徐昊祺，許靜漪，胡麗蓉，張 帆，羅漢鵬，張海亮，師 睿，李 想，劉 林，劉巧香，郭 剛，王雅春

(1.中國農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科技學(xué)院，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部動物遺傳育種與繁殖(家畜)重點實驗室，畜禽育種國家工程實驗室，北京 100193；2.北京奶牛中心，北京 100192；3.北京生物種業(yè)創(chuàng)新聯(lián)合體，北京 101206；4.北京首農(nóng)畜牧發(fā)展有限公司，北京 100029)

長期以來，育種者對奶牛的產(chǎn)奶性能進(jìn)行了高強(qiáng)度的選育，其遺傳進(jìn)展取得了一定程度的改善[1]。然而，由于產(chǎn)奶性狀與繁殖性狀之間存在的不利遺傳相關(guān)，產(chǎn)奶性狀的高強(qiáng)度選擇造成了繁殖、健康、長壽等功能性狀的衰退，嚴(yán)重影響了奶牛養(yǎng)殖的效益[2]。由于繁殖性狀的遺傳力較低，常規(guī)選育進(jìn)展速度較慢；針對繁殖性狀進(jìn)行相關(guān)研究，篩選候選基因和分子標(biāo)記，采用分子標(biāo)記進(jìn)行輔助選擇對繁殖性狀的遺傳改良具有重要意義。師睿等[3]前期對中國荷斯坦牛繁殖性狀進(jìn)行了全基因組關(guān)聯(lián)分析，獲得了包含磷脂酰肌醇-4，5-二磷酸3-激酶催化亞單位β(PIK3CB)在內(nèi)的多個候選基因。隨后，采用蛋白互作網(wǎng)絡(luò)分析發(fā)現(xiàn)PIK3CB基因與多個候選基因存在互作關(guān)系，表明PIK3CB基因可能是影響中國荷斯坦牛繁殖性狀的重要基因(未發(fā)表)。PIK3CB基因可以編碼磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中磷脂酰肌醇3-激酶的p110催化亞單位PI3Kp110β[4]，PI3K/Akt通路廣泛存在細(xì)胞中，對細(xì)胞周期、凋亡、糖代謝及其他重要生理過程產(chǎn)生調(diào)節(jié)作用[5]。

研究表明，PI3K/Akt通路可調(diào)節(jié)奶牛等哺乳動物顆粒細(xì)胞的凋亡進(jìn)程，參與卵泡發(fā)育和排卵，以調(diào)控卵巢活動周期[6-7]。畜禽生殖器官的細(xì)胞凋亡與繁殖性能存在關(guān)系，在雌性動物卵巢中，卵母細(xì)胞、顆粒細(xì)胞和黃體細(xì)胞的凋亡會使卵泡閉鎖，從而影響卵巢發(fā)育[8-9]。排卵后殘留的顆粒細(xì)胞和膜細(xì)胞形成黃體，黃體的正常退化是啟動下一個發(fā)情周期和卵泡發(fā)育的重要條件，黃體的溶解也同樣與細(xì)胞凋亡有密切聯(lián)系[10]。輸卵管上皮細(xì)胞和子宮內(nèi)膜細(xì)胞的周期性生長、分化、退化和再生與生殖周期有密切聯(lián)系；在不同繁殖力的母羊生殖器官中，細(xì)胞凋亡情況和細(xì)胞凋亡基因Bad的表達(dá)存在顯著差異，Bad基因編碼PI3K/Akt通路下游Bcl-2家族中的促進(jìn)細(xì)胞凋亡蛋白，受上游PIK3CB基因表達(dá)的調(diào)控[11]。馬鴻程等[12]發(fā)現(xiàn)，在牦牛不同大小級別卵泡壁顆粒細(xì)胞及卵母細(xì)胞中均有PIK3CB基因表達(dá)，其參與了PI3K/Akt介導(dǎo)的卵泡發(fā)育調(diào)控。上述研究表明PIK3CB基因可能在動物繁殖生理中扮演著重要角色。此外，PI3K/Akt通路通過調(diào)控葡萄糖攝取和脂質(zhì)合成，參與奶牛乳腺上皮細(xì)胞的功能分化和乳汁合成的代謝途徑[13]。葡萄糖是泌乳奶牛合成乳糖的前體物質(zhì)，與乳脂、乳蛋白的合成密切相關(guān)，對泌乳奶牛具有重要的營養(yǎng)生理功能[14]。同時，乳糖可以維持牛奶的滲透壓，其合成速率是產(chǎn)奶量的主要控制因素[15]。在敲除PIK3CB基因的小鼠肝臟中，p110β的缺失會影響胰島素敏感性和葡萄糖穩(wěn)態(tài)[16]。PI3K/Akt通路上游PIK3CB基因參與表達(dá)的PI3K蛋白受胰島素受體激活后催化4，5-二磷酸脂酰肌醇(PIP2)生成第二信使PIP3，可以調(diào)控糖原合成、抑制糖異生，降低血糖[17]，從而影響奶牛的產(chǎn)奶性能。

綜上，PIK3CB基因可能與中國荷斯坦牛繁殖和產(chǎn)奶性狀有關(guān)，但在荷斯坦牛中鮮見關(guān)于PIK3CB基因多態(tài)性與繁殖和產(chǎn)奶性狀的關(guān)聯(lián)分析。本研究擬通過篩查PIK3CB基因的單核苷酸多態(tài)位點(SNP)，并與荷斯坦牛的5個繁殖性狀(初產(chǎn)日齡、初配日齡、產(chǎn)犢至首次配種間隔、青年牛首末次配種間隔、經(jīng)產(chǎn)牛首末次配種間隔)和6個產(chǎn)奶性狀(產(chǎn)奶量、乳蛋白量、乳蛋白率、乳脂量、乳脂率、體細(xì)胞評分)進(jìn)行關(guān)聯(lián)分析，以探究該基因與荷斯坦牛繁殖和產(chǎn)奶性狀的關(guān)系，獲得中國荷斯坦牛繁殖和產(chǎn)奶相關(guān)的遺傳標(biāo)記，為中國奶牛的標(biāo)記輔助選擇和基因組選擇提供有用信息。

1 材料與方法

1.1 DNA混池構(gòu)建

選取70頭無親緣關(guān)系或親緣關(guān)系較遠(yuǎn)的中國荷斯坦牛公牛構(gòu)建DNA池，凍精樣品由北京奶牛中心提供。用高鹽法提取凍精樣品基因組DNA，使用NanoDrop 2000檢測濃度后將所有DNA稀釋到100 ng/μL，于-40 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 樣品采集和DNA提取

挑選北京地區(qū)8個牛場(金銀島、半截河、南三、渠頭、長三、長四、金星和中以)1 160頭健康的泌乳荷斯坦牛，采集血液樣品，每頭牛采集尾根靜脈血約10 mL，使用血液基因組DNA提取試劑盒(DP318，天根生化科技(北京)有限公司)從抗凝血樣提取基因組DNA，利用NanoDrop 2000測定樣品DNA濃度和純度，并通過2.0%瓊脂糖凝膠電泳鑒定DNA片段完整性，―40 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3 基因多態(tài)性篩查

根據(jù)GenBank中牛PIK3CB基因的序列(登錄號：NC_037328.1)，采用Primer-BLAST設(shè)計引物，引物信息見表1。引物均由北京擎科生物科技有限公司合成。PCR反應(yīng)體系25 μL：DNA(100 ng/μL)1 μL，1×CataAmpTaqPlus PCR Mix(北京開拓賽思生物技術(shù)有限公司)22 μL，上、下游引物(10 μmol/μL)各1 μL。PCR反應(yīng)程序：98 ℃預(yù)變性2 min；98 ℃變性10 s，退火(溫度見表1)30 s，72 ℃延伸10 s，共35個循環(huán)；72 ℃延伸1 min。PCR產(chǎn)物經(jīng)2.0%瓊脂糖凝膠檢測后，送至北京擎科生物科技有限公司測序，利用R語言對測序峰圖進(jìn)行可視化，識別雙峰，并比對參考序列篩選SNP位點。

表1 引物信息

續(xù)表

1.4 基因分型

針對篩選出的SNP，根據(jù)其峰值比例、距離、所處區(qū)域及突變類型等確定了7個SNPs用于在1 160頭泌乳荷斯坦牛中進(jìn)行基因分型。采用競爭性等位基因特異性PCR(KASP)技術(shù)進(jìn)行SNP分型，其檢測引物和通用引物見表2，KASP分型由中玉金標(biāo)記(北京)生物技術(shù)股份有限公司完成。

表2 多態(tài)位點競爭性等位基因特異性PCR(KASP)分型引物信息

1.5 育種值估計

本研究收集了北京地區(qū)荷斯坦牛群(與基因分型個體屬于相同群體)的初產(chǎn)日齡(AFC)、初配日齡(AFS)、產(chǎn)犢至首次配種間隔(ICF)、青年牛首末次配種間隔(IFL_H)、經(jīng)產(chǎn)牛首末次配種間隔(IFL_C)5個繁殖性狀以及產(chǎn)奶量(MY)、乳蛋白量(PY)、乳蛋白率(PP)、乳脂量(FY)、乳脂率(FP)、體細(xì)胞評分(SCS)6個產(chǎn)奶性狀的估計育種值(EBV)作為表型，用于關(guān)聯(lián)分析?；谂Ｈ旱纳a(chǎn)性能測定記錄和牧場管理記錄，進(jìn)行上述性狀的常規(guī)遺傳評估工作，進(jìn)而獲得上述性狀的估計育種值，繁殖和產(chǎn)奶性狀的遺傳評估模型參考Liu等[18]和任小麗等[19]的研究。

1.6 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計分析

對7個SNPs進(jìn)行分型后，統(tǒng)計具有多態(tài)位點的基因型頻率、基因頻率、多態(tài)信息含量(PIC)、群體雜合度(He)和有效等位基因數(shù)(Ne)，并檢驗各SNP基因型分布是否符合哈代-溫伯格平衡定律。使用Haploview 4.2軟件對PIK3CB基因SNP進(jìn)行連鎖不平衡分析，并構(gòu)建單倍型塊。

采用SAS 9.2軟件的GLM過程對5個繁殖性狀(AFC、AFS、ICF、IFL_H和IFL_C)和6個產(chǎn)奶性狀(MY、PY、PP、FY、FP和SCS)與PIK3CB基因的7個SNPs進(jìn)行基于單位點和單倍型組合的關(guān)聯(lián)分析，關(guān)聯(lián)分析模型為：

Y=μ+G+e

式中,Y,泌乳牛各繁殖或產(chǎn)奶性狀的EBV;μ,群體均值;G,基因型或單倍型固定效應(yīng);e,隨機(jī)殘差。采用Bonferronit檢驗進(jìn)行組間比較。結(jié)果以最小二乘均值±標(biāo)準(zhǔn)誤表示。P<0.05表示差異顯著；P<0.01表示差異極顯著。

2 結(jié) 果

2.1 PIK3CB基因的SNP

根據(jù)雙峰篩查與序列比對，確定了17個位于1號染色體上的候選SNPs位點(表3)，均已被數(shù)據(jù)庫收錄，其中15個SNPs位于內(nèi)含子區(qū)域，2個SNPs位于外顯子區(qū)域。最終確定7個SNPs用于在泌乳牛群體中分型，其測序峰圖如圖3所示。由圖3可知，g.130430832 A>-位點可見由缺失導(dǎo)致的片段錯位，其余SNP位點可見明顯套峰。

表3 PIK3CB基因候選SNPs信息

箭頭所示為SNPs位點

2.2 SNP的群體遺傳學(xué)分析

通過KASP分型技術(shù)，本研究在1 160頭泌乳荷斯坦牛中獲得了7個SNPs的基因型，部分結(jié)果如圖3所示。由圖3可以看到3種基因型聚類明顯，說明SNP分型結(jié)果可靠。

左上和右下區(qū)域點分別代表純合基因型；中間區(qū)域點代表雜合基因型；圓圈中點代表無明確分型的信號；左下區(qū)域點為空白對照

由表4可知，PIK3CB基因7個SNPs的MAF的范圍為0.12～0.44。位點g.130430832 A>-、g.130433743 A>G和g.130448069 G>A的PIC分別為0.21、0.23和0.22，為低度多態(tài)；其余SNP的PIC位于0.41～0.49之間，為中度多態(tài)。g.130448069 G>A位點處于哈代-溫伯格不平衡狀態(tài)(P<0.05),其余SNPs均處于哈代-溫伯格平衡狀態(tài)(P>0.05)。7個SNPs的遺傳雜合度(He)較低，說明其在測定群體中變異較小。g.130430832 A>-、g.130433743 A>G和g.130448069 G>A位點的有效等位基因數(shù)(Ne)較小，等位基因在測驗群體中分布較不均勻，其余SNPs均接近于2，說明等位基因在測驗群體中分布均勻。

表4 PIK3CB基因7個SNPs的遺傳多樣性

2.3 PIK3CB基因SNPs與繁殖和產(chǎn)奶性狀的關(guān)聯(lián)分析

2.3.1PIK3CB基因SNP與繁殖性狀關(guān)聯(lián)分析 由表5可知，7個SNPs位點與AFC均無關(guān)聯(lián)(P>0.05)，g.130387632 T>C位點3種基因型彼此間IFL_H差異極顯著(P<0.01)，表現(xiàn)為CCA位點AA基因型個體IFL_H極顯著低于另外2種基因型(P<0.01)，其AFS顯著低于GG基因型(P<0.05)；g.130430832 A>-位點AA基因型個體IFL_C極顯著低于-/-基因型(P<0.01)，A/-基因型個體IFL_C顯著低于-/-基因型(P<0.05)，對于ICF，AA基因型個體顯著低于-/-基因型(P<0.05)，不同基因型之間IFL_H的差異雖不顯著(P>0.05)，但也呈現(xiàn)出AAG位點3種基因型間IFL_C差異極顯著(P<0.01)，其排序為AAT位點CC基因型個體ICF極顯著低于另外2種基因型(P<0.01)，其IFL_C顯著低于TT基因型(P<0.05)；g.130446073 C>T位點TT基因型個體ICF極顯著低于另外2種基因型(P<0.01)，CT基因型個體ICF顯著低于CC基因型(P<0.05)，TT基因型個體IFL_C顯著低于CC基因型(P<0.05)；g.130448069 G>A位點GG基因型個體IFL_C極顯著低于AA基因型(P<0.01)，AG基因型IFL_C顯著低于AA基因型(P<0.05)，GG基因型個體IFL_H顯著低于AG基因型(P<0.05)。

表5 PIK3CB基因與繁殖性狀關(guān)聯(lián)分析結(jié)果

2.3.2PIK3CB基因SNP與產(chǎn)奶性狀關(guān)聯(lián)分析 由表6可知，g.130387632 T>C位點TT基因型個體的PP極顯著高于CC基因型(P<0.01)，CT基因型個體顯著高于CC基因型(P<0.05)；g.130387717 G>A位點AA基因型個體MY極顯著高于另外2種基因型(P<0.01)，PY顯著高于另外2種基因型(P<0.05)，PP極顯著低于另外2種基因型(P<0.01)，F(xiàn)Y極顯著高于AG基因型(P<0.01)；g.130430832 A>-位點AA基因型個體SCS極顯著高于A/-基因型，顯著高于-/-基因型(P<0.05)，其MY、PY和FY均顯著低于A/-基因型(P<0.05)；g.130433743 A>G位點AA基因型個體SCS極顯著高于另外2種基因型(P<0.01)，MY、PY和FY顯著低于AG基因型(P<0.05)；g.130433982 C>T位點CC基因型個體MY、PY和FY極顯著低于CT基因型(P<0.01)，MY和PY顯著低于TT型(P<0.05)，PP、FP和SCS顯著高于TT基因型(P<0.05)；g.130446073 C>T位點TT基因型個體MY、PY和FY極顯著低于CT基因型(P<0.01)，MY和PY顯著低于CC基因型(P<0.05)，PP、FP和SCS顯著高于CC基因型(P<0.05)；g.130448069 G>A位點GG基因型個體FY極顯著低于AG基因型(P<0.01)，SCS極顯著高于AG基因型(P<0.01)，顯著高于AA基因型(P<0.05)，MY和PY顯著低于AG基因型(P<0.05)。

表6 PIK3CB基因SNPs與產(chǎn)奶性狀關(guān)聯(lián)分析結(jié)果

續(xù)表

2.4 PIK3CB基因單倍型組合與繁殖和產(chǎn)奶性狀關(guān)聯(lián)分析

2.4.1 單倍型構(gòu)建 由圖3可知，PIK3CB基因中7個SNPs的連鎖不平衡分析顯示，g.130387717 G>A、g.130430832 A>-、g.130433743 A>G、g.130433982 C>T、g.130446073 C>T和g.130448069 G>A共6個SNPs緊密連鎖，可形成一個單倍型塊。該單倍型塊共有4種單倍型，各單倍型的基因型頻率均>10%；其中，H1為優(yōu)勢單倍型，頻率為42.9%。為了準(zhǔn)確估計各單倍型組合的總體平均值，本研究以個體百分比>5%為標(biāo)準(zhǔn)，篩選出了7種單倍型組合(即H1H1、H1H2、H1H3、H1H4、H2H2、H2H3和H2H4)與繁殖和產(chǎn)奶性狀進(jìn)行關(guān)聯(lián)分析。

方塊顏色表示連鎖程度，顏色越深，連鎖程度越高；方塊中數(shù)值為位點間相關(guān)性值的百分?jǐn)?shù)，無數(shù)值代表兩位點完全連鎖

2.4.2PIK3CB基因單倍型組合與繁殖性狀的關(guān)聯(lián)分析 由表7可知，H2H2組合個體IFL_H極顯著低于H1H1、H1H2、H1H3、H1H4和H2H4組合(P<0.01)；H2H3組合個體IFL_H極顯著低于H1H1組合(P<0.01)，顯著低于H1H3和H1H4組合(P<0.05)；H2H4組合個體AFS顯著低于H1H1組合(P<0.05)；各單倍型組合間ICF無顯著差異(P>0.05)。

表7 PIK3CB基因單倍型組合與繁殖性狀關(guān)聯(lián)分析結(jié)果

2.4.3PIK3CB基因單倍型組合與產(chǎn)奶性狀的關(guān)聯(lián)分析 由表8可知，H2H3組合個體MY極顯著高于H1H1和H1H2組合(P<0.01)，PY和FY極顯著高于H1H2組合(P<0.01)，PP極顯著低于H1H1組合(P<0.01)；H1H4組合個體PY和FY極顯著高于H1H2組合(P<0.01)，MY顯著高于H1H2組合(P<0.05)，SCS顯著低于H1H2組合(P<0.05);H2H2組合個體PP極顯著低于H1H1組合(P<0.01);H2H4組合個體FY顯著高于H1H2組合(P<0.05)。

表8 PIK3CB基因單倍型組合與產(chǎn)奶性狀關(guān)聯(lián)分析結(jié)果

3 討 論

通過混池測序法，本研究鑒定到PIK3CB基因在中國荷斯坦牛中共有17個SNPs，其中15個SNPs位于內(nèi)含子，2個SNPs位于外顯子，表明該基因內(nèi)含子區(qū)存在豐富的遺傳變異。為有效進(jìn)行KASP分型，篩選多態(tài)性較高的位點；同時考慮到對表型的影響，優(yōu)先保留位于外顯子或有特殊變異，即缺失和可變剪接的位點；此外，考慮到連鎖不平衡現(xiàn)象，相鄰200 bp內(nèi)只保留1個SNP，最后篩選得到7個SNPs進(jìn)行基因分型，并與繁殖和產(chǎn)奶性狀進(jìn)行關(guān)聯(lián)分析，發(fā)現(xiàn)7個SNPs與目標(biāo)性狀具有顯著或極顯著的相關(guān)性。其中，g.130433743 A>G位點與ICF、IFL_C、MY、PY、FY和SCS具有顯著或極顯著的相關(guān)性，且AA基因型個體ICF、IFL_C、MY、PY和FY最低，而SCS最高。本研究所關(guān)注的5個繁殖性狀的EBV越小代表繁殖性能越好，配種時間越短，這將減少奶牛養(yǎng)殖場飼養(yǎng)管理成本[20]。對于產(chǎn)奶性狀，除SCS外，其余6個性狀的EBV越高，代表個體產(chǎn)奶性能較好。因此，g.130433743 A>G位點的AA基因型個體具有較好的繁殖性能，而產(chǎn)奶性能較差。該位點為外顯子區(qū)域的同義突變，同義突變可以影響共翻譯折疊的時間，從而改變基因的功能[21]；或通過改變mRNA局部莖環(huán)結(jié)構(gòu)，影響蛋白質(zhì)的翻譯過程，使得不同基因型的表型存在差異[22]。因此，該位點可能通過改變mRNA的二級結(jié)構(gòu)影響PIK3CB基因的表達(dá)，進(jìn)而影響表型。g.130448069 G>A位點處于可變剪接區(qū)域，與IFL_H、IFL_C、MY、PY、FY和SCS性狀均呈顯著或極顯著相關(guān)，且GG基因型個體的IFL_C、MY、PY和FY性狀最低，SCS性狀最高，表明該基因型個體繁殖性能較好，而產(chǎn)奶性能較差。可變剪接能使單個基因產(chǎn)生多個mRNA異構(gòu)體和蛋白質(zhì)亞型[23-24]，可能產(chǎn)生異常轉(zhuǎn)錄本和蛋白質(zhì)[24]。推測g.130448069 G>A位點的不同基因型可能產(chǎn)生不同的轉(zhuǎn)錄本，從而對繁殖和產(chǎn)奶性狀產(chǎn)生影響。針對該位點對PIK3CB基因進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組分析，有望進(jìn)一步揭示導(dǎo)致表型差異的分子機(jī)制。

除g.130387717 G>A位點外，其他位點不同基因型間繁殖和產(chǎn)奶性狀的變化趨勢表現(xiàn)出頡頏效應(yīng)。但在g.130387717 G>A位點上，AA基因型個體AFS和IFL_H性狀最低，MY、PY和FY性狀最高，即AA基因型個體的繁殖和產(chǎn)奶性狀均表現(xiàn)良好，可作為中國荷斯坦牛繁殖和產(chǎn)奶性狀的候選位點重點關(guān)注，該位點位于內(nèi)含子區(qū)域。通常認(rèn)為內(nèi)含子不參與蛋白質(zhì)的翻譯過程而難以對表型產(chǎn)生影響，但內(nèi)含子區(qū)域的變異也可以影響基因的表達(dá)，如PIK3CB基因內(nèi)含子rs361072位點G等位基因能增加GATA結(jié)合位點從而促進(jìn)轉(zhuǎn)錄[25]，該位點與血清胰島素樣生長因子1水平和壽命有關(guān)[26]。在文惠等[27]對富亮氨酸重復(fù)序列G蛋白偶聯(lián)受體5(LGR5)基因的研究中，同樣有3個內(nèi)含子SNPs與中國荷斯坦牛副乳頭的發(fā)生存在關(guān)系。本研究中，PIK3CB基因內(nèi)含子SNP位點對繁殖和產(chǎn)奶性狀的影響可能與內(nèi)含子區(qū)突變的調(diào)控修飾有關(guān)，可以通過分子生物學(xué)試驗進(jìn)一步驗證。

動物基因?qū)Ρ硇偷挠绊懣赡苁艿蕉鄠€突變位點的共同作用[28]。研究發(fā)現(xiàn)，一個單倍型上的多個突變會對性狀產(chǎn)生更大的協(xié)同影響[29]。PIK3CB基因的g.130387717 G>A、g.130430832 A>-、g.130433743 A>G、g.130433982 C>T、g.130446073 C>T和g.130448069 G>A共6個SNPs緊密連鎖形成一個單倍型塊。以產(chǎn)奶性狀為例，形成單倍型塊的6個SNPs位點均與MY、PY和FY性狀呈顯著或極顯著相關(guān)，且單倍型塊與MY、PY和FY性狀均呈極顯著相關(guān)。其中，H1H2組合個體的3個性狀最低，而H1H2正是g.130430832 A>-、g.130433743 A>G、g.130433982 C>T、g.130446073 C>T和g.130448069 G>A位點的最低基因型組合，且不包含g.130387717 G>A位點的最高基因型AA；H1H4、H2H3和H2H4組合個體均排在3個性狀的前3位，H1H4組合不包含各位點最低的基因型，H2H3和H2H4組合在包含g.130387717 G>A位點的最高基因型AA的同時，伴有多個位點的雜合基因型，使得組合EBV較高；此外，H2H3組合個體AFS和IFL_H性狀較低，H2H4組合個體AFS性狀最低，因此H2H3和H2H4組合的繁殖和產(chǎn)奶性狀均表現(xiàn)良好，與關(guān)于g.130387717 G>A位點AA基因型的結(jié)果一致。本研究的單位點關(guān)聯(lián)分析和單倍型組合關(guān)聯(lián)分析可以相互佐證，H2H3和H2H4組合作為繁殖和產(chǎn)奶性狀的優(yōu)勢單倍型組合，可為奶牛的平衡育種提供理論依據(jù)。

4 結(jié) 論

本研究在PIK3CB基因上共檢測到17個SNPs，其中7個SNPs與繁殖和產(chǎn)奶性狀具有顯著或極顯著關(guān)聯(lián)，g.130433743 A>G位點的AA基因型和g.130448069 G>A位點的GG基因型個體具有較好的繁殖性能，而其產(chǎn)奶性能相對較差；g.130387717 G>A位點的AA基因型個體繁殖和產(chǎn)奶性狀均表現(xiàn)良好，上述3個位點可作為奶牛選育中繁殖和產(chǎn)奶性狀的潛在分子標(biāo)記。PIK3CB基因單倍型組合中，H2H3和H2H4組合個體的繁殖和產(chǎn)奶性狀均表現(xiàn)較好，為優(yōu)勢單倍型組合。本研究揭示了PIK3CB基因在中國荷斯坦牛群體中的多態(tài)性，并重點篩查了該基因中與繁殖和產(chǎn)奶性狀相關(guān)的多態(tài)位點，可為使用分子標(biāo)記輔助選擇改善中國荷斯坦牛的繁殖和產(chǎn)奶性狀提供參考。