田永，王瑞勤，常越，陳希，陳明凱

河南大學(xué)附屬鄭州頤和醫(yī)院消化內(nèi)科，鄭州 450000

胰腺癌是臨床常見的惡性腫瘤，由于早期癥狀不明顯，絕大多數(shù)患者確診時已發(fā)展至進展期，僅有少部分患者確診時能夠采取手術(shù)根治性治療，5年生存率低于10%[1-2]。胰腺癌惡性程度高、早期診斷困難、預(yù)后極差，因此提高胰腺癌的早期診斷率可能對改善預(yù)后具有重要意義[3]。血清腫瘤標(biāo)志物檢測是臨床中篩查腫瘤最簡便、快捷的方法，但目前尚無診斷胰腺癌的準(zhǔn)確可靠的血清標(biāo)志物，糖類抗原 19-9（carbohydrate antigen 19-9，CA19-9）是美國食品藥品管理局（Food and Drug Administration，F(xiàn)DA）批準(zhǔn)的唯一一個用于臨床的胰腺癌血清標(biāo)志物，但其靈敏度和特異度有限[4]。研究發(fā)現(xiàn)，腫瘤的發(fā)生發(fā)展與微小RNA（microRNA，miRNA）的調(diào)控相關(guān)，其中miRNA-143在結(jié)腸癌、乳腺癌中低表達，經(jīng)證實miRNA-143為抑癌基因，而且其在胰腺癌患者血清中的表達水平明顯低于健康人，其低表達影響了胰腺癌的組織學(xué)特性及生物學(xué)行為[5-6]。本研究探討miRNA-143、CA19-9在胰腺癌診斷和預(yù)后預(yù)測中的應(yīng)用價值，以期為胰腺癌的診斷和治療提供新的方向，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2015年10月至2017年10月河南大學(xué)附屬鄭州頤和醫(yī)院收治的胰腺癌患者。納入標(biāo)準(zhǔn)：①經(jīng)病理檢查確診為胰腺癌；②年齡18～80歲；③入院前未接受過其他抗腫瘤治療。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并重要臟器功能障礙；②合并血液系統(tǒng)疾??；③合并其他惡性腫瘤；④失訪患者。根據(jù)納入和排除標(biāo)準(zhǔn)，本研究共納入100例胰腺癌患者，作為胰腺癌組。其中，男54例，女46例；年齡41～78歲，平均（62.35±7.28）歲；腫瘤直徑 1.5～5.8 cm，平均（3.50±1.22）cm；腫瘤部位：胰頭42例，胰體尾58例；臨床分期：Ⅰ期11例，Ⅱ期25例，Ⅲ期49，Ⅳ期15例。另選擇同期河南大學(xué)附屬鄭州頤和醫(yī)院收治的30例胰腺良性病變患者（胰腺良性病變組）和30例健康體檢者（健康組）。胰腺良性病變組中，男17例，女13例；年齡36～75歲，平均（61.58±6.91）歲；疾病類型：慢性胰腺炎14例，急性胰腺炎9例，胰腺良性占位7例。健康組中，男15例，女15例；年齡37～79歲，平均（63.05±8.01）歲。3組研究對象的性別、年齡比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P﹥0.05），具有可比性。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會審批通過，所有患者均知情同意并簽署知情同意書。

1.2 檢測方法

采集所有研究對象的肘靜脈血5 ml，離心后取上層血清并分裝成2份，保存于-80℃冰箱中待用，其中一份采用酶聯(lián)免疫吸附試驗（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）檢測血清CA19-9水平，另外一份采用熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（polymerase chain reaction，PCR）檢測 miRNA-143表達水平。

1.3 隨訪方法

對胰腺癌患者進行3年的電話隨訪，隨訪截止時間為2020年10月，統(tǒng)計患者的生存情況。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析

采用SPSS 22.0軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析，符合正態(tài)分布且方差齊性計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，多組間比較采用單因素方差分析，如有統(tǒng)計學(xué)差異，進一步兩兩比較采用SNK-q檢驗；計數(shù)資料以例數(shù)和率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗。采用受試者工作特征（receiver operating characteristic，ROC）曲線分析血清miRNA-143、CA19-9單獨及聯(lián)合檢測對胰腺癌的診斷價值，采用二元Logistic回歸分析構(gòu)建聯(lián)合診斷方程；采用Spearman相關(guān)分析法分析miRNA-143與CA19-9的相關(guān)性；采用Kaplan-Meier法繪制生存曲線，組間比較采用Log-rank檢驗。以P﹤0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 血清miRNA-143、CA19- 9水平的比較

胰腺癌組、胰腺良性病變組、健康組的血清miRNA-143、CA19-9水平比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P﹤0.01）。胰腺癌組患者的血清miRNA-143水平低于胰腺良性病變組和健康組，CA19-9水平高于胰腺良性病變組和健康組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P﹤0.05）；胰腺良性病變組和健康組的血清miRNA-143水平比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P﹥0.05）；胰腺良性病變組患者的血清CA19-9水平高于健康組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P﹤0.05）。（表1）

表1 3組研究對象血清miRNA-143、CA19- 9水平的比較（）

表1 3組研究對象血清miRNA-143、CA19- 9水平的比較（）

注：a與健康組比較，P<0.05；b與胰腺良性病變組比較，P<0.05

組別miRNA-143（pmol/L）CA19-9（U/L）胰腺癌組（n=100）0.44±0.15a b72.19±25.46a b胰腺良性病變組（n=30）0.71±0.1957.33±18.20a健康組（n=30）0.69±0.2017.56±5.11F值44.98272.665P值<0.01<0.01

2.2 血清miRNA-143、CA19- 9單獨及聯(lián)合檢測對胰腺癌的診斷價值

ROC曲線分析結(jié)果顯示，血清miRNA-143聯(lián)合CA19-9檢測診斷胰腺癌的AUC為0.923，靈敏度為82.00%，特異度為90.00%；血清miRNA-143診斷胰腺癌的AUC為0.882，靈敏度為78.00%，特異度為93.33%；血清CA19-9診斷胰腺癌的AUC為0.718，靈敏度為59.00%，特異度為83.33%。其中血清miRNA-143聯(lián)合CA19-9檢測對胰腺癌的診斷價值最高，其次是血清miRNA-143、血清CA19-9。（表2、圖1）

表2 血清miRNA-143、CA19- 9單獨及聯(lián)合檢測對胰腺癌的診斷價值

圖1 血清miRNA-143、CA19- 9單獨及聯(lián)合檢測診斷胰腺癌的ROC曲線

2.3 血清miRNA-143與CA19- 9表達的相關(guān)性

Spearman相關(guān)分析結(jié)果顯示，血清miRNA-143與CA19-9表達無相關(guān)性（r=-0.135，P=0.089）。

2.4 血清miRNA-143、CA19- 9表達與胰腺癌患者預(yù)后的關(guān)系

以ROC曲線獲得的miRNA-143、CA19-9截斷值為界將胰腺癌患者分為低表達組和高表達組，分析miRNA-143、CA19-9與胰腺癌患者預(yù)后的關(guān)系。本研究中100例胰腺癌患者的隨訪資料完整，隨訪時間為3～36個月，根據(jù)血清miRNA-143、CA19-9的截斷值將其分為miRNA-143高表達組（miRNA-143≥0.39 pmol/L，43例）和miRNA-143低表達組（miRNA-143﹤0.39 pmol/L，57例）、CA19-9高表達組（CA19-9≥67.26 U/L，65例）和CA19-9低表達組（CA19-9﹤67.26 U/L，35例）。結(jié)果顯示，miRNA-143低表達組患者的3年生存率為12.30%，低于miRNA-143高表達組患者的27.90%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=6.529，P=0.011）；CA19-9高表達組患者的3年生存率為16.90%，低于CA19-9低表達組患者的31.40%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=4.039，P=0.044）。miRNA-143低表達組患者的中位總生存期為12.07個月（95%CI：8.30～15.70），短于miRNA-143高表達組的 21.09個月（95%CI：14.59～27.41）；CA19-9高表達組患者的中位總生存期為13.27個月（95%CI：8.49～17.51），短于CA19-9低表達組的21.46個月（95%CI：12.89～29.11）。（圖2、圖3）

圖2 miRNA-143低表達組（n=57）和miRNA-143高表達組（n=43）胰腺癌患者的生存曲線

圖3 CA19- 9低表達組（n=35）和CA19- 9高表達組（n=65）胰腺癌患者的生存曲線

3 討論

調(diào)查顯示，由于胰腺癌發(fā)病隱匿、早期診斷率低、解剖位置特殊，其預(yù)后較差，病死率極高，其中80%的患者在首次確診時已處于中晚期，無法采取手術(shù)切除治療，只能采取化療、放療、免疫治療等綜合治療，但患者的生存情況并未得到明顯改善[7-8]。因此，探尋新的腫瘤標(biāo)志物和分子靶點以提高胰腺癌的早期診斷率和治療效果成為臨床研究的熱點。CA19-9是目前最常用的診斷胰腺癌的標(biāo)志物，正常情況下CA19-9在血清中的含量極少，主要以糖蛋白復(fù)合物的形式存在，當(dāng)機體出現(xiàn)某些炎癥反應(yīng)如胰腺炎、胰腺良性占位病變時，CA19-9可過表達，而且在腫瘤患者的血清中，CA19-9水平也會升高[9-10]。miRNA屬于內(nèi)源性非編碼RNA，長度約為22 nt，可通過基因沉默途徑調(diào)控細(xì)胞的增殖、分化、凋亡過程，與腫瘤的發(fā)生發(fā)展有關(guān)[11]。miRNA-143是近年來臨床研究較多的一類抑癌基因，經(jīng)證實其在胰腺癌細(xì)胞中低表達，可能與胰腺癌的發(fā)生發(fā)展有關(guān)，也有研究表明，miRNA-143在胰腺癌組織中的表達量與全身淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移率呈負(fù)相關(guān)[12-13]。因此，本研究將miRNA-143與CA19-9聯(lián)合用于診斷胰腺癌并探討其預(yù)后預(yù)測價值。

本研究結(jié)果顯示，胰腺癌組患者的血清miRNA-143水平低于胰腺良性病變組和健康組，CA19-9水平高于胰腺良性病變組和健康組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P﹤0.05）；胰腺良性病變組和健康組的血清miRNA-143水平比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P﹥0.05）；胰腺良性病變組患者的血清CA19-9水平高于健康組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P﹤0.05）。上述結(jié)果與郭飛波等[6]研究結(jié)果具有一定的相似性，提示miRNA-143可能參與了胰腺癌的發(fā)展。既往研究發(fā)現(xiàn)，原癌基因Kirsten鼠肉瘤病毒癌基因同源物（Kirsten rat sarcoma viral oncogene homolog，KRAS）的激活突變是導(dǎo)致惡性腫瘤（包括胰腺癌）最常見的原因，其激活后可介導(dǎo)磷脂酰肌醇-3-激酶（phosphoinositide 3-kinase，PI3K）及促分裂原活化的蛋白激酶（mitogenactivated protein kinase，MAPK）通路，從而調(diào)控細(xì)胞增殖、遷移及凋亡過程[14-15]。KRAS基因激活后可導(dǎo)致miRNA-143在多種胰腺癌細(xì)胞中表達下調(diào)，說明miRNA-143表達下調(diào)可促進腫瘤的發(fā)展，因此胰腺癌患者血清miRNA-143水平低于胰腺良性病變患者和健康者。黃鶯等[16]研究發(fā)現(xiàn)，miRNA-21聯(lián)合CA19-9檢測對胰腺癌具有較高的診斷價值。本研究通過繪制ROC曲線得出，miRNA-143聯(lián)合CA19-9檢測對胰腺癌的診斷價值最高，提示miRNA-143聯(lián)合CA19-9檢測可提高胰腺癌的診斷準(zhǔn)確性。本研究結(jié)果顯示，miRNA-143診斷胰腺癌的靈敏度與特異度均相對較高，表明miRNA-143與胰腺癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)；而CA19-9診斷胰腺癌的靈敏度與特異度均相對較低。已有研究顯示，在胰腺良性病變中CA19-9也存在過表達[17]。miRNA-143與CA19-9聯(lián)合診斷胰腺癌的靈敏度和特異度均理想，可進一步提高診斷效能。本研究通過Spearman法進行相關(guān)分析，結(jié)果顯示，血清miRNA-143與CA19-9表達無相關(guān)性，與羅杰[18]的研究結(jié)果具有一定的相似性。

研究顯示，通過構(gòu)建miRNA模型能夠預(yù)測胰腺癌患者的生存情況[19]。本研究結(jié)果顯示，miRNA-143低表達組患者的3年生存率低于miRNA-143高表達組，CA19-9高表達組患者的3年生存率低于CA19-9低表達組，提示miRNA-143和CA19-9可作為胰腺癌的預(yù)后預(yù)測指標(biāo)。然而本研究仍存在不足，納入的病例數(shù)相對較少，未來需加大樣本量進一步證實。

綜上所述，miRNA-143聯(lián)合CA19-9檢測對胰腺癌具有較高的診斷價值，而且miRNA-143和CA19-9可作為胰腺癌的預(yù)后預(yù)測指標(biāo)。