陳植青，賀超，閆濱濱，陳彩霞，王文杰，侯俊玲，5*，王文全，5*

1.北京中醫(yī)藥大學(xué) 中藥學(xué)院，北京 100102；2.中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院 北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院 藥用植物研究所，北京 100193；3.中國中醫(yī)科學(xué)院 中藥資源中心，北京 100700；4.北京華宏康中藥材種植有限公司，北京 101300；5.中藥材規(guī)范化生產(chǎn)教育部工程研究中心，北京 100102

菘藍(lán)Isatis indigoticaFort.為十字花科2 年生草本植物，根為板藍(lán)根，葉為大青葉[1-2]。板藍(lán)根性寒，味苦，歸心、胃經(jīng)，有清熱解毒、涼血利咽之功效；大青葉性寒，味苦，歸心、胃經(jīng)，有清熱解毒、涼血消斑之功效[3]。近年來，我國對菘藍(lán)的需求量不斷增長，其生產(chǎn)正朝著大規(guī)模、商品化方向發(fā)展[4]。科學(xué)施肥是中藥材優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)的重要技術(shù)措施，也是中藥材生產(chǎn)持續(xù)健康發(fā)展的需要[5]。

目前，對菘藍(lán)的營養(yǎng)需求研究較多，但多集中在大量元素，尤其是氮元素[6]，而對中、微量元素的研究報道較少。本研究在參照Hoagland 營養(yǎng)液[7]配方基礎(chǔ)上，通過系列水培試驗，系統(tǒng)探討菘藍(lán)對大、中、微量元素的需求特性，為指導(dǎo)菘藍(lán)科學(xué)施肥及規(guī)范化種植提供參考。

1 材料

1.1 樣品

菘藍(lán)種子由北京悅康志德醫(yī)藥貿(mào)易有限公司提供，經(jīng)中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥用植物研究所王文全教授鑒定為十字花科植物菘藍(lán)Isatis indigoticaFort.的種子。

1.2 儀器

TYS-B 型葉綠素測定儀（浙江托普云農(nóng)科技股份有限公司）；AL204 型電子天平［梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司］。

1.3 試藥

尿素（批號：20191212）、磷酸二氫鉀（批號：20200110）、七水合硫酸鋅（批號：20161208）均購于國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；磷酸二氫銨（批號：20190809，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司）；硫酸鉀（批號：S30395）、無水氯化鈣（批號：S24110）、七水合硫酸鎂（批號：S24252）、乙二胺四乙酸鐵鈉鹽（螯合鐵，批號：S30021）均購于上海源葉生物科技有限公司；五水合硫酸銅（批號：140422）、一水合硫酸錳（批號：160509）均購于西隴科學(xué)股份有限公司；鉬酸鈉（批號：20200608，天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所）；硼酸（批號：20181203）、鹽酸（批號：20200914）均購于北京市通廣精細(xì)化工公司；氫氧化鈉（批號：20161008，北京化工廠）；75%乙醇消毒液（批號：20210120，北京消工匠醫(yī)療科技有限公司）；水為娃哈哈飲用純凈水。

2 方法

2.1 水培試驗

采用營養(yǎng)液水培方式，營養(yǎng)液參照Hoagland 營養(yǎng)液配方。試驗元素為氮（N）、磷（P）、鉀（K）、鈣（Ca）、鎂（Mg）、鐵（Fe）、銅（Cu）、錳（Mn）、鋅（Zn）、硼（B），各元素設(shè)置4 個質(zhì)量濃度水平，單因素變量，4水平分別為0水平（不添加該種營養(yǎng)元素）、2 水平參照Hoagland 營養(yǎng)液配方（S）、1 水平為2水平×0.5倍量、3水平為2水平×2倍量、以清水為對照（CK），具體處理見表1。共設(shè)32 個處理，每個處理重復(fù)30 株幼苗，每個處理水培營養(yǎng)液用0.1 mol·L-1鹽酸或氫氧化鈉將其pH調(diào)整為6.5。

表1 菘藍(lán)不同處理營養(yǎng)液組成mg·L-1

種子催芽和實(shí)驗布置：用40 ℃水浸泡12 h，使種子充分吸水，再用75%乙醇消毒液浸種5 min 進(jìn)行表面消毒，純凈水漂洗3～5 次。挑選飽滿膨脹的種子，直播于育苗海綿中。溫度控制在25 ℃左右，光照時間14 h/24 h。播種12 d 后，挑選規(guī)格一致的幼苗用相應(yīng)處理的營養(yǎng)液培養(yǎng)，每3 d 換1 次營養(yǎng)液，處理21 d后采收。

2.2 取樣與測定

觀測并記錄植株出現(xiàn)不良反應(yīng)的時間、部位、典型特征，在用營養(yǎng)液處理14 d 時，每個處理采集6 株植株，分別測定老葉及新葉的葉綠素SPAD 值。參照孫守文等[8]報道方法，采用葉綠素測定儀對葉片的葉綠素SPAD 值進(jìn)行測定，每片葉子測量3 個點(diǎn)（測定時避開葉脈），然后取其平均值作為該葉片的SPAD值。

用營養(yǎng)液處理21 d 后，每個處理采集6 株植株，測定生長指標(biāo)包括地上部分質(zhì)量、根質(zhì)量、葉片數(shù)、株高、葉寬、根長。

2.3 指標(biāo)計算及數(shù)據(jù)分析

所得結(jié)果為各處理平均值，用SPSS 26.0 軟件進(jìn)行單因素方差分析（P＜0.05），多重比較采用Duncan 法，用Origin 2018 軟件進(jìn)行作圖。根冠比按公式（1）計算。

3 結(jié)果

3.1 缺素處理對菘藍(lán)幼苗生長及葉綠素含量的影響

3.1.1 缺素處理下菘藍(lán)幼苗的癥狀表現(xiàn) 對缺素處理的菘藍(lán)幼苗進(jìn)行觀測，發(fā)現(xiàn)從第5 天開始陸續(xù)有不良癥狀發(fā)生（圖1）。菘藍(lán)幼苗表現(xiàn)出明顯不良反應(yīng)的有CK、N0、P0、K0、Ca0、Mg0、Fe0 處理，癥狀發(fā)生較快且提前死亡的有K0、Fe0、CK 處理。CK 處理培養(yǎng)8 d 時開始出現(xiàn)癥狀，地上部分矮小，生長緩慢，老葉先發(fā)黃，有黑斑，葉尖干枯卷曲；新葉葉肉發(fā)黃，網(wǎng)狀格子明顯；根部不發(fā)達(dá)，細(xì)長；提前發(fā)生死亡。N0 處理培養(yǎng)13 d 時開始出現(xiàn)癥狀，地上部分矮小，生長緩慢，新葉呈淺綠色；老葉黃化明顯，后干枯脫落；根細(xì)長。P0 處理培養(yǎng)14 d 時開始出現(xiàn)癥狀，葉片小，新葉呈暗綠色，老葉發(fā)黃，干枯卷曲；根多數(shù)呈銹色，白根少。K0處理培養(yǎng)5 d時開始出現(xiàn)癥狀，地上部分矮小，生長緩慢，老葉從葉尖開始發(fā)黃，干枯卷曲，呈灼傷狀，后逐步向基部擴(kuò)展，葉肉上有黑斑；新葉仍呈綠色；根部不發(fā)達(dá)，細(xì)短；提前發(fā)生死亡。Ca0 處理培養(yǎng)14 d 時開始出現(xiàn)癥狀，生長點(diǎn)異常，葉基部長出雜亂小葉，幼葉尖呈彎鉤狀；根部不發(fā)達(dá)。Mg0 處理培養(yǎng)14 d時開始出現(xiàn)癥狀，老葉出現(xiàn)黃色斑點(diǎn)，繼而轉(zhuǎn)為紫褐色，斑點(diǎn)漸漸枯白，壞死；癥狀先由葉緣開始，隨后向葉基部和中央擴(kuò)展。Fe0 處理培養(yǎng)5 d 時開始出現(xiàn)癥狀，地上部分矮小，新葉葉脈間失綠黃化，繼而發(fā)白，出現(xiàn)灰色斑點(diǎn)，葉脈仍綠，老葉干枯卷曲；根部細(xì)短不發(fā)達(dá)，短根毛明顯；提前發(fā)生死亡。Cu0、Mn0 處理，新葉略微偏黃，根部不發(fā)達(dá)。Zn0 處理，老葉略微偏黃，根部不發(fā)達(dá)。B0 處理，新葉略微偏黃。

圖1 缺素處理下菘藍(lán)幼苗癥狀

3.1.2 缺素處理對菘藍(lán)幼苗生物量的影響 方差分析結(jié)果表明，不同缺素處理下菘藍(lán)幼苗地上部分質(zhì)量、根質(zhì)量積累差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05，圖2）。除了B0 處理，其余處理與S 處理相比，根質(zhì)量顯著下降，其中CK、K0、Fe0 處理的影響最大，根質(zhì)量分別降低了45%、53%、52%；其次是Zn0、N0、Mn0、Ca0、P0、Cu0、Mg0 處理，根質(zhì)量降低了22%～29%，其中，N0處理降低了28%，P0處理降低了25%。與CK 處理相比，K0、Fe0 處理的根質(zhì)量有一定程度的降低，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義，推測K、Fe在菘藍(lán)幼苗的根系生長中起著重要作用。與S處理相比，除B0、Zn0處理外，其余處理地上部分質(zhì)量顯著下降，降低了21%～81%，其中，CK、K0、N0、Fe0、P0 處理的影響最大，根質(zhì)量分別降低了81%、79%、73%、68%、57%。就大量元素而言，對菘藍(lán)幼苗生物量的影響程度為K＞N＞P。與S 處理相比，CK、N0、K0、P0、Fe0處理的菘藍(lán)根冠比顯著增加，分別增加了187%、176%、131%、76%、55%。綜合地上部分質(zhì)量、根質(zhì)量指標(biāo)，K、N、Fe、P對菘藍(lán)幼苗的生長具有關(guān)鍵作用。

圖2 缺素處理對菘藍(lán)幼苗生物量的影響（±s, n=6）

3.1.3 缺素處理對菘藍(lán)幼苗生長性狀的影響 方差分析結(jié)果表明，不同缺素處理下菘藍(lán)幼苗葉數(shù)、株高、葉寬、根長差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05，表2）。與S處理相比，CK、N0、K0、Fe0、Cu0處理菘藍(lán)葉數(shù)減少了14%～33%，其中CK、N0、K0、Fe0處理的影響最大，均減少了33%；除B0 處理外，其余處理菘藍(lán)株高降低了7%～56%，CK、K0、N0和Fe0分別降低了56%、55%、48%和43%，Zn0、Ca0、Mn0處理影響最?。桓魈幚砣~寬顯著降低，CK、K0、N0、Fe0 和P0 處理菘藍(lán)葉寬降低了37%～65%；N0、CK處理根長增加了126%、21%，K0、Fe0處理根長減少了51%、30%，說明K0、Fe0處理抑制了菘藍(lán)幼苗根的生長。

表2 缺素處理對菘藍(lán)幼苗生長性狀的影響（±s, n=6）

表2 缺素處理對菘藍(lán)幼苗生長性狀的影響（±s, n=6）

注：同列不同小寫字母表示P＜0.05。

綜上所述，CK、K0、N0、Fe0、P0處理對菘藍(lán)幼苗的葉數(shù)、株高、葉寬抑制作用較大，其中最為明顯的是CK、K0 處理。與S 處理相比，N0、CK 處理顯著增加根長，推測在無營養(yǎng)及N 營養(yǎng)缺乏的情況下，菘藍(lán)可能通過促進(jìn)根的生長來適應(yīng)脅迫。K0、Fe0 處理菘藍(lán)幼苗根的生長受到抑制，說明K、Fe對菘藍(lán)根的生長具有關(guān)鍵作用。

3.1.4 缺素處理對菘藍(lán)幼苗老葉及新葉葉綠素含量的影響 方差分析結(jié)果表明，不同缺素處理下菘藍(lán)幼苗老葉及新葉葉綠素SPAD 值差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05，圖3）。與S 處理相比，CK、K0、Mg0、N0、P0、Zn0 處理老葉葉綠素SPAD 值降低了10%～53%，其中，最為顯著的是CK、K0 處理，其次是Mg0、N0 處理。與S 處理相比，P0 處理新葉葉綠素SPAD值增加了19%，F(xiàn)e0、CK、N0、K0、Cu0、B0、Mn0處理新葉葉綠素SPAD值降低了9%～77%。其中，F(xiàn)e0處理降低最多，其次是CK、N0、K0處理。

圖3 缺素處理對菘藍(lán)幼苗老葉、新葉葉綠素SPAD值的影響（±s, n=6）

綜上所述，N、P、K、Mg、Fe、Cu、Mn、Zn、B對菘藍(lán)的葉綠素含量有重要影響。清水培養(yǎng)、缺少N、K時，菘藍(lán)幼苗整體發(fā)黃，但老葉比新葉癥狀更早發(fā)生且更明顯；缺少M(fèi)g、P、Zn，菘藍(lán)幼苗主要表現(xiàn)為老葉發(fā)黃，推測N、K、Mg、P、Zn在菘藍(lán)體內(nèi)較易移動，故癥狀先從老葉表現(xiàn)出來；缺少Fe、Cu、B、Mn，菘藍(lán)幼苗主要表現(xiàn)為新葉發(fā)黃，推測Fe、Cu、B、Mn 在菘藍(lán)體內(nèi)不易移動，故癥狀先從新葉表現(xiàn)出來。

3.2 大量、中量元素濃度對菘藍(lán)幼苗生長及葉綠素含量的影響

3.2.1 大量、中量元素濃度對菘藍(lán)幼苗生物量的影響 方差分析結(jié)果表明，不同濃度大量、中量元素處理下菘藍(lán)幼苗生物量差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05，圖4～5）。不同濃度的大量、中量營養(yǎng)元素處理皆可顯著促進(jìn)地上部分質(zhì)量的增長。低、中濃度N，低、中、高濃度P、K，高濃度Ca，中濃度Mg可顯著促進(jìn)根質(zhì)量的增長。隨著N 濃度增加，地上部分質(zhì)量及根質(zhì)量呈先增后減的趨勢，與N0處理相比，低、中濃度N 處理根質(zhì)量分別增加了57%、39%。隨著P 濃度增加，地上部分質(zhì)量及根質(zhì)量呈逐漸增加的趨勢，與低濃度P 處理相比，中、高濃度P處理地上部分質(zhì)量分別增加19%、29%；高濃度處理對根質(zhì)量的促進(jìn)作用是中濃度處理的1.51 倍，說明在一定范圍內(nèi)，P 濃度越高，根生長越好。隨著K 濃度增加，根質(zhì)量呈逐漸增加的趨勢，地上部分質(zhì)量呈現(xiàn)先增后減的趨勢。其中，中濃度K 處理效果最好，地上部分質(zhì)量比K0 處理高384%。隨著Ca 濃度增加，地上部分質(zhì)量及根質(zhì)量均呈逐漸增加的趨勢，高濃度Ca 處理根質(zhì)量比Ca0 處理高52%，說明高濃度Ca更有利于菘藍(lán)幼苗地上及地下部分的生長。隨著Mg 濃度增加，地上部分質(zhì)量呈逐漸增加的趨勢，根質(zhì)量呈先增后減的趨勢，中濃度Mg處理根質(zhì)量比Mg0 處理高28%。綜上所述，低、中濃度N，中、高濃度P，中濃度K，高濃度Ca，中濃度Mg 處理對菘藍(lán)地上及地下部分的生長促進(jìn)效果較好。

圖4 大量、中量元素濃度對菘藍(lán)幼苗地上部分質(zhì)量的影響（±s, n=6）

與缺素處理相比，低、中、高濃度的N、P、K營養(yǎng)液處理根冠比皆顯著降低；其中，N 處理隨著濃度的增大根冠比逐漸下降，降低了50%～70%；P處理降低了31%～43%；K 處理降低了50%～57%（圖6）。綜上所述，大量營養(yǎng)元素缺乏會增大根冠比；氮濃度適量即可，超過一定量時對根的促生效果降低。中量營養(yǎng)元素缺乏時根冠比變化不明顯。

圖6 大量、中量元素濃度對菘藍(lán)幼苗根冠比的影響（±s, n=6）

圖5 大量、中量元素濃度對菘藍(lán)幼苗根質(zhì)量的影響（±s, n=6）

3.2.2 大量、中量元素濃度對菘藍(lán)幼苗生長性狀的影響 方差分析結(jié)果表明，不同濃度大量、中量元素處理下菘藍(lán)幼苗葉數(shù)、株高、葉寬、根長的差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05，表3）。與缺素處理相比，中、高濃度N 處理對葉數(shù)、株高、葉寬的促進(jìn)效果較好，其次是低N 處理；低、中、高濃度N 處理根長顯著減少，且隨著濃度的增加，根長顯著減少。中濃度N 對各生長指標(biāo)促進(jìn)效果顯著，與缺素處理相比，分別使葉數(shù)、株高、葉寬增加了50%、93%、130%。與缺素處理相比，中、高濃度P 處理對葉數(shù)的促進(jìn)效果較好，低、中、高濃度P 處理對株高、葉寬的促進(jìn)效果較好，低、中、高濃度P 處理對根長的影響與缺素處理差異無統(tǒng)計學(xué)意義。綜上所述，中、高濃度P 處理對菘藍(lán)幼苗生長性狀作用效果較好，與缺素處理相比，中濃度P處理分別使葉數(shù)、株高、葉寬增加了9%、26%、59%，高濃度P處理分別使葉數(shù)、株高、葉寬增加了9%、22%、50%。低、中、高濃度K處理葉數(shù)、株高、葉寬、根長皆顯著高于缺素處理，其中，中、高濃度K處理對葉寬的促進(jìn)效果較好，低濃度K處理對根長的促進(jìn)效果較好。中濃度K 處理分別使葉數(shù)、株高、葉寬增加了50%、123%、140%。低、中、高濃度Ca 處理株高、葉寬皆顯著高于缺素處理，其中，中、高濃度處理較好。高濃度Ca 處理分別使葉數(shù)、株高、葉寬增加了3%、6%、30%。中、高濃度Mg處理株高顯著高于缺素處理，其中，高濃度Mg 處理較好，低、中、高濃度Mg處理葉寬皆顯著增加，其中，中、高濃度處理較好。中濃度Mg 處理分別使株高、葉寬增加了26%、32%。綜合地上部分質(zhì)量、地根質(zhì)量可知，中濃度的N（N2）、高濃度的P（P3）、中濃度的K（K2）、高濃度的Ca（Ca3）、中濃度的Mg（Mg2）對菘藍(lán)地上部分質(zhì)量、根質(zhì)量、葉數(shù)、株高、葉寬、根長促生作用較好。

表3 大量、中量元素不同水平處理對菘藍(lán)幼苗生長性狀的影響（±s, n=6）

表3 大量、中量元素不同水平處理對菘藍(lán)幼苗生長性狀的影響（±s, n=6）

注：小寫字母表示同元素同列兩兩比較P＜0.05；表4～6同。

3.2.3 大量、中量元素濃度對菘藍(lán)幼苗老葉及新葉葉綠素含量的影響 方差分析結(jié)果表明，不同濃度大量、中量元素處理下菘藍(lán)幼苗老葉、新葉葉綠素SPAD 值差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05，表4）。隨著N 濃度增加，老葉和新葉葉綠素SPAD 值逐漸增加，與缺素處理相比，中、高濃度N 處理老葉葉綠素SPAD 值增加了31%、35%，低、中、高濃度N 處理新葉葉綠素SPAD 值增加了15%～30%。低、中、高濃度P 處理老葉葉綠素SPAD 值增加了13%～14%，新葉葉綠素SPAD 值降低了12%～16%。隨著K 濃度增加，老葉和新葉葉綠素SPAD 值逐漸增加，與K0處理相比，中、高濃度鉀處理老葉葉綠素SPAD 值增加了98%、101%，新葉葉綠素SPAD 值增加了18%。低、中、高濃度Mg處理老葉葉綠素SPAD值增加了37%～39%、新葉葉綠素SPAD 值增加了7%～10%。綜上所述，在一定用量范圍內(nèi)，N、P、K、Mg可以提高葉綠素含量，對菘藍(lán)幼苗的生長有促進(jìn)作用。

表4 大量、中量元素不同水平處理對菘藍(lán)幼苗老葉及新葉葉綠素SPAD值的影響（±s, n=6）

表4 大量、中量元素不同水平處理對菘藍(lán)幼苗老葉及新葉葉綠素SPAD值的影響（±s, n=6）

3.3 微量元素濃度對菘藍(lán)幼苗生長及葉綠素含量的影響

3.3.1 微量元素濃度對菘藍(lán)幼苗生物量的影響 方差分析結(jié)果表明，不同濃度微量元素濃度處理下菘藍(lán)幼苗生物量差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05，圖7～8）。隨著Cu濃度增加，地上部分質(zhì)量、根質(zhì)量呈增加的趨勢，高濃度Cu 處理根質(zhì)量顯著高出Cu0 處理49%。低、中、高濃度的Fe 處理地上部分質(zhì)量、根質(zhì)量均顯著增加，隨著Fe 濃度增加，地上部分質(zhì)量、根質(zhì)量均呈先增后減的趨勢，其中，中濃度Fe處理效果最好，地上部分質(zhì)量、根質(zhì)量與Fe0 處理相比分別增加了217%、109%。高濃度Fe 處理地上部分質(zhì)量與中濃度Fe 處理相比減少了14%。隨著Mn濃度增加，地上部分質(zhì)量、根質(zhì)量均呈先增后減的趨勢，低、中濃度Mn 處理效果較好，地上部分質(zhì)量與Mn0處理相比增加了33%、26%；中濃度Mn處理根質(zhì)量增加了39%。隨著Zn 濃度增加，地上部分質(zhì)量、根質(zhì)量呈現(xiàn)先增后減的趨勢，低、中、高濃度的Zn 處理地上部分質(zhì)量與Zn0 處理相比增加了32%、16%、15%；低濃度Zn處理根質(zhì)量與Zn0處理相比增加了66%。隨著B濃度增加，地上部分質(zhì)量、根質(zhì)量呈現(xiàn)先增后減的趨勢，低濃度B處理地上部分質(zhì)量與B0處理相比增加了8%。低、中、高濃度B處理根質(zhì)量與B0 處理相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義，其中，低濃度B 處理效果較好。綜上所述，高濃度Cu（Cu3）、中濃度Fe（Fe2）、中濃度Mn（Mn2）、低濃度Zn（Zn1）、低濃度B（B1）對菘藍(lán)地上部分質(zhì)量、根質(zhì)量促進(jìn)效果皆較好；但高濃度Fe及Mn處理、中高濃度Zn處理對菘藍(lán)幼苗生長有一定的抑制作用。

圖7 微量元素濃度對菘藍(lán)幼苗地上部分質(zhì)量的影響（±s, n=6）

與CK 處理相比，不同濃度微量元素處理根冠比均顯著降低（圖9）。其中，Cu、Mn、Zn、B 的低、中、高濃度處理與缺素處理的根冠比差異無統(tǒng)計學(xué)意義；低、中、高濃度Fe 處理與缺素處理相比降低了33%～35%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。

圖9 微量元素濃度對菘藍(lán)幼苗根冠比的影響（±s, n=6）

3.3.2 微量元素濃度對菘藍(lán)幼苗生長性狀的影響 方差分析結(jié)果表明，不同濃度微量元素處理下菘藍(lán)幼苗葉數(shù)、株高、葉寬、根長差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05，表5）。與缺素處理相比，高濃度Cu處理對葉數(shù)、株高、葉寬、根長的促進(jìn)效果均較好，分別增加了16%、35%、31%。中濃度Fe 處理對葉數(shù)、株高、葉寬、根長的促進(jìn)效果均較好，分別增加了50%、76%、108%。中濃度Mn 處理對株高、葉寬的促進(jìn)效果均較好，分別增加了8%、18%。低濃度Zn 處理對株高、葉寬的促進(jìn)效果均較好，分別增加了11%、35%。低濃度B 處理對葉數(shù)、株高、葉寬的促進(jìn)效果均較好，分別增加了12%、12%、10%。

表5 微量元素不同水平處理對菘藍(lán)幼苗生長性狀的影響（± s,n=6）

表5 微量元素不同水平處理對菘藍(lán)幼苗生長性狀的影響（± s,n=6）

3.3.3 微量元素濃度對菘藍(lán)幼苗老葉及新葉葉綠素含量的影響 方差分析結(jié)果表明，不同濃度微量元素處理下菘藍(lán)幼苗老葉及新葉葉綠素SPAD 值差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05，表6）。與缺素處理相比，低、中、高濃度Cu、Fe處理顯著增加了新葉葉綠素SPAD 值，Cu 處理增加了9%～16%，F(xiàn)e 處理增加了302%～341%。低、中濃度Mn 處理新葉葉綠素SPAD值增加了9%、10%，隨著Mn 濃度增加，新葉葉綠素SPAD 值有下降趨勢。低、中、高濃度Zn 處理的葉綠素SPAD 值與缺素處理相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義。低、中、高濃度B 處理增加新葉葉綠素SPAD 值10%～11%。綜上所述，在一定用量范圍內(nèi)，微量營養(yǎng)元素可以提高葉綠素含量，對菘藍(lán)幼苗的生長有促進(jìn)作用。隨著Mn 濃度增加，新葉葉綠素SPAD 值先增加后下降，說明高濃度錳對菘藍(lán)的生長有一定抑制作用。

表6 微量元素不同水平處理對菘藍(lán)幼苗老葉及新葉葉綠素SPAD值的影響（± s,n=6）

表6 微量元素不同水平處理對菘藍(lán)幼苗老葉及新葉葉綠素SPAD值的影響（± s,n=6）

圖8 微量元素濃度對菘藍(lán)幼苗根質(zhì)量的影響（±s, n=6）

4 討論

N、P、K、Ca、Mg、Fe、Cu、Mn、Zn 對菘藍(lán)幼苗的生長具有關(guān)鍵作用，尤其是K、N、Fe、P。與S 處理相比，CK、N0、K0、P0、Fe0 處理的根冠比顯著增加，推測菘藍(lán)幼苗可能是通過增加根質(zhì)量，減少地上部分質(zhì)量，調(diào)整根冠比來應(yīng)對缺N、缺P、缺K、缺Fe脅迫。裘珍飛等[9]研究缺P條件下黑木相思苗木的根冠比亦得到相似結(jié)論。K0、Fe0 處理抑制了菘藍(lán)幼苗根的伸長，說明K、Fe 對菘藍(lán)根的生長具有關(guān)鍵作用。何玉杰[10]研究發(fā)現(xiàn)，噴施Fe、Zn、B 能提高板藍(lán)根的根粗及根產(chǎn)量，噴施Fe、Zn 能提高大青葉的產(chǎn)量。本研究通過菘藍(lán)水培結(jié)果得知，缺B 對菘藍(lán)幼苗的生長影響不顯著，推測可能是種子B 含量已滿足生長發(fā)育前期所需，待種子里B 逐漸消耗殆盡時，外界供給的B 促生效果才得以凸顯，后續(xù)應(yīng)進(jìn)一步考慮延長培養(yǎng)時間。

菘藍(lán)對不同營養(yǎng)元素的需求程度不一，低、中濃度N處理有利于菘藍(lán)幼苗地上及地下部分的生長。N 處理隨著濃度的增大根冠比逐漸下降，可知N 濃度適量即可，超過一定量時對根的促生效果降低。中、高濃度P 處理有利于菘藍(lán)幼苗地上及地下部分的生長，且高濃度P 處理對增加根質(zhì)量促進(jìn)效果較好。王恩軍[11]研究表明，氮肥可以增加地上部分的生長，磷肥和鉀肥都有利于菘藍(lán)地下部分的生長，隨著兩者施肥量的增加，菘藍(lán)地下部分根直徑、根干質(zhì)量明顯增加，該研究結(jié)果與本研究結(jié)果相似。微量元素種類、含量影響藥用植物的生長發(fā)育，甚至影響藥材有效成分的含量，微量元素含量過高會產(chǎn)生不良作用[12-13]。本研究結(jié)果表明，高濃度Fe、Mn 處理，中高濃度Zn 處理對菘藍(lán)幼苗生長有一定的抑制作用。說明營養(yǎng)元素濃度過量時，對菘藍(lán)生長會產(chǎn)生不利影響，尤其是N 及微量元素，在實(shí)際應(yīng)用過程中應(yīng)注意使用濃度。

葉綠素是植物進(jìn)行光合作用的重要物質(zhì)基礎(chǔ)，是反映植物自身整體生長狀況的指標(biāo)。N 和Mg 是葉綠素分子的組成成分，其缺乏會影響葉綠素的形成，F(xiàn)e、Cu、Mn 等也影響葉綠素生物合成[14]。本研究結(jié)果表明，缺少N、P、K、Mg、Fe、Cu、Mn、Zn、B 降低了菘藍(lán)葉綠素的含量，有的表現(xiàn)在新葉，有的表現(xiàn)在老葉，從而影響菘藍(lán)正常生長。其中，P0 處理新葉呈暗綠色，推測生理缺P 影響了能量代謝，使光合作用產(chǎn)物運(yùn)輸受到了阻礙，因此葉片顏色異常[15]。

本研究通過水培方法發(fā)現(xiàn)菘藍(lán)營養(yǎng)元素缺乏時的典型癥狀，為菘藍(lán)營養(yǎng)缺乏提供診斷依據(jù)；初步確定菘藍(lán)對營養(yǎng)元素的需求程度，為菘藍(lán)的精準(zhǔn)施肥提供理論依據(jù)。實(shí)際應(yīng)用中，微量元素肥料具有用量少、移動性差、活性低、易被土壤固定等特點(diǎn)，較宜使用葉面噴施[16]，因此，后續(xù)需進(jìn)一步考慮研究葉面噴施微量元素對菘藍(lán)生長及質(zhì)量的影響。