何紫凝 袁中文 馮森玲

(廣州醫(yī)科大學(xué)附屬第三醫(yī)院藥學(xué)部/廣東省產(chǎn)科重大疾病重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣州，510150)

據(jù)美國(guó)疾病預(yù)防控制中心預(yù)測(cè)報(bào)告，自2019年10月至2020年4月有3 900～5 600萬(wàn)人感染流感，導(dǎo)致24 000～62 000人死亡[1]。流行性感冒(流感)是一種由流感病毒感染導(dǎo)致的急性呼吸道傳染病，嚴(yán)重時(shí)可發(fā)展為急性呼吸窘迫綜合征或多臟器衰竭，甚至引起死亡。目前主流的防治流感藥物有生物疫苗、奧司他韋和扎那米韋等神經(jīng)氨酸酶抑制劑、金剛烷胺類的M2離子通道抑制劑。但現(xiàn)有的抗流感藥物容易產(chǎn)生耐藥性，而且僅針對(duì)單一靶點(diǎn)，開(kāi)發(fā)滯后，完全跟不上流感病毒高抗原漂移的速度，給抗流感藥物的開(kāi)發(fā)帶來(lái)很大挑戰(zhàn)[2]。近年來(lái)，我國(guó)中藥及其復(fù)方發(fā)展迅速，研究表明中藥不僅可以通過(guò)抑制病毒復(fù)制、抵抗病毒導(dǎo)致的細(xì)胞病變來(lái)治療流感，還能通過(guò)調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能、改善肺循環(huán)、鎮(zhèn)痛抗炎來(lái)治療流感并發(fā)癥[3]。因此，運(yùn)用中藥防治流感，開(kāi)發(fā)抗流感藥物，有其獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)。

丁香為桃金娘科植物丁香EugeniacaryophyllataThunb.的干燥花蕾。具有溫中降逆，補(bǔ)腎助陽(yáng)的功效。主治脾胃虛寒，呃逆嘔吐，食少吐瀉，心腹冷痛，腎虛陽(yáng)痿[4]?，F(xiàn)代研究表明，丁香主要含有揮發(fā)油類、酚酸類、黃酮類、三萜類等成分，具有調(diào)節(jié)胃腸運(yùn)動(dòng)、抗胃潰瘍、抗炎、鎮(zhèn)痛、抗菌、抗病毒、抗癌等藥理作用[5]。有研究證明，丁香具有抗流感病毒活性，但其抗流感病毒作用機(jī)制的報(bào)道較少，目前只知其能抑制神經(jīng)氨酸酶而發(fā)揮抗流感病毒作用，但是否還存在其他機(jī)制仍不清楚[6]。網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)是基于生物信息學(xué)和系統(tǒng)生物學(xué)方法，通過(guò)構(gòu)建“藥物-靶點(diǎn)-疾病”網(wǎng)絡(luò)，分析網(wǎng)絡(luò)特征協(xié)同關(guān)系的新學(xué)科，近年來(lái)被廣泛用于預(yù)測(cè)中藥活性成分群和潛在靶點(diǎn)群，以闡述中藥作用機(jī)制。

本研究擬采用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)對(duì)丁香抗流感活性成分的相關(guān)靶點(diǎn)及信號(hào)通路進(jìn)行分析，并運(yùn)用分子對(duì)接實(shí)驗(yàn)研究丁香活性成分與流感病毒蛋白的結(jié)合作用，從分子水平、細(xì)胞水平和基因水平探討丁香抗流感分子機(jī)制，為丁香的深入研究及開(kāi)發(fā)利用，為抗流感藥物的研發(fā)提供參考。

1 資料與方法

1.1 數(shù)據(jù)庫(kù)與軟件 數(shù)據(jù)庫(kù)：中藥系統(tǒng)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)與分析平臺(tái)(Traditional Chinese Medicine Systems Pharmacology Database and Analysis Platform，TCMSP)(http://tcmspw.com/tcmsp.php)、SwissTarget Prediction數(shù)據(jù)庫(kù)(http://www.swisstargetprediction.ch/)、人類基因數(shù)據(jù)庫(kù)(GeneCards)(https://www.genecards.org/)、String數(shù)據(jù)庫(kù)(https://string-db.org/)、Protein Data Bank數(shù)據(jù)庫(kù)(PDB，https://www.rcsb.org/)、Metascape網(wǎng)站(http://metascape.org/gp/index.html)；軟件：Cytoscape 3.7.2、Autodock Vina 1.1.2、Ligplus等[7-13]。

1.2 丁香活性成分的收集和篩選 從TCMSP中以及文獻(xiàn)補(bǔ)充檢索丁香所有化學(xué)成分，然后篩選出其中生物利用度(Oral Bioavailability，OB)≥30%，類藥性(Drug Likeness，DL)≥0.18的丁香活性成分。

1.3 丁香活性成分靶點(diǎn)的預(yù)測(cè) 將篩選得到的活性成分輸進(jìn)數(shù)據(jù)庫(kù)SwissTarget Prediction，研究物種為“Homo sapiens”，得到結(jié)果后，整合、去重，最后得到丁香活性成分對(duì)應(yīng)的作用靶點(diǎn)。

1.4 流感疾病靶點(diǎn)的獲取及丁香治療流感的靶點(diǎn)預(yù)測(cè) 以“influenza”為關(guān)鍵詞，物種為“Homo sapiens”，檢索GeneCards，獲得流感疾病相關(guān)靶點(diǎn)。利用Microsoft Excel將流感疾病靶點(diǎn)與丁香活性成分作用靶點(diǎn)進(jìn)行映射，獲得二者的共同靶點(diǎn)，即為丁香治療流感的靶點(diǎn)。

1.5 構(gòu)建丁香-活性成分-流感靶點(diǎn)-流感網(wǎng)絡(luò) 運(yùn)用Cytoscape 3.7.2軟件，導(dǎo)入丁香活性成分和丁香治療流感的靶點(diǎn)，構(gòu)建網(wǎng)絡(luò)“丁香-活性成分-流感靶點(diǎn)-流感”，通過(guò)Network Analyzer功能分析網(wǎng)絡(luò)節(jié)點(diǎn)，度值的大小以節(jié)點(diǎn)的大小來(lái)代表。

1.6 構(gòu)建和分析丁香治療流感靶點(diǎn)的蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用(Protein-protein Interaction，PPI)網(wǎng)絡(luò) 運(yùn)用String數(shù)據(jù)庫(kù)檢索獲得的丁香治療流感的靶點(diǎn)，物種來(lái)源設(shè)為“Homo sapiens”，最小相互作用分值設(shè)為0.4，得到PPI信息，將其導(dǎo)入Cytoscape 3.7.2軟件，繪制出PPI網(wǎng)絡(luò)。利用Network Analyzer對(duì)其進(jìn)行分析，計(jì)算網(wǎng)絡(luò)中每個(gè)節(jié)點(diǎn)度值，篩選出度值高于2倍中位數(shù)的節(jié)點(diǎn)。然后運(yùn)用插件CytoNCA對(duì)PPI進(jìn)行網(wǎng)絡(luò)拓?fù)浞治?，包括連接度、介度和緊密度等，篩選出連接度、介度和緊密度均高于中位數(shù)的節(jié)點(diǎn)作為核心節(jié)點(diǎn)。

1.7 基因本體(Gene Ontology，GO)富集分析和京都基因和基因組百科全書(shū)(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes，KEGG)富集分析 將所得的丁香治療流感靶點(diǎn)錄入Metascape平臺(tái)，設(shè)置P<0.05，進(jìn)行GO生物功能與KEGG富集分析，通過(guò)平臺(tái)對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行可視化，以高級(jí)氣泡圖呈現(xiàn)。

1.8 分子對(duì)接及其作用網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建 將丁香-活性成分-流感靶點(diǎn)-流感網(wǎng)絡(luò)中的28個(gè)化合物和奧司他韋作為對(duì)接柔性配體，利用Chem Bio 3D Ultra 12.0構(gòu)建化合物的3D結(jié)構(gòu)，進(jìn)行能量最小化，并保存為PDB格式。然后用Mgltools 1.5.6對(duì)化合物進(jìn)行預(yù)處理，并轉(zhuǎn)化為PDBQT格式。選取“丁香-活性成分-靶點(diǎn)-疾病”網(wǎng)絡(luò)度值前15位與PPI核心網(wǎng)絡(luò)的2個(gè)交集靶點(diǎn)和6個(gè)關(guān)鍵流感病毒蛋白作為對(duì)接剛性受體。從PDB數(shù)據(jù)庫(kù)中下載受體靶蛋白的晶體結(jié)構(gòu)(含原配體)。利用Pymol軟件對(duì)各靶點(diǎn)晶體結(jié)構(gòu)去水及自身配體，通過(guò)Mgltools1.5.6進(jìn)行加氫，計(jì)算電荷，合并非極性氫等預(yù)處理，然后保存為PDBQT格式。以受體靶蛋白中原配體的中心點(diǎn)坐標(biāo)設(shè)置對(duì)接的活性口袋區(qū)域，采用AutoDock Vina 1.1.2進(jìn)行半柔性分子對(duì)接。取能量最低的構(gòu)象為最優(yōu)構(gòu)象，用Pymol軟件可視化分析作圖。根據(jù)分子對(duì)接結(jié)果，以?shī)W司他韋作為對(duì)照篩選出活性化合物，然后將其與流感相關(guān)關(guān)鍵蛋白導(dǎo)入Cytoscape 3.7.2軟件，構(gòu)建丁香化合物與流感相關(guān)關(guān)鍵蛋白作用網(wǎng)絡(luò)。

2 結(jié)果

2.1 丁香活性成分的篩選收集 通過(guò)TCMSP平臺(tái)檢索到丁香117個(gè)化學(xué)成分，以O(shè)B≥30%，DL≥0.18為條件篩選到6個(gè)活性成分(Clove1-6)。結(jié)合文獻(xiàn)補(bǔ)充TCMSP中并未收集的化學(xué)成分，同樣將OB≥30%及DL≥0.18作為標(biāo)準(zhǔn)，篩選得到3個(gè)活性成分(W1-3)。另外，有19個(gè)化學(xué)成分(NA1-19)因其有抗流感病毒活性報(bào)道，雖不符合篩選條件，同樣納入研究。共獲得28個(gè)丁香活性成分。見(jiàn)表1。

表1 丁香活性成分

2.2 丁香治療流感的靶點(diǎn) 共得到589個(gè)丁香活性成分作用靶點(diǎn)。獲得2 506個(gè)流感疾病靶點(diǎn)。映射后得到209個(gè)共同靶點(diǎn)。

2.3 丁香-活性成分-靶點(diǎn)-流感網(wǎng)絡(luò) 圖1包括1個(gè)丁香，28個(gè)丁香活性成分，209個(gè)流感靶點(diǎn)，1個(gè)流感，共239節(jié)點(diǎn)和1 281條邊。圓形代表丁香活性成分，正方形代表流感靶點(diǎn)。28個(gè)活性成分均能與25個(gè)以上的流感靶點(diǎn)相連接，度值排前5的活性成分分別為：Rhamnazin-3-O-β-D-glucopyranoside、Isoquercitrin、Quercetin-3-O-β-D-glucuronide、Rhamnetin-3-O-β-D-glucuronide-6″-methyl、1,2,3,6-tetra-O-galloylglucose。

圖1 丁香-活性成分-靶點(diǎn)-流感網(wǎng)絡(luò)

2.4 丁香治療流感靶點(diǎn)的PPI 利用String數(shù)據(jù)庫(kù)，檢索得到的209個(gè)丁香治療流感的靶點(diǎn)，獲得了包含207個(gè)節(jié)點(diǎn)，3 076條邊的PPI網(wǎng)絡(luò)，然后通過(guò)Cytoscape 3.7.2將網(wǎng)絡(luò)可視化，并使用Network Analyzer功能分析，篩選出度值高于2倍中位數(shù)的節(jié)點(diǎn)，所得PPI網(wǎng)絡(luò)有39個(gè)節(jié)點(diǎn)，610條邊；再做進(jìn)一步拓?fù)浞治觯Y選出連接度、介度和緊密度均高于中位數(shù)的18個(gè)節(jié)點(diǎn)，共150條邊，構(gòu)成PPI核心網(wǎng)絡(luò)，網(wǎng)絡(luò)中節(jié)點(diǎn)面積大小和顏色暖冷代表節(jié)點(diǎn)的重要性強(qiáng)弱。PPI核心網(wǎng)絡(luò)靶點(diǎn)包括AKT1、GAPDH、TP53、MAPK3、TNF、EGFR、VEGFA、SRC、MAPK1、CASP3、HSP90AA1、HRAS、MAPK8、IL2、MAPK14等。而在丁香-活性成分-靶點(diǎn)-流感網(wǎng)絡(luò)中，TERT、XDH、PRKCA、PTGS2、ADORA2A、PRKCD、PRKCB、SRC、ADRA2A、ADRA2C、HSP90AA1、PRKCE、NOX4、RPS6KA3、CD38均可與15個(gè)以上的活性成分相互作用，二者相互映射得到SRC、HSP90AA1 2個(gè)靶點(diǎn)。見(jiàn)圖2。

圖2 丁香治療流感靶點(diǎn)的PPI網(wǎng)絡(luò)

2.5 GO生物功能和KEGG富集分析 得到2 366個(gè)GO生物過(guò)程(Biological Processes，BP)富集分析條目、117個(gè)GO細(xì)胞組分(Cell Components，CC)富集分析條目和214個(gè)GO分子功能(Molecular Functions，MF)富集分析條目。以前20個(gè)條目為主要分析對(duì)象。BP主要涉及對(duì)酶活性的調(diào)控、細(xì)胞因子介導(dǎo)的信號(hào)通路、MAPK級(jí)聯(lián)的調(diào)控、細(xì)胞對(duì)化合物的反應(yīng)，細(xì)胞遷移的調(diào)控、細(xì)胞對(duì)應(yīng)激的反應(yīng)、細(xì)胞死亡的調(diào)控、激活免疫反應(yīng)等。CC主要涉及膜區(qū)、小窩、膜側(cè)、囊泡腔、分泌顆粒內(nèi)腔、溶解液泡、溶酶體等。MF主要涉及激酶和蛋白激酶結(jié)合與活性、磷酸轉(zhuǎn)移酶和蛋白絲氨酸/蘇氨酸激酶活性、轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合、細(xì)胞黏附分子結(jié)合、輔助因子結(jié)合、氧化還原酶活性、細(xì)胞因子受體。KEGG通路富集分析共得到173個(gè)條目，主要涉及癌癥途徑、PI3K-AKT信號(hào)通路、促分裂原活化的蛋白激酶(Mitogenactivated Protein Kinase，MAPK)、乙型肝炎、Ras蛋白、細(xì)胞凋亡和趨化因子信號(hào)通路、T細(xì)胞受體信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路、甲型流感、環(huán)磷酸腺苷信號(hào)通路、EB病毒感染等。見(jiàn)圖3。圖中橫坐標(biāo)表示富集因子，縱坐標(biāo)表示通路，圓點(diǎn)大小表示基因數(shù)，圓點(diǎn)越大則基因的富集數(shù)越多；圓點(diǎn)顏色代表-log10(P值)，值越大，顏色越明亮，此通路上富集的基因越多。

圖3 GO生物過(guò)程和KEGG信號(hào)通路富集分析

2.6 丁香活性成分與流感相關(guān)蛋白分子對(duì)接作用網(wǎng)絡(luò)與分子對(duì)接模式 將“丁香-活性成分-流感靶點(diǎn)-流感網(wǎng)絡(luò)”網(wǎng)絡(luò)中的28個(gè)活性成分和奧司他韋與8個(gè)流感相關(guān)蛋白進(jìn)行半柔性分子對(duì)接。見(jiàn)表2。以?shī)W司他韋作為對(duì)照篩選，構(gòu)建丁香活性成分與流感相關(guān)蛋白作用網(wǎng)絡(luò)。結(jié)果顯示，丁香活性成分對(duì)流感關(guān)鍵靶蛋白和流感病毒蛋白均有較好的結(jié)合作用。丁香中28個(gè)活性成分均能與流感病毒蛋白NA、HA、PB2對(duì)接，且大多還能與PA、NP、M2對(duì)接，還有11個(gè)成分能與M2對(duì)接，21個(gè)成分與NP對(duì)接，都優(yōu)于奧司他韋。除NA3、NA4、CLOVE2外，其他成分均可與SRC結(jié)合，除NA6外，其他成分均可與熱激蛋白90AA1結(jié)合，且都優(yōu)于奧司他韋。其中NA6與NA，NA8與HA，CLOVE6與M2，NA12與PB2，NA7與NP，NA9與PA、熱激蛋白90AA1、SRC的結(jié)合度最高。見(jiàn)圖4。從分子對(duì)接模式圖可以看出，大多化合物主要以氫鍵和疏水作用和受體位點(diǎn)結(jié)合，而且這些化合物大部分屬于黃酮類和鞣質(zhì)類。如NA6與NA中的Glu119、Glu227、Arg371等形成氫鍵，與Arg118、Glu277等形成疏水作用，加強(qiáng)了NA6與NA的相互作用。NA12與PB2中的Glu361、Lys376等形成氫鍵，與His357、Ser321等形成疏水作用，形成了穩(wěn)定的結(jié)合構(gòu)象。見(jiàn)圖5。

表2 流感相關(guān)蛋白

圖4 丁香活性成分與流感相關(guān)蛋白分子對(duì)接作用網(wǎng)絡(luò)

圖5 丁香活性成分與8個(gè)流感相關(guān)蛋白結(jié)合度最高的分子對(duì)接模式

3 討論

本研究構(gòu)建了丁香-活性成分-流感靶點(diǎn)-流感網(wǎng)絡(luò)，共篩選出丁香防治流感疾病的28個(gè)活性成分、209個(gè)靶點(diǎn)。網(wǎng)絡(luò)中度值前5位的化合物是rhamnazin-3-O-β-D-glucopyranoside、isoquercitrin、quercetin-3-O-β-D-glucuronide、rhamnetin-3-O-β-D-glucuronide-6″-methyl、1,2,3,6-tetra-O-galloylglucose。Isoquercetrin在體外和體內(nèi)均能顯著減少流感病毒的復(fù)制，還能通過(guò)抑制流感病毒神經(jīng)氨酸酶和下調(diào)γ干擾素水平而發(fā)揮抗流感病毒作用[14-15]。

流感病毒在宿主細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行復(fù)制增殖，最終通過(guò)多條凋亡途徑激活下游胱天蛋白酶3，使細(xì)胞凋亡[16]。流感病毒NS1能使凋亡肽酶激活因子1與熱激蛋白90AA1的相互作用減弱，并激活胱天蛋白酶3分解，減少細(xì)胞的過(guò)早凋亡，促使病毒在細(xì)胞內(nèi)的增殖[17]。流感病毒入侵宿主后，經(jīng)宿主能介導(dǎo)系列的天然免疫防御反應(yīng)，如釋放腫瘤壞死因子-α(Tumor Necrosis Factor-α，TNF-α)發(fā)揮抗病毒作用[18]。TNF-α可上調(diào)核因子κB、MAPK等信號(hào)通路，引起機(jī)體炎癥反應(yīng)的發(fā)生，最后導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。但是過(guò)度刺激天然免疫系統(tǒng)可能有害機(jī)體。研究表明，流感不是通過(guò)直接破壞呼吸道上皮細(xì)胞來(lái)引起病理?yè)p傷及死亡的，而是通過(guò)“細(xì)胞因子風(fēng)暴”，TNF-α是引起急性肺損傷的核心細(xì)胞因子[19]。P53是細(xì)胞腫瘤抗原，在細(xì)胞感染后期，流感病毒可激發(fā)P53依賴和非P53依賴的細(xì)胞凋亡、壞死途徑[20]。流感病毒先激活表皮生長(zhǎng)因子受體，進(jìn)而激活PI3K、MAPK等下游信號(hào)通路，促進(jìn)對(duì)宿主的侵襲，增強(qiáng)自身復(fù)制[21]。因此，本研究顯示，丁香可能通過(guò)AKT1、TP53、MAPK3、TNF、EGFR、CASP3、HSP90AA1等靶點(diǎn)調(diào)節(jié)人機(jī)體炎癥反應(yīng)、細(xì)胞凋亡等免疫應(yīng)答以防治流感。

通過(guò)GO功能富集分析發(fā)現(xiàn)丁香可激活免疫反應(yīng)、調(diào)控酶活性、細(xì)胞因子、細(xì)胞應(yīng)激、細(xì)胞凋亡等生物過(guò)程。而KEGG通路富集分析表明丁香可能通過(guò)PI3K-AKT信號(hào)通路、MAPK信號(hào)通路、乙型肝炎、細(xì)胞凋亡、趨化因子信號(hào)通路、T細(xì)胞受體信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路、甲型流感等多條復(fù)雜的通路防治流感。研究發(fā)現(xiàn)，流感病毒感染的早期和中期，非結(jié)構(gòu)性蛋白可以結(jié)合同時(shí)激活磷脂酰肌醇3激酶，或者與AKT1直接結(jié)合，磷酸化AKT1，使PI3K-AKT信號(hào)通路激活，抑制細(xì)胞凋亡，促使流感病毒的增殖和復(fù)制[22]。MAPK信號(hào)通路，包括胞外信號(hào)調(diào)節(jié)酶(Extracellular Signal-regulated Kinase，ERK)1/2、c-Jun末端激酶(JNK)、P38和ERK5 4種亞型。研究顯示，流感病毒感染可同時(shí)激活4條MAPK通路。而MAPK家族對(duì)病毒核糖核蛋白(Viral Ribonucleoprotein，vRNP)的運(yùn)輸和病毒復(fù)制有促進(jìn)作用。其中，在炎癥反應(yīng)中，P38 MAPK激活不可或缺，可調(diào)節(jié)流感病毒感染誘導(dǎo)產(chǎn)生的細(xì)胞因子。MAPK信號(hào)通路的激活還能誘導(dǎo)TNF-α、白細(xì)胞介素-2和白細(xì)胞介素-6等的表達(dá)[23]。

從丁香化學(xué)成分與流感相關(guān)蛋白分子對(duì)接作用網(wǎng)絡(luò)圖可知，28個(gè)成分均可與3個(gè)以上靶點(diǎn)結(jié)合，且各個(gè)靶點(diǎn)均能結(jié)合多個(gè)活性成分，這提示丁香抗流感病毒的多靶點(diǎn)作用，丁香除了能抑制NA，還能作用于HA、PB2、PA、NP、M2等多個(gè)流感病毒蛋白。由此推測(cè)，丁香可能是通過(guò)與NA、HA、M2等蛋白相互作用，影響流感病毒的吸附、脫殼、復(fù)制以及釋放等過(guò)程，從而達(dá)到抗流感病毒作用。據(jù)研究報(bào)道，除了W3、CLOVE1、CLOVE2、CLOVE3、CLOVE5外，其他活性成分均有抑制NA、抗流感病毒活性的作用[6，24-26]。其中Luteolin(木犀草素)、Quercetin(槲皮素)和Kaempferol(山柰酚)還被實(shí)驗(yàn)證實(shí)分別能通過(guò)抑制HA、M2的表達(dá)從而抑制流感病毒活性[25-27]。

根據(jù)網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析，SRC和熱激蛋白90AA1不僅為丁香多個(gè)化合物的靶點(diǎn)并且在PPI網(wǎng)絡(luò)中具有重要地位，故用AutoDock Vina對(duì)丁香活性成分與SRC和熱激蛋白90AA1進(jìn)行分子對(duì)接。結(jié)果表明丁香活性成分與SRC(原癌基因酪氨酸蛋白激酶)、熱激蛋白90AA1有較好的結(jié)合活性，推測(cè)丁香在人體內(nèi)可能主要干預(yù)SRC、熱激蛋白90AA1來(lái)治療流感。

綜上所述，本研究運(yùn)用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)和分子對(duì)接的方法探索丁香中化學(xué)成分、作用靶點(diǎn)以及主要活性成分與流感相關(guān)蛋白結(jié)合的能力。研究結(jié)果提示，丁香發(fā)揮防治流感的作用可能是通過(guò)多成分、多靶點(diǎn)、多通路的協(xié)同作用來(lái)實(shí)現(xiàn)的。本研究初步探索和預(yù)測(cè)丁香治療流感的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)與分子生物學(xué)機(jī)制，為后續(xù)進(jìn)一步驗(yàn)證其作用機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究提供了依據(jù)。