鞏新民，祝永華，郭龍宗

（山東益生種畜禽股份有限公司，煙臺 264680）

沙門菌是危害家禽養(yǎng)殖業(yè)的最重要細菌性病原之一，可引起禽類各種各樣的急性和慢性疾病[1]。其具有復雜的抗原結(jié)構(gòu)，一般包括三種抗原，它們分別是菌體抗原（O）、表面抗原（Vi）、鞭毛抗原（H），O抗原是每株沙門菌均含有的抗原成分。沙門菌是一種需氧及兼性厭氧菌，在普通瓊脂培養(yǎng)基上培養(yǎng)20～24 h，生長良好，并形成圓形、中等大小、表面光滑、邊緣整齊、無色半透明的單菌落，是革蘭氏陰性菌、無莢膜、無芽孢，除雞白痢沙門菌、禽傷寒沙門菌外，其他都具有鞭毛可以運動，多數(shù)沙門菌具有菌毛結(jié)構(gòu)，可吸附在宿主細胞表面[2]。

迄今為止，已發(fā)現(xiàn)2600多種血清型的沙門菌[3]。對家禽危害較大的血清型包括傳統(tǒng)意義上的雞白痢沙門菌和禽傷寒沙門菌，以及其他引起禽副傷寒的諸多沙門菌血清型。禽副傷寒沙門菌的感染非常普遍，是使各種幼禽遭受嚴重死亡損失的細菌性疾病之一，臨床感染的血清型以腸炎沙門菌和鼠傷寒沙門菌為主，也因為其是人類食物源性疾病病原而具有非常重要的公共衛(wèi)生意義[4]，因而受到廣泛關注。目前對于沙門菌病的主要防控措施有定期監(jiān)測、藥物預防、疫苗免疫及應用益生菌等，而免疫一直是所有疫病防控的基礎策略。沙門菌的活疫苗和弱毒活疫苗已經(jīng)在全世界應用，它們的效果已經(jīng)通過攻毒實驗得到驗證，這將是今后家禽沙門菌病防控的必要手段[5]。

本研究通過對某大型白羽肉種雞公司A、B兩個規(guī)模化父母代肉種雞場，前后各一個種雞批次，分別采用兩次和三次腸炎沙門菌活疫苗免疫的效果進行了跟蹤對比，為種雞場腸炎沙門菌活疫苗免疫程序的制定提供科學指導。

1 材料與方法

1.1 實驗雞群 山東某大型白羽肉種雞公司規(guī)?；改复N雞場，A、B兩場前后飼養(yǎng)的4個批次，分別為A場的170511/20批和190706批、B場的201705批和201812批，每批飼養(yǎng)量約20萬套。同一場內(nèi)分別先后飼養(yǎng)兩個批次，采樣2次和3次良種免疫程序。飼養(yǎng)期間場區(qū)管理人員、硬件條件、操作流程相同。

1.2 主要試劑 雞白痢-傷寒多價染色平板凝集試驗抗原及陰性和陽性血清均購自北京中海生物科技有限公司；用于微生物分離鑒定的培養(yǎng)液和培養(yǎng)基等均購自青島海博生物技術有限公司；沙門菌屬O多價診斷血清A-F購自寧波天潤生物藥業(yè)有限公司。

1.3 免疫疫苗 雞腸炎沙門菌病活疫苗（AviPro?Salmonella Vac E），2000羽份/瓶，德國羅曼動物保健有限公司生產(chǎn)。

1.4 凈化藥物 藥物a，阿莫西林，山東華辰制藥有限公司安力素；藥物b，多西環(huán)素，鄭州福源動物藥業(yè)有限公司呼欄；藥物c，磺胺，天津瑞普生物技術股份有限公司速可能；藥物d，氟苯尼考山東華辰制藥有限公司?？尚?。

1.5 免疫程序 同一場飼養(yǎng)的前后2批雞腸炎沙門菌活疫苗免疫分別采用兩次和三次方式，采用兩次免疫的批次是在6周齡和16周齡飲水免疫，每只雞劑量為羽份；采用三次免疫的批次是在1日齡、6周齡和16周齡飲水免疫，每只雞劑量為1羽份。詳見表1。

表1 免疫程序Table 1 Immunization procedures

1.6 樣品采集與處理 用雞白痢-傷寒平板凝集試驗對種雞血清跟蹤監(jiān)測，每次采集數(shù)量為雞群飼養(yǎng)量的1%。按照NY/T 536-2002《雞傷寒和雞白痢診斷技術》[6]方法執(zhí)行，檢測出的陽性血清用生理鹽水依次做4倍和8倍稀釋，再進行平板凝集，觀察結(jié)果，記錄不同陽性率。種雞所產(chǎn)種蛋孵化后的毛蛋及雛雞從卵黃囊進行沙門菌的分離與鑒定，每次至少100只/枚。分離鑒定方法，參照GB4789.4-2010《食品安全國家標準-食品微生物學檢驗 沙門氏菌檢驗》[7]、《NY/T 536-2017雞傷寒和雞白痢診斷技術》[8]方法執(zhí)行，分離出的疑似沙門菌，通過生化實驗、單因子血清凝集實驗、PCR方法進行鑒定。

2 結(jié)果

2.1 血清雞白痢-傷寒平板凝集結(jié)果 A場兩次免疫批次雞血清雞白痢-傷寒平板凝集陽性率全程保持為3%～17%，血清做4倍和8倍稀釋后的平板凝集陽性率顯示，在產(chǎn)蛋后期有明顯波動，但比例也較低。A場三次免疫批次血清雞白痢-傷寒平板凝集陽性率除25周和54周超過10%以外，其他周齡均在8%以下，血清做4倍和8倍稀釋后的平板凝集結(jié)果均為陰性。B場兩次免疫批次雞血清雞白痢-傷寒平板凝集陽性率全程保持為10%～30%，血清做4倍和8倍稀釋后平板凝集檢測結(jié)果顯示產(chǎn)蛋高峰階段和產(chǎn)蛋后期有明顯波動。B場三次免疫批次血清雞白痢-傷寒平板凝集陽性率全程保持在10%以下，血清4倍和8倍稀釋后均為陰性（表3）。

表2 采樣周齡Table 2 Sampling week age

表3 血清雞白痢-傷寒平板凝集結(jié)果Table 3 Results of serum plate agglutination of pullorum and typhoid

2.2 沙門菌分離與血清型鑒定結(jié)果 A場兩次免疫批次45周齡后所產(chǎn)毛蛋基本每次都有沙門菌分離出，但雛雞中未分離出沙門菌，經(jīng)生化、單因子血清凝集、PCR鑒定，毛蛋中分離菌株均為腸炎沙門菌。A場三次免疫批次毛蛋和雛雞中均未分離到沙門菌。B場兩次免疫批次35周齡后所產(chǎn)毛蛋每次都有沙門菌分離出，在49周的雛雞中也分離出沙門菌，經(jīng)生化、單因子血清凝集、PCR鑒定，毛蛋和雛雞中分離到的均為腸炎沙門菌。B場三次免疫批次毛蛋和雛雞中均未分離到沙門菌（表4）。

表4 毛蛋與健康雛雞的沙門氏菌分離結(jié)果Table 4 Results of salmonella isolation from wool eggs and healthy chicks

2.3 開產(chǎn)后抗生素治療費用的統(tǒng)計 開產(chǎn)后根據(jù)雞群健康狀況決定是否使用抗生素治療，以B場統(tǒng)計數(shù)據(jù)為例。B場兩次免疫批次共使用8次抗生素，總藥費為2.4元/只，B場三次免疫批次共使用兩次抗生素，總藥費為0.3元/只，比兩次免疫批次節(jié)約藥費2.1元/只。其中兩次免疫批次專門針對治療沙門氏菌病的C藥共使用4次，共2元/只（表5）。

表5 開產(chǎn)后抗生素治療費用的統(tǒng)計Table 5 Statistics of postpartum antibiotic treatment costs

3 討論

雞白痢-傷寒平板凝集試驗受抗原試劑批次穩(wěn)定性、敏感性、血清質(zhì)量變化及其他雜菌感染、雞群細菌性滅活苗免疫等多重因素的干擾，其檢測結(jié)果易出現(xiàn)假陽性[9]，日常檢測中出現(xiàn)的陽性，不能充分、準確說明雞群的感染狀況。ELISA方法更加敏感和可靠，但因其費用過高，不適于臨床大規(guī)模樣品的常規(guī)監(jiān)測。郭龍宗等[10]發(fā)現(xiàn)血清8倍稀釋后的陽性與ELISA檢測數(shù)據(jù)之間具有較強的對應性，血清8倍稀釋后雞白痢-傷寒沙門菌平板凝集陽性率可有效評估臨床沙門菌野毒感染的狀態(tài)。

沙門菌在毛蛋中的分離率遠高于雛雞，與沙門菌在種蛋孵化過程中大量生長、增殖，落盤后交互污染有關，從而更容易被檢出。毛蛋檢測結(jié)果對于種雞群是否感染沙門菌具有明顯的病原學指示作用。

通過兩個場，前后分別采用2次和3次免疫的4批雞大群田間實驗檢測跟蹤，可以發(fā)現(xiàn)，腸炎沙門菌2次活疫苗免疫批次，血清4、8倍稀釋后平板凝集長期陰性或陰性周齡段為主，證明雞群感染率不高，血清抽樣檢測時，難以檢出；同時毛蛋中沙門菌的分離率A場全程在13%以內(nèi)，大部分周齡在5%以內(nèi)，B場則全程控制在23%以內(nèi)，毛蛋與雛雞的沙門菌檢出率與血清的雞白痢-傷寒平板凝集試驗結(jié)果，尤其是血清8倍稀釋后的結(jié)果，并沒有呈現(xiàn)全程的關聯(lián)性（同時陽性或同時陰性），主要還是與雞群的感染率低有關，毛蛋在孵化過程中存在沙門菌的增殖或相互污染，而更容易被檢測出，同時腸炎沙門菌和雞白痢、禽傷寒雖同屬于D群且有相同的抗原位點，但相比自身菌體抗原的識別而言，還是要低一些。但在血清8倍稀釋使用雞白痢-傷寒平板凝集檢測出現(xiàn)結(jié)果陽性時，雞群的沙門菌的感染是可以確認的，并需對雞群采取對應的控制措施。

2次疫苗免疫，配合藥物凈化作用，對雞群的腸炎沙門氏菌感染能起到較好的控制作用。但相比而言，三次免疫批次，血清4、8倍稀釋后平板凝集和毛蛋分離全程都為陰性，效果優(yōu)于2次免疫批次，分析可能與1日齡免疫，而更早的建立免疫保護有關，控制了雞群的早期感染，育雛期是雛雞對沙門菌的最為易感階段。

按照Kauffman-White規(guī)則，雞白痢、禽傷寒和腸炎沙門菌被統(tǒng)一劃分為D亞群，這主要基于其O抗原一致，并具有相同的1、9、12的抗原位點，也進而決定了屬于同一亞群的沙門菌之間有較好的交叉保護，腸炎沙門菌活疫苗三次免疫可以有效抵抗禽傷寒的注射攻毒，顯著減少雞群死亡率，降低糞便中沙門菌排毒率和器官中沙門菌定植率[11]。白羽肉雞種源目前主要為國外引種，已經(jīng)實現(xiàn)雞白痢、傷寒凈化，在良好生物安全控制條件下，白羽肉雞很少出現(xiàn)雞白痢、禽傷寒的感染，本實驗重點反應的是免疫腸炎沙門菌對雞群感染腸炎沙門氏菌野毒的保護力。

通過血清8倍稀釋平板凝集、毛蛋和雛雞沙門菌分離結(jié)果，可以確定腸炎沙門菌活疫苗的三次免疫批次臨床保護要好于兩次免疫，開產(chǎn)后的藥品投入相比兩次免疫批次也明顯減少，這說明腸炎沙門菌活疫苗三次免疫可對種雞全生產(chǎn)周期腸炎沙門菌的感染提供良好保護，證明了三次免疫中盡早對雞群進行首免占位的重要性。

沙門菌是一種胞內(nèi)寄生病原微生物[12]，具有極強的適應能力，并且分布廣泛，要徹底根除雞群中的沙門菌是一項艱巨的工作，需要多環(huán)節(jié)的全面綜合措施，包括疫苗免疫的特異性措施和場區(qū)生物安全、清洗消毒、有害生物控制在內(nèi)的非特異性措施。腸炎沙門菌活疫苗可用于降低家禽腸炎沙門菌的感染壓力，免疫三次腸炎沙門菌活疫苗的效果明顯優(yōu)于免疫兩次，可對種雞整個生產(chǎn)周期提供良好保護力。