郝莉雨 于澤玥 孫建輝 李宗源 陳紅映 霍海如 李洪梅

(中國中醫(yī)科學(xué)院中藥研究所，北京，100700)

摩羅丹(濃縮丸)是一種中成藥丸劑，由百合、茯苓、玄參、烏藥、澤瀉、麥冬等18味藥材制成，具有和胃降逆、健脾消脹、通絡(luò)定痛功能，用于治療慢性萎縮性胃炎，癥見胃疼、脹滿、痞悶、納呆、噯氣等，臨床效果良好1-2]。由于人們快節(jié)奏的生活方式以及不良的飲食習(xí)慣，各種理化損傷因子(包括長期食用粗纖維食品、燙食、濃茶、咖啡、煙酒，以及長期服用對胃黏膜有損傷的非甾體抗炎藥)刺激已成為當(dāng)前慢性非萎縮性胃炎(Chronic Non-Atrophic Gastritis，CNAG)的主要致病因素，也使CNAG的發(fā)病率逐年增加[3]。CNAG若未在早期得到有效控制，隨病情加重會逐步形成慢性萎縮性胃炎并存在后續(xù)癌變的可能[4]。

本研究以摩羅丹濃縮丸為受試藥物，觀察其對大鼠胃黏膜損傷的修復(fù)作用，以及抗炎鎮(zhèn)痛止血作用，探究摩羅丹(濃縮丸)治療CNAG的作用效果，為增加摩羅丹(濃縮丸)在藥效學(xué)方面的研究提供實驗依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動物 無特定病原體(Specific Pathogen Free,SPF)級ICR小鼠，110只，體質(zhì)量18～22 g；SPF級SD大鼠，120只，體質(zhì)量180～220 g，均由北京維通利華實驗動物技術(shù)有限公司提供，動物生產(chǎn)許可證號：SCXK(京)2016-0006。小鼠和大鼠飼育于屏障環(huán)境，實驗動物使用許可證號：SYXK(京)2019-0003。本研究所涉及動物實驗通過中國中醫(yī)科學(xué)院中藥研究所動物福利倫理委員會審批(倫理審批號：2020B025)。

1.1.2 藥物 摩羅丹(濃縮丸)(邯鄲制藥股份有限公司，生產(chǎn)批號：S00518003)；枸櫞酸鉍鉀顆粒(麗珠集團(tuán)麗珠制藥廠，生產(chǎn)批號：1901008)；云南白藥膠囊(云南白藥集團(tuán)股份有限公司生產(chǎn)，生產(chǎn)批號：ZLB1914)；布洛芬顆粒(沈陽福寧藥業(yè)有限公司，生產(chǎn)批號：190101)。

1.1.3 試劑與儀器 無水乙醇(國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，生產(chǎn)批號：20181210)；鹽酸(北京化工廠，生產(chǎn)批號：20101106)；冰醋酸(北京化工廠，生產(chǎn)批號：20170401)；甲醛(天津市大茂化學(xué)試劑廠，生產(chǎn)批號：20171111)；碳酸氫鈉(國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，生產(chǎn)批號：20170628)；水合氯醛(國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，生產(chǎn)批號：20130201)；吲哚美辛片(消炎痛)(濮陽市匯元藥業(yè)有限公司，生產(chǎn)批號：191003)；伊文思藍(lán)(北京索萊寶科技有限公司，生產(chǎn)批號：NO.828J401)；0.9%氯化鈉注射液(石家莊四藥有限公司，生產(chǎn)批號：1908263201)；數(shù)位型游標(biāo)卡尺(上海市寶工工具有限公司，型號：PD-151)；電子天平(賽多利斯科學(xué)儀器有限公司，德國，型號：Sartorius BSA323S-CW)；電子天平(梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司，美國，型號：PL203 METTLER TOLEDO)；酶標(biāo)儀(伯騰儀器有限公司，美國，型號：BioTek Epoch)。

1.2 方法

1.2.1 分組與模型制備

1.2.1.1 摩羅丹(濃縮丸)對吲哚美辛致大鼠胃黏膜損傷的影響 取健康SD大鼠，體質(zhì)量180～220 g，按體質(zhì)量采用分層區(qū)組隨機(jī)化方法(將同一性別大鼠，按體質(zhì)量從小到大排序，賦予隨機(jī)數(shù)字后，每6只為一區(qū)組，區(qū)組內(nèi)按隨機(jī)數(shù)字進(jìn)行排序，不同區(qū)組內(nèi)同一序號大鼠為一組)進(jìn)行分組，分別為正常對照組、模型對照組、摩羅丹(濃縮丸)高劑量、中劑量、低劑量組、陽性對照藥枸櫞酸鉍鉀顆粒組，每組10只，雌雄各半。各組分別灌胃給藥，模型對照組灌胃給予等體積的純凈水，1次/d，連續(xù)4 d，第3天給藥后禁食，自由飲水。第4天給藥2次，間隔4 h，第1次藥后0.5 h，除正常對照組外，將其余各組大鼠用吲哚美辛混懸液(45 mg/kg)皮下注射制備大鼠胃黏膜損傷模型。

1.2.1.2 摩羅丹(濃縮丸)對鹽酸-乙醇致大鼠胃黏膜損傷的影響 取健康SD大鼠，體質(zhì)量180～220 g，按體質(zhì)量采用分層區(qū)組隨機(jī)化方法(將同一性別大鼠，按體質(zhì)量從小到大排序，賦予隨機(jī)數(shù)字后，每6只為一區(qū)組，區(qū)組內(nèi)按隨機(jī)數(shù)字進(jìn)行排序，不同區(qū)組內(nèi)同一序號大鼠為一組)進(jìn)行分組，分別為正常對照組、模型對照組、摩羅丹(濃縮丸)高劑量、中劑量、低劑量組、陽性對照藥枸櫞酸鉍鉀顆粒，每組10只，雌雄各半。各組分別灌胃給藥，模型對照組灌胃給予等體積的純凈水，1次/d，連續(xù)4 d，第3天禁食16 h以上，自由飲水，第4天給藥后3 h，灌胃給予鹽酸-乙醇溶液(1 L含鹽酸150 mmol，無水乙醇600 mL)1.5 mL/只，制備鹽酸-乙醇致大鼠胃黏膜損傷模型。

1.2.1.3 摩羅丹(濃縮丸)對小鼠出血時間、凝血時間的影響 取健康SPF級ICR小鼠，體質(zhì)量18～22 g，按體質(zhì)量采用分層區(qū)組隨機(jī)化方法(將同一性別小鼠，按體質(zhì)量從小到大排序，賦予隨機(jī)數(shù)字后，每6只為一區(qū)組，區(qū)組內(nèi)按隨機(jī)數(shù)字進(jìn)行排序，不同區(qū)組內(nèi)同一序號小鼠為一組)進(jìn)行分組，分別為空白對照組、摩羅丹(濃縮丸)高劑量、中劑量、低劑量組、陽性對照藥云南白藥膠囊組，每組10只，雌雄各半。各組分別灌胃給藥，空白對照組灌胃給予等體積的純凈水，1次/d，連續(xù)給藥3 d。末次給藥后1 h，測定出血時間和凝血時間。

1.2.1.4 摩羅丹(濃縮丸)對醋酸致小鼠疼痛反應(yīng)和腹腔毛細(xì)血管通透性增高的影響 取健康SPF級ICR小鼠，體質(zhì)量18～22 g，按體質(zhì)量采用分層區(qū)組隨機(jī)化方法(將同一性別小鼠，按體質(zhì)量從小到大排序，賦予隨機(jī)數(shù)字后，每5只為一區(qū)組，區(qū)組內(nèi)按隨機(jī)數(shù)字進(jìn)行排序，不同區(qū)組內(nèi)同一序號小鼠為一組)進(jìn)行分組，分別為模型對照組、摩羅丹(濃縮丸)高劑量、中劑量、低劑量組、陽性對照藥布洛芬顆粒組，每組10只，雌雄各半。各組分別灌胃給藥，模型對照組灌胃給予等體積的純凈水，1次/d，連續(xù)給藥3 d。

1.2.2 給藥方法 摩羅丹(濃縮丸)3次/d，每次1袋(16丸，1.84 g)，臨床每日擬用量為48丸，按動物與人體表面積比折算，小鼠等效劑量為6.24丸/kg設(shè)為中劑量，高劑量、低劑量分別為12.48丸/kg、3.12丸/kg；大鼠等效劑量為4.32丸/kg設(shè)為中劑量，高劑量、低劑量分別為8.64丸/kg、2.16丸/kg。枸櫞酸鉍鉀顆粒，臨床用量為4.0 g，按動物與人體表面積比折算，大鼠等效劑量的2倍為0.72 g/kg。云南白藥膠囊，臨床用量為1～2 g，按動物與人體表面積比折算，小鼠等效劑量的2倍為0.52 g/kg。布洛芬顆粒臨床用量為0.8 g，按動物與人體表面積比折算，小鼠等效劑量的2倍為0.21 g/kg。大、小鼠均灌胃給藥，灌胃量小鼠20 mL/kg體質(zhì)量，大鼠10 mL/kg體質(zhì)量。

1.2.3 檢測指標(biāo)與方法

1.2.3.1 摩羅丹(濃縮丸)對吲哚美辛致大鼠胃黏膜損傷的影響 注射吲哚美辛混懸液7 h后將大鼠用10%水合氯醛溶液(3 mL/kg)腹腔注射麻醉，打開腹腔，結(jié)扎幽門和賁門后將全胃取出，向胃內(nèi)注入10%甲醛10 mL，再將胃浸泡于10%甲醛中，以固定胃內(nèi)外層。沿胃大彎剪開胃，用自來水輕輕沖洗去掉胃內(nèi)容物，將胃展平在玻璃板上，測量潰瘍長度，以潰瘍長度的總和作為潰瘍指數(shù)。

1.2.3.2 摩羅丹(濃縮丸)對鹽酸-乙醇致大鼠胃黏膜損傷的影響 灌胃鹽酸-乙醇溶液1 h后將大鼠用10%水合氯醛溶液腹腔注射麻醉，打開腹腔，結(jié)扎幽門和賁門后將全胃取出，向胃內(nèi)注入10%甲醛10 mL，再將胃浸泡于10%甲醛中，以固定胃內(nèi)外層。沿胃大彎剪開胃，用自來水輕輕沖洗去掉胃內(nèi)容物，將胃展平在玻璃板上，測量潰瘍長度，以潰瘍長度的總和作為潰瘍指數(shù)。

1.2.3.3 摩羅丹(濃縮丸)對小鼠出血時間、凝血時間的影響 出血時間測定：固定小鼠，以利剪將小鼠尾尖3 mm處剪斷，待血液自行流出開始計時，此后每隔30 s用濾紙吸去血滴1次，至血液自然停止為止，即為出血時間。凝血時間測定：小鼠眼眶內(nèi)側(cè)取血，于載玻片兩端各滴1滴血，血滴直徑約5～10 mm，立即開始計時，此后每隔30 s用干燥針頭自血滴邊緣向里輕輕挑動1次，至針頭能挑起纖維蛋白絲為止，即為凝血時間，另一滴血供最后復(fù)試。

1.2.3.4 摩羅丹(濃縮丸)對醋酸致小鼠疼痛反應(yīng)和腹腔毛細(xì)血管通透性增高的影響 末次給藥后1 h，尾靜脈注射0.5%伊文思藍(lán)液0.1 mL/10 g，5 min后腹腔注射0.8%醋酸0.1 mL/10 g，再5 min后觀察15 min內(nèi)小鼠典型的扭體次數(shù)(伸展后肢、腹部收縮和扭曲身體)，然后立即腹腔注射5 mL生理鹽水注射液，處死小鼠，輕揉腹部50次，剪開皮膚，用吸管吸取腹腔液，離心，取上清在波長590 nm下測吸光度，并計算抑制率。

2 結(jié)果

2.1 摩羅丹(濃縮丸)對吲哚美辛致大鼠胃黏膜損傷的影響 與正常對照組比較，模型對照組大鼠潰瘍指數(shù)明顯上升，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)；與模型對照組比較，摩羅丹(濃縮丸)高劑量、中劑量、低劑量組以及陽性藥枸櫞酸鉍鉀顆粒組大鼠的潰瘍指數(shù)明顯降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。其中枸櫞酸鉍鉀顆粒對大鼠胃潰瘍的抑制率為62.73%，摩羅丹(濃縮丸)高劑量、中劑量、低劑量對吲哚美辛所致胃黏膜損傷大鼠胃潰瘍的抑制率分別為60.29%、55.52%以及51.90%。見圖1。

圖1 摩羅丹(濃縮丸)對吲哚美辛致大鼠胃黏膜損傷的影響

2.2 摩羅丹(濃縮丸)對鹽酸-乙醇致大鼠胃黏膜損傷的影響 與正常對照組比較，模型對照組大鼠潰瘍指數(shù)明顯上升，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)；與模型對照組比較，摩羅丹(濃縮丸)高劑量、中劑量組以及陽性藥枸櫞酸鉍鉀顆粒組大鼠的潰瘍指數(shù)明顯降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05，P<0.01)。其中枸櫞酸鉍鉀顆粒對大鼠胃潰瘍的抑制率為89.06%，摩羅丹(濃縮丸)高劑量、中劑量、低劑量對鹽酸-乙醇所致胃黏膜損傷大鼠胃潰瘍的抑制率分別為52.75%、37.22%以及35.00%。見圖2。

圖2 摩羅丹(濃縮丸)對鹽酸-乙醇致大鼠胃黏膜損傷的影響

2.3 摩羅丹(濃縮丸)對小鼠出血時間、凝血時間的影響 與空白對照組比較，陽性藥云南白藥膠囊組、摩羅丹(濃縮丸)高劑量、中劑量組小鼠出血時間明顯縮短，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；與空白對照組比較，陽性藥云南白藥膠囊組以及摩羅丹(濃縮丸)高劑量組小鼠的凝血時間明顯縮短，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見圖3。

圖3 摩羅丹(濃縮丸)對小鼠出血時間、凝血時間的影響

2.4 摩羅丹(濃縮丸)對醋酸致小鼠疼痛反應(yīng)和腹腔毛細(xì)血管通透性增高的影響 在鎮(zhèn)痛實驗中，與模型對照組比較，陽性藥布洛芬顆粒以及摩羅丹(濃縮丸)高劑量組小鼠的扭體次數(shù)明顯減少，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。其中布洛芬顆粒對醋酸致小鼠疼痛反應(yīng)的抑制率為53.6%，摩羅丹(濃縮丸)高劑量、中劑量、低劑量對醋酸致小鼠疼痛反應(yīng)的抑制率分別為32.1%、24.9%以及22.9%。見圖4。

圖4 摩羅丹(濃縮丸)對醋酸致小鼠疼痛反應(yīng)的影響

在腹腔毛細(xì)血管通透性增高實驗中，與模型對照組比較，陽性藥布洛芬顆粒組、摩羅丹(濃縮丸)高、中劑量組小鼠腹腔液吸光度明顯降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。其中布洛芬顆粒對醋酸致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性增高的抑制率為43.27%，摩羅丹(濃縮丸)高劑量、中劑量、低劑量對腹腔毛細(xì)血管通透性增高的抑制率分別為34.98%、32.23%以及14.95%。見圖5。

圖5 摩羅丹(濃縮丸)對醋酸致小鼠毛細(xì)血管通透性增高的影響

3 討論

CNAG是臨床常見病，常伴有胃潰瘍、穿孔、出血等發(fā)生[5]，“正常胃黏膜→非萎縮性胃炎→萎縮性胃炎→腸上皮化生→異型增生→胃癌”的演變規(guī)律也得到眾多學(xué)者的認(rèn)可[5-6]。因此，有效控制非萎縮性胃炎的發(fā)生對控制后續(xù)病情加重有十分重要的意義?，F(xiàn)代西醫(yī)學(xué)對于CNAG的治療方式主要以藥物為主，包括抗幽門螺桿菌治療、胃黏膜保護(hù)藥、制酸/抑酸藥、促胃腸動力藥以及抗焦慮抑郁藥等，雖有一定療效但遠(yuǎn)期療效并不十分理想[7-8]。

根據(jù)臨床正常，CNAG屬于中醫(yī)“胃脘痛”“痞滿”“反酸”等范疇[9]。中成藥干預(yù)是我國慢性胃炎治療的重要組成部分[10]。摩羅丹(濃縮丸)可單獨用于治療胃癌前病變和胃癌前疾病(主要指萎縮、腸化生、異型增生)，臨床效果顯著且具有較好的安全性[11-12]。在其主要成分中，百合清熱透邪，甘潤微寒，經(jīng)現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，百合中含有的果膠及磷脂類物質(zhì)，服用后可保護(hù)胃黏膜，治療胃黏膜損傷，并具有一定的抑制幽門螺桿菌作用[13-14]；烏藥辛開溫散，能順氣暢中，散寒止痛，且善于疏通氣機(jī)，用于治療寒凝氣滯胸腹諸癥，經(jīng)現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，烏藥具有較強(qiáng)的鎮(zhèn)痛、抗炎作用，并能影響某些胃腸激素的分泌，從而興奮胃平滑肌，刺激幽門運動，以增強(qiáng)胃竇運動[15]。百合與烏藥配伍使用出現(xiàn)在大量治療胃病的經(jīng)典方劑中，二者相配一寒一溫，一升一降，潤而不滯，辛而不燥，具有行氣和胃、健脾止痛之功效[16]。其他主要成分如茯苓、白術(shù)，為健脾藥，茯苓健脾燥濕、利水消腫，白術(shù)健脾益氣、燥濕利尿，被前人譽(yù)為“補(bǔ)氣健脾第一要藥”，可主要針對慢性胃炎脾氣虛的病機(jī)特點[17-18]。不同成分配伍使用，使摩羅丹(濃縮丸)從多種角度針對CNAG的病機(jī)產(chǎn)生療效。

本研究模擬CNAG常見的癥狀表現(xiàn)進(jìn)行造模，在相應(yīng)癥狀上采用對癥西藥作為陽性對照藥，為確保陽性對照藥結(jié)果可靠，陽性對照藥均采用2倍臨床等效劑量進(jìn)行對照。研究中，以吲哚美辛模擬非甾體抗炎藥，以鹽酸-乙醇所致大鼠胃黏膜損傷實驗?zāi)M生活中飲酒導(dǎo)致的CNAG、胃潰瘍等疾病狀態(tài)；以小鼠出血凝血實驗?zāi)M臨床常見的CNAG伴糜爛；以小鼠毛細(xì)血管通透性實驗、小鼠扭體實驗來模擬CNAG可能出現(xiàn)的炎癥、疼痛狀態(tài)，在上述模型基礎(chǔ)上給予摩羅丹(濃縮丸)進(jìn)行治療，評價摩羅丹(濃縮丸)在治療CNAG中的藥效作用。

結(jié)果顯示，摩羅丹(濃縮丸)對吲哚美辛、鹽酸-乙醇致大鼠胃黏膜損傷有保護(hù)和治療作用，對醋酸致小鼠疼痛反應(yīng)具有抑制作用，對醋酸致小鼠毛細(xì)血管通透性增高具有抑制作用，并能明顯縮短小鼠出血以及凝血時間，具有良好的止血效果，且其作用效果均非劣于陽性對照藥組，表明摩羅丹(濃縮丸)各劑量組對CNAG中的胃黏膜損傷、出血、疼痛、炎癥均具有治療作用。

綜上所述，摩羅丹(濃縮丸)對吲哚美辛等非甾體抗炎藥、乙醇刺激引起的胃黏膜破損、潰瘍具有治療作用，對CNAG中常見的糜爛出血、疼痛、炎癥也同樣具有治療作用，并能有效保護(hù)胃黏膜。本研究為摩羅丹(濃縮丸)藥效學(xué)作用提供新的實驗依據(jù)，后期可針對CNAG其他臨床表現(xiàn)開展實驗，以進(jìn)一步完善摩羅丹(濃縮丸)對CNAG的臨床療效評價。