李培勛，林淑玲，孟凡亮，沈葉盛，趙伊然，王泰龍，李寶全*，劉思當*

（1.山東農業(yè)大學，山東 泰安 271018；2.山東省棲霞市動物疫病預防與控制中心，山東 棲霞；3.華云（山東）檢驗檢疫服務有限公司，山東 泰安）

豬繁殖與呼吸綜合征（Porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS）是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）引發(fā)的一種高度接觸性、烈性傳染病[1]。PRRS最早發(fā)現(xiàn)于美洲，1995年左右出現(xiàn)在中國。PRRSV 只感染豬，主要感染巨噬細胞尤其是肺泡巨噬細胞[2]，PRRSV感染可導致嚴重的間質性肺炎及免疫抑制，感染豬體可導致嚴重的呼吸道癥狀及免疫抑制[3]，懷孕母豬出現(xiàn)流產、早產、木乃伊胎等繁殖障礙，高致病性變異毒株致病力顯著增強，易感豬感染表現(xiàn)以呼吸道癥狀為特征的急性敗血癥[4]，因PRRSV易變異、重組，又具有抗體依賴性增強和持續(xù)性感染的特性，嚴重危害世界養(yǎng)豬業(yè)[5]。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 樣品來源 2021年7月份鄒城某豬場為一自繁自養(yǎng)小規(guī)模豬場，60多日齡的保育豬舍個別豬只出現(xiàn)發(fā)燒、厭食、呼吸困難等癥狀。樣品來自該場病豬。

1.1.2 儀器、試劑 PCR 儀（Takara）、4 ℃ 離心機（Eppendorf）、DYYnl-2型電泳儀（Biorad）、高壓滅菌鍋（日本三洋）、石蠟切片機（德國徠卡）、SimplyP 病毒 DNA/RNA 共提取試劑盒（杭州博日科技有限公司）、Easy Script Onestep RT-PCR Super Mix（北京全式金生物技術有限公司）、蘇木素、伊紅染料（索萊寶）。

1.2 方法

1.2.1 病理學診斷 （1）剖檢診斷。剖檢病死豬，眼觀頜下淋巴結、扁桃體、腹股溝淋巴結、肺臟、心臟、脾臟、肝臟、腎臟、腸道和膀胱等器官組織病變，進行初步診斷。（2）病理組織學診斷。取病變器官組織，用 10 % 的福爾馬林溶液固定，修剪病變組織至適當大小，常規(guī)石蠟切片，HE染色，在顯微鏡下觀察組織學病變。

1.2.2 病原學檢測 （1）核酸提取及擴增。選取剖檢所見病變明顯的器官組織，放入研磨器中，加入 20 ml生理鹽水進行研磨。研磨完成后分裝到離心管中，以便進行檢測。選取一管研磨液提取病毒核酸，配制反應體系，進行 PCR擴增，并對擴增后的DNA進行檢測。1 %瓊脂糖凝膠進行電泳，并在紫外照膠儀下拍照觀察。（2）序列測定。用PRRSV NSP2全長引物對陽性樣品進行擴增，目的片段切膠膠回收，與 PMD18-T進行連接轉化，選取PCR鑒定陽性菌落，送至生工生物工程公司測序。（3）遺傳進化分析。將本研究分離毒株的序列與參考序列進行遺傳進化分析，用Megline軟件構建系統(tǒng)發(fā)育樹。

2 結果與分析

2.1 剖檢病變

剖檢病變如圖1，可見肺小葉間質增寬，全肺暗紅色實變，切面結構致密，鮮紅色血液溢出。頸部及肺部淋巴結充血腫大。

圖1

2.2 病理組織學病變

病理組織學病變見圖 2，肺泡壁間質增寬，大量淋巴細胞、巨噬細胞浸潤，有的肺泡腔內見脫落的肺泡上皮細胞、巨噬細胞及淋巴細胞。

圖2

2.3 病原學檢測

檢測結果見圖 3，檢測豬瘟病毒、豬藍耳病病毒、豬偽狂犬病毒、豬圓環(huán)病毒，豬藍耳病病毒陽性，其余均為陰性。

圖3

2.4 遺傳進化分析

本次試驗樣品分離出的病毒與高致病性藍耳病病毒毒株同源性最高。

圖4 病毒毒株進化樹

據臨床癥狀表現(xiàn)、剖檢病變、病理組織學檢查、病原學檢測及遺傳進化分析結果，該病例最后確診為高致病性藍耳病。

3 討論

經調查得知該豬場應用經典毒株疫苗免疫，后備母豬配種前 2次免疫馴化，基礎母豬每年普免3次，商品豬2周齡一次免疫。近年來一直使用該免疫程序，以往未曾發(fā)生過類似疫情。該豬場病豬只見于 60多日齡的保育豬，說明存在仔豬免疫失敗現(xiàn)象，分析其原因主要是仔豬只在 2周齡是一次免疫，免疫力度不夠，一旦有高致病PRRSV感染，必然會導致部分豬只發(fā)病。

建議加強仔豬免疫，在 2周齡免疫的基礎上，6周齡進行二免；對發(fā)病豬群泰萬菌素和抗病毒藥物飲水或拌料治療，該豬群經過治療，病情很快得到好轉；健全生物安全體系，加強飼養(yǎng)管理，減少應激反應，增強豬群尤其是保育豬的健康體質。