徐文杰

（廣東省第二中醫(yī)院（廣東省中醫(yī)藥工程技術(shù)研究院、廣州中醫(yī)藥大學(xué)第五臨床醫(yī)學(xué)院），廣東省中醫(yī)藥研究開發(fā)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東廣州 510095）

三白草酮為從三白草中分離得到的一種結(jié)構(gòu)獨(dú)特的木脂素[1]。三白草酮（Sauchinone）分子式為C20H20O6，現(xiàn)代研究表明三白草酮具有眾多的藥理活性，包括保肝[2]、抗炎[3]、抗氧化[4]、降血糖[5]、神經(jīng)保護(hù)[6]、抗腫瘤[7]等藥理作用。但目前為止，尚沒有一個(gè)三白草酮有效成分的新藥得以成功開發(fā)，究其根本原因乃三白草酮理化性質(zhì)所限，如脂溶性高、溶液穩(wěn)定性低、吸收差、代謝迅速等特性，導(dǎo)致口服吸收率低、血藥濃度低、生物利用度差，直接影響其藥理活性和臨床用量，嚴(yán)重限制其臨床推廣使用。為此，在前期研究工作的基礎(chǔ)上，我們擬通過現(xiàn)代制劑技術(shù)-固體分散體技術(shù)進(jìn)一步對三白草酮制劑工藝進(jìn)行優(yōu)化，以大幅度增加其水溶性，增加其穩(wěn)定性，促進(jìn)吸收，以提供較平穩(wěn)的血藥濃度，發(fā)揮三白草酮最大藥理作用，維持持久藥效。

1 儀器與材料

1.1 儀器HaakeMiniCTW 微量混合擠出機(jī)（美國賽默飛世爾公司）；Nicolet6700 型傅立葉變換紅外光譜儀（美國賽默飛世爾公司）；Quanta400 熱場發(fā)射掃描電鏡（荷蘭飛利浦FEI公司）；SPX-150C 恒溫恒濕箱（上海博迅實(shí)業(yè)有限公司）；JJ500 型電子天平（常熟市雙杰測試儀器廠）；XS-205DU 電子分析天平（瑞士梅特勒-托利多公司）；3K30型離心機(jī)（美國Sigma 公司）；TG209 型熱重分析儀（NETZSCH）；Agilent1200 型高效液相色譜儀（G1312A 型二元泵，G1329A 型自動進(jìn)樣器，G1316A 型柱溫箱，G1314B型VWD 檢測器，美國安捷倫科技有限公司）；RC806 型智能溶出試驗(yàn)儀（天津市天大天發(fā)科技有限公司）；KQ5200DE 型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；銳影（Empyrean）X-射線衍射儀（荷蘭帕納科公司）。

1.2 材料 三白草酮對照品（批號111863-201001）購于中國食品藥品檢定研究院，三白草酮（自制，純度≥98%），聚乙二醇6000 購于ISP 公司。甲醇（色譜純，默克公司），磷酸（色譜純，科密歐公司），水為超純水，磷酸、氫氧化鈉、亞硝酸鈉、硝酸鋁均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 樣品的制備

2.1.1 物理混合物的制備 選擇聚乙二醇6000（PEG6000）為載體材料，分別按藥物與載體材料的質(zhì)量比為1:1，1:4 的比例準(zhǔn)確稱量三白草酮與PEG6000，置于乳缽中研細(xì)，混勻，過80 目篩，置干燥器內(nèi)保存，備用。

2.1.2 固體分散體的制備 將熱熔擠出機(jī)溫度設(shè)定為150℃；螺桿轉(zhuǎn)速設(shè)定為100r·min-1。待溫度達(dá)到設(shè)定值后，分別取上述質(zhì)量比為1:1，1:4 的三白草酮-PEG6000物理混合物，分別投入擠出機(jī)的加料斗中，待物料從模孔擠出后，用不銹鋼盤收集，冷卻，于-20℃下放置24h，置干燥器中干燥，粉碎，過80 目篩，備用。

2.2 體外溶出度試驗(yàn)

2.2.1 HPLC測三白草酮

2.2.1.1 色譜條件Agilent Eclipse XDB-C18 色譜柱（4.6mm×250mm，5μm），流動相：乙腈-水（60:40），柱溫30℃，流速1mL·min-1，檢測波長240nm。

2.2.1.2 對照品溶液的制備 取三白草酮對照品適量置10mL 量瓶中，加甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得三白草酮含量為296.8μg·mL-1的對照品溶液。

2.2.1.3 供試品溶液的制備 取三白草酮與PEG6000的固體分散體，精密稱定，置10mL 量瓶中，加入甲醇溶解，定容至刻度，濾過，即得。

2.2.1.4 陰性對照溶液的制備 稱取PEG6000 適量，精密稱定，置10mL 量瓶中，加入甲醇溶解，定容至刻度，濾過，即得。

邊坡穩(wěn)定性、土石方量、擾動面積變化情況及運(yùn)行初期水土保持效果、施工過程中水土流失狀況及對周邊造成的影響。

2.2.1.5 專屬性試驗(yàn) 精密量取對照品溶液、供試品溶液和陰性對照溶液各10μL，按照“2.2.1.1”項(xiàng)的色譜條件進(jìn)行測定，結(jié)果顯示對照品溶液和供試品溶液在三白草酮相應(yīng)位置有對應(yīng)色譜峰出現(xiàn)，且與相鄰色譜峰的分離度達(dá)到1.5 以上，表明該方法專屬性良好，輔料對三白草酮含量測定無干擾，見圖1。

圖1 三白草酮HPLC

2.2.1.6 線性關(guān)系考察 精密量取對照品溶液0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL，分別置于2mL 量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得系列對照品溶液。精密量取上述系列對照品溶液各10μL，按“2.2.1.1”項(xiàng)條件下進(jìn)樣，測得峰面積。分別以三白草酮濃度為橫坐標(biāo)（X），峰面積為縱坐標(biāo)（Y）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得三白草酮的標(biāo)準(zhǔn)曲線為Y=23.76X-9.9512（r=0.99998），結(jié)果表明三白草酮在14.84～148.4μg·mL-1范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系。

2.2.1.7 精密度試驗(yàn) 精密吸取同一供試品溶液重復(fù)進(jìn)樣6 次，按“2.2.1.1”項(xiàng)下進(jìn)行測定，記錄峰面積并計(jì)算RSD。結(jié)果表明，三白草酮峰面積的RSD 值為0.85%，小于2%，表示儀器精密度較好。

2.2.1.8 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一供試品溶液，分別于第0、1、2、4、8、12、24h進(jìn)樣10μL 測定，按“2.2.1.1”項(xiàng)下的色譜條件測定，記錄三白草酮峰面積并計(jì)算RSD。結(jié)果表明，三白草酮峰面積的RSD為1.40%，小于2%，樣品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定。

2.2.1.9 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批樣品，按“2.2.1.3”項(xiàng)下的方法平行制備6份供試品溶液，分別進(jìn)樣測定，按“2.2.1.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測定，記錄峰面積并計(jì)算RSD。結(jié)果表明，三白草酮峰面積的RSD 為1.18%，小于2%，該方法重復(fù)性良好。

2.2.1.10 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱取已知三白草酮含量的樣品，平行9份，分別精密加入相對于供試品含量的80%、100%、120%的三白草酮對照品溶液，按“2.2.1.3”項(xiàng)下的供試品溶液制備方法制備，進(jìn)樣測定，按“2.2.1.1”項(xiàng)下條件測定，記錄峰面積并計(jì)算三白草酮含量及回收率。結(jié)果表明，三白草酮加樣回收率平均值為99.83%，RSD為0.78%，小于2%，表明該方法穩(wěn)定可行。見表1。

表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果（n=9）

2.2.1.11 測定方法 分別精密吸取對照品溶液與各供試品溶液10μL，注入液相色譜儀，測定，計(jì)算三白草酮含量，即得。

圖2 三白草酮-PEG6000固體分散體和物理混合物溶出度曲線

2.3 固體分散體的物相表征

2.3.1 紅外光譜分析 采用Nicolet6700 傅立葉紅外光譜儀，用KBr 分別對三白草酮、PEG6000 及其物理混合物和固體分散體進(jìn)行壓片處理，在400～4000cm-1范圍掃描，進(jìn)行紅外光譜分析，根據(jù)FT-IR圖譜中藥物和載體的吸收峰判斷藥物與載體之間的相互作用，結(jié)果見圖3。從結(jié)果可知，三白草酮中3384.85cm-1吸收峰為-OH 的伸縮振動峰；PEG6000中1280.68cm-1、1242.15cm-1吸收峰為C-O 的伸縮振動峰；在物理混合物中存在3425.54cm-1（ν-OH）、1280.68cm-1和1241.80cm-1（νC-O）吸收峰，而在固體分散體中，-OH 的伸縮振動峰向低波數(shù)（3417.75cm-1）移動，而C-O 的伸縮振動峰沒有發(fā)生遷移，但是峰強(qiáng)度減弱，認(rèn)為可能是三白草酮與PEG6000 在固體分散體中通過-OH和C-O以氫鍵作用結(jié)合。

圖3 三白草酮-PEG6000固體分散體和物理混合物lR圖

2.3.2 X-射線粉末衍射分析 工作條件：銅靶Kα1射線，高壓強(qiáng)度40kV，電流40mA，發(fā)射狹縫1/32°，防散射狹縫1/16°，防散射狹縫7.5mm，2θ 范圍：3°-～50°，步長0.02°，每分鐘停留40s。分別對三白草酮、PEG6000 及其物理混合物和固體分散體進(jìn)行X-射線粉末衍射分析。結(jié)果見圖4。由圖可知，PEG6000 在19.19°，23.44°，26.21°，26.93°出現(xiàn)衍射峰，而三白草酮沒有明顯的衍射峰，三白草酮與PEG6000 各比例的固體分散體和物理混合物中都有衍射峰出現(xiàn)，且都隨著載體含量的增加衍射強(qiáng)度增大，但固體分散體的衍射峰強(qiáng)度與相應(yīng)比例的物理混合物的衍射峰相比強(qiáng)度減弱，提示沒有新的物相形成。

圖4 三白草酮-PEG6000固體分散體和物理混合物X-射線衍射圖

2.3.3 掃描電鏡（SEM）為了較好的研究制備前后三白草酮形態(tài)的變化以及所制備固體分散體的表面形態(tài)，分別對三白草酮、PEG6000 以及三白草酮:PEG6000（1:4）物理混合物和固體分散體進(jìn)行熱場掃描電鏡的觀察。將上述四個(gè)樣品分別粘于鋁臺表面，表面噴金后，采用20Kv 的加速電壓掃描其表面，并拍照。由圖5可見，固體分散體中沒有形成新的物相，這與X-射線衍射的結(jié)果一致。

圖5 三白草酮-PEG6000物理混合物（PM）和固體分散體（SD）SEM圖

3 討論

采用熱熔擠出技術(shù)制備三白草酮固體分散體，以PEG6000 為載體制備固體分散體，考察藥物與載體比例為1:1、1:4 時(shí)，三白草酮的體外溶出度，并采用紅外光譜、X-射線衍射、掃描電鏡對其進(jìn)行表征。體外溶出度試驗(yàn)結(jié)果顯示，PEG6000 為載體制備的固體分散體中三白草酮的90min累積體外溶出度搭98%以上。IR 結(jié)果顯示，布渣葉總黃酮與各載體均以氫鍵的形式結(jié)合。X-射線衍射和掃描電鏡結(jié)果顯示，布渣葉總黃酮與各載體在固體分散體中均未形成新的物相。