韓曉麗 屈永濤 李色 郭明麗

1 山東省耳鼻喉醫(yī)院眩暈疾病科，山東大學(xué)(濟(jì)南 250000)； 2 河北省人民醫(yī)院

梅尼埃病(Meniere’s disease，MD)是一種特發(fā)性內(nèi)耳疾病，表現(xiàn)為間斷發(fā)作性眩暈、波動(dòng)性感音神經(jīng)性聽力損失、耳鳴和耳脹滿感，但其病因及發(fā)病機(jī)制至今尚不清楚。目前治療多為經(jīng)驗(yàn)性治療和對(duì)癥處理，沒(méi)有針對(duì)病因的策略，導(dǎo)致臨床癥狀反復(fù)發(fā)作。實(shí)驗(yàn)研究和臨床觀察發(fā)現(xiàn)變態(tài)反應(yīng)與MD有一定關(guān)系,Ⅰ型超敏反應(yīng)的發(fā)生與變應(yīng)原特異性輔助性T細(xì)胞(T helper cells，Th)中Th1和Th2平衡失調(diào)有關(guān)，系Th2細(xì)胞反應(yīng)增強(qiáng)所致。Th1細(xì)胞分泌的干擾素-γ(interferon-γ，IFN-γ)是巨噬細(xì)胞活化必不可少的細(xì)胞因子，同時(shí)能夠抑制白介素-4(interleukin-4，IL-4)誘導(dǎo)的免疫球蛋白E(immunogloblin E，IgE)的合成，從而抑制體內(nèi)IgE的產(chǎn)生。Th2細(xì)胞分泌的IL-4會(huì)促進(jìn)B淋巴細(xì)胞抗體IgE的產(chǎn)生。近幾年，隨著對(duì)白介素-17(IL-17)、白介素(IL-10)與Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)的深入研究，提出了Th17/Treg細(xì)胞模式的理論,發(fā)現(xiàn)二者的相互關(guān)系可影響Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)性疾病的發(fā)展與轉(zhuǎn)歸。IL-10主要是由CD4+T細(xì)胞中的Foxp3+Treg細(xì)胞產(chǎn)生，并提出IL-10是最重要的抗炎細(xì)胞因子之一，可限制炎癥性Th細(xì)胞產(chǎn)生的免疫病理學(xué)反應(yīng)，維持組織穩(wěn)態(tài)[1]。IL-17主要由Th17細(xì)胞分泌，主要生物學(xué)效應(yīng)是參與炎癥反應(yīng)。本研究擬通過(guò)比較MD患者與耳科正常對(duì)照組外周血中IL-10、IL-4、IFN-γ、IL-17、tIgE的水平，并計(jì)算IL-4/IFN-γ和IL-17/IL-10比值，反應(yīng)Th1/Th2、Th17/Treg細(xì)胞平衡狀態(tài)，初步探討其在MD發(fā)病中的作用，為MD的臨床治療提供參考。

1 資料與方法

1.1研究對(duì)象及分組 MD組納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合《梅尼埃病診斷和治療指南(2017)》的臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)[2]；②1個(gè)月內(nèi)未使用過(guò)糖皮質(zhì)激素、免疫抑制劑、抗組胺藥物及鎮(zhèn)靜藥物；③2周內(nèi)無(wú)急性感染；④無(wú)其他重大疾病及重大手術(shù)史，無(wú)其他慢性疾病病史，有糖尿病、高血壓等者病情控制穩(wěn)定。排除前庭性偏頭痛、突發(fā)性聾伴眩暈等眩暈相關(guān)性疾病?；颊咴谘灠l(fā)作48 h內(nèi)進(jìn)行外周靜脈血采集及相關(guān)檢查。

耳科正常對(duì)照組納入標(biāo)準(zhǔn)：滿足MD組納入標(biāo)準(zhǔn)②～④，且所有受試者不伴耳、鼻疾病，無(wú)眩暈疾病及過(guò)敏疾病史。

根據(jù)上述標(biāo)準(zhǔn)，選取2019年5月至2019年12月在河北省人民醫(yī)院耳鼻咽喉科確診的31例MD患者為研究對(duì)象(MD組)，男12例，女19例；年齡33～77歲，平均55.03±10.35歲；耳科正常對(duì)照組18例，男11例，女7例；年齡30～69歲，平均51.33±10.76歲；兩組間年齡差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。所有研究對(duì)象入組前均告知其研究目的及意義，在其充分知情和自愿的前提下簽署醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)的知情同意書。

1.2血清IL-4、IFN-γ、IL-10、IL-17、總IgE(tIgE)檢測(cè) 采用促凝真空采血管，抽取受試者合格的晨起外周血5 ml，放置于室溫2～4 h，待其自然凝固后，放置于離心機(jī)中，轉(zhuǎn)速為3 600 r/min，離心10 min后收集血清2 mL，放置于EP管內(nèi)。登記編號(hào)信息后置于-80 ℃冰箱冷藏保存，用于檢測(cè)血清中IL-4、IFN-γ、IL-10、IL-17、tIgE濃度，并計(jì)算IL-4/IFN-γ、IL-17/IL-10比值。

均采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測(cè)，對(duì)樣本的處理、實(shí)驗(yàn)步驟及最終濃度計(jì)算，均按照使用說(shuō)明書進(jìn)行操作。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS20.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)數(shù)資料比較采用卡方檢驗(yàn)；計(jì)量資料先行正態(tài)性及方差齊性檢驗(yàn)，兩者均滿足者兩組間比較用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)；非正態(tài)分布連續(xù)變量?jī)瑟?dú)立樣本比較采用Mann-Whitney U檢驗(yàn)。正態(tài)分布數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差描述，非正態(tài)分布數(shù)據(jù)以四分位數(shù)M(P25,P75)表示；P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1MD組和對(duì)照組血清tIgE比較 31例MD患者中16例(51.61%)tIgE升高，對(duì)照組18例受試者中3例(16.67%)tIgE升高，兩組tIgE升高的比例差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.016,P<0.05)。

2.2MD組與對(duì)照組血清IL-4、IFN-γ、IL-17、IL-10及IL-4/IFN-γ、IL-17/IL-10水平比較 MD組和對(duì)照組之間外周血IL-4(P=0.65>0.05)、IFN-γ(P=0.16>0.05)、IL-17(P=0.14>0.05)、IL-10(P=0.33>0.05)差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(表1)。

表1 兩組間外周血中IL-4、IFN-γ、IL-10、IL-17水平比較[pg/L，M(P25,P75)]

MD組IL-4/IFN-γ(P<0.01)、IL-17/IL-10值IL-4/IFN-γ均明顯高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)(表2)。

表2 兩組外周血中IL-4/IFN-γ、IL-17/IL-10比較

3 討論

Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)與MD關(guān)系的研究備受關(guān)注，Egami等[3]在用豚鼠制做Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)介導(dǎo)的膜迷路積水模型中發(fā)現(xiàn)，接受H1受體拮抗劑處理組的組織切片中，在激發(fā)過(guò)敏反應(yīng)時(shí)未觀察到嗜堿性粒細(xì)胞浸潤(rùn)及顯著膜迷路積水現(xiàn)象；之后M?ller等[4]發(fā)現(xiàn)人內(nèi)淋巴囊組織上皮層有組胺H1受體表達(dá)。本研究檢測(cè)了MD組和對(duì)照組外周血清中tIgE水平，結(jié)果顯示MD組患者外周血清tIgE升高比例明顯高于對(duì)照組(P<0.05)，與Derebery等(2000)、Keles等(2004)研究結(jié)果一致，因此,推測(cè)Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)是部分MD患者重要的發(fā)病機(jī)制,其機(jī)制可能為位于內(nèi)淋巴囊周圍的肥大細(xì)胞在IgE介導(dǎo)下脫顆粒，內(nèi)淋巴囊組織內(nèi)組胺及嗜酸粒細(xì)胞趨化因子增加，造成局部炎性反應(yīng)，從而影響了內(nèi)淋巴囊的吸收和濾過(guò)功能，從而引起膜迷路積水[5]。

Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)的發(fā)生與變應(yīng)原特異性Th1和Th2細(xì)胞的平衡失調(diào)有關(guān)，系Th2細(xì)胞反應(yīng)增強(qiáng)所致，其中Th2細(xì)胞分泌的IL-4能夠促進(jìn)IgE合成，Th1細(xì)胞分泌的IFN-γ 能夠抑制IL-4所誘導(dǎo)的IgE合成，Th1和Th2細(xì)胞之間通過(guò)細(xì)胞因子復(fù)雜的調(diào)節(jié)關(guān)系共同調(diào)控IgE的合成，當(dāng)他們失去平衡時(shí)，可能引起變態(tài)反應(yīng)性疾病。本研究結(jié)果中MD組與對(duì)照組外周血IL-4、IFN-γ 濃度差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但對(duì)照組IL-4/IFN-γ 值明顯低于MD組(P<0.05),可能的原因，一是MD的調(diào)控機(jī)制復(fù)雜，系Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)與其他免疫因素共同作用的結(jié)果，二是本組樣本量較少，不排除存在偏差，還需大樣本實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。本研究IL-4/IFN-γ 的結(jié)果與Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)性疾病中Th1/Th2細(xì)胞失衡的理論相符，因此，推測(cè)MD的發(fā)生和發(fā)展可能與IL-4/IFN-γ失衡有密切的關(guān)系，但其作用機(jī)制尚不明確，還需進(jìn)一步研究。

很多學(xué)者對(duì)Th17細(xì)胞、調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(regulatory cell,Treg)分別表達(dá)的細(xì)胞因子IL-17、IL-10在各種疾病的發(fā)生及發(fā)展中的意義進(jìn)行了研究，其在Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)中的作用也成為研究的熱點(diǎn)。研究發(fā)現(xiàn)IL-17的主要生物學(xué)效應(yīng)是參與炎癥反應(yīng)[6,7]。IL-10是最重要的抗炎細(xì)胞因子之一，可限制炎癥性Th細(xì)胞產(chǎn)生的免疫病理學(xué)反應(yīng)，維持組織穩(wěn)態(tài)[1]。有研究表明，Treg細(xì)胞或者其分泌的IL-10在調(diào)節(jié)Th2細(xì)胞介導(dǎo)的Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)性疾病及維持免疫耐受方面起著重要作用[8～10]。以上研究結(jié)果表明Treg細(xì)胞及其分泌的IL-10水平可以提示疾病的轉(zhuǎn)歸。但也有不同觀點(diǎn)，Dehnavi等[11]發(fā)現(xiàn)，變應(yīng)性鼻炎(allergic rhinitis，AR)患者免疫治療后臨床癥狀改善，外周單核細(xì)胞中檢測(cè)的IL-10的基因表達(dá)減少。Salmani等[12]發(fā)現(xiàn)AR患者經(jīng)免疫治療后疾病的嚴(yán)重程度和生活質(zhì)量顯著改善，但I(xiàn)L-17的基因表達(dá)顯著增加；目前IL-10、IL-17與Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)的關(guān)系還在探索之中，且對(duì)其的產(chǎn)生條件及作用機(jī)制尚不明確。本研究結(jié)果顯示，兩組間外周血中IL-10、IL-17水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，可能是IL-10、IL-17的作用機(jī)制在不同個(gè)體中的表達(dá)可能存在一定的差異，導(dǎo)致MD組與對(duì)照組外周血各細(xì)胞因子之間的檢測(cè)結(jié)果存在一定的差異；也可能與樣本量較小有關(guān)。另外，MD的發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，不單是I型變態(tài)反應(yīng)所致，或有更為復(fù)雜的機(jī)制。

苗青等[13]在探討花粉癥患者在發(fā)作期和非發(fā)作期外周血Th17/Treg平衡變化及臨床意義時(shí)發(fā)現(xiàn)，發(fā)作期內(nèi)存在Th17/Treg 細(xì)胞免疫失衡。本研究用IL-17/IL-10間接評(píng)估Th17/Treg平衡狀態(tài)，結(jié)果顯示MD組IL-17/IL-10顯著高于對(duì)照組(P<0.05),推測(cè)IL-17、IL-10共同作用在MD發(fā)病機(jī)制中具有重要作用,Th17/Treg細(xì)胞失衡可能影響MD的發(fā)展。潘滔等[7]發(fā)現(xiàn)MD伴發(fā)變態(tài)反應(yīng)患者的 Treg細(xì)胞水平、Treg/Th17比值均明顯高于不伴變態(tài)反應(yīng)者，但沒(méi)有研究MD患者不同時(shí)期Treg/Th17比值變化。本研究樣本量較小，各組間未按照伴發(fā)變態(tài)反應(yīng)與不伴發(fā)變態(tài)反應(yīng)再次分組，因此，還需要更多的樣本進(jìn)行詳細(xì)分組，觀察Treg、Th17在MD發(fā)病中的作用。