徐明杰，伍一煒，趙迪，徐玉巖，潘巧嶺，趙田甜，周偉松，袁銀銀，徐暾海*，朱寅荻*

1.北京中醫(yī)藥大學(xué) 中藥學(xué)院，北京 100029；2.溫州醫(yī)科大學(xué) 藥學(xué)院，浙江 溫州 325035

風(fēng)輪菜Clinopodium chinense（Benth.）O.Kuntze為唇形科風(fēng)輪菜屬多年生草本植物，其地上干燥部分已收載于《中華人民共和國藥典》2020 年版，作為斷血流藥用，味微苦、澀，性涼，歸肝經(jīng)，具有收斂止血之功，可用于崩漏、尿血、鼻衄、牙齦出血、創(chuàng)傷出血[1]。風(fēng)輪菜中含有的豐富的三萜皂苷和黃酮類化合物具有抗炎、抗腫瘤、抗心肌缺血等活性[2-6]，是其主要活性成分。為進(jìn)一步尋找結(jié)構(gòu)新穎、活性良好的化學(xué)成分，本研究對風(fēng)輪菜地上部分進(jìn)行提取分離，經(jīng)硅膠、十八烷基硅烷鍵合硅膠（ODS）、Sephadex LH-20 柱色譜及制備高效液相色譜法（HPLC）等從其70%乙醇提取物的正丁醇萃取部位中分離得到11 個化合物，分別鑒定為3β,16β,23,28-四羥基-齊墩果烷-11(12),13(18)-二烯-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖苷（1）、3β,16β,23,28-四羥基-齊墩果烷-11(12),13(18)-二烯-3-O-[β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)]-[β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)]-β-D-吡喃葡萄糖苷（2）、柴胡皂苷a（3）、異落葉松脂素（4）、梣樹脂酚（5）、8-羥基-7′-表松脂醇（6）、三角葉鳳毛菊木脂素A（7）、柳葉柴胡酚（8）、異秦皮啶（9）、4-羥基-3-甲氧基苯基-1-丙烷-1,2-二醇（10）和布盧竹柏醇A（11），結(jié)構(gòu)見圖1。其中化合物1、2 為新化合物，分別命名為風(fēng)輪菜皂苷F（clinoposaponin F，1）、風(fēng)輪菜皂苷G（clinoposaponin G，2）。

圖1 風(fēng)輪菜中分離得到的化合物1～11的化學(xué)結(jié)構(gòu)式

1 材料

Avance Ⅲ600 型核磁共振儀（德國Bruker 公司）；LTQ-Obit rap XL 型質(zhì)譜儀（美國Thermo Fisher 公司）；Triple TOF 6600 System 型高分辨率質(zhì)譜儀（美國SCIEX 公司）；1100 型高效液相色譜儀、6890 型氣相系統(tǒng)配置火焰離子化檢測器（FID）（美國Agilent公司）；TU19型雙光束紫外-可見光分光度計（北京普析通用儀器有限公司）；FTIR-850 型傅里葉變換紅外光譜儀（天津港東科技發(fā)展股份有限公司）；MiFly-6 微型離心機（合肥艾本森科學(xué)儀器有限公司）；YMC Pack ODS-A 型半制備色譜柱（250 mm×10 mm，5 μm）、C18反相填料均購于日本YMC 公司；柱色譜和薄層色譜硅膠（青島海洋化工廠）；D101 型大孔吸附樹脂（南開大學(xué)）；Sephadex LH-20（瑞典Amersham Biosciences公司）。

對照品D-吡喃葡萄糖（批號：110833-201205，純度＞99.5%，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）；石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、甲醇和乙醇等試劑為分析純（國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）或色譜純（美國Tedia公司）；水為實驗室儀器自制超純水。

風(fēng)輪菜購于安徽省亳州市中藥材市場，經(jīng)安徽中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院余世春教授鑒定為唇形科風(fēng)輪菜屬植物風(fēng)輪菜Clinopodium chinense（Benth.）O.Kuntze。樣品標(biāo)本（20170820）現(xiàn)存于溫州醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院。

2 提取與分離

風(fēng)輪菜干燥地上部分60 kg粉碎后，經(jīng)70%乙醇提取2 次，回收溶劑得到浸膏。浸膏加水分散后，依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取，回收溶劑得到各部分萃取物；將正丁醇萃取物加水混懸上D101 大孔吸附樹脂柱，以30%、50%、75%、95%乙醇梯度洗脫，依次得到組分Fr.A、Fr.B、Fr.C 及Fr.D。

Fr.C 經(jīng)硅膠柱色譜（100～200 目），以二氯甲烷-甲醇（100∶0→0∶100）梯度洗脫，經(jīng)薄層色譜檢識，合并共得16個組分（Fr.C.1～16）；Fr.C.5經(jīng)C18中壓柱色譜，以甲醇-水（30∶70→100∶0）梯度洗脫，經(jīng)薄層色譜檢識，合并得到9 個組分（Fr.C.5.1～5.9）；Fr.C.5.2 經(jīng)多次Sephadex LH-20 柱色譜（甲醇）分離得到6 個組分（Fr.C.5.2.1～5.2.6），F(xiàn)r.C.5.2.2 經(jīng)半制備高效液相色譜（甲醇-水，74∶26）分離純化，得到化合物1（5 mg，tR=27 min）和2（7 mg，tR=32 min）；Fr.C.5.2.3 經(jīng)半制備高效液相色譜（甲醇-水，76∶24）分離純化，得到化合物3（6 mg，tR=30 min）。

Fr.A經(jīng)硅膠柱色譜（100～200目），以二氯甲烷-甲醇（100∶0→0∶100）梯度洗脫，經(jīng)薄層色譜檢識，合并共得22個組分（Fr.A.1～22）；Fr.A.2經(jīng)C18中壓柱色譜，以甲醇-水（30∶70→100∶0）梯度洗脫，經(jīng)薄層色譜檢識，合并得到7個組分（Fr.A.2.1～2.7），F(xiàn)r.A.2.2再經(jīng)硅膠柱色譜（100～200目），以石油醚-乙酸乙酯（100∶5→100∶50）梯度洗脫，經(jīng)薄層色譜檢識，合并共得12個組分（Fr.A.2.2.1～2.2.12），F(xiàn)r.A.2.2.3 經(jīng)Sephadex LH-20 柱色譜（甲醇為洗脫劑）及半制備高效液相色譜（甲醇-水，45∶55）分離純化，得到化合物11（12 mg，tR=20 min）；Fr.A.2.2.5 經(jīng)Sephadex LH-20 柱色譜（甲醇為洗脫劑）及半制備高效液相色譜（甲醇-水，40∶60）分離純化，得到化合物8（5 mg，tR=13 min）和9（4 mg，tR=20 min）；Fr.A.2.2.8 經(jīng)Sephadex LH-20柱色譜（甲醇為洗脫劑）及半制備高效液相色譜（甲醇-水，39∶61）分離純化，得到化合物6（7 mg，tR=30 min）；Fr.A.2.2.9 經(jīng)Sephadex LH-20 柱色譜（甲醇為洗脫劑）及半制備高效液相色譜（甲醇-水，30∶70）分離純化，得到化合物10（6 mg，tR=14 min）；Fr.A.2.2.10 經(jīng)Sephadex LH-20 柱色譜（甲醇為洗脫劑）及半制備高效液相色譜（甲醇-水，42∶58）分離純化，得到化合物4（9 mg，tR=18 min）、7（5 mg，tR=22 min）和5（7 mg，tR=43 min）。

3 酸水解和糖構(gòu)型的確定

取分離得到的新化合物各1 mg 于三氟乙酸-水（2∶1）1 mL 中溶解，95 ℃水浴回流2 h，冷卻至室溫，再用二氯甲烷1 mL 萃取3 次。水層減壓濃縮干燥后旋蒸，并反復(fù)多次加入無水乙醇以除去三氟乙酸。薄層色譜檢測（三氯甲烷-甲醇-水，8∶5∶1，下層），通過與單糖對照品的比移值（Rf）對比，確定水解得到的單糖種類。用無水吡啶2 mL 溶解水層樣品，再加入L-半胱氨酸甲酯鹽酸鹽1.5 mg，密封，60 ℃加熱1 h。冷卻至室溫，再加入三甲基氯硅烷-六甲基二硅胺烷（1∶2）0.5 mL，密封，60 ℃加熱30 min。取單糖對照品D-吡喃葡萄糖1 mg，加入L-半胱氨酸甲酯鹽酸鹽1.5 mg、無水吡啶2 mL，溶解，密封，60 ℃加熱1 h。再加三甲基氯硅烷-六甲基二硅胺烷（1∶2）0.5 mL，密封，60 ℃加熱30 min。樣品離心（4 ℃，10 min，3000 r·min-1，離心半徑為5 cm），取上層進(jìn)行氣相色譜分析[7]。

氣相色譜條件：Agilent 6890 型氣相色譜系統(tǒng)；FID；HP-5 毛細(xì)管柱（30 m×0.25 mm，0.25 μm）；柱溫為150 ℃（2 min）；程序升溫（5 ℃·min-1到210 ℃）；載氣為N2，流速為1 mL·min-1；進(jìn)樣量為3.0 μL；進(jìn)樣口溫度為250 ℃；檢測器溫度為250 ℃；分流比為1∶50。D-吡喃葡萄糖對照品衍生物tR為12.17、13.83 min；化合物1 的tR為12.14、13.76 min；化合物2的tR為12.16、13.81 min。

4 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：白色無定形粉末，易溶于甲醇；HRESI-MSm/z：819.450 9[M+Na]+（理論值為819.450 7），推斷該化合物分子式為C42H68O14，不飽和度為9。紫外（UV）光譜（甲醇）顯示在243、251、259 nm處有最大吸收，紅外（IR）光譜（溴化鉀壓片）顯示存在羥基（3291 cm-1）和雙鍵（1621 cm-1）等官能團(tuán)。

在核磁共振氫譜（1H-NMR）中顯示，有6 個甲基單峰δH0.84、0.85、0.92、0.94、1.05、1.09；2 個次甲基烯烴信號δH5.65 (1H,d,J=10.8 Hz) 和6.51(1H,dd,J=10.8,3.0 Hz)；2 對連氧的亞甲基信號δH3.78(1H,d,J=10.8 Hz)、4.45(1H,d,J=10.8 Hz)和4.20(2H,m)；2 個連氧的次甲基質(zhì)子信號δH4.22(1H,m)和4.22(1H,m)。在核磁共振碳譜（13C-NMR）中可以觀察到42個碳信號，其中12個來自糖取代基（2 個端基碳信號δC104.4、106.5；2 個連羥基的亞甲基信號δC63.0、63.1；8 個連羥基的次甲基信號δC71.6～84.6）。此外，含有6個甲基碳信號δC13.4、17.4、19.2、22.4、25.2、32.7；2 個羥甲基碳信號δC65.1 (C-23) 和64.4 (C-28)；2 個連氧次甲基碳信號δC82.7 (C-3) 和77.0 (C-16)；4 個烯碳信號δC126.1 (C-11)、127.5 (C-12)、136.8 (C-13)、133.7 (C-18)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[8]中風(fēng)輪菜皂苷E（clinoposaponin E）的苷元數(shù)據(jù)基本一致，兩者具有相同的苷元結(jié)構(gòu)，即齊墩果烷-11(12),13(18)-二烯型三萜皂苷。

化合物1的苷元結(jié)構(gòu)中共有9個不對稱碳，分別為C-3、C-4、C-5、C-8、C-9、C-10、C-14、C-16和C-17。在ROESY 譜中，H-3 與H-5 相關(guān)，H-9 與H-5、H-27相關(guān)，H-27與H-16相關(guān)，上述已確定H-3為α構(gòu)型，則H-5、H-9、H-16、H-24 和H-27 均為α構(gòu)型。H-25 與H-24、H-26 相關(guān)且與H-27 無相關(guān)，H-27 與H-28 無相關(guān)，可以確定H-24、H-25、H-26和H-28 為β構(gòu)型。另外，C-23 向高場位移，C-24 向低場位移，同樣提示23-CH2OH為α構(gòu)型，24-CH3為β構(gòu)型[9-10]；H-28與H-22遠(yuǎn)程相關(guān)，可知C-17位連有1 個羥甲基（圖2～3）。通過HMBC 和HSQC 可知C-16 的化學(xué)位移為77.0，連有1 個羥基，C-16 的化學(xué)位移與C-α-OH 相比向低場位移[9,11]，提示C-16-OH 為β構(gòu)型。化合物1 中9 個不對稱碳的構(gòu)型與風(fēng)輪菜皂苷E 相應(yīng)碳的構(gòu)型一致，以上數(shù)據(jù)可以確定化合物1 的苷元為3β,16β,23,28-四羥基-齊墩果烷-11(12),13(18)-二烯型三萜皂苷。

圖2 化合物1和2的主要1H-1H COSY和HMBC相關(guān)

1H-NMR 譜中顯示有2 個糖的端基質(zhì)子信號δH5.13 (1H,d,J=7.8 Hz),5.41 (1H,d,J=7.8 Hz)，根據(jù)其耦合常數(shù)可知其結(jié)構(gòu)中糖苷鍵均為β構(gòu)型。通過酸水解和氣相色譜檢測2 個糖均為D-葡萄糖基。在HMBC 譜中，δH5.13(H-1′)與δC82.7(C-3)有遠(yuǎn)程相關(guān)，δH5.41 (H-1?) 與δC84.6 (C-2′) 有遠(yuǎn)程相關(guān)，且C-3 的化學(xué)位移向低場位移至δC82.7，由此可確定2個葡萄糖基以β(1→2)苷鍵相連，且與苷元3β-羥基成苷[10,12]。

圖3 化合物1的主要ROESY相關(guān)

綜上所述，化合物1 確定為3β,16β,23,28-四羥基-齊墩果烷-11(12),13(18)-二烯-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖苷，經(jīng)SciFinder查詢?yōu)樾禄衔?，命名為風(fēng)輪菜皂苷F。

化合物2：白色無定型粉末，易溶于甲醇；HRESI-MSm/z：981.503 9[M+Na]+（理論值為981.503 5），推斷該化合物分子式為C48H78O19，不飽和度為10。UV光譜（甲醇）顯示在242、252、260 nm處有最大吸收，IR光譜（溴化鉀壓片）顯示存在羥基（3411 cm-1）和雙鍵（1596 cm-1）等官能團(tuán)。

分析化合物2和1的核磁共振波譜數(shù)據(jù)得出兩者結(jié)構(gòu)相似，具有相同的苷元，但化合物2比化合物1多了1 個葡萄糖基。通過酸水解和氣相色譜檢測，可確定化合物1 中的3 個糖基均為D-葡萄糖基，在1H-NMR（表1）中顯示3 個糖的端基質(zhì)子δH5.05(1H,d,J=7.8 Hz),5.74 (1H,d,J=7.8 Hz),5.34 (1H,d,J=7.8 Hz)，由HSQC 譜可判斷出其分別對應(yīng)3 個糖基的端基碳信號δC104.6 (C-1′),104.3 (C-1?),105.1(C-1?)，結(jié)合其耦合常數(shù)可知3 個糖基均為β-D-葡萄糖基。由C-3 與H-1′有HMBC 相關(guān)及C-3 的化學(xué)位移向低場位移至δC83.0，可知1 個葡萄糖基與3-β-OH成糖苷鍵；H-1′與H-2′有COSY相關(guān)，C-2′與H-1?有HMBC 相關(guān)，可知第2 個糖基連接在C-2′-OH 上；H-2′與H-3′有COSY 相關(guān)，C-3′/C-3?與H-1?有HMBC相關(guān)，提示第3個糖基連接在C-3′-OH上。通過1H-1H-COSY、HSQC、HMBC 和NOESY 對該化合物的所有氫碳信號進(jìn)行了歸屬，見表1。

表1 化合物1和2的1H-NMR和13C-NMR數(shù)據(jù)（600/150 MHz，吡啶-d5)

續(xù)表1

綜上所述，化合物2 確定為3β,16β,23,28-四羥基-齊墩果烷-11(12),13(18)-二烯-3-O-[β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)]-[β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)]-β-D-吡喃葡萄糖苷，經(jīng)SciFinder 查詢?yōu)樾禄衔?，命名為風(fēng)輪菜皂苷G。

化合物3：黃色無定形粉末；1H-NMR(600 MHz,pyridine-d5)δ: 0.87 (3H,s,H-30),0.91 (3H,s,H-29),0.91(3H,s,H-24),0.97(3H,s,H-25),1.09(3H,s,H-27),1.39(3H,s,H-26),1.42(3H,d,J=6.6 Hz,H-6′),4.98 (1H,d,J=7.8 Hz,H-1′),5.36 (1H,d,J=7.8 Hz,H-1″),5.99(1H,brd,J=10.8 Hz,H-12),5.65(1H,dd,J=10.8,2.4 Hz,H-11)；13C-NMR (150 MHz,CD3OD)δ: 38.4 (C-1),25.9 (C-2),81.3 (C-3),43.5 (C-4),47.0 (C-5),17.3 (C-6),31.4 (C-7),41.9 (C-8),52.8(C-9),36.0 (C-10),132.0 (C-11),130.9 (C-12),83.7(C-13),45.4 (C-14),35.9 (C-15),63.8 (C-16),46.8(C-17),51.9 (C-18),37.4 (C-19),31.3 (C-20),34.4(C-21),25.5 (C-22),63.6 (C-23),12.8 (C-24),18.5(C-25),19.8 (C-26),20.6 (C-27),72.8 (C-28),33.4(C-29),23.6 (C-30),105.8 (C-1′),71.6 (C-2′),85.0(C-3′),71.9 (C-4′),70.8 (C-5′),17.0 (C-6′),106.6(C-1″),75.6 (C-2″),78.6 (C-3″),72.3 (C-4″),78.2(C-1″),62.5(C-6″)，以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報道的數(shù)據(jù)基本一致[13]，故鑒定化合物3為柴胡皂苷a。

化合物4：白色無定型粉末；1H-NMR(600 MHz,CD3OD)δ:6.73(1H,d,J=7.8 Hz,H-5′),6.67(1H,d,J=1.8 Hz,H-2′),6.65 (1H,s,H-2),6.61 (1H,dd,J=7.8,1.9 Hz,H-6′),6.17 (1H,s,H-5),3.80 (3H,s,H-8′),3.77 (3H,s,3-OCH3),3.68 (3H,m,H-9b,9a,9′a),3.80 (1H,m,H-8′),3.39 (1H,m,H-9′b),2.77(2H,m,H-7),2.00 (1H,m,H-8),1.76 (2H,m,H-7′)；13C-NMR (150 MHz,CD3OD)δ: 129.1 (C-1),113.8(C-2),149.2 (C-3),146.1 (C-4),117.5 (C-5),134.3(C-6),33.8 (C-7),40.0 (C-8),66.0 (C-9),138.8 (C-1′),112.4 (C-2′),147.4 (C-3′),145.4 (C-4′),116.1(C-5′),123.4 (C-6′),48.2 (C-7′),48.1 (C-8′),62.2(C-9′),56.4(3-OCH3),56.5(3′-OCH3)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報道的數(shù)據(jù)基本一致[14]，故鑒定化合物4為異落葉松脂素。

化合物5：黃色油狀物；1H-NMR (600 MHz,CD3OD)δ: 7.05 (1H,d,J=1.8 Hz,H-2′),6.87 (1H,dd,J=7.8,1.8 Hz,H-6′),6.77 (1H,d,J=7.8 Hz,H-5′),6.72 (2H,s,H-2,6),4.85 (1H,d,J=4.8 Hz,H-7′),4.67 (1H,s,H-7),4.46 (1H,t,J=8.4 Hz,H-9′a),4.07 (1H,d,J=9.0 Hz,H-9a),3.86 (1H,m,H-9b),3.85 (9H,s,3,3′,5-OCH3),3.76 (1H,dd,J=9.0,6.0 Hz,H-9′b),3.04 (1H,ddd,J=7.8,6.0,6.0 Hz,H-8′)；13C-NMR (150 MHz,CD3OD)δ:149.3(C-3′),149.1 (C-3,5),147.6 (C-4′),136.5 (C-4),133.8 (C-1′),128.4 (C-1),120.7 (C-6′),116.2 (C-5′),111.4(C-2′),106.3 (C-2,6),93.1 (C-8),89.6 (C-7),87.9(C-7′),76.2 (C-9),72.2 (C-9′),62.6 (C-8′),56.9 (3,5-OCH3),56.5 (3′-OCH3)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報道的數(shù)據(jù)基本一致[15]，故鑒定化合物5為梣樹脂酚。

化合物6：黃色油狀物；1H-NMR (600 MHz,CD3OD)δ: 7.03 (1H,d,J=1.8 Hz,H-2),6.94 (1H,brs,H-2′),6.84 (1H,dd,J=7.8,1.8 Hz,H-6′),6.78(3H,overlap,H-5,5′,6′),5.17(1H,d,J=6.4 Hz,H-7′),4.37 (1H,s,H-7),4.19 (1H,d,J=9.0 Hz,H-9a),3.90 (1H,d,J=9.0 Hz,H-9′a),3.86 (3H,s,3-OCH3),3.86 (3H,s,3′-OCH3),3.60 (1H,d,J=9.0 Hz,H-9b),3.22 (1H,t,J=9.0 Hz,H-9′b),3.09 (1H,m,H-8′)；13C-NMR (150 MHz,CD3OD)δ: 149.1 (C-3′),148.8(C-3),147.7(C-4),146.9(C-4′),131.2(C-1′),129.1(C-1),121.8(C-6),119.4(C-6′),116.2(C-5′),115.8(C-5),112.9 (C-2),110.5 (C-2′),91.8 (C-8),91.0(C-7),82.9 (C-7′),76.9 (C-9),69.3 (C-9′),58.9 (C-8′),56.6 (3-OCH3),56.5 (3′-OCH3)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報道的數(shù)據(jù)基本一致[15]，故鑒定化合物6為8-羥基-7′-表松脂醇。

化合物7：無色油狀物；1H-NMR (600 MHz,CD3OD)δ: 6.95 (1H,s,H-6′),6.81 (1H,d,J=1.8 Hz,H-2),6.75 (1H,s,H-2),6.75 (1H,s,H-2′),6.72 (1H,d,J=7.8 Hz,H-5),6.65 (1H,dd,J=9.0,1.8 Hz,H-6),4.82 (1H,s,H-7′),4.06 (dd,J=6.4,8.4 Hz,H-9α),3.85 (3H,s,3′-OCH3),3.84 (3H,s,3-OCH3),3.79 (1H,d,J=11.4 Hz,H-9a),3.66 (1H,dd,J=5.4,8.4 Hz,H-9β),3.60 (1H,d,J=11.4 Hz,H-9b),3.09(1H,dd,J=13.2,3.0 Hz,H-7a),2.58 (1H,m,H-8),2.48 (1H,t,J=12.9 Hz,H-7b)；13C-NMR (150 MHz,CD3OD)δ: 133.4 (C-1),113.5 (C-2),149.2 (C-3),146.9 (C-4),115.7 (C-5),122.4 (C-6),35.3 (C-7),52.1 (C-8),72.1 (C-9),130.9 (C-1′),121.7 (C-2′),147.4 (C-3′),116.3 (C-4′),148.8 (C-5′),112.8 (C-6′),85.7 (C-7′),83.4 (C-8′),64.6 (C-9′),56.5 (3-OCH3),56.5 (3′-OCH3)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報道的數(shù)據(jù)基本一致[16]，故鑒定化合物7為三角葉鳳毛菊木脂素A。

化合物8：白色粉末；1H-NMR (600 MHz,CD3OD)δ:6.96(1H,d,J=1.8 Hz,H-5),6.83(1H,dd,J=7.8,1.8 Hz,H-9),6.77(1H,d,J=8.1 Hz,H-8),4.66 (1H,d,J=6.6 Hz,H-3),4.53 (1H,dd,J=9.6,6.6 Hz,H-1α),4.36 (1H,dd,J=9.6,1.8 Hz,H-1β),4.30 (1H,t,J=8.4 Hz,H-1?α),4.09 (1H,dd,J=9.0,3.0 Hz,H-1?β),3.86 (1H,s,6-CH3),3.55 (1H,td,J=8.4,3.0 Hz,H-2?),3.20～3.24(1H,m,H-2)；13C-NMR(150 MHz,CD3OD)δ: 71.1 (C-1),49.5 (C-2),87.9(C-3),132.4 (C-4),111.0 (C-5),149.4 (C-6),147.9(C-7),116.3 (C-8),120.4 (C-9),72.0 (C-1?),47.7 (C-2?),181.3(C-3?),56.5(6-OCH3)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報道的數(shù)據(jù)基本一致[17]，故鑒定化合物8為柳葉柴胡酚。

化合物9：黃色無定形粉末；1H-NMR(600 MHz,CD3OD)δ: 7.86 (1H,d,J=9.4 Hz,H-4),6.93 (1H,s,H-5),6.23 (1H,d,J=9.4 Hz,H-3),3.95 (3H,s,8-OCH3),3.90 (3H,s,6-OCH3)；13C-NMR (150 MHz,CD3OD)δ: 163.7 (C-2),147.7 (C-6),146.8 (C-4),146.2 (C-9),144.9 (C-7),136.4 (C-8),112.9 (C-3),112.3 (C-10),105.2 (C-5),61.9 (8-OCH3),57.0 (6-OCH3)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報道的數(shù)據(jù)基本一致[18]，故鑒定化合物9為異秦皮啶。

化合物10：無色針狀晶體（甲醇）；1H-NMR(600 MHz,CD3OD)δ: 6.82 (1H,d,J=1.5 Hz,H-6),6.65 (1H,d,J=7.8 Hz,H-3),6.66 (1H,dd,J=7.8,1.8 Hz,H-4),3.83 (3H,s,1-OCH3),3.76 (1H,m,H-8),3.49 (1H,dd,J=11.4,6.6 Hz,H-9a),3.42 (1H,dd,J=11.4,6.6 Hz,H-9b),2.73 (1H,dd,J=13.2,5.7 Hz,H-7a),2.59 (1H,dd,J=13.2,5.7 Hz,H-7b)；13C-NMR (150 MHz,CD3OD)δ: 149.0 (C-1),146.1(C-2),116.2 (C-3),123.1 (C-4),131.7 (C-5),114.2(C-6),40.7 (C-7),74.9 (C-8),66.7 (C-9),56.5 (1-OCH3)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報道的數(shù)據(jù)基本一致[19]，故鑒定化合物10 為4-羥基-3-甲氧基苯基-1-丙烷-1,2-二醇。

化合物11：黃色無定形粉末；1H-NMR(600 MHz,CD3OD)δ: 1.00,1.03 (各3H,s,11,12-CH3),1.24(3H,d,J=6.5 Hz,10-CH3),1.92(3H,d,J=1.0 Hz,13-CH3),2.15,2.52 (各1H,d,J=16.8 Hz,H-2),4.32(1H,m,H-9),5.78 (2H,m,H-7,8),5.87 (1H,brs,H-5)；13C-NMR (150 MHz,CD3OD)δ: 42.6 (C-1),50.9(C-2),201.5(C-3),127.3(C-4),167.7(C-5),80.2(C-6),130.3 (C-7),137.1 (C-8),68.9 (C-9),24.0 (C-10),23.7 (C-11),24.7 (C-12),19.8 (C-13)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報道的數(shù)據(jù)基本一致[20]，故鑒定化合物11為布盧竹柏醇A。

5 討論

本研究運用多種色譜技術(shù)從風(fēng)輪菜的70%乙醇提取物的正丁醇萃取部位中分離得到11 個化合物，其中化合物1 和2 為未見報道的新化合物，化合物4～11 為首次從該植物中分離得到。化合物1 和2 為齊墩果烷型三萜皂苷，化合物4～8 為木脂素類化合物，化合物9為香豆素，還有2個其他類型的結(jié)構(gòu)。

風(fēng)輪菜有止血之功，臨床上主要應(yīng)用于各種出血性疾病[5]，現(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)其具有抗炎、抗腫瘤、抗心肌缺血再灌注損傷的活性。柴胡皂苷a 具有抗腫瘤、抗炎、抗癲癇、保肝護(hù)肝等作用[21]；木脂素具有多種對人體健康有益的特性，而這種特性與其抗氧化能力密切相關(guān)[22]；異落葉松脂素具有較強的1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）自由基、超氧陰離子自由基清除和還原能力[23]；異秦皮啶具有抗炎[24]和抗癌[25]等活性，并且以Toll 樣受體4（TLR4）/髓樣分化蛋白2（MD-2）軸為靶點阻止骨關(guān)節(jié)炎發(fā)展[26]；布盧竹柏醇A 對人體腫瘤細(xì)胞具有細(xì)胞毒性，但作用不顯著[27]，其他方面的研究較少。綜上所述，本研究豐富了風(fēng)輪菜的化學(xué)成分多樣性，為尋找風(fēng)輪菜屬植物中新的、高效的生物活性成分提供了參考。