李堅李運石曉峰

1.蘭州市食品藥品檢驗檢測研究院，甘肅 蘭州 730050；2.甘肅省醫(yī)學科學研究院，甘肅 蘭州 730050

通宣理肺片收載于《中國藥典》，由紫蘇葉、前胡、桔梗等11味中藥組成，具有解表散寒，宣肺止咳的功效；用于風寒束表、肺氣不宣所致的感冒咳嗽等癥的治療[1］。其現(xiàn)行標準項下規(guī)定鹽酸麻黃堿、枳殼、甘草、紫蘇葉等的薄層鑒別及黃芩苷、鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿的含量測定，對其質量進行控制。近年來，有學者開展了通宣理肺片指紋圖譜[2］、柚皮苷含量測定[3］及基于近紅外的一致性檢驗模型[4］等研究工作。為了更全面的掌握、控制通宣理肺片的整體質量，本文結合前期研究基礎，選擇甘草苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、黃芩苷、甘草酸等6種指標性成分的含量為考察對象，建立了HPLC法同時測定方法，以期為該制劑的質量控制提供參考。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Waters e2695液相色譜儀（Waters公司）；XSE205DU電子天平（瑞士梅特勒-托利多公司）；SB-800DT超聲波恒溫清洗機（寧波新芝生物科技股份有限公司）。

1.2 試劑 甘草苷（批號：111610-201908，純度：95%）、柚皮苷（批號：110722-201815，純度：91.7%）、橙皮苷（批號：110721-202019，純度：95.3%）、新橙皮苷（批號：111857-201804，純度99.4%）、甘草酸銨（批號：110731-201619，純度96.2%）對照品，均購自中國食品藥品檢定研究院；黃芩苷（批號：8369，純度：96.2%）對照品購自上海詩丹德生物技術有限公司。乙腈、甲醇為色譜純；其他試劑為分析純；純化水為實驗室自制。

1.3 試藥 收集7個不同廠家生產的28份通宣理肺片樣品。見表1。

表1 樣品信息

2 方法與結果

2.1 溶液的配制

2.1.1 對照品溶液的制備。精密稱取各對照品適量，置于10mL容量瓶中，甲醇溶解并定容，即得（其中甘草苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、黃芩苷、甘草酸的濃度分別為0.928、1.737、0.679、1.778、1.708、0.965mg/mL）。

2.1.2 供試品溶液的制備。取編號為S3的樣品適量，研成粉末，取約1g置于150mL錐形瓶中，精密加入70%乙醇25.00mL，稱定質量，超聲處理（功率300W，頻率40kHz）30min，放冷，再次稱定重量，用70%乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.1.3 陰性樣品溶液的制備。按照處方比例及工藝，分別模擬制備缺甘草，缺陳皮，缺枳殼，缺陳皮、枳殼，缺黃芩及缺甘草、黃芩、陳皮、枳殼的陰性樣品，按“2.1.2”項下方法制備，即得。

2.2 含量測定

2.2.1 色譜條件[5］。CAPCELL PAK C 18 MG色譜柱（250 mm×4.6mm，5μm）；0.1%甲酸水溶液（A）-80%乙腈（B），梯度洗脫（0～5min，15%～20%B；5～10min，20%～25%B；10～20min，25%B；20～30min，25%～48%B；30～40min，48%～70%B；40～45min，70%～90%B；45～55min，90%B；55～56min，90%～15%B；56～60min，15%B）；流速：1.0mL/min；柱溫：30℃；檢測波長：250nm；進樣體積：10μL。

2.2.2 系統(tǒng)適用性試驗。分別取“2.1”項下對照品溶液、供試品溶液和陰性樣品溶液，按“2.2.1”項下色譜條件分析，色譜圖見圖1。分析結果提示，各指標性成分分離度良好；陰性樣品色譜圖中，各對應目標化合物在相應的保留時間無色譜峰吸收出現(xiàn)，表明處方中其他共存物質對含量測定結果無干擾，理論塔板數(shù)以黃芩苷（5號峰）計應不得少于5000。

圖1 通宣理肺片及其陰性樣品的HPLC色譜圖

2.2.3 線性關系考察。精密吸取“2.1.1”項下對照品溶液適量，置于10mL容量瓶中，甲醇定容至刻度，搖勻，在“2.2.1”項下色譜條件分析。以對照品質量濃度為橫坐標（X，μg/mL），峰面積為縱坐標（Y）進行線性回歸，結果見表2，可知各成分在各自范圍內線性關系良好。

表2 各指標性成分的線性關系及相關系數(shù)

2.2.4 精密度試驗。取“2.2.3”項下混合對照品溶液，在“2.2.1”項色譜條件下重復進樣6次，以色譜峰面積積分值計算相對標準偏差（RSD），結果甘草苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、黃芩苷、甘草酸、峰面積的RSD（n=6）分別為1.57%、2.47%、2.27%、2.47%、2.32%、2.67%，表明該方法的儀器精密度良好。

2.2.5 重復性試驗。取編號為S3的樣品，按“2.1.2”項下方法平行制備6份供試品溶液，在“2.2.1”項下色譜條件進樣測定，測得甘草苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、黃芩苷、甘草酸峰面積RSD分別為1.05%、1.09%、2.20%、2.18%、2.52%、1.61%，表明該方法的重復性良好。

2.2.6 穩(wěn)定性試驗。取編號為S3的樣品，按“2.1.2”項下方法制備供試品溶液，分別在0、2、4、8、12、24 h，按“2.2.1”項色譜條件進樣分析，測得甘草苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、黃芩苷、甘草酸峰面積RSD分別為1.43%、2.68%、1.40%、1.10%、0.36%、1.11%，表明供試品溶液在24h內均處于穩(wěn)定狀態(tài)。

2.2.7 加樣回收率實驗。精密量取各成分含有量已知的樣品（S3）0.5g，共6份，加入對照品溶液，按“2.2.2”項下方法平行制備供試品溶液，進樣測定，計算回收率，結果甘草苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、黃芩苷和甘草酸平均加樣回收率（n=6）分別為98.65%、102.10%、98.53%、98.69%、94.12%、99.05%、RSD分別為2.05%、1.68%、2.30%、1.29%、2.25%、1.49%。

2.2.8 樣品測定。分別取28批樣品，按“2.1.2”項下方法制備供試品溶液，在“2.2.1”項色譜條件下進樣分析，計算含量。見表3。

表3 各指標性成分的含量測定結果（%，n=3）

3 討論

3.1 流動相的考察 本實驗考察了乙腈-0.1%磷酸、乙腈-0.2%甲酸、90%乙腈-0.2%磷酸水、80%乙腈-0.2%磷酸水、80%乙腈-0.1%甲酸水等不同流動相系統(tǒng)的分離效果，結果表明以80%乙腈-0.1%甲酸水為流動相，梯度洗脫，各指標成分峰形較好。

3.2 測定波長的考察 采用DAD檢測器，對各指標成分進行全波長掃描，比較不同吸收波長處色譜峰響應強度，最終確定250nm作為檢測波長，各成分在該波長下，檢測靈敏度較好，無干擾。

3.3 含量測定結果分析 28份分析樣品中，甘草苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、黃芩苷、甘草酸的含量分別為0.0046%～0.0735%、0.0169%～0.5200%、0.0151%～0.2408%、0.0084%～0.4399%、0.4348%～0.8137%、0.0137%～0.1068%。結果提示，各企業(yè)內部不同批次間各指標成分的含量差異較小，一致性較好。而在不同企業(yè)間各樣本中指標成分的含量差異較大。

綜上，本實驗建立了同時測定通宣理肺片其中甘草苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、黃芩苷、甘草酸含量的HPLC方法，能夠較全面地反映該制劑的產品質量狀況；且測定方法簡便易行、穩(wěn)定性好，可為該制劑的整體質量控制提供參考。