慢性乙型肝炎(CHB)感染是誘發(fā)肝硬化，并逐漸發(fā)展為原發(fā)性肝癌的一個重要的原因

。約有50%的原發(fā)性肝癌(PHC)患者與乙型肝炎病毒的感染相關(guān)

。肝癌的死亡率較高，其主要原因為缺乏早期診斷指標，因此尋找一種科學有效的指標對肝癌進行早期診斷是十分必要的

。miRNA在動、植物以及病毒體內(nèi)廣泛存在，血清miRNAs檢測方便并且具有較好的穩(wěn)定性

。正常情況，血清miRNA主要來源于血細胞，但是機體出現(xiàn)疾病時，血清miRNA會影響組織(腫瘤組織)分泌

。故目前血清miRNA已被考慮作為疾病診斷和療效評估的新型標志物

。本文探討miRNA-130a與HBV-HCC的相關(guān)性，為進一步了解肝癌發(fā)生的分子機制以及尋找新的診療標志物提供參考。

2017年的試驗結(jié)果（表1）表明，38%吡唑醚菌酯·啶酰菌胺水分散粒劑是防治黃瓜灰霉病的良好藥劑，三個供試濃度處理對黃瓜灰霉病的平均防效隨施藥濃度升高，平均防效升高，它們處理間的平均防效差異彼此達到顯著水平。38%吡唑醚菌酯·啶酰菌胺水分散粒劑每畝用藥60 g處理平均防效與對照藥劑250 g/L吡唑醚菌酯乳油和50%腐霉利可濕性粉劑處理的平均防效相當，但顯著低于50%啶酰菌胺水分散粒劑的處理；38%吡唑醚菌酯·啶酰菌胺水分散粒劑每畝用藥80 g處理平均防效與對照藥劑50%啶酰菌胺水分散粒劑處理的平均防效相當，但顯著高于另外兩個對照藥劑的處理。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集肝癌組HBV-HCC 60例患者和對照組30例體檢健康者。miRNA血清樣品24 h進行血清處理，獲得無細胞的血清樣品，并置于-80℃冰箱儲存。同時收集肝病患者的一般臨床資料。肝硬化患者的納入標準為其診斷結(jié)果，由臨床醫(yī)生依據(jù)相關(guān)診斷標準進行診斷。肝細胞癌患者納入標準：①患者未進行手術(shù)治療；②在收集血清前未進行其他治療；③經(jīng)病理確診為HCC。排除標準：①合并有慢性丙型肝炎等其他肝臟疾病、伴有自身免疫性肝病、伴有藥物性肝損傷或者代謝性肝??；②合并有HIV感染；③進行過器官移植；④合并有其他類型腫瘤；⑤患者為免疫抑制狀態(tài)。此項研究所有內(nèi)容均符合赫爾辛基宣言，兩組人員均知曉此項研究并簽署知情同意書。

Preliminary Study on Quantitative Research Methods of Discussion-based Teaching: CAD/CAM Course

政府作為相對獨立的行動主體，政府及其官員絕不僅僅是所謂的公共利益的代表，他們也具有相對狹隘的部門利益，在公共政策的制定、實施、評估等過程中也有謀求部門利益與自身發(fā)展的沖動⑦。政府購買社工服務也存在自身的動機，政府的需求主要有兩個：一是維護社區(qū)的穩(wěn)定，二是滿足某些政府官員對于政績方面的需求。而服務對象的需求則是多樣化的，社會工作強調(diào)以服務對象的需求為本，培養(yǎng)案主解決問題的能力。在具體實踐過程中，時常會出現(xiàn)政府的需求與服務對象的需求不一致的時候。

2.2 兩組人員性別、年齡、甲胎蛋白及血清miRNA-130a 表達情況 見表2。

1.3 方法

2.7 凋亡蛋白Bcl-2的表達水平 見表5。

2.5 miRNA-130a對Hep-G2細胞增殖的影響 見表4。

2.6 miRNA-130a對Hep-G2的細胞凋亡影響 見圖1。在進行轉(zhuǎn)染48 h后，上調(diào)組細胞的凋亡率高于對照組，下調(diào)組細胞的凋亡率低于對照組，差異有統(tǒng)計學意義(

<0.05)；上調(diào)組細胞的凋亡率高于下調(diào)組，差異有統(tǒng)計學意義(

<0.05)。

?Lehr v．Robertson，463 U．S．248，Supreme Court of the United States，June 27，1983，p．262．

2.4 miRNA-130a與患者其他臨床特征的相關(guān)性 見表3。

1.3.4 流式細胞儀檢測細胞凋亡 常規(guī)方法操作。

1.3.5 Western blot法檢測凋亡蛋白Bcl-2表達 常規(guī)方法操作。

1.4 統(tǒng)計學方法 所有數(shù)據(jù)分析均使用SPSS 18.0軟件。數(shù)據(jù)采用Mean±SD表示，使用

檢驗確認各組數(shù)據(jù)之間的差異性，計數(shù)資料以百分率表示，使用χ

檢驗。

<0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。應用受試者工作特征曲線(ROC)對甲胎蛋白(AFP)和血清miRNA在區(qū)分不同疾病的特異性和敏感性進行分析。

2 結(jié)果

2.1 HBV-HCC患者的一般臨床資料 見表1。

1.2 實驗材料 HepG2肝癌細胞由中國科學院上海生命科學院提供；胎牛血清由上?？道缮锟萍加邢薰咎峁?；PBS購自江西江藍純生物試劑有限公司；信號通路抗體由北京百奧萊特科技有限公司提供；p-Genesil-NC和p-Genesil-miRNA-130a由廈門科研生物技術(shù)有限公司提供。

2.3 miRNA-130a作為潛在診斷標準的評估 截斷值為7.49，miRNA-130a時的曲線下面積(AUC)為0.858(95%

：0.812～0.903)，敏感性為83.5%，特異性為83.2%。單用AFP時的AUC為0.852(95%

：0.801～0.902)，敏感性為72.1%，特異性為93.6%。聯(lián)合兩個指標時的AUC為0.899(95%

：0.846～0.952)，敏感性為89.6%，特異性為80.4%。

1.3.3 MTT法檢測miRNA-130a對肝癌HepG2細胞的增殖能力 將對數(shù)期生長的HepG2細胞接種到96孔板中，每孔5×10

個，培養(yǎng)24 h后，將細胞分為3組：對照組、下調(diào)組和上調(diào)組，其中對照組細胞不進行處理，下調(diào)組和上調(diào)組細胞給予p-Genesil-NC和p-Genesil-miRNA-130a進行轉(zhuǎn)染。在轉(zhuǎn)染48 h后，每孔加入10 μl的MTT溶液，避光培養(yǎng)4 h后，將每孔溶液倒出，然后每孔加入150 μl DMSO溶液，應用酶標儀檢測490 nm下吸光度(OD)值，應用公式細胞存活率(%)=OD上調(diào)組/下調(diào)組/OD對照組×100%對各組細胞的存活率進行計算。

近年來，已有多種技術(shù)實現(xiàn)陷波特性的UWB天線被設計出來[2-10]。如在天線輻射體上蝕刻各種形狀的縫隙或者槽線以及缺陷地等結(jié)構(gòu)來獲得所需頻段上的陷波。例如，天線尺寸大，沒有實現(xiàn)小型化，集成難度大；結(jié)構(gòu)復雜，給天線制作帶來了一定困難。

1.3.2 實時定量PCR(qRT-PCR) 常規(guī)方法操作。

1.3.1 RNA的提取和逆轉(zhuǎn)錄 應用QuantoBio的RNA試劑盒對200 μl血清中的RNA進行提取，所有步驟均按照說明書進行。應用NanoDrop 8000(Thermo Fisher)對RNA的純度和濃度進行分析測定。cDNA是應用聚腺苷酸化的方法由RNA逆轉(zhuǎn)錄得到。

3 討論

miRNA作為一種由21～25個核苷酸組成的單鏈非編碼小分子RNA

，其在各種動、植物中廣泛存在，其能夠?qū)Π?mRNA的翻譯進行抑制，并且能夠調(diào)控基因轉(zhuǎn)錄后的表達和翻譯

，能夠?qū)ι矬w的發(fā)育生長以及其他多種病理生理學過程進行調(diào)控

。諸多研究證實，miRNA能夠?qū)σ职┗蚝桶┗虻谋磉_進行控制從而調(diào)控肝癌的發(fā)生，其中包括肝癌細胞的侵襲轉(zhuǎn)移、凋亡和增殖

。

本研究發(fā)現(xiàn)，血清miRNA-130a的表達在HBV-HCC患者中的表達水平要明顯高于健康體檢者。ROC曲線分析結(jié)果提示血清miRNA-130a能夠成為一個潛在的肝癌的診斷指標，在聯(lián)合AFP后敏感性進一步提高，具有一定的臨床評估價值。

1993年，miRNA首次被人類發(fā)現(xiàn)后，越來越多的研究發(fā)現(xiàn)miRNAs在各種組織及疾病中的表達有所改變，其血清miRNA的表達變化能在一定程度上反映疾病的狀態(tài)

。例如，miR-278在腎癌患者血清中表達升高，miR-451的表達降低

；在肝癌和肝炎患者中血清miR-21的水平明顯升高，其與患者的肝臟損傷有一定的相關(guān)性

；在肝癌和肝炎患者中血清miR-122的水平也有一定升高，這對于肝癌的預后有一定的意義

。血清中miRNA表達的可測性和穩(wěn)定性，使其在疾病的診斷和預后中的作用越來越多。

2018年5月29日下午，肇慶海事局2018年“智慧西江”“雙實驗室”簽約儀式暨“平安西江”搜救應急裝備建設展示與操作演練在該局港口海事處進行。

細胞的增殖是生命體重要的生命特征，其是生命體繁殖、發(fā)育和生長的基礎(chǔ)，其中細胞分裂是細胞增殖的重要的方式

。而細胞凋亡則是由基因鎖調(diào)控的為了維持細胞內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定而產(chǎn)生的有序的自主的細胞死亡

。細胞的死亡包括細胞凋亡和細胞壞死兩種方式，其中細胞凋亡是一種基本的生物學現(xiàn)象，其在內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定以及生物的進化等多個系統(tǒng)的發(fā)育中有著相對重要的作用

。胡維晟等

研究發(fā)現(xiàn)，miR-497能夠?qū)ζ涠ㄏ虬邢蚧蜻M行調(diào)節(jié)，對肝癌細胞的生物學行為進行改變，從而發(fā)揮抑癌的作用。白璐等

研究表明miR-129-3p能夠?qū)ζ湎掠伟邢蚧蜻M行調(diào)控進而參與腫瘤的轉(zhuǎn)移和發(fā)生，對腫瘤的轉(zhuǎn)移、分化和生長進行調(diào)控。本研究結(jié)果表明，上調(diào)miRNA-130a的表達能夠?qū)Ω伟┘毎脑鲋尺M行抑制并且促進細胞的凋亡。

Bcl-2是一種抗凋亡基因，Bcl-2家族能夠?qū)€粒體凋亡信號產(chǎn)生調(diào)控作用

。大量研究表明，HCC中miRNA主要是通過對Bcl-2家族進行調(diào)節(jié)進而對細胞凋亡產(chǎn)生影響

。miR-125b能夠抑制抗凋亡蛋白Bcl-2的表達從而促進細胞的凋亡；miR-221能夠通過抑制Bmf的表達從而發(fā)揮抗凋亡的作用；miR-122能夠?qū)cl-w進行抑制從而抑制凋亡；miR-224能夠?qū)cl-2進行調(diào)節(jié)從而發(fā)揮抗凋亡的作用

。本研究結(jié)果表明，miRNA-130a能夠通過對Bcl-2表達調(diào)控促進細胞的凋亡。

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