梅寒穎 劉炬 湯曾耀 胡玲 江敏 石春紅

陰虛型原發(fā)性干燥綜合征（PSS）是一種慢性自身免疫性疾病，在中醫(yī)學(xué)上導(dǎo)致的主要原因是燥邪損傷津液，同時(shí)五臟六腑失去濡潤(rùn)，所以陰虛是其主要的發(fā)病機(jī)制[1]。唾液腺、淚腺等外分泌腺存在淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，同時(shí)血清中存在著自身抗體是本病的主要特點(diǎn)。其臨床表現(xiàn)是口眼干燥、肢體疼痛及疲勞等，同時(shí)患者還會(huì)出現(xiàn)系統(tǒng)受累情況，尤其是血液系統(tǒng)出現(xiàn)受累[2]。根據(jù)李婭等[3]的統(tǒng)計(jì)，對(duì)PSS 患者進(jìn)行調(diào)查，血液系統(tǒng)受累率達(dá)到35.1%，其中青年患者血液系統(tǒng)受累率更高。有研究顯示，調(diào)節(jié)性B 淋巴細(xì)胞（Breg）及白細(xì)胞介素-17（IL-17）與PSS 的發(fā)展有著密切的關(guān)系。IgG 是一種抗體蛋白，其水平可以表明血液系統(tǒng)受累情況。本研究通過(guò)檢測(cè)Breg、IL-17 水平，分析兩者水平與血液系統(tǒng)受累情況的相關(guān)性，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取九江市第一人民醫(yī)院風(fēng)濕免疫科2020 年1 月-2021 年4 月收治的PSS 患者62 例為研究對(duì)象。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）符合文獻(xiàn)[4]陰虛型原發(fā)性干燥綜合征診斷標(biāo)準(zhǔn)；（2）均為初治；（3）年齡>18 歲；（4）入院前未接受任何治療。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）合并內(nèi)分泌系統(tǒng)疾?。唬?）合并其他風(fēng)濕性疾病；（3）多臟器功能衰竭；（4）既往有卵巢手術(shù)史；（5）存在精神障礙；（6）合并其他需要服用長(zhǎng)期藥物治療的疾病。根據(jù)患者是否發(fā)生血液系統(tǒng)受累，將患者分為血液系統(tǒng)受累組（22 例）和無(wú)血液系統(tǒng)受累組（40 例）。本研究以通過(guò)本院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)，患者及家屬積極配合，簽署知情同意書(shū)。

1.2 方法

1.2.1 Breg 細(xì)胞水平 于清晨抽取兩組患者2 mL的肘靜脈血，經(jīng)過(guò)抗凝處理后在流式細(xì)管中加入肘靜脈血100 μL，編碼后去送檢；在流式細(xì)管分別加入APC-CD19 單抗、FITC-CD24 單抗、PE-CD38 單抗各20 μL，混合均勻后在室溫下避光放置30 min，然后加入150 μL 的紅細(xì)胞裂解液，震蕩混勻后在冰箱中冷藏30 min，在2 000 r/min 的離心機(jī)上離心10 min，棄上清液，用PBS 液將白細(xì)胞沉淀清洗3 次，然后在2 000 r/min 的離心機(jī)上離心10 min，循環(huán)2 次，在沉淀中加入PBS 液500 mL 制成單細(xì)胞懸液，再用濾網(wǎng)過(guò)濾，最后使用流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測(cè)。

1.2.2 IL-17 水平 ELISA 法檢測(cè)，于入院第2 天清晨抽取兩組患者空腹的外周靜脈血取5 mL，在室溫中放置2 h，在1 000 r/min 的離心機(jī)中離心20 min，將上清液血清放在-80 ℃中儲(chǔ)存。在檢測(cè)前將標(biāo)準(zhǔn)品震蕩混勻，洗滌緩沖液是由洗滌液按照1︰20 稀釋的，然后分別往預(yù)先包被IL-1A 抗體的包被孔中依次加入標(biāo)準(zhǔn)品和樣本，加入50 μL 不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品在孔板中，在樣本孔中加50 μL 待測(cè)樣本，在空白孔中加50 μL 樣本稀釋液。加完后在每孔中加入100 μL 辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的檢測(cè)抗體，將反應(yīng)孔用封板膜封住，用37 ℃水浴鍋溫育60 min 后棄液體，將吸水紙上排干，每孔再加350 μL 洗滌液，靜置1 min。將洗滌液甩去，拍干吸水紙，反復(fù)此動(dòng)作4 次，在每孔中加入100 μL 的底物，在37 ℃避光孵育15 min，每孔加入50 μL 終止液，最后用酶標(biāo)儀在150 nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)IL-17水平。

1.2.3 IgG 水平 操作步驟嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)要求進(jìn)行，采集所有患者空腹外周靜脈血，分離血清待測(cè)。采用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA），根據(jù)每孔吸光度及標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算IgG 水平。

1.2.4 血液系統(tǒng)受累診斷標(biāo)準(zhǔn) 結(jié)合山東省各地市級(jí)醫(yī)院標(biāo)準(zhǔn)制定，（1）貧血診斷標(biāo)準(zhǔn)：男性血紅蛋白<120 g/L，女性血紅蛋白<110 g/L；（2）白細(xì)胞受累診斷標(biāo)準(zhǔn)：白細(xì)胞計(jì)數(shù)<3.5×109/L；（3）血小板受累診斷標(biāo)準(zhǔn)：血小板及時(shí)<100×109/L；（4）紅細(xì)胞受累診斷標(biāo)準(zhǔn)：男性紅細(xì)胞<4.0×1012/L；女性紅細(xì)胞<3.5×1012/L[5]。依據(jù)IgG 水平分為輕中重，輕度組：13.0 g/L≤IgG≤15.0 g/L；中度組：15.0 g/L20 g/L。

1.2.5 相關(guān)性分析 采用Pearson 相關(guān)性分析陰虛型原發(fā)性干燥綜合征患者Breg、IL-17 水平與IgG的相關(guān)性。

1.3 觀察指標(biāo)（1）比較兩組一般資料，包括年齡、性別、病程、體重指數(shù)、吸煙史、飲酒史、高血壓史、糖尿病史。（2）比較各組患者Breg 細(xì)胞水平、IL-17 水平及IgG 水平。（3）分析Breg、IL-17 水平與IgG 水平的相關(guān)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 22.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)。計(jì)量資料用（）表示，組間比較采用t 檢驗(yàn)，多組間比較采用方差分析，計(jì)數(shù)資料用率（%）表示，比較采用χ2檢驗(yàn)，相關(guān)性用Pearson 相關(guān)性分析，以P<0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組一般資料比較 兩組一般資料比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），具有可比性，見(jiàn)表1。

表1 兩組一般資料比較

2.2 兩組Breg、IL-17、IgG 水平比較 血液系統(tǒng)受累組患者Breg、IL-17、IgG 水平均高于無(wú)血液系統(tǒng)受累組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見(jiàn)表2。

表2 兩組Breg、IL-17、IgG水平比較（）

表2 兩組Breg、IL-17、IgG水平比較（）

2.3 不同程度血液系統(tǒng)受累患者Breg、IL-17、IgG水平比較 與輕度組相比，中度組和重度組患者Breg、IL-17 水平均升高；與中度組相比，重度組患者Breg、IL-17 水平均升高（P<0.05），見(jiàn)表3。

表3 不同程度血液系統(tǒng)受累患者Breg、IL-17、IgG水平比較（）

表3 不同程度血液系統(tǒng)受累患者Breg、IL-17、IgG水平比較（）

2.4 陰虛型原發(fā)性干燥綜合征患者Breg、IL-17 水平與血液系統(tǒng)受累情況的相關(guān)性 陰虛型原發(fā)性干燥綜合征患者Breg、IL-17 水平均與患者血液系統(tǒng)受累（IgG 水平）情況呈正相關(guān)（r=0.798，0.811，P<0.05），見(jiàn)表4、圖1。

表4 陰虛型原發(fā)性干燥綜合征患者Breg、IL-17水平與IgG的相關(guān)性

圖1 陰虛型原發(fā)性干燥綜合征患者Breg、IL-17水平與IgG的相關(guān)性

3 討論

陰虛型原發(fā)性干燥綜合征是一種慢性自身免疫性疾病，有著較高的發(fā)病率，其發(fā)病因素與遺傳、環(huán)境、多種細(xì)胞及相關(guān)因子等因素有關(guān)[6]。同時(shí)，這個(gè)疾病科可及腺體以外的多種臟器，其中以血液系統(tǒng)受累最為常見(jiàn)[7]。而血液系統(tǒng)受累已經(jīng)不容忽視，嚴(yán)重時(shí)會(huì)掩蓋患者干燥綜合征的癥狀從而延誤陰虛型原發(fā)性干燥綜合征患者的診斷和治療[8]。血液系統(tǒng)損害和免疫有關(guān)，其發(fā)病機(jī)制和調(diào)節(jié)性B 淋巴細(xì)胞和白細(xì)胞介素-17 有關(guān)[9]。因此，探究陰虛型原發(fā)性干燥綜合征患者Breg、IL-17 水平與血液系統(tǒng)受累情況的相關(guān)性具有重要意義，為臨床診斷和治療提供合理的依據(jù)。

目前對(duì)于Breg 細(xì)胞與PSS 關(guān)系的研究?jī)H有少量文獻(xiàn)報(bào)道。研究顯示，在多種自身免疫性疾病中Breg 表達(dá)水平表現(xiàn)出異常[10]。雖然Breg 在B 細(xì)胞中比例僅占0.2%～0.6%，但有著非常明顯的免疫調(diào)節(jié)作用[11]。多種免疫復(fù)合物、多克隆免疫球蛋白及自身抗體是由機(jī)體中的B 淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的體液免疫產(chǎn)生的，損害患者的血液系統(tǒng)[12]。有研究發(fā)現(xiàn)，Breg 在干燥綜合征患者中具有減輕CD4+T 細(xì)胞所介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)的作用，同時(shí)Breg 可以通過(guò)分泌多種細(xì)胞因子，直接或者間接地作用于其他免疫細(xì)胞，進(jìn)而發(fā)揮抑制炎癥反應(yīng)的作用[13]。在本研究中，血液系統(tǒng)受累組患者Breg 水平顯著高于無(wú)血液系統(tǒng)受累組（P<0.05），這與文獻(xiàn)[14]研究結(jié)果一致，說(shuō)明Breg 不僅與陰虛型原發(fā)性干燥綜合征的發(fā)病過(guò)程相關(guān)，還與患者血液系統(tǒng)受累的程度有關(guān)，所以進(jìn)一步分析了陰虛型原發(fā)性干燥綜合征患者Breg 水平與血液系統(tǒng)受累情況的相關(guān)性，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，陰虛型原發(fā)性干燥綜合征患者Breg 水平與血液系統(tǒng)受累情況呈正相關(guān)（r=0.798，P=0.005），說(shuō)明患者Breg 水平越高，血液系統(tǒng)受累情況就越嚴(yán)重。

IL-17主要是由近期新發(fā)現(xiàn)的Th17細(xì)胞分泌的，目前作為新發(fā)現(xiàn)的細(xì)胞因子，可以促進(jìn)白細(xì)胞的遷移和活化，導(dǎo)致炎癥反應(yīng)加重[15-16]。一些研究表明，IL-17 因子與陰虛型原發(fā)性干燥綜合征疾病有著很大的關(guān)系[17-18]。結(jié)果顯示，血液系統(tǒng)受累組患者IL-17 水平顯著高于無(wú)血液系統(tǒng)受累組（P<0.05），這與國(guó)外研究結(jié)果一致[19-20]。這說(shuō)明IL-17 不僅參與了陰虛型原發(fā)性干燥綜合征的發(fā)病過(guò)程，還與患者血液系統(tǒng)受累的程度有關(guān)，所以進(jìn)一步分析了陰虛型原發(fā)性干燥綜合征患者IL-17 水平與血液系統(tǒng)受累情況的相關(guān)性，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，陰虛型原發(fā)性干燥綜合征患者IL-17 水平與血液系統(tǒng)受累情況呈正相關(guān)（r=0.811，P=0.016），說(shuō)明患者IL-17 水平越高，患者血液系統(tǒng)受累情況就越嚴(yán)重。

綜上所述，因陰虛型原發(fā)性干燥綜合征發(fā)生血液系統(tǒng)受累的患者病情比較嚴(yán)重，可以用Breg、IL-17 水平來(lái)判斷陰虛型原發(fā)性干燥綜合征患者血液系統(tǒng)受累的嚴(yán)重情況，為后續(xù)臨床治療提供合理的依據(jù)。