郭肖 公保索安 增太措 吾堅旦增 吉毛才讓 羅多文色 李先加 多杰 李啟恩

(青海大學(xué) 1藏醫(yī)藥研究中心，青海 西寧 810016；2藏醫(yī)學(xué)院；3藏藥新藥開發(fā)國家重點實驗室)

失眠主要由心理、藥物、疾病及環(huán)境等因素引起，其典型特征表現(xiàn)為入睡困難、睡眠不深和睡眠時間不足，嚴(yán)重失眠者不僅會表現(xiàn)出以上典型特征，而且甚至?xí)?dǎo)致徹夜不眠。失眠雖不能直接威脅生命，但可導(dǎo)致抑郁、焦慮及機(jī)體多功能受損，誘發(fā)糖尿病等代謝性疾病、免疫性疾病、心血管疾病和神經(jīng)性疾病等多種慢性和重大疾病，并影響疾病預(yù)后。失眠治療以減少患者痛苦、改善生活質(zhì)量、降低機(jī)體功能受損和減少抑郁、焦慮、糖尿病和心血管病風(fēng)險為目標(biāo)〔1～6〕。

失眠在藏醫(yī)學(xué)中稱為“尼業(yè)”，是藏醫(yī)學(xué)“三因”中的“隆”因過盛和功能紊亂而導(dǎo)致，反過來，失眠作為藏醫(yī)學(xué)飲食、起居、時令和心理等“四大病因”之一的起居因素的重要內(nèi)容，會進(jìn)一步加重“隆”因的病變，引發(fā)“隆”病，而“隆”病的發(fā)生會誘發(fā)包括心血管系統(tǒng)疾病和精神性疾病在內(nèi)的各類疾病〔7〕。因此，藏醫(yī)學(xué)在失眠的臨床治療中特別注重對“隆”的調(diào)理和正常睡眠時間的要求。尼極藏茶以藏醫(yī)治療“隆”病和改善睡眠的藥性理論出發(fā)，選用藏民族民間有食用習(xí)慣的藥食同源植物窄葉鮮卑花和寬葉蕁麻為原料藥材進(jìn)行炮制加工和配伍而成，具有良好的改善睡眠和調(diào)和“隆”病的作用〔7～10〕。本研究旨在通過動物實驗驗證尼極藏茶改善睡眠的功效。

1 資料與方法

1.1材料

1.1.1尼極藏茶的制備 100目尼極藏茶(窄葉鮮卑花和寬葉蕁麻1∶1，炒制)100 g，料液比1∶10，浸泡2 h，熱回流130℃提取3次，3 h/次，抽濾，合并濾液，濃縮干燥，計算得率(9.241±1.842)%。

1.1.2實驗動物 SPF級KM小鼠，雄性，9周齡，體重(45±2)g。購于斯貝福(北京)生物技術(shù)有限公司，合格證號：SCXK(京)2016-0002，飼養(yǎng)條件為溫度(21±1)℃，相對濕度(60±5)%，適應(yīng)性生長1 w，實驗期間小鼠自由進(jìn)食和飲水。

1.1.3其他實驗材料 戊巴比妥鈉和巴比妥鈉均為分析純，購于上?；瘜W(xué)試劑公司。地西泮片(1.25 mg/片)，濟(jì)寧市安康制藥有限責(zé)任公司。

1.2實驗方法

1.2.1一般觀察 每天觀察小鼠的毛色狀況、行為表現(xiàn)及精神狀況，分析有無異常，并在各項實驗前后稱重，觀察體重變化情況。

1.2.2不同劑量戊巴比妥鈉對小鼠睡眠發(fā)生率和睡眠時間的影響 雄性KM小鼠60只，隨機(jī)分為6組，每組10只。分別按25、30、35、40、50、60 mg/kg的梯度劑量給小鼠腹腔注射戊巴比妥鈉溶液，然后測定不同劑量下戊巴比妥鈉對小鼠睡眠發(fā)生率和睡眠時間的影響。

1.2.3不同劑量尼極藏茶對小鼠直接睡眠的影響 50只KM小鼠，按體重隨機(jī)分為5組，每組10只，分別為生理鹽水組(等體積生理鹽水)，地西泮組(地西泮片10 mg/kg，1.25 mg/片)，尼極藏茶低、中、高劑量組(200 mg/kg、450 mg/kg、1 000 mg/kg)。灌胃不同藥物溶液，1次/d，0.1 ml/20 g，連續(xù)給藥66 d。實驗期間記錄每日小鼠攝食量，且每2 d稱量體重 1 次，攝食飲水自由，觀察給藥后小鼠是否出現(xiàn)睡眠現(xiàn)象，小鼠是否進(jìn)入睡眠以翻正反射消失為依據(jù)指標(biāo)，如超過1 min不能翻正則認(rèn)為翻正反射消失，確認(rèn)小鼠進(jìn)入睡眠。翻正反射恢復(fù)則認(rèn)為動物覺醒，從翻正反射消失到最終恢復(fù)這段時間被認(rèn)為是小鼠的睡眠時間，記錄各組入睡小鼠的數(shù)量及睡眠時間長短。睡眠潛伏期計算方法是入睡時間減去注射時間，睡眠時間的計算方法是睡眠結(jié)束時間減去入睡時間。

1.2.4不同劑量尼極藏茶對戊巴比妥鈉閾上劑量小鼠睡眠潛伏期和睡眠時間的影響 參照1.2.3分組及給藥末次給藥1 h后腹腔注射54 mg/kg戊巴比妥鈉，并記錄戊巴比妥鈉注射時間、小鼠入睡時間、小鼠睡眠結(jié)束時間，以觀察尼極藏茶和戊巴比妥鈉聯(lián)和用藥對小鼠睡眠潛伏期和睡眠時間的作用。

1.2.5不同劑量尼極藏茶對戊巴比妥鈉閾下劑量小鼠睡眠率的影響 參照1.2.3分組及給藥末次給藥1 h后腹腔注射32 mg/kg戊巴比妥鈉，記錄各組入睡動物數(shù)，觀察尼極藏茶對戊巴比妥鈉閾下劑量小鼠睡眠發(fā)生率的影響(睡眠發(fā)生率=入睡動物數(shù)/受試動物數(shù)×100%)。

1.2.6不同劑量尼極藏茶對巴比妥鈉睡眠潛伏期和睡眠時間的影響 參照1.2.3分組及給藥末次給藥后30 min，給每組小鼠按250 mg/kg腹腔注射巴比妥鈉，并記錄注射催眠劑量巴比妥鈉后各組小鼠的睡眠潛伏期和睡眠時間。

1.3統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS19.0軟件進(jìn)行方差分析和χ2檢驗。

2 結(jié) 果

2.1受試物對小鼠體重的影響 各組實驗中，每個劑量組小鼠的毛色、行為及精神狀況均無異常。各組灌胃前體重、攝食量比較無顯著差異(P>0.05)。 見表1。

表1 各組灌胃前后體重、體重攝食量比較

2.2不同劑量戊巴比妥鈉對小鼠睡眠發(fā)生率和睡眠時間的影響 戊巴比妥鈉最佳劑量(閾劑量)的確定以實驗小鼠100%進(jìn)入睡眠，且入睡時間不超過90 min為標(biāo)準(zhǔn)，本實驗確定的閾劑量為50 mg/kg。戊巴比妥鈉的最大閾下劑量為80%～90%小鼠翻正反射不消失的鎮(zhèn)靜劑量，本實驗最終確定的最大閾下劑量為32 mg/kg。見表2。

表2 不同劑量戊巴比妥鈉對小鼠睡眠發(fā)生率和睡眠時間的影響

2.3尼極藏茶對小鼠直接睡眠的影響 3個劑量的藏茶連續(xù)灌胃66 d，各組翻正反射仍未消失，表示尼極藏茶對受試小鼠無直接睡眠作用。

2.4尼極藏茶協(xié)同閾劑量戊巴比妥鈉對睡眠潛伏期和睡眠時間的影響 與生理鹽水組比較，地西泮組睡眠潛伏期明顯縮短，睡眠時間明顯延長(P<0.05,P<0.01)；藏茶各劑量組睡眠潛伏期縮短不明顯(P>0.05)，但其中、高劑量組睡眠時間顯著延長(P<0.05,P<0.01)。與地西泮組比較，尼極藏茶高劑量組表現(xiàn)出相同的延長睡眠時間的作用。見表3。

表3 尼極藏茶協(xié)同閾劑量戊巴比妥鈉對小鼠睡眠潛伏期和睡眠時間的影響

2.5尼極藏茶對戊巴比妥鈉閾下劑量誘導(dǎo)小鼠催眠作用的影響 與對照組(0%)比較，尼極藏茶低、中、高劑量組睡眠發(fā)生率提高(20%、40%、40%)；與地西泮組(80%)比較，尼極藏茶對戊巴比妥鈉閾下劑量誘導(dǎo)小鼠催眠發(fā)生率較低，即尼極藏茶對閾下劑量戊巴比妥鈉誘導(dǎo)的小鼠睡眠發(fā)生有促進(jìn)作用。

2.6尼極藏茶對巴比妥鈉誘導(dǎo)小鼠睡眠作用的影響 與生理鹽水組相比，地西泮組、尼極藏茶各劑量組睡眠潛伏期均明顯縮短，且睡眠時間顯著延長(P<0.05)。與地西泮組相比，尼極藏茶高劑量組對小鼠睡眠潛伏期和睡眠時間無顯著差異(P>0.05)。見表4。

表4 尼極藏茶對巴比妥鈉誘導(dǎo)小鼠睡眠潛伏期和睡眠時間的影響

3 討 論

失眠不僅是一種疾病，而且是引發(fā)藏醫(yī)學(xué)被認(rèn)為可誘發(fā)一切疾病的“隆”病的重要因素〔7〕。隨著社會的發(fā)展和生活節(jié)奏的加快及隨之而來的生活壓力日趨增大、社會老齡化現(xiàn)象不斷加劇和社會關(guān)系日趨冷淡等社會現(xiàn)實問題，導(dǎo)致越來越多的人患有失眠癥〔3，4，11〕，輕則導(dǎo)致人們生活質(zhì)量下降、身心疲憊、記憶力減退和脾氣暴躁等癥狀，重則出現(xiàn)機(jī)體免疫和代謝功能紊亂，甚至?xí)T發(fā)心血管疾病、神經(jīng)系統(tǒng)疾病、糖尿病等慢性重大疾病〔3～5，11〕。

藏醫(yī)學(xué)一向關(guān)注睡眠方法和質(zhì)量，在藏醫(yī)經(jīng)典《四部醫(yī)典》之起居章中明確記載：常人每晚必須保證足夠的睡眠，如果因熬夜而缺了睡眠，次日早晨須在空腹?fàn)顟B(tài)下補足睡眠，補睡時間為正常晚間睡眠時間的一半為宜，尤其是對醉酒者、身體虛弱者、受到精神和心理創(chuàng)傷者、過度勞累者、說話過多者和老齡群體等必須確保足夠的睡眠，否則會使機(jī)體功能受到嚴(yán)重?fù)p害，誘發(fā)藏醫(yī)“隆”病及上述各類疾病〔7〕。尼極藏茶是在藏醫(yī)理論指導(dǎo)下，以調(diào)和“隆”因和改善睡眠為目的而組方和開發(fā)的藏茶，雖然臨床應(yīng)用已證明具有良好的改善睡眠功能，但缺乏實驗數(shù)據(jù)。鑒于此，本研究擬通過戊巴比妥鈉睡眠時間實驗和戊巴比妥鈉閾下劑量催眠實驗來驗證尼極藏茶改善睡眠的功能〔12〕。通過觀察受試藥物對巴比妥類藥物誘導(dǎo)睡眠的影響，是觀察藥物催眠作用的經(jīng)典方法〔2，13～16〕。戊巴比妥鈉和巴比妥鈉為目前常用的中樞鎮(zhèn)靜藥物，本實驗結(jié)果表明受試藥尼極藏茶無直接睡眠作用，尼極藏茶與戊巴比妥鈉和巴比妥鈉均有協(xié)同的催眠作用。根據(jù)《保健食品檢驗與評價技術(shù)規(guī)范》規(guī)定，延長戊巴比妥鈉睡眠時間實驗、閾下劑量催眠實驗及巴比妥鈉睡眠實驗中，只要有兩個實驗結(jié)果呈現(xiàn)陽性，就可以判定受試物具有改善睡眠的功效〔12〕，本實驗結(jié)果符合《保健食品檢驗與評價技術(shù)規(guī)范》中受試物具有改善睡眠的效果的規(guī)定，說明尼極藏茶具有理想的改善睡眠作用。