馮召嵐 盛健健 董愛武 李江雄 曹玲玲
糖尿病足是糖尿病的嚴(yán)重并發(fā)癥之一,患者足部潰爛,創(chuàng)傷難愈,嚴(yán)重時(shí)甚至導(dǎo)致截肢及死亡[1]。相關(guān)調(diào)查顯示,約15%的糖尿病患者遭受足部潰爛的折磨,全球范圍內(nèi)每20 秒就有1 例因糖尿病而截肢的患者,而70%的截肢患者往往在5 年內(nèi)死亡[2]。糖尿病足的高截肢率及高死亡率嚴(yán)重威脅患者生命安全,因此積極探究糖尿病感染性慢性創(chuàng)面的治療,刻不容緩。富血小板(platelet-rich plasma,PRP)凝膠是靜脈血梯度離心分離后,以氯化鈣及牛凝血酶激活的產(chǎn)物,含有多種生長(zhǎng)因子,有利于細(xì)胞增殖[3]。Elsaid 等[4]分別給予糖尿病足患者PRP 凝膠外敷及生理鹽水處理,發(fā)現(xiàn)PRP 凝膠具有明顯縮小患者足部潰瘍面積的作用。秦新愿等[5]研究指出,PRP 局部注射在促進(jìn)糖尿病足潰瘍創(chuàng)面修復(fù)方面效果良好。脂肪干細(xì)胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)具有分化為表皮細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞的多向分化潛能,可有效促進(jìn)創(chuàng)面愈合。此前,國(guó)內(nèi)外多項(xiàng)研究證明,PRP 凝膠聯(lián)合ADSCs 治療皮膚創(chuàng)傷,效果明顯[6-7]。但關(guān)于其治療機(jī)制,研究甚少。本研究分析了磷脂酰肌醇3-激酶(phosphoinositide-3-kinase,PI3K)/ 蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)信號(hào)通路在PRP 凝膠聯(lián)合ADSCs 治療糖尿病足中的作用,現(xiàn)匯報(bào)如下。
1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 78 只8 周齡清潔級(jí)雄性大鼠,體重200~240 g,購(gòu)自上海美軒生物科技有限公司,合格證號(hào):11400700197085。所有動(dòng)物適應(yīng)性飼養(yǎng)6 周,室溫控制在20 ℃左右,濕度控制在60%~70%。本實(shí)驗(yàn)方案經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn),實(shí)驗(yàn)操作符合相關(guān)動(dòng)物倫理學(xué)要求。
1.2 主要實(shí)驗(yàn)試劑及儀器 鏈脲佐菌素(streptozotocin,STZ,美國(guó)Sigmag),磷酸鹽緩沖液(phosphate buffer solution,PBS,美國(guó)Hyclone),檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液(上海如吉生物科技發(fā)展有限公司),胎牛血清(fetal bovine serum,F(xiàn)BS,阿根廷Natocor),蘇木精-伊紅染色劑(hematoxylin-eosin staining,HE,中國(guó)上海索萊寶),CD31 抗體(美國(guó)Abcam)、PI3K/Akt 抗體(美國(guó)Abcam),TRETrizol(美國(guó)Thermofisher),甘油醛-3-磷酸脫氫酶(GAPDH,中國(guó)上海生工),Primers(中國(guó)上海生 工),SYBR Premix Ex Taq?Ⅱ(日 本TaKaRa),PrimeScript?RT reagent Kit with gDNA Eraser(日 本TaKaRa),Ⅰ型膠原酶(美國(guó)Thermofisher),胰蛋白酶(中國(guó)上海生工),乙二胺四乙酸鹽(ethylene diamine tetraacetie acid,EDTA,上海阿拉丁生化科技股份有限公司),DMEM/F12 培養(yǎng)基(美國(guó)Thermofisher),鏈霉素(上海阿拉丁生化科技股份有限公司),DAB 辣根過氧化物酶(上海阿拉丁生化科技股份有限公司),高糖高脂飼料(北京科澳協(xié)力飼料有限公司),配方為:豬膽鹽0.3%,膽固醇1.5%,蔗糖20%,精煉豬油10%,普通飼料68.2%;高速離心機(jī)(3K15,德國(guó)SIGMA),Real Time PCR 儀(CFX96,美國(guó)BioRad),光學(xué)顯微鏡(DP71,日本Olympus),NanoDrop2000 超微量分光光度計(jì)(美國(guó)Thermofisher)。
1.3 方法
1.3.1 糖尿病足裸鼠模型的建立 78 只大鼠隨機(jī)取15 只作為正常組,予以常規(guī)清潔級(jí)飼料。其余63 只予以高糖高脂飼料。喂養(yǎng)6 周后,禁食12 h,進(jìn)行第一次STZ 腹腔注射,以0.1 mmol/L 的檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液(pH 為4.4)配制為1%的STZ 注射液,現(xiàn)配現(xiàn)用,經(jīng)濾過處理后,以150 mg/kg 進(jìn)行腹腔注射。注射第3 天進(jìn)行尾靜脈取血,檢測(cè)血糖水平(血糖≥16.7 mmol/L 為達(dá)標(biāo)),標(biāo)記不合格大鼠;于第7 周進(jìn)行第二次STZ 腹腔注射,操作方法同前,注射第3 天檢測(cè)尾靜脈血糖;對(duì)于血糖升高不明顯大鼠,于第8 周進(jìn)行第3 次STZ 腹腔注射;剔除三次干預(yù)后,血糖含量仍不達(dá)標(biāo)大鼠。
采用燙傷法建立糖尿病足與創(chuàng)傷模型:待糖尿病模型大鼠出現(xiàn)明顯的熱痛覺、觸覺異常等神經(jīng)病變癥狀時(shí),采用燙傷板在大鼠后足的左側(cè)做一5 mm×5 mm 的創(chuàng)傷,并將燙傷處浸入70 ℃的水中8 s,建立糖尿病足大鼠模型,使用硅膠板對(duì)創(chuàng)面邊緣進(jìn)行固定,防止創(chuàng)面過早愈合。本研究中63 只SD 大鼠,60 只糖尿病足模型建立成功,其中2 只血糖水平不達(dá)標(biāo),1 只因高血糖死亡。正常組大鼠也按照上述方法在后足左側(cè)建立創(chuàng)傷模型。
1.3.2 PRP 凝膠的制備 采用改良Cascade-Esforax 法制備PRP 凝膠[8],使用Ca2+激活。采用7%(0.3 mL/100 g)水合氯醛(生產(chǎn)廠家:西安天正藥用輔料有限公司,批準(zhǔn)文號(hào):國(guó)藥準(zhǔn)字H37022673,規(guī)格:500 g)腹腔注射麻醉大鼠,取5 mL 注射器,吸取0.3 mL 4%的枸櫞酸鈉抗凝劑(生產(chǎn)廠家:伊勢(shì)久生物科技有限責(zé)任公司,批準(zhǔn)文號(hào):國(guó)藥準(zhǔn)字H20058912,規(guī)格:100 mL),注射器連接硬膜外管,于大鼠頸靜脈處取3 mL 靜脈血,以1 100 g 離心10 min;而后加入0.3 mL 的氯化鈣(生產(chǎn)廠家:西寶生物科技股份有限公司,批準(zhǔn)文號(hào):AHD0004H,規(guī)格:500 g)50 mg/mL 以激活,靜置后,中間淡黃色凝膠即為PRP 凝膠,留取備用。
1.3.3 ADSCs 的分離和培養(yǎng) 將實(shí)驗(yàn)大鼠進(jìn)行腹腔麻醉后,取兩側(cè)腹股溝脂肪墊組織,用PBS 緩沖液反復(fù)沖洗后剪碎至靡狀,0.2%Ⅰ型膠原酶恒溫消化40 min,以基礎(chǔ)培養(yǎng)基中和,1 500 r/min離心10 min,去除雜質(zhì)及上清;沉淀混勻后采用200 目濾網(wǎng)過濾,以1 000 r/min 離心5 min,棄上清;采用含有10%FBS 的DMEM/F12 混懸細(xì)胞,按照2×104個(gè)/瓶接種于25 cm2培養(yǎng)瓶?jī)?nèi);將原代細(xì)胞置于37 ℃,5% CO2及飽和恒溫培養(yǎng)箱中,48 h 換液。待原代細(xì)胞融合至80%左右時(shí)開始傳代:棄去原培養(yǎng)液以PBS 沖洗,采用0.25%胰蛋白酶+0.03%EDTA 進(jìn)行消化;消化結(jié)束后吹打細(xì)胞,使其充分懸浮,以1 000 r/min 離心5 min,用含有10%胎牛血清及1%鏈霉素的DMEM 培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞,按1︰3 比例進(jìn)行傳代,當(dāng)傳代細(xì)胞單層匯合達(dá)70%以上時(shí)可繼續(xù)傳代;留取生長(zhǎng)良好的第3 代細(xì)胞,用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
1.3.4 動(dòng)物模型分組與創(chuàng)面干預(yù) 按照創(chuàng)面干預(yù)方式將60 只建模成功的大鼠分為模型對(duì)照組、PRP組、ADSCs 組、PRP+ADSCs 組各15 只。正常組、模型對(duì)照組創(chuàng)面滴加0.2 mL 生理鹽水;PRP 組創(chuàng)面滴加PRP 凝膠0.2 mL;ADSCs 組創(chuàng)面滴加ADSCs 0.2 mL(2×104個(gè)細(xì)胞/mL);PRP+ADSCs 組滴加ADSCs-PRP 復(fù)合物0.2 mL(2×104個(gè)細(xì)胞/mL)。
1.3.5 RT-PCT 檢測(cè)PI3K、Akt mRNA 的表達(dá) 分別于創(chuàng)傷后3、7、10、14 d 時(shí),每組隨機(jī)取3 只大鼠,觀察其創(chuàng)面恢復(fù)情況。采用Trizol 法提取愈傷組織總RNA,運(yùn)用NanoDrop2000 超微量分光光度計(jì)檢測(cè)RNA 濃度和純度(OD260/230約為2.2,OD260/280為1.8~2.2);采用反轉(zhuǎn)錄試劑盒(日本TaKaRa)制作cDNA 文庫(kù),配制10 μL 反應(yīng)體系;采用iTaq?Universal SYBR?Green Supermix 熒光定量酶(上海生工)及RT-PCR 儀(美國(guó),BioRad)進(jìn)行PCR 擴(kuò)增反應(yīng),采用3 步法擴(kuò)增,參數(shù)設(shè)置:95 ℃ 30 s,95 ℃ 5 s;62℃ 30 s,72 ℃ 10 s,95 ℃10 s,45 個(gè)循環(huán);溶解曲線為75 ℃ 60 s,95 ℃ 1 s。從PCT 儀中導(dǎo)出數(shù)據(jù),采用2-△△Ct法計(jì)算目的基因的mRNA 相對(duì)表達(dá)水平,以GraphPad Prism 7.0繪制柱狀圖。以GAPDH 為內(nèi)參基因,RT-PCR 引物序列見表1。
表1 RT-PCR引物序列表
1.3.6 組織標(biāo)本的制備與處理 創(chuàng)傷后3、7、10、14 d,每組隨機(jī)處死3 只大鼠,取愈傷組織為實(shí)驗(yàn)標(biāo)本,采用4%甲醛固定,梯度脫水、浸蠟、包埋后制作成厚度為4 μm 的切片,行HE 染色。血小板-內(nèi)皮細(xì)胞黏附分子(CD31)、PI3K、Akt 表達(dá)檢測(cè):分別采用相應(yīng)的抗體共孵育后,滴加DAB辣根過氧化物酶顯色后,采用HE 復(fù)染,梯度脫水,透明,風(fēng)干后封片,采用PBS 為陰性對(duì)照,顯微鏡下閱片、分析。由2 名經(jīng)驗(yàn)豐富的病理科醫(yī)師進(jìn)行閱片,隨機(jī)選取光學(xué)顯微鏡下的5 個(gè)視野,記錄CD31 細(xì)胞陽性表達(dá)率,視野下以細(xì)胞核和/或細(xì)胞質(zhì)出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性;采用Image Pro Plus 6.0 軟件處理免疫組化圖片,計(jì)算光密度值(optical density,OD),取每張切片的5 個(gè)視野設(shè)為平均OD值,統(tǒng)計(jì)PI3K、Akt 表達(dá)OD 值。
1.4 觀察指標(biāo)及評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn) 觀察各組大鼠干預(yù)3、7、10、14 d 時(shí)的創(chuàng)面愈合率,創(chuàng)面愈合率=(創(chuàng)面初始面積-未愈合面積)/創(chuàng)面初始面積×100%,統(tǒng)計(jì)各組創(chuàng)面愈合時(shí)間;免疫組化法檢測(cè)各組干預(yù)3、7、10、14 d 時(shí)CD31 細(xì)胞陽性表達(dá)率及PI3K、Akt 蛋白表達(dá)OD 值;RT-PCT 檢測(cè)各組干預(yù)3、7、10、14 d 時(shí)PI3K、Akt mRNA 表達(dá)水平。
1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 運(yùn)用SPSS 20.0 和GraphPad Prism 7.0 進(jìn)行數(shù)據(jù)分析及圖表繪制,各組不同時(shí)間點(diǎn)創(chuàng)面愈合率、PI3K、Akt 表達(dá)OD 值等計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差()表示,組間比較采用方差分析,方差齊兩兩比較采用LSD 檢驗(yàn);P<0.05 表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
2.1 各組不同時(shí)間點(diǎn)創(chuàng)面愈合率及完全愈合時(shí)間比較 隨著時(shí)間的延長(zhǎng),各組創(chuàng)面愈合率呈上升趨勢(shì),組間及時(shí)間點(diǎn)比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),PRP+ADSCs 組、正常組干預(yù)3、7、10、14 d 時(shí)的創(chuàng)面愈合率均顯著高于PRP 組、ADSCs 組及模型對(duì)照組(P<0.05),而PRP+ADSCs 組與正常組組間同時(shí)間點(diǎn)比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);PRP+ADSCs 組、正常組的創(chuàng)面完全愈合時(shí)間顯著早于PRP 組、ADSCs 組及模型對(duì)照組(P<0.05),而ADSCs 組和PRP 組創(chuàng)面愈合時(shí)間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表2。
表2 各組不同時(shí)間點(diǎn)創(chuàng)面愈合率及完全愈合時(shí)間比較()
表2 各組不同時(shí)間點(diǎn)創(chuàng)面愈合率及完全愈合時(shí)間比較()
*與同時(shí)間點(diǎn)PRP+ADSCs 組及正常組比較,P<0.05;#與同時(shí)間點(diǎn)ADSCs 組比較,P<0.05;△與同時(shí)間點(diǎn)模型對(duì)照組比較,P<0.05。創(chuàng)面愈合率:F組間=525.400,P組間=0.001;F時(shí)間=3 705.000,P時(shí)間=0.001。創(chuàng)面完全愈合時(shí)間:F組間=10.181,P組間=0.001。
2.2 各組不同時(shí)間點(diǎn)CD31 細(xì)胞陽性表達(dá)率比較 隨著時(shí)間的延長(zhǎng),各組間CD31 細(xì)胞陽性表達(dá)率呈上升趨勢(shì),組間及時(shí)間點(diǎn)比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);PRP+ADSCs 組、正常組干預(yù)3、7、10 及14 d 時(shí)的CD31 細(xì)胞陽性表達(dá)率均顯著高于PRP 組、ADSCs 組及模型對(duì)照組(P<0.05)。見表3。
表3 各組不同時(shí)間點(diǎn)CD31細(xì)胞陽性表達(dá)率比較[%,()]
表3 各組不同時(shí)間點(diǎn)CD31細(xì)胞陽性表達(dá)率比較[%,()]
*與同時(shí)間點(diǎn)PRP+ADSCs 組及正常組比較,P<0.05;#與同時(shí)間點(diǎn)ADSCs 組比較,P<0.05;△與同時(shí)間點(diǎn)模型對(duì)照組比較,P<0.05。F組間=457.100,P組間=0.001;F時(shí)間=655.600,P時(shí)間=0.001。
2.3 各組不同時(shí)間點(diǎn)PI3K、Akt 表達(dá)OD 值比較 大鼠創(chuàng)傷組織PI3K、Akt 表達(dá)OD 值的組間及時(shí)間點(diǎn)比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),其中PRP+ADSCs 組和正常組干預(yù)3、7 及10 d 時(shí)的PI3K、Akt 表達(dá)OD 值均顯著高于PRP 組、ADSCs組及模型對(duì)照組(P<0.05),見表4。
表4 各組不同時(shí)間點(diǎn)PI3k、Akt蛋白表達(dá)OD值比較()
表4 各組不同時(shí)間點(diǎn)PI3k、Akt蛋白表達(dá)OD值比較()
表4(續(xù))
2.4 各組不同時(shí)間點(diǎn)愈創(chuàng)組織中PI3K、Akt mRNA相對(duì)表達(dá)情況比較 RT-PCR 數(shù)據(jù)分析顯示,當(dāng)將模型對(duì)照組設(shè)為單位一時(shí),PRP+ADSCs 組、ADSCs組、PRP 組及正常組大鼠的PI3K、Akt mRNA 表達(dá)量出現(xiàn)顯著上調(diào),見表5。
表5 各組不同時(shí)間點(diǎn)愈創(chuàng)組織中PI3k、Akt mRNA相對(duì)表達(dá)量()
表5 各組不同時(shí)間點(diǎn)愈創(chuàng)組織中PI3k、Akt mRNA相對(duì)表達(dá)量()
糖尿病潰瘍創(chuàng)面由于組織結(jié)構(gòu)及細(xì)胞形態(tài)發(fā)生病理性改變,不利于創(chuàng)面肉芽組織生長(zhǎng),故難以愈合[9]。PRP 凝膠聯(lián)合ADSCs 是目前治療皮膚創(chuàng)面損傷的常用手段,PRP 凝膠可抑制血管病變,減輕炎癥反應(yīng),ADSCs 可刺激真皮外基質(zhì)膠原的合成,加快創(chuàng)面恢復(fù)[10]。PI3K/Akt 信號(hào)通路廣泛存在多種細(xì)胞中,具有調(diào)控細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖、分化、凋亡等作用[11]。本研究通過CD31 細(xì)胞陽性表達(dá)率檢測(cè)創(chuàng)面血管生成情況,通過免疫組化檢測(cè)PI3K、Akt 蛋白表達(dá)水平,通過PT-PCR 檢測(cè)PI3K、Akt mRNA 的相對(duì)表達(dá)量,以分析PRP 凝膠聯(lián)合ADSCs 治療糖尿病足治療的可能機(jī)制。
本研究中分別給予各組實(shí)驗(yàn)鼠PRP 凝膠聯(lián)合ADSCs、單獨(dú)PRP 凝膠、單獨(dú)ADSCs 等干預(yù),結(jié)果顯示,PRP+ADSCs 組創(chuàng)面愈合時(shí)間早于PRP 凝膠或ADSCs 單獨(dú)使用組,早于模型對(duì)照組。說明給予糖尿病潰瘍創(chuàng)面單一PRP 凝膠或ADSCs 干預(yù)均可有效促進(jìn)創(chuàng)面修復(fù),但二者聯(lián)合效果更佳。分析原因,ADSCs 雖可分泌血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子、成纖維生長(zhǎng)因子等多種促進(jìn)病灶新生血管生長(zhǎng)的有效成分。但單一的生長(zhǎng)因子在促進(jìn)細(xì)胞增殖及轉(zhuǎn)移方面作用甚微,當(dāng)多種細(xì)胞因子相結(jié)合時(shí)才可發(fā)揮效用[12]。PRP 凝膠中的血小板衍生生長(zhǎng)因子(platelet-derived growth factor,PDGF)、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因 子-β(transforming growth factor β,TGF-β)等可調(diào)控ADSCs 的旁分泌作用,加速成纖維細(xì)胞的遷移和增殖,促進(jìn)創(chuàng)面修復(fù)[13]。同時(shí),PRP 凝膠還具有抑制創(chuàng)面感染的作用,其特有的纖維蛋白網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)可為ADSCs 提供生物支架,有利于ADSCs 持續(xù)釋放生長(zhǎng)因子,促進(jìn)局部微血管生成,增加血供,促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)及膠原合成,增強(qiáng)創(chuàng)面上皮化能力[14]。PRP 凝膠與ADSCs 二者聯(lián)合可相互協(xié)同,促進(jìn)創(chuàng)面恢復(fù)。本研究還發(fā)現(xiàn),隨著時(shí)間的增長(zhǎng),各組間CD31 細(xì)胞陽性表達(dá)率明顯升高,且PRP+ADSCs 組、正常組、PRP 組、ADSCs 組的表達(dá)率均顯著高于模型對(duì)照組。CD31 在內(nèi)皮細(xì)胞、嗜中性粒細(xì)胞及T 細(xì)胞亞群中廣泛表達(dá),是血管內(nèi)皮相關(guān)的標(biāo)志性蛋白[15]。CD31 陽性表達(dá)率的升高,進(jìn)一步證明PRP 凝膠及ADSCs 干預(yù)有利于創(chuàng)面新生血管生成。
PI3K 是由催化亞基p110 和調(diào)節(jié)亞基p85 組成的二聚體蛋白,可分為Ⅰ型、Ⅱ型及Ⅲ型3 類,其中Ⅰ型PI3K 研究較為廣泛,與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)[16]。PI3K 中的調(diào)節(jié)亞基p85 可與細(xì)胞表面的各類受體相互作用,引發(fā)自身構(gòu)象改變,從而催化p110 激活PI3K;活化后的PI3K 可產(chǎn)生第二使信分子3,4,5-三磷酸磷脂酰肌醇,該信號(hào)分子可 與Akt 的Pleckstrin 同源性(pleckstrin homology,PH)結(jié)合域相結(jié)合,引發(fā)其蛋白構(gòu)象改變,促進(jìn)Ser473 和Thr308 位點(diǎn)的磷酸化;磷酸化蛋白激酶B(phosphorylated protein kinase B,p-Akt)可通過調(diào)控動(dòng)物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)、核轉(zhuǎn)錄因子(nuclear factor-κB,NF-κB)等下游靶基因,完成細(xì)胞增殖、分化、凋亡等生物過程[17]。本研究中免疫組化結(jié)果顯示,干預(yù)3、7、10 d 時(shí),各組PI3K、Akt 蛋白表達(dá)OD 值均明顯升高,且PRP+ADSCs 組、ADSCs 組、PRP 組均顯著高于模型對(duì)照組,說明PRP 凝膠及ADSCs 干預(yù)可有效激活PI3K/Akt 信號(hào)通路。RT-PCR mRNA表達(dá)分析顯示,隨著干預(yù)時(shí)間的延長(zhǎng),各組PI3K、Akt mRNA 表達(dá)水平呈上升趨勢(shì),干預(yù)14 d 時(shí)隨著創(chuàng)面愈合率的增長(zhǎng),PI3K、Akt mRNA 表達(dá)量呈下降趨勢(shì),以PRP+ADSCs 及正常組最為顯著,進(jìn)一步證明PI3K/Akt 信號(hào)通路的激活是PRP 凝膠聯(lián)合ADSCs 治療糖尿病足的可能機(jī)制。Chen 等[18]研究指出,重組人血小板源性生長(zhǎng)因子-BB(recombinant human platelet-derived growth facto,rhPDGF-BB)與人脂肪源性干細(xì)胞(human adipose-derived stem cells,hADSCs)可通過上調(diào)磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(p-PI3K)及p-Akt 水平以激活PI3K/Akt 信號(hào)通路,促進(jìn)跟腱炎康復(fù)。
綜上所述,自體PRP 凝膠聯(lián)合ADSCs 在治療糖尿病潰瘍型創(chuàng)面方面效果良好,這可能與PI3K/Akt 信號(hào)通路的激活相關(guān)。另外,本研究還存在明顯不足:僅對(duì)PI3K、Akt 的蛋白及mRNA 的表達(dá)情況進(jìn)行探究,未分析PI3K/Akt 信號(hào)通路下游關(guān)鍵因子的表達(dá)情況;未采用LY294002 等PI3K/Akt 信號(hào)通路相關(guān)抑制劑進(jìn)行對(duì)照研究,故實(shí)驗(yàn)結(jié)論說服力不足,期待后續(xù)實(shí)驗(yàn)中進(jìn)一步完善。