齊夢(mèng)竹，耿 好，張 月，盛英霞，陳書民，孔祥華，王秀江，胡莉萍*

（1.山東農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，山東 泰安 271018；2.山東省動(dòng)物疫病預(yù)防與控制中心，山東 濟(jì)南；3.山東省畜牧總站，山東 濟(jì)南；4.山東新希望六和集團(tuán)有限公司，山東 青島）

布魯氏菌病是由布魯氏菌入侵機(jī)體而感染的一種人畜共患病，布魯氏菌是大小為 0.5-0.7×0.6-1.5μm 的革蘭氏陰性小球桿菌，胞內(nèi)寄生，無(wú)芽抱，大多數(shù)無(wú)莢膜。根據(jù)其特異性動(dòng)物宿主的不同分為 10個(gè)生物種（見表1）[1]。近幾年，有報(bào)道顯示兩棲動(dòng)物中也分離出了新的布魯氏菌[2]。布魯氏菌的宿主具有多樣性，其中，羊種布魯氏菌、牛種布魯氏菌和豬種布魯氏菌是引起人和動(dòng)物患病的主要病原。

表1 布魯氏菌主要的生物種及亞型

1 致病機(jī)理及主要毒力因子

1.1 致病機(jī)理

布魯氏菌致病的基礎(chǔ)是能在巨噬細(xì)胞內(nèi)存活并進(jìn)行復(fù)制和繁殖，入侵細(xì)胞的方式主要包括黏附、侵襲、定植和傳播4個(gè)步驟。

布魯氏菌表面的脂多糖（LPS）能夠與巨噬細(xì)胞的脂筏相互作用，從而粘附于細(xì)胞上。細(xì)菌進(jìn)入細(xì)胞后，募集小 GTP蛋白 Rab等形成布氏小體（BCV），然后招募溶酶體蛋白 LAMP1，參與形成內(nèi)含布魯氏菌的囊泡。在 IV型分泌系統(tǒng)的參與下，囊泡移動(dòng)到內(nèi)質(zhì)網(wǎng)并大量復(fù)制，當(dāng)數(shù)量積累到一定程度后，BCV會(huì)轉(zhuǎn)化成自噬相關(guān)囊泡（aBCV），逃避和調(diào)節(jié)宿主的免疫應(yīng)答。完成大量的增殖后最終傳播到易感組織和細(xì)胞中，進(jìn)一步造成損傷[1]。

1.2 毒力因子

布魯氏菌沒有外毒素、質(zhì)粒等經(jīng)典的毒力因子，其毒力主要與入侵宿主細(xì)胞、抵抗細(xì)胞內(nèi)的殺菌作用以及在細(xì)胞內(nèi)增殖有關(guān)。布魯氏菌的毒力基因主要集中于少數(shù)基因上，如脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）、超氧化物歧化酶（superoxidedismutase，SOD）、外膜蛋白（outer membrane proteins，Omp/OMPs）、Ⅳ型分泌系統(tǒng)（type Ⅳ secretion system，T4SS）、和二元調(diào)控系統(tǒng)等[3]。

2 流行病學(xué)

布魯氏菌病（簡(jiǎn)稱“布病”）的主要傳染源是患病或者帶菌的動(dòng)物及其動(dòng)物產(chǎn)品，可經(jīng)呼吸道、消化道、生殖道、傷口黏膜、吸血昆蟲等感染易感動(dòng)物。牛種、羊種、豬種布魯氏菌是最主要的病原微生物，病畜的排泄物、分泌物、乳汁、精液等內(nèi)都會(huì)帶菌，造成環(huán)境污染。布魯氏菌的潛伏期通常為一周到數(shù)月，而排菌期可長(zhǎng)達(dá)數(shù)月乃至數(shù)年，越接近性成熟的易感動(dòng)物對(duì)布魯氏菌越易感，人感染布魯式菌后通常條件下不會(huì)進(jìn)行水平傳播[4]。布魯氏菌病一年四季均可發(fā)病，在春末夏初或春秋之間多發(fā)，人布魯氏菌的發(fā)病率與其從事行業(yè)息息相關(guān)，發(fā)病率高的人群多是基層獸醫(yī)、飼養(yǎng)員、防疫員、屠宰工人及養(yǎng)殖戶等，經(jīng)常與動(dòng)物及畜產(chǎn)品接觸密切。布魯氏菌在世界各地均有存在，尤其是在中東地區(qū)、非洲、地中海地區(qū)、中南美洲流行嚴(yán)重，雖然挪威、瑞士、英國(guó)等地已消除了布病，但隨著全球貿(mào)易的發(fā)展，目前呈現(xiàn)反彈的趨勢(shì)。我國(guó)疫情主要集中在內(nèi)蒙古、東北和華中等地，給畜牧業(yè)的穩(wěn)定發(fā)展造成了巨大的威脅[5]。

3 診斷

3.1 臨床癥狀

大部分動(dòng)物感染布魯氏菌后，會(huì)表現(xiàn)發(fā)熱、食欲下降，精神沉郁等，有的還會(huì)出現(xiàn)關(guān)節(jié)疼痛腫脹、脊椎炎、后肢麻痹等癥狀[6]。染病母畜主要臨床癥狀是流產(chǎn)、奶量下降、死胎、生育力低下等癥狀，染病公畜以生殖道的損傷為主，會(huì)出現(xiàn)附睪炎、睪丸炎、睪丸腫脹、滑液囊炎等[7]。

人感染布魯氏菌早期癥狀與傷寒、上呼吸道感染、風(fēng)濕病等相似，且會(huì)出現(xiàn)波浪熱。急性期的主要癥狀為乏力、低熱、多汗、頭疼、厭食、肌肉關(guān)節(jié)疼痛等[8]。布魯氏菌入侵中樞神經(jīng)系統(tǒng)會(huì)導(dǎo)致腦炎、腦膜炎，腦脊液、神經(jīng)麻痹等，侵害泌尿生殖系統(tǒng)后會(huì)出現(xiàn)流產(chǎn)、睪丸炎、前列腺炎等癥狀[9]。如果沒有在急性期進(jìn)行及時(shí)有效的治療，會(huì)轉(zhuǎn)化成慢性疾病加大治愈的難度，且病程時(shí)間長(zhǎng)容易復(fù)發(fā)[6]。

3.2 實(shí)驗(yàn)室診斷

實(shí)驗(yàn)室常用的診斷方法包括細(xì)菌學(xué)診斷、血清學(xué)診斷和分子生物學(xué)診斷。

3.2.1 細(xì)菌學(xué)診斷 病原分離培養(yǎng)是診斷布魯氏菌病最直觀的方法，也是國(guó)標(biāo)中規(guī)定的金標(biāo)準(zhǔn)。該種方式主要用于檢測(cè)已經(jīng)發(fā)病或疑似病畜個(gè)體身上是否攜帶病菌，對(duì)病畜病變部位進(jìn)行細(xì)菌的分離培養(yǎng)，結(jié)合合理的診斷與定性分析達(dá)到診斷目的[10]。但因該方法培養(yǎng)周期長(zhǎng)、檢出率低，且對(duì)實(shí)驗(yàn)室的要求要達(dá)到 P3及以上，臨床中往往難以操作，因而應(yīng)用較少[11]。首先采取部分病變樣品接種到含血清的胰蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基中，長(zhǎng)出肉眼可見的灰白色、隆起、不溶血的小菌落，進(jìn)行下一步顯微鏡檢查。布魯氏菌是需氧菌，添加一定含量的 CO2會(huì)更有利其生長(zhǎng)。布魯氏菌難以染色，快速鑒別布魯氏菌的經(jīng)典染色方法之一是柯茲洛夫斯基染色法，若在綠色細(xì)菌中發(fā)現(xiàn)紅色點(diǎn)狀細(xì)菌，則高度懷疑是布魯氏菌；姬姆薩染色呈現(xiàn)紫色，革蘭氏染色為陰性菌；用改良Ziehl-Neelsen方法染色后，鏡檢背景為藍(lán)色，布魯氏菌菌體染成紅色[3-5]。

3.2.2 血清學(xué)診斷 布魯氏菌病的血清學(xué)診斷主要包括以虎紅平板凝集試驗(yàn)（RBPT）、熒光偏振分析技術(shù)（FPA）、膠體金免疫層析法（GICA）、間接酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（iELISA）為主的臨床初步篩查技術(shù)和以補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)（CFT）、試管凝集試驗(yàn)（SAT）、競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（cELISA）為主的確診檢測(cè)方法[4-5，12-13]。其中虎紅平板試驗(yàn)和間接酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)是布病檢測(cè)的常用初篩方法；布病的確診常使用試管凝集試驗(yàn)和競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)[14-15]。

3.2.3 分子生物學(xué)診斷 分子生物學(xué)診斷方法多用于布魯氏菌的分型及鑒別診斷[16]。包括聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）、多重 PCR、熒光定量 PCR、環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)（LAMP）、核酸探針檢測(cè)法、基因芯片技術(shù)等。分子生物學(xué)檢測(cè)方法靈敏快捷、操作簡(jiǎn)便，但對(duì)實(shí)驗(yàn)室條件要求較高[4,6]。

4 防控思路

4.1 加強(qiáng)領(lǐng)導(dǎo)，聯(lián)防聯(lián)控

高度重視人畜共患病防控工作，不斷健全“政府領(lǐng)導(dǎo)、部門協(xié)作、全社會(huì)共同參與”的布病防控機(jī)制，成立領(lǐng)導(dǎo)小組，組建工作專班，堅(jiān)定不移地推進(jìn)布病防控工作實(shí)施。將布病防控作為“一把手”工程來(lái)抓，列入重要?jiǎng)游镆卟》揽毓ぷ鲀?nèi)容，形成主要領(lǐng)導(dǎo)親自抓，分管領(lǐng)導(dǎo)具體抓、上下聯(lián)動(dòng)、齊抓共管的良好局面。

市疫控中心負(fù)責(zé)將監(jiān)測(cè)凈化、牛羊及產(chǎn)品移動(dòng)控制、檢疫監(jiān)管、防控經(jīng)費(fèi)保障、群眾宣傳發(fā)動(dòng)、違法行為處理、區(qū)域消毒滅源、疫情處置、人畜聯(lián)動(dòng)等各環(huán)節(jié)均納入多部門聯(lián)防聯(lián)控機(jī)制，建立多部門、跨行業(yè)的布病防控長(zhǎng)效機(jī)制，有效保障布病防控工作的有序開展，做到對(duì)布病發(fā)生早發(fā)現(xiàn)、早處置。

各級(jí)畜牧獸醫(yī)主管部門要加強(qiáng)與衛(wèi)生部門的密切配合和溝通協(xié)調(diào)，按照“各負(fù)其責(zé)，同級(jí)協(xié)作，資源共享”的原則，建立完善布病防治工作合作機(jī)制。實(shí)行部門例會(huì)制度和疫情信息通報(bào)制度，定期會(huì)商疫情形勢(shì)，研究防控策略，聯(lián)合處理人畜間布病疫情，形成布病防控工作合力。

4.2 強(qiáng)化內(nèi)力，補(bǔ)齊短板

成立人畜共患病防控與凈化聯(lián)合體，合力防控。布病防控不是一個(gè)部門的事情，必須作為一項(xiàng)社會(huì)系統(tǒng)工程，全省一盤棋。政府參與、隊(duì)伍完善、經(jīng)費(fèi)保障、科學(xué)布局、全民知曉、合作機(jī)制、強(qiáng)化制約、齊抓共管。以人間病例為方向標(biāo)，做好頂層設(shè)計(jì)，補(bǔ)短板、堵漏洞、強(qiáng)弱項(xiàng)，全面提升。

4.3 分區(qū)防控，分類指導(dǎo)

制定切實(shí)可行的布病防控方案，布病根據(jù)《山東省布魯氏菌病推進(jìn)方案》要求，采取分區(qū)防控。在布病防控上，摸清底數(shù)，把威海、煙臺(tái)、青島分為免疫區(qū)、其他 13 市為凈化區(qū)和緩沖區(qū)，在免疫區(qū)實(shí)行凈化備案，在凈化區(qū)實(shí)行免疫備案。分別采取檢測(cè)凈化、免疫—監(jiān)測(cè)凈化的技術(shù)路線，統(tǒng)籌推進(jìn)。根據(jù)實(shí)際情況，采取全群撲殺、全群淘汰、隔離飼養(yǎng)等不同措施，對(duì)陽(yáng)性動(dòng)物和群體實(shí)行分類處置。

4.4 強(qiáng)化檢疫，果斷處置

加強(qiáng)檢測(cè)，疫控機(jī)構(gòu)要及時(shí)向主管部門匯報(bào)檢測(cè)情況，實(shí)施強(qiáng)制免疫后開展監(jiān)督抽檢情況及檢測(cè)結(jié)果，畜間布病發(fā)病及處置情況，免疫家畜移動(dòng)監(jiān)管情況等。加強(qiáng)檢疫監(jiān)管，禁止從疫區(qū)調(diào)入牛、羊等易感動(dòng)物及其產(chǎn)品。在種畜場(chǎng)發(fā)證、生鮮奶收購(gòu)、屠宰場(chǎng)檢疫追溯中，把布病檢測(cè)作為必須項(xiàng)目。加強(qiáng)疫情監(jiān)測(cè)，及時(shí)掌握疫情發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)，做好防疫各項(xiàng)工作，從根本上推動(dòng)規(guī)?；Ｑ驁?chǎng)自覺開展布病凈化。

發(fā)現(xiàn)畜間布魯氏菌疫情，要迅速果斷處置。確診后，當(dāng)?shù)厝嗣裾M織有關(guān)部門按照“早、快、嚴(yán)、小”的原則，按照《山東省牲畜布魯氏菌病防控技術(shù)指南》和緊急情況下布魯氏菌病免疫預(yù)防，開展畜間溯源調(diào)查，嚴(yán)格落實(shí)染疫撲殺政策，對(duì)檢疫發(fā)現(xiàn)的陽(yáng)性畜，嚴(yán)格按照國(guó)家規(guī)定進(jìn)行全部撲殺和無(wú)害化處理，嚴(yán)格封鎖、防止大面積擴(kuò)散疫情。

4.5 全面宣傳，廣泛培訓(xùn)

宣傳培訓(xùn)、輿論引導(dǎo)，扎實(shí)的群眾基礎(chǔ)是“推進(jìn)器”。按照“分級(jí)負(fù)責(zé)，逐級(jí)實(shí)施，立體培訓(xùn)”的原則，在全市范圍內(nèi)利用多種形式加強(qiáng)牛羊布病宣傳和技術(shù)培訓(xùn)，向養(yǎng)殖、運(yùn)輸、屠宰、加工、銷售從業(yè)人員發(fā)放布病防治知識(shí)資料，開展技術(shù)培訓(xùn)班。采取現(xiàn)場(chǎng)培訓(xùn)、發(fā)放宣傳畫和手冊(cè)、電視直播、關(guān)注公眾號(hào)、制作動(dòng)漫等一系列宣傳引導(dǎo)，擴(kuò)大了獸醫(yī)部門對(duì)企業(yè)的影響力，強(qiáng)化了“產(chǎn)-學(xué)-研-推”的凝聚力，提高了社會(huì)對(duì)布病的認(rèn)知力和防控意識(shí)。

4.6 預(yù)警預(yù)報(bào)，風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估

評(píng)估風(fēng)險(xiǎn)、分類處置，科學(xué)的處置方法是“定海針”。成立省級(jí)動(dòng)物衛(wèi)生風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估專家委員會(huì)，依法開展動(dòng)物衛(wèi)生風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估。合理確定抽樣檢測(cè)的場(chǎng)群數(shù)和個(gè)體樣本數(shù)，科學(xué)評(píng)估疫情發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)，做好新發(fā)動(dòng)物疫病和外來(lái)動(dòng)物疫病的監(jiān)測(cè)預(yù)警和應(yīng)急處置工作，科學(xué)研判防控形勢(shì)，及時(shí)發(fā)布預(yù)警信息。建立以法律法規(guī)為依據(jù)，以風(fēng)險(xiǎn)分析科學(xué)評(píng)估為手段的動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估分級(jí)管理的監(jiān)管新模式。