■王金榮

（河南工業(yè)大學(xué)生物工程學(xué)院，河南鄭州 450001）

近年來，隨著科技的進(jìn)步，飼料中單組分分析檢測(cè)技術(shù)已經(jīng)非常成熟，檢測(cè)限和定量限均能滿足飼料安全監(jiān)督的要求。但是在實(shí)際飼料安全檢測(cè)中，飼料基質(zhì)復(fù)雜，污染物種類繁多，一方面同類物質(zhì)之間在檢測(cè)時(shí)可能存在相互干擾，另一方面對(duì)每種單一物質(zhì)的檢測(cè)與排除也增加了檢測(cè)的工作量。傳統(tǒng)的化學(xué)分析方法很難一次性精確定量檢測(cè)出多種組分，因此多組分同步分析技術(shù)逐漸成為飼料安全檢測(cè)的重要技術(shù)支撐。樣品的預(yù)處理是實(shí)現(xiàn)飼料多組分同步分析的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，目前也是整個(gè)分析過程的瓶頸，其結(jié)果的精準(zhǔn)性直接決定分析結(jié)果的準(zhǔn)確性。常規(guī)的樣品預(yù)處理包括被分析物的提取、凈化和濃縮等步驟，有些樣品預(yù)處理過程中還需要同時(shí)進(jìn)行衍生化處理。傳統(tǒng)的樣品預(yù)處理過程通常是分步進(jìn)行的，過程冗長(zhǎng)，甚至需要消耗大量的化學(xué)試劑等，不符合現(xiàn)代飼料安全快速、高通量檢測(cè)分析的要求。因此，研究與建立新型的簡(jiǎn)單、便捷、快速的飼料樣品預(yù)處理技術(shù)變得尤為重要。QuEChERS 是近年來發(fā)展迅速的一種多組分分析凈化方法，其結(jié)合了液液萃取和分散固相萃取凈化，為氣相色譜、液相色譜分析及質(zhì)譜確證分析提供了干凈的樣品，非常適合對(duì)復(fù)雜基質(zhì)的樣品進(jìn)行分析。由于該方法在最初提出的時(shí)候被認(rèn)為特別適用于提取極性和堿性化合物，因此，基于QuEChERS 開發(fā)的大多數(shù)方法主要涉及從各種基質(zhì)中提取農(nóng)藥和污染物，特別是對(duì)水果、蔬菜和其他食品中農(nóng)殘及污染物分析中應(yīng)用較為廣泛。文章主要圍繞QuEChERS技術(shù)進(jìn)展及其在飼料中霉菌毒素、禁限用藥物等飼料安全檢測(cè)方面的應(yīng)用進(jìn)行綜述，并對(duì)QuEChERS在飼料安全檢測(cè)中的應(yīng)用進(jìn)行展望。

1 QuEChERS方法簡(jiǎn)介

QuEChERS 是快速（Quick）、簡(jiǎn)便（Easy）、廉價(jià)（Cheap）、高效（Effective）、穩(wěn)定（Rugged）和安全（Safe）的簡(jiǎn)稱，作為多殘留分析方法首次于2002 年在羅馬召開的歐洲農(nóng)藥殘留研討會(huì)上，由Anastassiades等[1]提出，并于2003 年公開發(fā)表詳細(xì)的操作方法[2]，2005 年Lehotay等[3]采用該方法測(cè)定了蔬菜和水果中的229種農(nóng)藥，驗(yàn)證了該方法的可行性。QuEChERS 方法的基本原理是分散固相萃取，采用乙腈對(duì)樣品進(jìn)行提取，經(jīng)氯化鈉、無水硫酸鎂等進(jìn)行鹽析分層后采用吸附劑對(duì)提取液進(jìn)行凈化，去除雜質(zhì)，凈化后的樣品再由色譜或質(zhì)譜儀器進(jìn)行定量分析，并形成了最初的3種標(biāo)準(zhǔn)方法（見表1）。

表1 基于QuEChERS方法分析的主要步驟

該方法的使用不僅減少了實(shí)驗(yàn)室玻璃器皿等耗材的使用，同時(shí)也減少了樣品和有機(jī)溶劑的使用，減少了環(huán)境污染。大多數(shù)被測(cè)物質(zhì)（尤其是殺蟲劑）應(yīng)用QuEChERS方法處理都能獲得滿意的回收率，對(duì)于提取效率低的（如極性大的、酸或堿性）分析物相對(duì)比較麻煩，通常需要對(duì)QuEChERS 方法進(jìn)行改進(jìn)[6]。QuEChERS 方法最初僅僅用于對(duì)含水量高或低脂肪含量的樣品檢測(cè)的預(yù)處理（如水分含量高的水果、蔬菜和果汁等），而其他類型的食品樣品（如中、高脂肪含量和色素含量高或者葉綠素含量高的食品樣品），則需要進(jìn)一步地處理。而對(duì)于含水量低于80%的樣品，通過加水使樣品總質(zhì)量達(dá)到10 g，可以減少分析物與基質(zhì)間的相互作用，從而提高分析物的凈化效率。此外，干燥食品、飼料和一些復(fù)雜基質(zhì)的樣品，通常共同提取物比較多，應(yīng)用QuEChERS方法預(yù)處理相對(duì)較為困難。隨著檢測(cè)技術(shù)的不斷發(fā)展，檢測(cè)樣品的種類及性質(zhì)也不斷發(fā)生變化，上述3種方法不能完全滿足實(shí)際分析的要求，因此國(guó)內(nèi)外研究學(xué)者對(duì)QuEChERS 前處理方法進(jìn)行了改進(jìn)，針對(duì)分析目標(biāo)物的不同，優(yōu)化有效的提取溶劑、鹽析的質(zhì)量和比例、樣品質(zhì)量以及樣品/溶劑值、pH等條件，根據(jù)復(fù)雜基質(zhì)分析的要求選擇適宜的吸附劑類型，實(shí)現(xiàn)樣品的高效提取與凈化分離。

根據(jù)PubMed 統(tǒng)計(jì)，QuEChERS 方法自2002 年提出發(fā)展至2021 年12 月，采用QuEChERS 作為樣品預(yù)處理方法已發(fā)表2 196 篇論文，測(cè)定蔬菜、食品、飼料等樣品中農(nóng)藥殘留、霉菌毒素、抗氧化劑等分析的樣品凈化方法。一些研究報(bào)告對(duì)QuEChERS 方案進(jìn)行了不同的改進(jìn)或修改，以確保更加有效地提取被測(cè)目標(biāo)物，并最大程度地減少不穩(wěn)定分析物的降解，提高分析效率。綜合文獻(xiàn)分析，采用QuEChERS進(jìn)行預(yù)處理方法與傳統(tǒng)的萃取技術(shù)相比具有很多優(yōu)勢(shì)，測(cè)定所需要的樣品質(zhì)量和溶劑使用量均減少，同時(shí)樣品預(yù)處理的時(shí)間更短。此外，大多數(shù)已發(fā)表的研究成果表明，QuEChERS 方案提供了比傳統(tǒng)程序更高的回收率和更好的分析性能。

2 QuEChERS方法與其他預(yù)處理方法比較

QuEChERS 方法的應(yīng)用范圍十分廣泛，傳統(tǒng)的樣品前處理方法[如液-液萃取、液固萃取（包括索氏提?。┓椒╙需要使用大量的有機(jī)溶劑，不僅對(duì)操作人員有潛在的健康影響，同時(shí)廢液的處理困難，還可能造成環(huán)境污染；此外這兩種方法操作步驟較為繁瑣，耗時(shí)長(zhǎng)，選擇專屬性差，無法滿足復(fù)雜樣品或痕量物質(zhì)分析要求。近些年發(fā)展起來的樣品預(yù)處理方法包括固相萃?。⊿PE）、液-液萃?。↙LE）、加速溶劑萃?。ˋSE）、超聲輔助萃取（UAE）和微波輔助提取萃?。∕AE）等技術(shù)逐漸取代了傳統(tǒng)的樣品預(yù)處理方法，在分析效率上有了明顯的提高。QuEChERS 方法與這些取代方法相比，減少了一些特殊設(shè)備的使用（如微波、超聲波設(shè)備等），但是對(duì)于不同的分析物分析效果還是有顯著的差別。Di等[7]分析土壤中的有機(jī)氯殺蟲劑類化合物，與UAE 和ASE 方法相比，MAE 和QuEChERS 方法獲得的結(jié)果偏高，但對(duì)于除草劑2,4-二氯苯氧乙酸（2,4-D）的提取效率卻僅為57%。Orellana-Silla等[8]用MAE方法提取果汁中的氯苯脲，其凈化效果優(yōu)于QuEChERS 和C18 的固相萃取方法。但是QuEChERS 方法提取中草藥植物根和莖中的農(nóng)藥殘留比SPE 和LLE 方法效果好[9]。同樣，在蜂蜜中農(nóng)藥殘留的檢測(cè)也是QuEChERS 方法效果優(yōu)于SPE 和LLE方法[10]。Dong等[11]比較了SPE和QuEChERS方法對(duì)蔬菜和水果中真菌毒素凈化分析效率，發(fā)現(xiàn)SPE在真菌毒素的測(cè)定中表現(xiàn)出更高的選擇性、準(zhǔn)確度和精密度。與ASE方法相比，QuEChERS 方法提取芹菜和萵苣中卡馬西平、對(duì)乙酰氨基酚等11 種目標(biāo)藥物更有效，采用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定11種藥物的回收率為70.1%～118.6%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）均低于20%，并且減少了樣品制備的時(shí)間和成本，使用的有機(jī)溶劑更少[12]。Panasiuk 等[13]采用固液萃?。∣ASIS HLB 柱或免疫親和柱）、QuEChERS 和Mycosep 225 Trich 柱的樣品預(yù)處理，同時(shí)測(cè)定飼料中的脫氧雪腐鐮刀菌烯醇（DON）、3-乙酰脫氧雪腐鐮刀菌烯醇（3Ac-DON）、15-乙酰脫氧雪腐鐮刀菌烯醇（15Ac-DON）、DON-3-葡萄糖苷（DON-3Glc）雪腐鐮刀菌烯醇和鐮刀菌烯酮-X，并使用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法進(jìn)行檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)6種免疫親和柱對(duì)所有霉菌毒素測(cè)定均沒有交叉反應(yīng)，但是免疫親和柱如果與3Ac-DON 結(jié)合，則不能與15Ac-DON結(jié)合；其中Mycosep 225 Trich凈化效果最好，能夠凈化所有上述6種毒素完全分離，包括3Ac-DON 和15Ac-DON 異構(gòu)體形式，回收率為92%～97%，定量限（LOQ）為1.30～50.00 g/kg。

3 QuEChERS在飼料安全多組分分析檢測(cè)中的應(yīng)用

3.1 飼料中霉菌毒素的檢測(cè)

霉菌毒素是由真菌產(chǎn)生的次生代謝產(chǎn)物，具有致畸、致癌、致突變特性。霉菌毒素的污染對(duì)糧食生產(chǎn)、飼料生產(chǎn)及養(yǎng)殖生產(chǎn)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失，此外霉菌毒素在動(dòng)物性食品中的殘留還可通過食物鏈對(duì)人類健康構(gòu)成潛在危害。因此，對(duì)飼料中霉菌毒素的準(zhǔn)確檢測(cè)是飼料安全的重要技術(shù)保障。黃曲霉毒素是黃曲霉和寄生曲霉等某些菌株產(chǎn)生的雙呋喃環(huán)類毒素，其衍生物約有20 種，其中以B1 的毒性最大，致癌性最強(qiáng)，也是飼料及食品安全衛(wèi)生中必檢的指標(biāo)之一。Choochuay 等[14]建立了碎米、花生、玉米和魚粉4 種飼料中的黃曲霉毒素B1（AFB1）的方法，樣品預(yù)處理基于QuEChERS 方法進(jìn)行，用乙腈/甲醇（40/60，V/V）提取AFB1，用氯化鈉和硫酸鎂進(jìn)行層析凈化，采用柱前衍生化和熒光檢測(cè)的高效液相色譜法進(jìn)行檢測(cè)，回收率為82.50%～109.85%，在20～100 ng/g范圍內(nèi)AFB1 的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差低于11%，檢測(cè)限（LOD）為0.2～1.2 ng/g，LOQ 為0.3～1.5 ng/g。用這種方法對(duì)120份飼料樣品進(jìn)行檢測(cè)，AFB1 污染程度：碎米0.44～2.33 ng/g、花生3.97～106.26 ng/g、玉米0.88～50.29 ng/g和魚粉1.06～10.35 ng/g。玉米赤霉烯酮（ZEA）是具有雌激素樣作用的霉菌毒素，主要污染玉米、小麥、大米、大麥、小米和燕麥等谷物，能造成動(dòng)物急性、慢性中毒，引起動(dòng)物繁殖機(jī)能異常甚至死亡。Llorent-Martínez等[15]利用QuEChERS程序提取飼料原料中的玉米赤霉烯酮，回收率為93%～107%，用LC-MS進(jìn)行定量分析，定量限滿足歐洲共同體委員會(huì)規(guī)定的最大殘留水平。藤毒素是由鏈格孢霉產(chǎn)生的一種霉菌毒素，廣泛污染谷物和飼料。王瑞國(guó)等[16]應(yīng)用QuEChERS-超高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)（UPLC-MS/MS）分析飼料中的騰毒素，以0.1%甲酸乙腈提取，用C18和PSA 做吸附劑進(jìn)行凈化后檢測(cè)，騰毒素在1～500 μg/kg 濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)為0.997 6～0.999 2，在飼料中添加濃度為5、25、125 μg/kg 時(shí)回收率為89.1%～105.7%，定量限為2.0 μg/kg。

由于飼料中霉菌種類很多，產(chǎn)毒霉菌在外環(huán)境滿足霉菌生長(zhǎng)需求時(shí)則繼續(xù)產(chǎn)生毒素，并且會(huì)存在多種霉菌毒素的積累疊加，飼料中具有多種霉菌毒素同時(shí)存在的風(fēng)險(xiǎn)。Jo 等[17]使用QuEChERS 結(jié)合LC-MS/MS方法測(cè)定了飼料中13 種霉菌毒素，并對(duì)方法的檢出限、定量限、線性和回收率進(jìn)行了分析方法驗(yàn)證，同時(shí)考慮了基質(zhì)效應(yīng)，均達(dá)到了可接受的驗(yàn)證水平范圍。用該方法測(cè)定的39個(gè)飼料樣品中，9個(gè)樣品主要由伏馬菌素B1（FB1）、脫氧雪腐鐮刀菌烯醇、伏馬菌素B2和玉米赤霉烯酮污染，其中FB1 的檢測(cè)濃度最高為18.094 3 mg/kg。崔曉娜等[18]建立了飼料中17種霉菌毒素同時(shí)檢測(cè)的方法，包括黃曲霉毒素（B1、B2、G1、G2）、赭曲霉毒素A、T-2毒素、HT-2毒素、橘青霉素、蛇形菌素、疣孢青霉原、新茄鐮孢菌醇、O-甲基雜色曲霉素、雜色曲霉素、青霉酸、環(huán)匹阿尼酸、伏馬菌素（B1、B2），采用QuEChERS 方法凈化后用高效液相色譜-四級(jí)桿飛行時(shí)間質(zhì)譜（HPLC-Q-TOF/MS）檢測(cè)，外標(biāo)法定量，在1.0～200.0 μg/L范圍內(nèi)呈線性，相關(guān)系數(shù)均大于0.990，檢出限在0.5～3.0 μg/kg，定量限在1.0～10.0 μg/kg。同樣，劉玲利[19]也利用改進(jìn)的QuEChERS方法對(duì)飼料及其原料樣品進(jìn)行預(yù)處理，測(cè)定了19 種霉菌毒素，以0.3%甲酸的乙腈溶液為提取劑提取30 min，以0.5 g氯化鈉和1.5 g無水硫酸鎂為鹽析劑，吸附劑由150 mg C18、20 mg 伯仲胺（primary secondary amine，PSA）和150 mg 無水硫酸鎂組成。通過對(duì)色譜條件、質(zhì)譜條件和前處理?xiàng)l件的優(yōu)化，建立同時(shí)測(cè)定19種霉菌毒素的HPLC-MS/MS法。19種霉菌毒素的相關(guān)系數(shù)為0.992 1～0.999 6，線性范圍為0.05～200.00 μg/L。飼料樣品中19種霉菌毒素的方法檢出限和定量限分別為0.12～3.85 μg/kg和0.40～10.80 μg/kg，加標(biāo)回收率為80.6%～94.0%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為7.15%～13.70%。原料樣品中19種霉菌毒素的方法檢出限和定量限分別為0.10～3.40 μg/kg 和0.25～10.00 μg/kg，加標(biāo)回收率為83.6%～95.4%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為6.20%～12.60%，所建立的方法線性良好、檢出限低、準(zhǔn)確度高、精密度好。由于飼料基質(zhì)成分復(fù)雜，一些被測(cè)物質(zhì)在樣品提取后通常需要凈化后才能進(jìn)行儀器分析，否則提取液中復(fù)雜的成分不僅干擾測(cè)定結(jié)果，同時(shí)還可能會(huì)對(duì)分析柱或分析設(shè)備造成損壞，因此提高飼料樣品的凈化程度是提高分析效率的有效方法。優(yōu)化QuEChERS 提取程序可以降低飼料基質(zhì)影響，González-Jartín 等[20]通過優(yōu)化QuEChERS 程序并結(jié)合超高液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（UHPLC-MS/MS）對(duì)飼料中黃曲霉毒素B1、B2、G1、G2 等22 種霉菌毒素進(jìn)行定性、定量分析，方法的回收率67%～94%，定量限0.22～32.64 μg/kg。用這種方法檢測(cè)7 種原料和8 種飼料產(chǎn)品的回收率符合現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)的要求。同時(shí)分析了附近飼料廠的75 個(gè)樣品，發(fā)現(xiàn)玉米和基于玉米的飼料產(chǎn)品中霉菌毒素發(fā)生率最高，但均低于標(biāo)準(zhǔn)限量。恩尼克菌素（ENNs）和白僵菌素（BEA）是鐮刀菌屬產(chǎn)生的次生毒性代謝物，近年來在谷物和副產(chǎn)品中被廣泛發(fā)現(xiàn)，對(duì)飼料安全構(gòu)成了重大風(fēng)險(xiǎn)。采用乙腈萃取、QuEChERS 樣品處理后用LC-MS/MS 對(duì)39份飼料原料和其生產(chǎn)的48份飼料進(jìn)行檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)飼料原料和配合飼料的檢出率分別為18%和92%[21]。Facorro等[22]采用分散萃取和QuEChERS 萃取方法對(duì)20 個(gè)奶牛場(chǎng)飼料中的26 種霉菌毒素進(jìn)行提取分離，采用高分辨質(zhì)譜進(jìn)行確證分析，大多數(shù)毒素的回收率都大于80%，檢出限達(dá)到ng/mL 水平，其中玉米赤霉烯酮、伏馬菌素B1和β-玉米赤霉烯醇的檢出率為60%～90%。范志辰等[23]采用QuEChERS 前處理技術(shù)，建立了超高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)（UHPLC-MS/MS）檢測(cè)飼料樣品中30 種不同的真菌毒素含量的分析方法。飼料樣品用水和含1%（V/V）甲酸的乙腈溶液等比例混合后提取，上清液氮吹至近干，殘?jiān)?jīng)5 mmol/L乙酸銨水溶液-乙腈（80∶20，V/V）復(fù)溶后上機(jī)測(cè)定，30 種真菌毒素的平均加標(biāo)回收率為72.0%～118.4%（n=5），在一定濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)大于0.99，檢出限和定量限分別為0.7～20.0 μg/L 和2～50 μg/L。Amelin等[24]采用氣-液色譜法電子捕獲檢測(cè)器同時(shí)測(cè)定谷物和飼料中單端孢霉烯類毒素T2、HT-2、脫氧纈氨醇和雪腐鐮刀菌烯醇，用乙腈提取樣品中的毒素，與三氟乙酸酐衍生后用QuEChERS方法凈化和濃縮，4種毒素的回收率均大于90%，分析時(shí)間0.5～1.0 h，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD＜5%。

綜上，飼料中的霉菌毒素采用QuEChERS方法或改進(jìn)后的QuEChERS方法進(jìn)行樣品預(yù)處理，均能提高霉菌毒素的分析性能，縮短檢測(cè)時(shí)間，同時(shí)所用的提取溶劑少，并能夠?qū)崿F(xiàn)多種霉菌毒素的同步分析。

3.2 飼料中藥物的檢測(cè)

飼料中藥物的使用是一定歷史時(shí)期的產(chǎn)物，我國(guó)從2020 年1 月1 日起，在飼料中全面禁止添加抗生素，減少濫用抗生素造成的危害，以維護(hù)動(dòng)物源性食品安全和公共衛(wèi)生安全。一些激素類的違禁藥物、用于治療或促生長(zhǎng)的抗生素類藥物等的違規(guī)使用，可能會(huì)導(dǎo)致飼料及食品安全事件發(fā)生，因此對(duì)飼料中藥物的監(jiān)測(cè)顯得更為重要?；赒uEChERS 及其改良的預(yù)處理技術(shù)對(duì)藥物進(jìn)行凈化與濃縮，是近年來飼料中藥物準(zhǔn)確及快速檢測(cè)的重要保證。羅輝泰等[25]用改進(jìn)的QuEChERS 對(duì)飼料中17 種β-受體激動(dòng)劑、18 種β-內(nèi)酰胺類、6種抗球蟲類、5種大環(huán)內(nèi)酯類、2種林可胺類、15 種喹諾酮類、21 種磺胺類及3 種磺胺類增效劑等8類共計(jì)87種獸藥進(jìn)行測(cè)定，樣品經(jīng)Na2EDTA溶液分散后，以甲醇-乙腈（50∶50）超聲提取，提取液用Bondesil—PSA 吸附劑以分散固相萃取方式快速凈化，超高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)進(jìn)行定性篩查和定量分析，87 種藥物在相應(yīng)的濃度范圍內(nèi)線性良好，相關(guān)系數(shù)均大于0.99，加標(biāo)回收率為63.7%～108.8%，檢出限和定量限分別為3～15 μg/kg 及10～50 μg/kg[25]?；前奉愃幬镆蚱鋸V譜抗菌、高效、低毒及價(jià)格低廉，在動(dòng)物養(yǎng)殖中廣泛應(yīng)用，曾經(jīng)一個(gè)重要的給藥途徑是通過添加到飼料中使用。徐堅(jiān)等[26]用乙腈提取飼料樣品中5 種磺胺類藥物，采用QuEChERS 進(jìn)行預(yù)處理后用高效液相色譜進(jìn)行檢測(cè)，在10～500 μg/L 范圍內(nèi)，5 種磺胺類藥物線性良好，相關(guān)系數(shù)大于0.999 0，檢出限和定量限分別為0.05 mg/kg 和0.1 mg/kg，在0.1～10.0 mg/kg添加濃度范圍內(nèi)，豬、雞配合飼料中磺胺類藥物平均回收率為76.0%～101.0%[26]。劉新輝等[27]基于QuEChERS 方法對(duì)飼料樣品進(jìn)行凈化，采用Cleanertlipo No 和Cleanert PSA 進(jìn)行凈化，比固相萃取凈化基質(zhì)效果好，并實(shí)現(xiàn)了飼料中20種β-受體激動(dòng)劑類和3種喹噁啉類藥物的同時(shí)檢測(cè)，超高液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜定量，在1～50 ng/mL 范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（R2＞0.99），β-受體激動(dòng)劑類定量限為5 μg/kg、喹噁啉類定量限為50 μg/kg，添加回收率在88.2%～105.0%范圍內(nèi)，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差均小于8.4%。表2是近10年來采用QuEChERS方法進(jìn)行樣品預(yù)處理并結(jié)合質(zhì)譜對(duì)飼料中的藥物進(jìn)行檢測(cè)的文獻(xiàn)[28-34]。由表2可知，QuEChERS方法或改進(jìn)的QuEChERS 方法對(duì)飼料中的藥物分析均具有良好的凈化效果，并且能夠?qū)Χ喾N藥物實(shí)現(xiàn)同步分析，提高了分析方法性能，大部分文獻(xiàn)的回收率均達(dá)到建立分析方法的標(biāo)準(zhǔn)，檢出限和定量限也能滿足現(xiàn)行分析方法的要求。

表2 飼料中藥物檢測(cè)

3.3 其他應(yīng)用

QuEChERS 凈化技術(shù)不僅僅用在飼料中霉菌毒素、抗生素、違禁藥物等的檢測(cè)，也可以用于飼料中抗氧化劑、著色劑、植物精油、農(nóng)藥殘留等成分檢測(cè)的樣品預(yù)處理。乙氧基喹啉屬于喹諾酮類藥物，曾經(jīng)在飼料中用作抗氧化添加劑和殺菌劑，歐盟（EU）2017/962規(guī)定禁止其作為所有動(dòng)物物種和類別的飼料添加劑使用。使用改進(jìn)的QuEChERS 方法從動(dòng)物飼料中提取乙氧基喹啉，并加入抗壞血酸緩沖液防止降解，用氣相色譜聯(lián)用三重四極桿質(zhì)譜(GC-QQQ)進(jìn)行檢測(cè)，回收率為70%～120%（RSD＜20%）。采用QuEChERS方法在2018 年和2019 年期間，對(duì)來自西班牙加泰羅尼亞（Catalonian）地區(qū)農(nóng)業(yè)生產(chǎn)生產(chǎn)的70 份飼料樣品進(jìn)行了分析，43%的樣品檢出乙氧基喹啉[35]。同樣，用乙腈提取飼料樣品中的8 種抗氧化劑，采用改進(jìn)優(yōu)化的QuEChERS 預(yù)處理方法結(jié)合UPLC-MS/MS進(jìn)行檢測(cè)，檢出限為0.005～0.100 mg/kg，定量限0.01～0.20 mg/kg，在低、中、高3 個(gè)不同濃度梯度的平均加標(biāo)回收率為76.2%～102.8%[36]。

飼料中使用著色劑可以增加畜禽（蛋禽、肉禽）和水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物產(chǎn)品色澤，如使牛奶中黃油、禽蛋的蛋黃等具有更鮮艷美觀的色澤，水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物諸如魚類和甲殼類、對(duì)蝦等產(chǎn)品肉質(zhì)比天然產(chǎn)品更鮮艷，提高了商品的價(jià)值。在飼料中添加適量的著色劑，可以實(shí)現(xiàn)對(duì)畜禽產(chǎn)品（特別是禽類蛋黃及皮膚）色澤的精準(zhǔn)調(diào)控。為滿足飼料樣品中脂溶性著色劑監(jiān)控的需要，對(duì)飼料中著色劑的定性定量分析顯得尤為重要。付巖等[37]用基于QuEChERS 的分散固相萃取方法對(duì)蘇丹紅Ⅰ、蘇丹紅Ⅱ、蘇丹紅Ⅲ、蘇丹紅Ⅳ、對(duì)位紅、蘇丹紅7B、蘇丹紅G 和蘇丹黃進(jìn)行提取及樣品凈化，結(jié)合LC-MS/MS 方法檢測(cè)，8 種脂溶性著色劑在1.0～200.0 μg/L 范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)均大于0.998。所建立的方法對(duì)飼料的檢出限為5.0 μg/kg，定量限為10 μg/kg，在10、50 μg/kg 和500 μg/kg 加標(biāo)濃度下8種脂溶性著色劑的回收率為102%～111%。

牛至香酚的主要成分為香芹酚和百里香酚，香芹酚和百里香酚屬于同分異構(gòu)體，香芹酚中的-OH基團(tuán)在甲基鄰位，而百里香酚的-OH 在甲基的間位，兩者的化學(xué)性質(zhì)相似。采用QuEChERS 結(jié)合高效液相色譜法測(cè)定飼料中牛至香酚中的主成分含量，不同樣品中的加標(biāo)回收率為香芹酚92.4%～101.5%，百里香酚92.9%～98.7%；精密度（n=6）為香芹酚1.4%～4.8%，百里香酚為1.7%～4.5%；兩種物質(zhì)檢出限均為0.1 mg/kg，定量限均為0.3 mg/kg[38]。

近年來QuEChERS 方案在飼料中農(nóng)藥殘留檢測(cè)方面也取得一定的進(jìn)展，如飼料中的有機(jī)磷農(nóng)藥[39]、除草劑[40]、殺蟲劑[41]、敵敵畏[42]等采用QuEChERS 預(yù)處理方法，結(jié)合液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜進(jìn)行快速篩查確證及定量分析，不僅提高了飼料中農(nóng)藥殘留快速篩查的可靠性，同時(shí)可以獲得較高靈敏度的定量結(jié)果，為飼料安全監(jiān)測(cè)的快速高通量篩查提供準(zhǔn)確、可靠的方法。

4 建議和未來展望

飼料安全的分析趨勢(shì)不僅在于開發(fā)快速的檢測(cè)方法，同時(shí)對(duì)于樣品快速凈化的預(yù)處理技術(shù)非常重要，能夠在一次凈化過程后分析盡可能多的污染物及其化學(xué)組成是理想的分析模式。QuEChERS 方法應(yīng)用于飼料分析中的樣品預(yù)處理，不僅擴(kuò)大了被測(cè)物質(zhì)的分析范圍，同時(shí)對(duì)于復(fù)雜基質(zhì)的凈化能力也得到了提高。QuEChERS 萃取法結(jié)合HPLC-MS/MS 或GCMS/MS 分析可以同時(shí)確證和定量分析復(fù)雜基質(zhì)中多類別、多殘留分析物的方法。Teledyne Tekmar[43]提出了QuEChERS提取程序的全自動(dòng)化方法，系統(tǒng)自動(dòng)執(zhí)行以下樣品制備功能，如液體分配/移液、旋渦混合、小瓶搖動(dòng)、打開/關(guān)閉樣品小瓶、添加固體試劑（鹽、緩沖液）、識(shí)別液位、傾析、離心、基質(zhì)加標(biāo)和d-SPE 凈化。因此，未來QuEChERS方法在飼料分析自動(dòng)化研發(fā)，可用于實(shí)驗(yàn)室大量樣品的快速分析，實(shí)現(xiàn)樣品的振蕩、提取及凈化任務(wù)的自動(dòng)化程序。凈化程序的自動(dòng)化有助于節(jié)約成本，同時(shí)提高分析效率、高通量和再現(xiàn)性。

5 小結(jié)

由于QuEChERS應(yīng)用的靈活性和快速特點(diǎn)，該方法已經(jīng)成為樣品分析預(yù)處理通用的一種方法，根據(jù)被分析物及樣品基質(zhì)的不同，可以對(duì)不同溶劑、鹽、緩沖液和吸附劑等的具體參數(shù)進(jìn)行優(yōu)化，從而使QuECh-ERS方法能夠廣泛用于食品、飼料等復(fù)雜基質(zhì)樣品分析?；赒uEChERS方法的整體分析具有成本效益，因此應(yīng)用范圍還在不斷地?cái)U(kuò)大。由于GC-MS/MS、LC-MS/MS、UHPLC-MS/MS、TOF-MS/MS 等檢測(cè)系統(tǒng)無需進(jìn)行大量樣品制備，QuEChERS 程序可提供足夠干凈的提取物，因此二者結(jié)合應(yīng)用可以實(shí)現(xiàn)多種農(nóng)藥、違禁藥物以及抗氧化劑、精油、著色劑等多組分的同步分析。