王學(xué)方，歸 榮，陳功義，王 偉2,，張紅英，王學(xué)兵，李 曉

(1.河南農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院,鄭州 450000；2.河南省納普生物技術(shù)有限公司，鄭州 450002；3.河南農(nóng)業(yè)職業(yè)學(xué)院，鄭州 451450；4.河南省科學(xué)院，鄭州 450002)

呼吸系統(tǒng)疾病是畜禽養(yǎng)殖中的常見和多發(fā)類疾病，特別是在集約化養(yǎng)殖中，呼吸系統(tǒng)疾病已成為制約中國養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展的一個重要因素。上呼吸道感染是畜禽生產(chǎn)實踐中最常見的呼吸系統(tǒng)疾病，控制上呼吸道感染及其并發(fā)、繼發(fā)感染已成為各個養(yǎng)殖群體疫病防控的重要目標(biāo)。目前，對上呼吸道感染的治療，臨床上多以抗菌、抗病毒、解熱鎮(zhèn)痛等化學(xué)藥物治療為主，但不能獲得理想療效，且易造成抗生素濫用、藥物殘留，不利于長期治療[1]。中獸藥具有作用多靶點、低殘低毒、不易產(chǎn)生耐藥性等優(yōu)點[2-4]，在治療上呼吸道感染方面有著較強(qiáng)的應(yīng)用優(yōu)勢。從中獸醫(yī)理論分析，禽上呼吸道感染辨證多為六淫或疫癘等病邪侵襲肺衛(wèi)而造成的肺經(jīng)外感疾病[5]。雞風(fēng)熱犯肺證多見于上呼吸道感染初期，風(fēng)溫病初起，正氣不足以御邪，風(fēng)熱病邪乘虛侵入肺衛(wèi)，以致衛(wèi)氣被郁、肺失宣降所表現(xiàn)的證候。病機(jī)由外感風(fēng)熱、肺氣壅阻、失于清肅所致，邪在肺衛(wèi)，由于雞的生理特點，病邪易內(nèi)郁、從陽化熱，可快速向內(nèi)傳及到氣分受病，出現(xiàn)衛(wèi)、氣同病或表里同病。病禽主證表現(xiàn)為縮頸乍毛、不愿走動、發(fā)熱、流涕、咳嗽、氣管啰音、張口呼吸、口渴、食欲降低等癥狀。據(jù)辨證論治體系的理、法、方、藥，對本證應(yīng)疏散風(fēng)熱，治熱防變，同時清肺止咳，截斷病勢傳變。

連花柴芩可溶性粉是由連翹、山銀花、柴胡、黃芩、紫蘇葉、甘草六味制成的中獸藥可溶性粉劑，連翹[6-8]、山銀花[9]為君藥，既辛涼解表、疏散表邪，還可清熱解毒、攻除里熱；柴胡[10]苦平、疏肝解郁、和解退熱、升舉陽氣，黃芩[11-12]苦寒，清熱燥濕，瀉火解毒，兩藥一升清一降濁，配伍使用，清解半表半里之邪，和解少陽、調(diào)暢樞機(jī)、使郁熱有外達(dá)之機(jī)為臣藥；紫蘇葉[13]祛風(fēng)解表、行氣和胃，甘草[14]補(bǔ)脾益氣、祛痰止咳、調(diào)和諸藥共為佐使。全方合用，共清熱解毒、宣肺止咳之效。本試驗旨在研究連花柴芩可溶性粉對風(fēng)熱犯肺所導(dǎo)致的雞發(fā)熱、咳嗽、食欲減退、口渴喜飲等證候的臨床療效并初步探討其機(jī)制，以期為中獸藥在風(fēng)熱犯肺證的治療中提供科學(xué)數(shù)據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 毒株 雞傳染性支氣管炎病毒(Infectious bronchitis virus,IBV)IBV-M41標(biāo)準(zhǔn)毒株購自中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所，批號：AV1511，實驗室測定其雞胚半數(shù)感染量(EID50)為10-6.32/0.1 mL。

1.1.2 藥物 連花柴芩可溶性粉由河南中亞神鵬醫(yī)藥科技有限公司提供，批號：20190826；麻杏石甘顆粒購自河北瑞高動物藥業(yè)有限公司，批號：19100802；經(jīng)河南省獸藥監(jiān)察所檢驗均符合標(biāo)準(zhǔn)。

1.1.3 主要試劑 RPMI-1640培養(yǎng)基購自HyClone公司；胎牛血清購自杭州四季青生物工程材料有限公司；10 kU/mL青霉素、10 mg/mL鏈霉素均購自北京雷根生物技術(shù)有限公司；L-谷氨酰胺購自WOLSEN公司；刀豆蛋白A(ConA)、脂多糖(LPS)均購自Sigma-Aldrich公司；淋巴細(xì)胞分離液購自北京索萊寶科技有限公司；鼠抗雞CD3-FITC、CD4-PE和CD8a-PE、鼠抗人IgG1-FITC和IgG1-PE單克隆抗體均購自艾美捷科技有限公司。

1.1.4 試驗動物 1日齡AA白羽肉雞公雛購自河南省開封市興達(dá)禽業(yè)有限公司。常規(guī)飼養(yǎng)至15日齡供試驗用。試驗期間未做雞傳染性支氣管炎疫苗免疫。飼料購于河南省金諾飼料有限公司，為不含任何抗生素及其他抗病促生長藥物的雛雞全價飼料。

1.2 方法

1.2.1 雞風(fēng)熱犯肺證模型的建立

1.2.1.1 IBV種毒復(fù)壯 IBV標(biāo)準(zhǔn)株M41在使用前用雞胚復(fù)壯。種毒用滅菌PBS液10倍稀釋，經(jīng)尿囊腔接種于10日齡SPF雞胚，0.1 mL/胚，37 ℃培養(yǎng)72 h，收集雞胚尿囊液，加入青霉素1 000 IU/mL、鏈霉素1 mg/mL混勻，以3 000 r/min離心30 min，取上清液-40 ℃保存?zhèn)溆?。以上述方法盲?代，試驗用毒種為IBV第3代病毒，EID50為10-6.32/0.1 mL。

1.2.1.2 攻毒量篩選 1日齡健康A(chǔ)A白羽肉雞公雛50只，飼養(yǎng)至15日齡，隨機(jī)分成5組，10只/組，取經(jīng)雞胚盲傳3代進(jìn)行復(fù)壯的IBV-M41病毒液進(jìn)行10倍稀釋，分別以0、0.1、0.2、0.3、0.4 mL/羽的劑量對雛雞滴鼻點眼進(jìn)行攻毒。攻毒前12 h，將雞舍室溫調(diào)至20 ℃，并室內(nèi)噴淋冷水使相對濕度保持在70%以上。試驗組攻毒后自由飲水采食，試驗期間不接種任何疫苗。觀察攻毒后每組雞的臨床癥狀，確定建立雞風(fēng)熱犯肺證模型的攻毒量。

1.2.1.3 診斷標(biāo)準(zhǔn) 根據(jù)《中獸醫(yī)學(xué)》[15]和《中獸醫(yī)基礎(chǔ)理論》[16]臟腑辨證中風(fēng)熱犯肺證的診治原則，結(jié)合《中醫(yī)內(nèi)科病證診斷療效標(biāo)準(zhǔn)》[17]、《中藥新藥臨床研究指導(dǎo)原則》[18]和《獸藥研究技術(shù)指導(dǎo)原則匯編》[19]中風(fēng)熱犯肺證的診斷標(biāo)準(zhǔn)及雞的生理特征，風(fēng)熱犯肺證主證為咳喘、發(fā)熱；次證包括口干咽痛、鼻塞流涕、食欲下降等，制定了本試驗雞風(fēng)熱犯肺的診斷標(biāo)準(zhǔn)為：①精神沉郁、羽毛蓬亂、反應(yīng)遲鈍；②發(fā)熱，體溫>41.5 ℃；③咳嗽、打噴嚏、甩頭、流涕、氣管啰音或張口呼吸；④食欲不振、飲水增加。

1.2.1.4 病例納入標(biāo)準(zhǔn)與排除標(biāo)準(zhǔn) 本試驗設(shè)置精神狀態(tài)、體溫、呼吸道3項指標(biāo)對風(fēng)熱犯肺主證，采用分別量化分級評分法，將病雞臨床癥狀分為無癥狀、癥狀輕、中、重，分別記0、1、2、3分。各項指標(biāo)的積分權(quán)重方面，考慮到精神狀態(tài)人為判斷的主觀因素影響，積分權(quán)重應(yīng)較低，設(shè)為10%；呼吸道癥狀權(quán)重比體溫權(quán)重稍高，二者分別設(shè)為50%和40%。最終積分評定按各指標(biāo)積分權(quán)重，計算總積分。具體各指標(biāo)對應(yīng)積分情況見表1。

表1 各指標(biāo)積分標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn)：符合雞風(fēng)熱犯肺證臨床試驗動物診斷標(biāo)準(zhǔn)(用藥前總積分≥1)。

排除標(biāo)準(zhǔn)：①不符合上述標(biāo)準(zhǔn)的發(fā)病雞；②雞群發(fā)病突然，且死亡率超過50%；③發(fā)熱至體表皮膚尤其是冠髯嚴(yán)重發(fā)紺；④伴輕中度以上腹瀉；⑤殘疾、受傷、弱小的雞。

1.2.2 動物分組與處理 臨床健康15日齡AA白羽肉雞，采用10倍稀釋的IBV-M41第3代雞胚尿囊液滴鼻點眼染毒，0.3 mL/只。于攻毒前12 h，將雞舍室溫調(diào)至20 ℃，并于室內(nèi)噴淋冷水使相對濕度保持在70%以上。攻毒2 d后選擇符合風(fēng)熱犯肺證納入標(biāo)準(zhǔn)的試驗雞150只，隨機(jī)均分為5組，30只/組，分別為：連花柴芩可溶性粉高、中、低劑量組(簡稱高、中、低劑量組，根據(jù)試驗前期用藥劑量的篩選結(jié)果，連花柴芩可溶性粉濃度分別設(shè)為4、2和1 g/L)、藥物對照組(麻杏石甘顆粒,1 g/L)、模型對照組，另設(shè)30只為健康對照組。健康對照組與其他各組分開飼養(yǎng)，各組飼養(yǎng)條件一致。連花柴芩可溶性粉高、中、低劑量組、藥物對照組采用飲水給藥方法，連續(xù)給藥5 d，每天給藥1次。模型對照組和健康對照組不用藥物，自由飲水和采食。

1.2.3 療效評價 結(jié)合主證與次證，綜合評價連花柴芩可溶性粉用于雞風(fēng)熱犯肺所致的發(fā)熱、咳嗽、食欲下降、口渴喜飲的臨床效果。

1.2.3.1 主證指標(biāo)與療效評價標(biāo)準(zhǔn) ①精神狀況：觀察每只試驗雞的精神、羽毛狀態(tài)，按照積分標(biāo)準(zhǔn)記錄每只雞得分；②體溫：測量每只試驗雞給藥前及給藥1、2、3、4、5 d后的體溫，按照積分標(biāo)準(zhǔn)記錄每只雞得分；③呼吸道癥狀：觀察每只試驗雞給藥前及給藥5 d中的呼吸道癥狀，按照積分標(biāo)準(zhǔn)記錄每只雞得分，計算每組的呼吸道癥狀評分百分比；④療效評價標(biāo)準(zhǔn)：根據(jù)以上評分標(biāo)準(zhǔn)，評價每只存活雞給藥前后的積分情況，計算療效指數(shù)。療效判定標(biāo)準(zhǔn)以療效指數(shù)表示。臨床療效判定標(biāo)準(zhǔn)見表2。根據(jù)臨床療效判定標(biāo)準(zhǔn)統(tǒng)計治愈數(shù)、有效數(shù)和無效數(shù)。

呼吸道癥狀評分百分比(%)=每組癥狀評分總和/每組中最大可能的癥狀評分總和×100%

療效指數(shù)(%)=(治療前積分-治療后積分)/治療前積分×100%

1.2.3.2 采食、飲水等次證指標(biāo)考察 由于雞采食、飲水量不易精確到個體，所以試驗期間通過記錄每組雞的采食飲水量，對風(fēng)熱犯肺次證進(jìn)行臨床療效評價。各試驗組雞，記錄每天飼料、飲水的給予量與剩余量，計算各試驗組雞的平均采食量、平均飲水量；分別在給藥前、給藥后第5天上午8:00到10：00逐只稱取每只存活雞體重，計算各組平均體重，計算體增重。

1.2.4 免疫指標(biāo)

1.2.4.1 免疫器官指數(shù) 試驗各組于停藥后第5天，每組隨機(jī)抽取10只雞剖殺，稱重，摘取胸腺、法氏囊及脾臟并稱重，計算免疫器官指數(shù)。

免疫器官指數(shù)(mg/g)=試驗結(jié)束時的免疫器官重量(mg)/體重(g)

1.2.4.2 雞外周血T細(xì)胞亞群 各試驗組于用藥前、停藥后第1和5天，每組隨機(jī)取10只雞，翅下靜脈無菌采血，肝素抗凝后，將抗凝血樣與D-Hank’s液1∶1混勻進(jìn)行稀釋，再取稀釋血樣沿試管壁緩慢加在同等體積淋巴細(xì)胞分離液上層，2 000 r/min離心20 min，分離淋巴細(xì)胞，用PBS將細(xì)胞數(shù)調(diào)至5×106/mL。一管加入鼠抗雞CD3-FITC、CD4-PE單克隆抗體各10 μL，另一管加入CD3-FITC、CD8a-PE單克隆抗體各10 μL，相應(yīng)對照管加入鼠抗人IgG1-FITC、IgG1-PE單克隆抗體各10 μL，再分別加入淋巴細(xì)胞懸液50 μL，混勻，4 ℃避光作用20 min。加入PBS 500 μL，混勻，室溫避光作用10 min，1 500 r/min離心10 min，棄去上清，再加入PBS 500 μL，重懸細(xì)胞，流式細(xì)胞儀檢測，得出CD3+、CD4+、CD8+百分?jǐn)?shù)。

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析

將各項指標(biāo)進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計，計數(shù)資料以χ2檢驗分析；計量資料采用SPSS 18.0軟件進(jìn)行方差分析，差異顯著時進(jìn)行Duncan’s多重比較。結(jié)果用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，P<0.05表示差異顯著。

2 結(jié) 果

2.1 雞風(fēng)熱犯肺證模型的建立

攻毒后，第1天雞開始出現(xiàn)精神沉郁、羽毛松亂現(xiàn)象，第2天出現(xiàn)咳嗽、打噴嚏、觸診發(fā)熱，夜間觀察能聽到明顯的濕性氣管啰音，嚴(yán)重者伸直頭頸，因呼吸困難而張口呼吸，雞群采食欲下降，飲水增加，攻毒后第7天剖檢病雞發(fā)現(xiàn)其氣管部有漿液、黏液性滲出物，氣管環(huán)出血，肺臟出血。

比較不同攻毒量發(fā)病情況，接種0.1～0.2 mL IBV-M41病毒液后雛雞發(fā)病率為80%以上；接種0.3 mL的雞群發(fā)病率為100%，呼吸道癥狀明顯；接種0.4 mL的雞群發(fā)病率為100%，表現(xiàn)出嚴(yán)重的呼吸道癥狀。故確定每羽接種0.3 mL經(jīng)10倍稀釋的IBV-M41第3代雞胚尿囊液為本試驗的攻毒劑量。

試驗雞于攻毒2 d后臨床癥狀明顯，病雞主要表現(xiàn)為精神不振或萎靡，羽毛蓬亂，扎堆，翅膀下垂，閉目呆立，食欲下降，飲水欲增加，體溫升高，流涕，打噴嚏，咳嗽，夜間觀察能聽到明顯的氣管啰音，嚴(yán)重者伸直頭頸，張口呼吸，符合風(fēng)熱犯肺證候表現(xiàn)。

2.2 療效評價

2.2.1 主證指標(biāo)

2.2.1.1 各組雞體溫變化 由表3可知，在攻毒2 d后，除健康對照組外，各試驗組雞體溫均超過正常體溫，處于發(fā)熱狀態(tài)。在給藥后3 和5 d，連花柴芩可溶性粉高、中、低劑量組及藥物對照組體溫均顯著低于模型對照組(P<0.05)，但仍顯著高于健康對照組(P<0.05)，高、中劑量組體溫顯著低于藥物對照組(P<0.05)。

表3 各組雞體溫變化

2.2.1.2 各組雞呼吸道癥狀 攻毒1 d后雞群陸續(xù)發(fā)病，迅速波及全群，攻毒后第2～3天，各攻毒試驗組呼吸道癥狀程度到達(dá)高峰。

給藥后3 d，連花柴芩可溶性粉各試驗組和藥物對照組呼吸道癥狀呈減輕趨勢；用藥后5 d，連花柴芩可溶性粉各試驗組和藥物對照組呼吸道癥狀大幅好轉(zhuǎn)，高、中劑量組呼吸道癥狀程度較輕。用藥前后共6個時間點的呼吸道癥狀百分比見圖1。

圖1 各組雞呼吸道癥狀評分變化

2.2.1.3 主證臨床療效 依據(jù)療效判定標(biāo)準(zhǔn)，統(tǒng)計各試驗組的治愈數(shù)、有效數(shù)與無效數(shù)，計算治愈率、有效率及無效率(總有效率為治愈率和有效率之和)，結(jié)果見表4。比較各治療組的總有效率，以連花柴芩可溶性粉高、中劑量組較好，總有效率分別為90.00%和86.66%，顯著高于模型對照組(P<0.05)。連花柴芩可溶性粉高、中劑量的治愈率、有效率與總有效率均無顯著差異(P>0.05)。

表4 連花柴芩可溶性粉的臨床療效結(jié)果

2.2.2 次證指標(biāo)

2.2.2.1 各組雞采食量 攻毒2 d后，除健康對照組外，各試驗組雞均出現(xiàn)采食量下降趨勢。給藥后3 d，連花柴芩可溶性粉高、中劑量組雞采食量與模型對照組相比顯著提高(P<0.05)，且高、中劑量雞采食量顯著高于藥物對照組(P<0.05)；給藥后5 d，連花柴芩可溶性粉高、中、低劑量組、藥物對照組雞采食量均顯著高于模型對照組(P<0.05)，其中高劑量組與健康對照組無顯著差異(P>0.05)(表5)。

表5 連花柴芩可溶性粉對雞平均采食量的影響

2.2.2.2 各組雞飲水量 給藥前，各試驗組雞飲水量無顯著差異(P>0.05)；給藥后3 d，除健康對照組外，各試驗組雞均出現(xiàn)飲水量增加的趨勢。給藥后5 d，連花柴芩可溶性粉高、中、低劑量組、藥物對照組雞飲水量與模型對照組相比差異顯著(P<0.05)，中劑量組雞飲水量與藥物對照組相比差異顯著(P<0.05)，高、中劑量組與健康對照組相比無顯著差異(P>0.05)(表6)。

表6 連花柴芩可溶性粉對雞平均飲水量的影響

2.2.2.3 各組雞體重 給藥前，除健康對照組外，由于采食量下降，各試驗組雞體重增長也受到影響。給藥后5 d，連花柴芩可溶性粉高、中、低劑量組、藥物對照組雞體重、體增重與模型對照組相比顯著提高(P<0.05)，且高、中劑量組雞體重、體增重顯著高于藥物對照組(P<0.05)，高劑量組雞體增重與健康對照組比無顯著差異(P>0.05)，連花柴芩可溶性粉高劑量組雞體重、體增重與中劑量組比無顯著差異(P>0.05)(表7)。

表7 連花柴芩可溶性粉對雞體重的影響

2.2.3 免疫指標(biāo)

2.2.3.1 各組雞免疫器官指數(shù) 由表8可知，連花柴芩可溶性粉高、中劑量組雞的胸腺指數(shù)顯著高于健康對照組(P<0.05)，中劑量組雞的法氏囊指數(shù)顯著高于模型對照組和健康對照組(P<0.05)；各試驗雞的脾臟指數(shù)無顯著差異(P>0.05)。

表8 連花柴芩可溶性粉對雞免疫器官指數(shù)的影響

2.2.3.2 免疫細(xì)胞亞群的影響 給藥前，與健康對照組相比，各試驗組雞外周血CD3+、CD4+T淋巴細(xì)胞含量均顯著降低(P<0.05)；停藥后第1天，連花柴芩可溶性粉高、中、低劑量組、藥物對照組雞外周血CD3+、CD4+和CD8+T淋巴細(xì)胞含量升高，均顯著高于模型對照組與健康對照組(P<0.05)，且高、中劑量組CD3+和CD4+T淋巴細(xì)胞含量顯著高于低劑量組與藥物對照組(P<0.05)；停藥后第5天，連花柴芩可溶性粉高、中劑量雞外周血CD3+、CD8+T淋巴細(xì)胞及低劑量組CD4+T細(xì)胞含量均顯著高于模型對照組與健康對照組(P<0.05)，且高、中劑量組CD4+T細(xì)胞含量顯著高于低劑量組與藥物對照組(P<0.05) (表9)。

表9 連花柴芩可溶性粉對雞CD3+、CD4+、CD8+ T細(xì)胞含量的影響

3 討 論

目前，關(guān)于雞風(fēng)熱犯肺證模型建立的報道較少，鄧銳涵等[20]采用H9N2亞型禽流感病毒(AIV)與脂多糖(LPS)混合感染的方式人工建立雞風(fēng)熱犯肺證模型并應(yīng)用于金芩藍(lán)口服液的療效評價，其病例納入標(biāo)準(zhǔn)包括主癥:發(fā)熱、咳嗽、甩鼻、咽喉腫脹；次癥:眼睛變形結(jié)膜充血、腹瀉、精神沉郁、食欲減退、扎堆、口渴。與本試驗設(shè)立的主、次證基本一致，但本試驗在明確風(fēng)熱犯肺主、次證的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步采用量化分級評分法制定了診斷標(biāo)準(zhǔn)和療效評價標(biāo)準(zhǔn)，以期能為風(fēng)熱犯肺證中獸藥的療效評價提供參考。

中獸醫(yī)認(rèn)為，新城疫病毒(Newcastledisease virus,NDV)、IBV、傳染性喉氣管炎病毒(Infectious laryngotracheitis virus,ILTV)、流感病毒等均為“疫氣”，皆屬“熱毒”范疇，在氣溫驟變、季節(jié)交替等環(huán)境下，風(fēng)熱之毒侵犯肺衛(wèi)，均易造成雞的風(fēng)熱犯肺證。本試驗藥物的抗病毒作用是其用于雞風(fēng)熱犯肺證的重要基礎(chǔ)。連花柴芩可溶性粉由六味中藥組成，分別為連翹、山銀花、柴胡、黃芩、紫蘇葉和甘草。本試驗前期設(shè)置連花柴芩可溶性粉0.25、0.5、1、2、4、8 g/L 6個不同給藥劑量，混飲給藥，進(jìn)行臨床用藥劑量的篩選，結(jié)果表明連花柴芩可溶性粉給藥劑量為2.0 g/L時，臨床療效及用藥成本綜合較佳。因此，本試驗以此劑量為基礎(chǔ)，設(shè)置4、2和1 g/L高、中、低 3個劑量組進(jìn)行連花柴芩可溶性粉的臨床試驗。大量研究表明，連翹、山銀花有直接抗流感病毒作用[21]，連翹水提液能抑制H5N1和H9N2亞型 AIV在DF-1細(xì)胞中的增殖，降低炎癥相關(guān)細(xì)胞因子CX3CL1、IL8L1、CCL5、IL-6和TNF-α的表達(dá)[22]，連翹中的主要成分連翹酯苷可顯著誘生人工感染IBV雛雞體內(nèi)IFN-α的mRNA水平[23]，顯著抑制細(xì)胞內(nèi)IBV的復(fù)制，提高IBV感染細(xì)胞內(nèi)受體(MDA5、LGP2、NLRC5)和抗病毒基因(IRF7、IFN-α、IFN-β)mRNA的表達(dá)[24]，說明連翹有良好的抗炎、抗病毒和解熱作用。陳靈等[25]研究表明，山銀花水提物具有體外抗甲型H1N1病毒作用，且以治療給藥和直接殺滅給藥抗病毒作用較好，金銀花和山銀花綠原酸類提取物體外均具有顯著的抗NDV的作用[26]，這也是試驗藥物選擇連翹、山銀花作為主藥治療雞風(fēng)熱犯肺證的重要基礎(chǔ)。此外，連翹酯苷可明顯降低副流感病毒感染后家兔的體溫[27]，金銀花對試驗性發(fā)熱具有明顯的解熱作用[28]，柴芩水提液對LPS誘導(dǎo)的發(fā)熱小鼠具有明顯的退熱作用[29]，這與本試驗藥物組方中將連翹、山銀花、黃芩和柴胡合用可顯著降低病雞體溫的結(jié)果一致。薛洋等[30]研究了黃芩苷防治雞傳染性支氣管炎的藥理作用，結(jié)果表明，黃芩苷可明顯提升病雞淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化能力，顯著提高病雞CD3+、CD8+T淋巴細(xì)胞比率，且使IFN-α濃度長時間維持高水平。與本試驗就免疫器官指數(shù)和淋巴細(xì)胞增殖的結(jié)果相吻合。崔小七等[31]用柴黃顆粒防治雞傳染性支氣管效果較好，結(jié)果表明，在感染前7 d給予2 g/L柴黃顆粒對人工感染雞傳染性支氣管炎有較好的保護(hù)作用，使其發(fā)病率降至50%。本試驗結(jié)果表明，連花柴芩可溶性粉用于風(fēng)熱犯肺證的臨床藥效可能與其調(diào)節(jié)機(jī)體免疫系統(tǒng)有關(guān)，這也提示有必要開展連花柴芩可溶性粉對雞風(fēng)熱犯肺證的預(yù)防試驗，并在現(xiàn)有基礎(chǔ)上增加病雞預(yù)后病毒量、炎癥因子及相關(guān)蛋白等指標(biāo)評價，對其實際臨床應(yīng)用提供更全面、更科學(xué)的數(shù)據(jù)支撐。

4 結(jié) 論

本試驗采用IBV攻毒成功復(fù)制了雞風(fēng)熱犯肺證模型，并進(jìn)行了連花柴芩可溶性粉的臨床療效評價。結(jié)果表明，連花柴芩可溶性粉對風(fēng)熱犯肺所致的雞發(fā)熱、咳嗽、食欲減退、口渴喜飲具有較好的緩解和治療效果，結(jié)合藥物量效關(guān)系和經(jīng)濟(jì)成本等因素綜合考慮，推薦連花柴芩可溶性粉臨床應(yīng)用劑量為2 g/L，飲水給藥，連用5 d。