熊蕓雲(yún)，周艷寧，謝昌材，周 凱，虞道銳

（1.海南醫(yī)學(xué)院第一臨床學(xué)院，2.海南醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)與生命科學(xué)學(xué)院，海南 ?？?571199）

社會(huì)生活與經(jīng)濟(jì)水平的提高，人口老齡化的日益增加，衰老后帶來(lái)了許多疾病是現(xiàn)代社會(huì)醫(yī)學(xué)所重點(diǎn)關(guān)注的問(wèn)題，至此，當(dāng)代科學(xué)界的熱門研究問(wèn)題之一是探索新的有效抗衰老藥物來(lái)提高老年人的生活水平［1］。衰老是機(jī)體隨著增齡各種器官功能的普遍削弱而發(fā)生退行性改變，其中涉及了多因素、多器官等復(fù)雜過(guò)程，它具有慢性的不可逆性特性，導(dǎo)致衰老的主要原因是自由基的產(chǎn)生，氧自由基代謝失衡［2，3］。腦作為人體重要器官，受衰老的影響也非常大，表現(xiàn)為免疫力下降和壽命縮短以及學(xué)習(xí)記憶能力下降等［4］。雖然目前研究衰老的報(bào)道較多，但對(duì)于延緩衰老的機(jī)制尚未清楚，亦缺乏有效延緩的藥物，因此探討衰老機(jī)理及研發(fā)有效延緩衰老的藥物，從而改善老年人的生活質(zhì)量具有重要意義［5-7］。

D-半乳糖常用于構(gòu)建衰老動(dòng)物模型，其效應(yīng)已經(jīng)得到了國(guó)內(nèi)外研究者的認(rèn)可，并且D-半乳糖已大范圍應(yīng)用于抗衰老藥物研究［8］。有文獻(xiàn)表明［9］D-半乳糖誘導(dǎo)的衰老模型的程度與16～24 個(gè)月大的正常小鼠相似，并且這些變化與自然衰老相一致。番木瓜（Carica papaya）屬番木瓜科又稱木瓜［10］。主要分布在熱帶、亞熱帶［11］。目前有研究表明，番木瓜具有很多生物活性，包括抑菌、抗氧化抗炎、抗菌、抗癌、鎮(zhèn)痛等［12-14］。最新研究發(fā)現(xiàn)番木瓜具有抗氧化性、能有效地清除自由基等多種生物活性［15］。然而針對(duì)海南番木瓜能否延緩衰老的研究進(jìn)度較為落后，且具體延緩機(jī)制尚未明了。因此，本實(shí)驗(yàn)以亞急性衰老小鼠模型探索海南番木瓜提取物的抗衰老作用，為海南番木瓜在抗衰老方面提供實(shí)驗(yàn)支持。

1 材料與方法

1.1 主要試劑、藥物及儀器

吡拉西坦，批號(hào)：190705，購(gòu)自廣東華南藥業(yè)集團(tuán)有限公司；D-半乳糖，批號(hào)：G0625，購(gòu)自Sigma 公司；海南番木瓜提取物，由海南醫(yī)學(xué)院生藥學(xué)教研室提供；用0.9%的NaCl 溶液配置成400、200、100 mg/kg 的藥液。3 個(gè)劑量組的劑量按市售木瓜粉中人體服用劑量2 倍量遞增；［超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）、過(guò) 氧 化 氫 酶（catalase，CAT），批號(hào)：20180118；一氧化氮合酶（nitric oxide synthase，NOS）批號(hào)：20180432、丙二醛（malondialdehyde，MDA）批號(hào)：20180275］試劑盒，均購(gòu)自南京建成生物工程研究所；anti-核因子-E2-相關(guān)因子（nuclear factor erythroid-derived factor 2-related fac-tor，Nrf2），批號(hào)：ab137550，購(gòu)自Abcam 公司；Morris 水迷宮裝置，購(gòu)自成都泰盟科技有限公司。生物素化羊抗 兔IgG（1∶500），購(gòu) 自Sigma 公司；Mini-PROTEAN Tetra 垂直電泳轉(zhuǎn)印系統(tǒng)，購(gòu)自Bio-Rad 公 司；Western Blot 自 動(dòng) 分 析 儀，購(gòu) 自proteinsimple 公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

實(shí)驗(yàn)小鼠72 只，體重18～25 g，昆明種清潔級(jí)，長(zhǎng)沙天勤生物技術(shù)有限公司購(gòu)置，各組小鼠均室溫分籠喂養(yǎng)，并讓其自由飲水進(jìn)食。本實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究參海南醫(yī)學(xué)院倫理委員會(huì)的標(biāo)準(zhǔn)，遵循“3R”實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)原則，在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中盡可能給動(dòng)物在舒適的環(huán)境中完成，規(guī)范操作實(shí)驗(yàn)步驟以減輕實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的痛苦，實(shí)驗(yàn)結(jié)束后動(dòng)物以安樂(lè)死的方法處死，最后委托學(xué)校動(dòng)物管理中心處理所有動(dòng)物尸體。動(dòng)物合格證號(hào)：SCXK（湘）2014-001。

1.3 動(dòng)物模型的制備及給藥

室溫下，讓小鼠自由飲水、攝食，適應(yīng)性喂養(yǎng)1周，再通過(guò)水迷宮試驗(yàn)［16］先訓(xùn)練后篩選認(rèn)知功能正常的72 只小鼠作為正式實(shí)驗(yàn)。再將其隨機(jī)分成陽(yáng)性對(duì)照組、陰性對(duì)照組、模型組和海南番木瓜提取物高、中、低劑量組，每組12 只小鼠。海南番木瓜提取物高、中、低劑量組（400、200、100 mg/kg）和陽(yáng)性對(duì)照組（600 mg/kg）的小鼠灌胃給藥；其余兩組灌胃等劑量的0.9%NaCl。同時(shí)，陰性對(duì)照組腹腔 注 射 給0.9%NaCl 100 mg·kg-1·d-1，其 余 各 組 通過(guò)腹腔注射給藥2%D-半乳糖140 mg/kg。用此方法連續(xù)給藥進(jìn)行7 周，每周將進(jìn)行一次稱重，根據(jù)體重調(diào)整其用藥量，7 周后進(jìn)行后續(xù)試驗(yàn)。

1.4 Morris 水迷宮試驗(yàn)

第7 周后小鼠進(jìn)行2 d 適應(yīng)性訓(xùn)練，訓(xùn)練內(nèi)容為將小鼠放置于終點(diǎn)旁水域，小鼠自行找到平臺(tái)并爬上臺(tái)階2 次為準(zhǔn)，第3 天開(kāi)始測(cè)試，數(shù)據(jù)作為記憶成績(jī)。各組小鼠分上、下午兩個(gè)時(shí)間段，大池平均分4 個(gè)象征限并標(biāo)記，將小鼠面向水池壁，且從4 個(gè)不同的標(biāo)記點(diǎn)放入水，同時(shí)記錄其游泳距離、逃避潛伏期，以90 s 內(nèi)找到平臺(tái)為準(zhǔn)，若超過(guò)90 s 未找到平臺(tái)，測(cè)試者再引導(dǎo)小鼠休息在平臺(tái)后撤出水池，以90 s 作為其潛伏期。重復(fù)實(shí)驗(yàn)間隔不少于30 min，連續(xù)實(shí)驗(yàn)4 d 后撤除平臺(tái)，接著在任意1 個(gè)入水點(diǎn)再讓小鼠面向池壁入水，記錄其游泳時(shí)間［17］。

1.5 小鼠腦組織HE 組織形態(tài)學(xué)變化

小鼠經(jīng)Morris 水迷宮實(shí)驗(yàn)后，頸椎脫臼處死后取其大腦，腦組織表面少量的血液用冰0.9%NaCl水溶液洗凈、濾紙吸干，取出海馬組織，將海馬組織對(duì)半切為兩片，將一半海馬組織放置于冷凍柜中-80 ℃保存，以備后期Nrf2 蛋白表達(dá)測(cè)定的使用；另一半則4%甲醛固定，HE 染色觀察腦組織形態(tài)學(xué)變化。剩下的腦組織放置于冷凍柜-20℃保存，用于腦組織SOD、CAT、NOS、MDA 的含量檢測(cè)。

1.6 小鼠腦組織中SOD、NOS、MDA、CAT 的含量檢測(cè)

將4 ℃0.9%NaCl 溶液加入事先取材保存的小鼠腦組織，以腦重量體積比1∶9 的量置于勻漿管中勻成漿狀，放入低溫離心機(jī)中，調(diào)至4 ℃，離心15 min（轉(zhuǎn)速：3 000 r/min），離心結(jié)束后，取出上清液，按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行下一步操作，測(cè)其SOD、NOS、MDA、CAT 各自的含量。

1.7 各組小鼠海馬組織Nrf2 蛋白表達(dá)測(cè)定

將保存于-80℃冰箱的另一半海馬組織取出后將其剪碎，并按要求將其與RIPA 裂解液、PMSF蛋白酶抑制劑混合研磨并制成勻漿，低溫裂解30 min 左右，下一步離心40 min（轉(zhuǎn)速：12 000 r/min），取其上清液蛋白定量，將計(jì)算好的上樣量與緩沖液混合、搖勻，100 ℃水煮10 min。上樣40 μg 的蛋白樣品進(jìn)行電泳分離，然后轉(zhuǎn)膜封閉1 h，并在4 ℃冰箱中一抗孵育過(guò)夜，第2 天二抗37 ℃孵育1 h 于ECL 發(fā)光液中顯色，結(jié)束后進(jìn)行曝光和拍照，此處利用凝膠圖像處理系統(tǒng)處理，最后分析并與內(nèi)參條帶比較灰度值。

1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS23.0 軟件包將本次實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理；計(jì)量資料的表示采用（±s）；組間差異的比較采用方差分析；兩兩比較用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，P＜0.05 為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 一般狀況觀察

給藥第15 天開(kāi)始，對(duì)比模型組和對(duì)照組，小鼠的毛色枯黃、無(wú)光澤并伴有脫毛，且出現(xiàn)行動(dòng)遲緩、精神萎靡、攝食明顯變小等行為。而第28 天后，海南番木瓜提取物高、中、低各劑量組才出現(xiàn)脫毛現(xiàn)象，但第42 天后脫毛量逐漸減少，且毛色、光澤等方面有很大的改善。

2.2 海南番木瓜提取物對(duì)衰老模型小鼠Morris 水迷宮游泳時(shí)間的影響

第1 天水迷宮實(shí)驗(yàn)中，各組間的游泳時(shí)間比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。從第3 天起，模型組小鼠的游泳時(shí)間明顯長(zhǎng)于陰性對(duì)照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。而海南番木瓜提取物各劑量組與模型組比較，游泳時(shí)間均隨著實(shí)驗(yàn)時(shí)間的增加而呈劑量依賴性縮短趨勢(shì)，第4 天時(shí)，海南番木瓜提取物各劑量組比模型組游泳時(shí)間明顯減少，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與模型組比較，吡拉西坦組游泳時(shí)間明顯減少，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），但高于高劑量組，提示海南番木瓜提取物在一定范圍內(nèi)提高記憶能力優(yōu)于吡拉西坦，見(jiàn)表1。

表1 海南番木瓜提取物對(duì)衰老模型小鼠水迷宮游泳時(shí)間的變化（s，n=12，±s）Tab 1 Effects of hainan papaya extract on swimming time in water maze in aging mice（s，n=12，±s）

表1 海南番木瓜提取物對(duì)衰老模型小鼠水迷宮游泳時(shí)間的變化（s，n=12，±s）Tab 1 Effects of hainan papaya extract on swimming time in water maze in aging mice（s，n=12，±s）

注：與陰性對(duì)照組比較，#P＜0.05，##P＜0.01；與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。

組別劑量(mg/kg)游泳時(shí)間第3 天67.31±2.21 79.81±2.29#61.16±3.56*71.36±3.08 59.46±4.35*53.22±4.36*第4 天48.83±2.29 75.72±4.69##39.78±3.07**58.48±4.67*48.19±3.60*35.71±4.78**第2 天72.25±2.42 89.23±3.38 76.42±3.28 75.52±3.82 74.83±3.89 59.29±3.49*陰性對(duì)照組模型組吡拉西坦組海南番木瓜提取物組海南番木瓜提取物組海南番木瓜提取物組--600 100 200 400第1 天83.31±2.34 92.88±3.19 85.16±3.50 88.24±2.94 86.52±3.23 81.67±2.86

2.3 海南番木瓜提取物對(duì)衰老模型小鼠Morris 水迷宮游泳距離的影響

第1 天水迷宮實(shí)驗(yàn)中，各組游泳距離比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。從第2 天起，模型組游泳距離明顯長(zhǎng)于陰性對(duì)照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。與模型組比較，各海南番木瓜提取物各劑量組的游泳距離均隨著實(shí)驗(yàn)時(shí)間的延長(zhǎng)而呈劑量依賴性下降趨勢(shì)，海南番木瓜提取物高劑量組游泳距離縮短最明顯，第4 天時(shí)，海南番木瓜提取物中、高劑量組游泳距離明顯短于模型組游泳距離，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；吡拉西坦組也明顯縮短，但略高于高劑量組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見(jiàn)表2。

表2 海南番木瓜提取物對(duì)衰老模型小鼠水迷宮試驗(yàn)游泳距離的變化（m，n=12，±s）Tab 2 Effects of hainan papaya extract on swimming distance of aging model mice in water maze test（m，n=12，±s）

表2 海南番木瓜提取物對(duì)衰老模型小鼠水迷宮試驗(yàn)游泳距離的變化（m，n=12，±s）Tab 2 Effects of hainan papaya extract on swimming distance of aging model mice in water maze test（m，n=12，±s）

注：與陰性對(duì)照組比較，#P＜0.05，##P＜0.01；與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。

組別劑量(mg/kg)游泳距離第3 天7.80±1.48 18.81±3.22##11.24±5.38*17.24±5.36 13.24±4.98*8.73±2.87**第4 天6.56±1.43 16.70±3.41##7.67±7.15**17.37±7.45 9.39±4.01*7.11±1.91**第2 天14.71±3.02 20.94±3.54#15.17±4.40 19.82±4.75 16.62±6.60 12.86±5.15*陰性對(duì)照組模型組吡拉西坦組海南番木瓜提取物組海南番木瓜提取物組海南番木瓜提取物組--600 100 200 400第1 天19.53±2.85 22.36±4.87 20.34±4.27 20.58±5.12 19.65±3.90 18.58±4.46

2.4 小鼠腦組織中SOD、NOS、CAT、MDA 的含量變化

與陰性對(duì)照組比較，模型組SOD、NOS 、CAT含量明顯降低，而MDA 含量明顯升高，說(shuō)明模型制備成功。與模型組比較，海南番木瓜提取物各劑量組呈劑量依賴性逆轉(zhuǎn)衰老模型的SOD、NOS 、CAT、MDA 的含量，且隨著劑量增加而效果增強(qiáng)，其中高劑量組效果最強(qiáng)，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），在提升SOD 含量和降低MDA 水平方面優(yōu)于吡拉西坦組，提示海南番木瓜可能通過(guò)調(diào)節(jié)這兩個(gè)活性水平來(lái)提高學(xué)習(xí)記憶能力，見(jiàn)表3。

表3 海南番木瓜提取物對(duì)衰老模型小鼠腦組織中SOD、NOS、CAT、MDA 含量的影響（n=12，±s）Tab 3 Effects of papaya hainanensis extract on SOD，NOS，CAT and MDA contents in brain tissue of aging model mice（n=12，±s）

表3 海南番木瓜提取物對(duì)衰老模型小鼠腦組織中SOD、NOS、CAT、MDA 含量的影響（n=12，±s）Tab 3 Effects of papaya hainanensis extract on SOD，NOS，CAT and MDA contents in brain tissue of aging model mice（n=12，±s）

注：與陰性對(duì)照組比較，#P＜0.05，##P＜0.01；與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。

組別劑量(mg/kg)陰性對(duì)照組SOD(U/mg)119.48±4.39 NOS(U/mg prot)7.84±0.41 CAT(U/mg)15.56±0.87 MDA(nmol/mg)8.36±1.01模型組--84.67±2.78##3.64±0.41##8.53±0.64##16.65±0.62##吡拉西坦組海南番木瓜提取物組海南番木瓜提取物組600 100 200 146.39±3.56**101.61±4.75*109.82±3.89*6.78±0.54*6.12±0.95*7.37±0.43**16.32±0.65**11.38±0.85*12.63±0.64*10.32±0.66**15.81±0.96 13.72±0.83*海南番木瓜提取物組9.97±0.72**400 135.70±4.92**7.48±0.58**14.49±0.55**

2.5 海南番木瓜提取物對(duì)衰老模型小鼠海馬組織形態(tài)的改變

HE 染色結(jié)果中：圖1A（陰性對(duì)照組）中海馬組織可見(jiàn)正常的CA1 區(qū)神經(jīng)細(xì)胞，細(xì)胞間排列整齊；圖1B（模型組）中海馬組織可見(jiàn)CA1 區(qū)神經(jīng)細(xì)胞變性壞死現(xiàn)象明顯，部分細(xì)胞的體積變大、胞漿深染，神經(jīng)元核固縮且軸突消失，細(xì)胞膜核膜界限不夠清晰且細(xì)胞數(shù)量有所減少；圖1C（吡拉西坦組）中海馬組織可見(jiàn)CA1 區(qū)神經(jīng)細(xì)胞的形態(tài)有好轉(zhuǎn)趨勢(shì)；圖1D（海南番木瓜提取物低劑量組）中海馬組織可見(jiàn)CA1 區(qū)神經(jīng)細(xì)胞變性、壞死、數(shù)量減少，但較模型組輕；圖1E、F（海南番木瓜提取物中、高劑量組）中海馬組織CA1 區(qū)神經(jīng)細(xì)胞變性壞死的程度較輕且數(shù)量略減少，細(xì)胞膜核膜界限清晰好多，高劑量組較好，其改善程度有一定的劑量依賴性。提示海南番木瓜提取物可能通過(guò)保護(hù)海馬CA1 區(qū)神經(jīng)細(xì)胞來(lái)延緩衰老和提高記憶。

圖1 海南番木瓜提取物對(duì)D -半乳糖所致衰老模型小鼠海馬組織形態(tài)的影響（HE×400）Fig 1 Effects of hainan papaya extract on hippocampal morphology of d-galactose induced aging mice（HE×400）

2.6 海南番木瓜提取物對(duì)衰老模型小鼠腦組織Nrf2 蛋白表達(dá)的影響

免疫蛋白印跡結(jié)果顯示，與陰性對(duì)照組比較，模型組腦組織中Nrf2 蛋白表達(dá)明顯降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與模型組比較，吡拉西坦組腦組織中Nrf2 蛋白表達(dá)明顯增加（P＜0.01）；而海南番木瓜提取物低、中、高劑量給藥組腦組織中Nrf2 蛋白表達(dá)均呈劑量依賴性趨勢(shì)升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），且上升幅度與陽(yáng)性藥吡拉西坦組持平。見(jiàn)圖2。

圖2 海南番木瓜提取物對(duì)衰老模型小鼠腦組織腦組織Nrf2 蛋白表達(dá)的影響Fig 2 Effects of papaya hainanensis extract on Nrf2 protein expression in brain tissue of aging model mice

3 討論

目前，老齡化現(xiàn)象逐漸加重，衰老及之后帶來(lái)的許多問(wèn)題引起了人們的重視。雖然衰老是一種正常生理現(xiàn)象，但若發(fā)展太快，將使NS 帶來(lái)病理性的如AD、PD 的退行性病變，給患者與其家人造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失［18］。如果長(zhǎng)期攝入D-半乳糖，會(huì)使代謝紊亂，之后再累及到各器官、系統(tǒng)，使其正常功能降低。包括記憶力減退、免疫器官退化，體力明顯不支等癥狀，而體內(nèi)無(wú)形中有自由基的堆積和過(guò)氧化脂質(zhì)、脂褐質(zhì)均增高，細(xì)胞膜脂質(zhì)從而受損，繼而增高體內(nèi)的B 型單胺氧化酶活性等。以上的改變都與高齡小鼠類似。

機(jī)體內(nèi)超氧化物歧化酶的活性在衰老中占主要因素，機(jī)體隨著超氧化物歧化酶活性提升意味著清除自由基的能力會(huì)加強(qiáng)。降解產(chǎn)物丙二醛又是在自由基作用下產(chǎn)生的，細(xì)胞損傷程度隨著MDA含量升高而增大。因此兩者含量的多少，直接影響到機(jī)體衰老，是衡量衰老的重要指標(biāo)。本研究結(jié)果顯示，海南番木瓜提取物各劑量組以一定的趨勢(shì)提高SOD 活性及降低MDA 水平，這表明其有助于增強(qiáng)機(jī)體對(duì)自由基的清除能力而大大減少組織細(xì)胞損傷程度，因此可能通過(guò)其起延緩衰老作用［19，20］。NO 是一種小分子物質(zhì)，有著多種生物活性，不但提高機(jī)體學(xué)習(xí)記憶能力，而且作用于神經(jīng)系統(tǒng)介導(dǎo)神經(jīng)元使氨基酸有興奮性的反應(yīng)［21］。本研究結(jié)果提示，海南番木瓜提取物各劑量呈劑量依賴性提高NOS 的活性，這進(jìn)一步表明海南番木瓜可能通過(guò)升高體內(nèi)NOS 活性，使分解出更多的NO 來(lái)延緩衰老。過(guò)氧化氫酶能清除體內(nèi)的過(guò)氧化氫，阻斷產(chǎn)生的一些自由基反應(yīng)，通過(guò)抑制活性氧的產(chǎn)生并堆積來(lái)保護(hù)身體各臟器由自由基引發(fā)的損傷，從而有抗衰老作用［22］。本研究結(jié)果表明海南番木瓜提取物各劑量組能夠很大程度提高衰老小鼠腦組織中的CAT 的活性，且與吡拉西坦組相當(dāng)。

反應(yīng)神經(jīng)認(rèn)知和治療效果評(píng)估的水迷宮試驗(yàn)是目前常用的實(shí)驗(yàn)手段［23］，本研究結(jié)果顯示，海南番木瓜提取物各劑量小鼠在逃避潛伏期和游泳探索距離方面有明顯的減少，提示海南番木瓜提取物能改善衰老模型小鼠的神經(jīng)認(rèn)知功能障礙。小鼠腦海馬組織形態(tài)學(xué)也進(jìn)一步表明了海南番木瓜提取物高、中、低濃度組都在不同程度上改善神經(jīng)細(xì)胞結(jié)構(gòu)。有研究表明，Nrf2 是抗氧化的因子，其下游的各種抗氧化酶被激活后發(fā)揮抗氧化應(yīng)激損傷，間接延緩衰老［24，25］。本研究結(jié)果提示，海南番木瓜能上調(diào)Nrf2 蛋白表達(dá)的水平，說(shuō)明間接上調(diào)與其相關(guān)的抗氧化酶的含量，來(lái)增加體內(nèi)的抗氧化能力，使其能夠延緩衰老的效果。

本研究通過(guò)海南番木瓜提取物對(duì)D-半乳糖所致衰老模型小鼠的干預(yù)，發(fā)現(xiàn)其具有一定的提高記憶效果，并在一定程度上能改善神經(jīng)認(rèn)知功能和海馬組織的病理改變，其作用機(jī)制可能是有效的提升腦組織中SOD、NOS、CAT 的含量并降低MDA 的水平，進(jìn)而增加Nrf2 蛋白活性以抗氧化作用去改善小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力，為臨床開(kāi)發(fā)用藥提供了依據(jù)。雖然本實(shí)驗(yàn)初步揭示了海南番木瓜提取物在一定程度上能夠延緩小鼠衰老并初步探討了一些其抗衰老的作用機(jī)制，但僅僅對(duì)動(dòng)物體內(nèi)的一些指標(biāo)，且不夠深入、全面的闡釋，往后應(yīng)進(jìn)一步通過(guò)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)以及人體實(shí)驗(yàn)來(lái)完善，綜上，海南番木瓜值得進(jìn)一步研發(fā)。

作者貢獻(xiàn)度說(shuō)明：

熊蕓雲(yún)：調(diào)研整理文獻(xiàn)，設(shè)計(jì)研究方案及論文框架，起草論文；周艷寧、謝昌材、周凱：參與研究，實(shí)施研究過(guò)程，采集整理數(shù)據(jù)，統(tǒng)計(jì)分析；虞道銳：提出研究選題，獲取技術(shù)或材料支持，指導(dǎo)性支持。