nèi)膜脂氧化程度的重要指標(biāo),所有實(shí)驗(yàn)組在DAC暴露初期藻細(xì)胞MDA含量就出現(xiàn)明顯上升,并且隨濃度增加而增大,血紅哈卡藻則呈現(xiàn)出明顯的濃度-效應(yīng)關(guān)系(圖5)。塔瑪亞歷山大藻各處理組與對(duì)照組整體變化一致,呈現(xiàn)出先升后降、24 h達(dá)到峰值,其后逐漸下降且均在96 h時(shí)出現(xiàn)最低值的趨勢(shì);96 h時(shí)對(duì)照組藻細(xì)胞MDA含量顯著低于1 mmol·L-1濃度組(P<0.05,圖5(a))。血紅哈卡藻各DAC濃度組藻細(xì)胞MDA含量整體上先升后降,對(duì)照組和高DAC濃度組藻細(xì)胞MDA含量在24 h達(dá)到最大值,而0.01 mmol·L-1和0.1 mmol·L-1濃度組的最大值出現(xiàn)于48 h;96 h時(shí)對(duì)照組的MDA含量顯著低于各中、高DAC濃度組(>0.5 mmol·L-1,P<0.05,圖5(b))。
圖5 不同濃度DAC對(duì)2種甲藻細(xì)胞丙二醛(MDA)含量的影響注:(a)塔瑪亞歷山大藻,(b)血紅哈卡藻;同一時(shí)間不同DAC濃度條柱上的不同字母表示同一時(shí)間不同濃度處理組間差異顯著,P<0.05。Fig.5 Variation of malondialdehyde (MDA) content in two algae under the exposure of DAC with different concentrationsNote:(a) Al. tamarense,(b) Ak. sanguinea;different letters at different DAC concentrations in the same time indicate significant differences,P<0.05.
不同藻類對(duì)DAC暴露的耐受能力不同,萊茵衣藻(Chlamydomonasreinhardtii)暴露在濃度為10 μmol·L-1的DAC下,雖然生物量濃度在第1天下降,但隨著時(shí)間延長而持續(xù)增大,在第5天接近對(duì)照組;而四尾柵藻(Scenedesmusquadricauda)對(duì)DAC的耐受能力較差,生物量在第1天下降,1~3 d內(nèi)有所增加,但第3天后大幅度下降,最終降至暴露前的初始生物量水平[14]。本研究中,不同濃度DAC對(duì)2種赤潮甲藻的生長均有較強(qiáng)的抑制作用,且呈現(xiàn)出明顯的劑量-效應(yīng)和時(shí)間-效應(yīng)關(guān)系,因此需要防范其對(duì)海洋環(huán)境特別是海洋初級(jí)生產(chǎn)力的影響。
MDA是細(xì)胞膜脂質(zhì)過氧化的產(chǎn)物,也是衡量膜脂質(zhì)過氧化程度的一個(gè)重要指標(biāo)[28],其含量的高低能反映細(xì)胞的損害程度以及細(xì)胞在逆境條件下耐受能力的強(qiáng)弱。本研究中在DAC暴露下,血紅哈卡藻和塔瑪亞歷山大藻MDA含量均出現(xiàn)明顯上升趨勢(shì),而且呈現(xiàn)出一定的劑量-效應(yīng)關(guān)系,其中血紅哈卡藻MDA含量對(duì)DAC的響應(yīng)更為敏感。但2種藻細(xì)胞MDA含量均在暴露后的24 h達(dá)到最大值,隨后逐漸下降,這可能是由于隨著暴露時(shí)間的延長,藻類細(xì)胞逐漸適應(yīng)了毒害環(huán)境,加之SOD活性的增大及GSH誘導(dǎo)作用的加強(qiáng),及時(shí)清除了一部分ROS,對(duì)細(xì)胞膜起到了一定的保護(hù)作用[29-30],使生物膜所受損害有所降低;此外,隨著時(shí)間延長,DAC會(huì)有一定程度的降解和吸附,實(shí)驗(yàn)液中DAC濃度下降,毒性也隨之降低[31],因此,MDA含量在暴露短時(shí)間內(nèi)達(dá)到峰值后會(huì)逐漸回落。
2種實(shí)驗(yàn)甲藻中,塔瑪亞歷山大藻屬于甲藻門膝溝藻目亞歷山大藻屬,其細(xì)胞表層覆有堅(jiān)硬厚實(shí)的細(xì)胞壁,可有效阻止或減少DAC等脅迫因子進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)而破壞細(xì)胞器,同時(shí)也有效減少了DAC的醌基誘導(dǎo)藻細(xì)胞產(chǎn)生大量ROS毒害的可能;而血紅哈卡藻屬于甲藻門多甲藻目裸甲藻屬,細(xì)胞體表沒有堅(jiān)實(shí)的細(xì)胞壁,對(duì)DAC脅迫的保護(hù)能力較弱,這可能是本研究中血紅哈卡藻對(duì)DAC脅迫更為敏感的主要原因。本研究中隨著DAC濃度增加、暴露時(shí)間延長,2種甲藻細(xì)胞生長均受到明顯抑制,DAC分子結(jié)構(gòu)上的醌基能誘導(dǎo)大量ROS生成,同時(shí)在逆境脅迫下藻細(xì)胞SOD活性的抑制、GSH誘導(dǎo)作用的增強(qiáng)及膜脂過氧化可能是DAC抑制2種實(shí)驗(yàn)甲藻特別是血紅哈卡藻的生長并對(duì)其產(chǎn)生一定致毒作用的重要原因。相較而言,血紅哈卡藻對(duì)DAC脅迫更為敏感,其GSH和MDA含量變化敏感,呈現(xiàn)出明顯的劑量-效應(yīng)和時(shí)間-效應(yīng)關(guān)系,可以作為監(jiān)測(cè)DAC環(huán)境污染的生物標(biāo)記指標(biāo)之一。