智錦錦，王志廣，吳雙杰，李兆杰，薛長湖，唐慶娟

（中國海洋大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院，山東青島 266003）

牡蠣是一種雙殼軟體貝類，產(chǎn)量高居貝類之首[1,2]，其營養(yǎng)豐富，肉質(zhì)鮮美[3]，深受消費(fèi)者青睞。牡蠣具有濾食性攝食特性，能夠富集環(huán)境中大量微生物和其他有害污染物[4]。作為水產(chǎn)品，牡蠣蛋白質(zhì)豐富，含水量較大[3]，加之體內(nèi)容易濾食大量微生物等特點(diǎn)， 使其在儲運(yùn)過程中極易發(fā)生品質(zhì)劣化，導(dǎo)致衛(wèi)生質(zhì)量降低、貨架期較短等問題，給消費(fèi)者的健康帶來巨大隱患[5-7]。隨著生鮮牡蠣的普及與人們安全意識的提升，生食牡蠣的安全問題愈發(fā)成為大眾關(guān)注的焦點(diǎn)。因此目前迫切需要開發(fā)一種新型應(yīng)用技術(shù)，在不影響外觀與營養(yǎng)品質(zhì)的基礎(chǔ)上保證牡蠣的食用安全性。

光敏劑介導(dǎo)的光動力滅菌技術(shù)（photodynamic sterilization technology，PDST），以下簡稱光動力，是一種新型非熱力殺菌技術(shù)，通過光敏劑在特定波長光的激活下生成活性氧物質(zhì)，其具有的強(qiáng)氧化作用可以滅活各種微生物[8]。姜黃素屬于國標(biāo)認(rèn)可的一種安全無毒的食品添加劑[9]，可作為新型光敏劑，在波長420 nm的可見光下具有強(qiáng)烈的吸收峰，光敏性好，廣泛應(yīng)用于殺菌、治療皮膚病和抗腫瘤中[10-12]?，F(xiàn)有報道表明，姜黃素介導(dǎo)的光動力技術(shù)可以在不影響牡蠣營養(yǎng)品質(zhì)的同時，有效殺滅其中的微生物[13-15]，延緩品質(zhì)劣化和延長貨架期[16-18]。為將該技術(shù)在貝類加工中推廣應(yīng)用，需要對光動力處理的牡蠣進(jìn)行安全性評價。

現(xiàn)有研究證實(shí)，單純的姜黃素屬于實(shí)際無毒化合物，未見潛在的遺傳毒性作用和致突變性，無明顯亞慢性毒性[19-21]，且其主要光降解產(chǎn)物香草醛和阿魏酸也不存在毒性作用[22]。本課題組前期從細(xì)胞水平初步證實(shí)光敏化姜黃素和光動力處理后的牡蠣，在實(shí)驗(yàn)條件下不具有明顯毒性作用[23,24]。然而，考慮到體外與體內(nèi)實(shí)驗(yàn)的差異，仍需要對光動力處理牡蠣的食用安全性進(jìn)行進(jìn)一步探究。因此，本文將通過構(gòu)建大鼠和小鼠安全評價模型，開展急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)和28 d經(jīng)口毒性試驗(yàn)評價光動力處理牡蠣的食用安全性，以期為姜黃素介導(dǎo)的光動力技術(shù)在貝類加工中的實(shí)際應(yīng)用提供理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 主要試劑

鮮活太平洋牡蠣（Crassostrea gigas），質(zhì)量為130±10 g，青島市市南區(qū)金海利達(dá)水產(chǎn)營業(yè)部；姜黃素（食品級添加劑，純度＞95%），陜西慈緣生物技術(shù)有限公司；食品級乙醇（純度95%），濟(jì)寧高科工業(yè)水處理化工有限公司；海水素，廣州益爾生物技術(shù)有限公司；葡萄糖試劑盒、白蛋白試劑盒、總膽固醇試劑盒、谷丙轉(zhuǎn)氨酶試劑盒、谷草轉(zhuǎn)氨酶試劑盒、甘油三酯試劑盒、肌酐試劑盒、尿酸試劑盒和尿素氮試劑盒，南京建成生物工程研究所；BCA蛋白濃度測定試劑盒，上海碧云天生物技術(shù)有限公司；AIN93G標(biāo)準(zhǔn)飼料，南通特洛菲飼料科技有限公司；普通棒狀飼料，青島大任富城畜牧有限公司。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)動物

SPF級健康KM小鼠（4周齡，18～22 g）、SPF級健康SD大鼠（4周齡，60～80 g），供應(yīng)商為北京維通利華動物技術(shù)有限公司，動物許可證號SCXK（京）2016-0011。所有動物實(shí)驗(yàn)均得到中國海洋大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院動物倫理委員會批準(zhǔn)，動物飼養(yǎng)環(huán)境溫度23±2 ℃、相對濕度為50%±10%、光照/黑暗周期為12 h。

1.1.3 儀器與設(shè)備

BC-5000Vet全自動血細(xì)胞分析儀，邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司；URIT-500B尿液分析儀，桂林優(yōu)利特醫(yī)療電子有限公司；JL-420-590多功能LED光源儀，青島建亮科技有限公司；NIKON/Ni-E電動熒光顯微鏡，日本尼康公司；SPARK 10M酶標(biāo)儀，帝肯（上海）貿(mào)易有限公司；B E-9008微孔板恒溫震蕩器，上海坤誠科學(xué)儀器有限公司；CP224C電子天平，奧豪斯儀器（上海）有限公司；JYL-C022E九陽料理機(jī)，九陽股份有限公司；Neofuge 13R臺式高速冷凍離心機(jī)，上海力申科學(xué)儀器有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 牡蠣樣品的制備

選取大小均勻的鮮活牡蠣，洗凈外殼后置于鹽度為33 g/L的人工海水中暫養(yǎng)24 h，充分吐沙。將暫養(yǎng)后的牡蠣隨機(jī)分為未光動力處理組（無姜黃素，無光照）和光動力處理組（姜黃素濃度10 μmol/L，有光照），放入人工海水中暫養(yǎng)3 h，貝水質(zhì)量之比為1:5。將各組牡蠣開殼取肉，整個過程盡可能在潔凈弱光條件下進(jìn)行。將光動力組牡蠣于波長420 nm的LED藍(lán)色光源下（光功率密度60 mW/cm2，光源距樣品7.5 cm，光照強(qiáng)度1745 Lux）照射2 min，即光能量密度為7.2 J/cm2。之后，將各組牡蠣肉分別勻漿，真空冷凍干燥48 h。將凍干后的牡蠣置于研缽中研磨成粉末狀（此干粉0.18 g相當(dāng)于牡蠣濕重1 g），并過80目網(wǎng)篩，在避光環(huán)境下密封保存于干燥器備用。灌胃之前，將牡蠣干粉用蒸餾水配置成混懸液，現(xiàn)配現(xiàn)用。

1.2.2 小鼠急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)（限量法）[25]

將牡蠣干粉用蒸餾水配制成一定濃度的混懸液，以12號灌胃針頭連接1 mL注射器筒抽取藥液未見明顯堵塞，且可順暢通過針頭為準(zhǔn)，測得此時牡蠣干粉濃度為0.24 g/mL，設(shè)此濃度為最大給藥濃度。

SPF級健康KM小鼠60只，經(jīng)適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后，將雌雄小鼠各隨機(jī)分為正常組（NC）、光動力組（PDT）和未光動力組（NP），每組20只，雌雄各半。為提高給藥劑量，以小鼠最大灌胃體積、最大灌胃濃度進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)前禁食不禁水12 h后，NC組灌胃蒸餾水，PDT組灌胃光動力處理的牡蠣，NP組灌胃未光動力處理的牡蠣，每次灌胃10 mL/kg·bw，24 h內(nèi)灌胃三次，每次間隔3 h，灌胃總體積為30 mL/kg·bw，總劑量為40 g/kg·bw。灌胃完成后禁食不禁水1 h后恢復(fù)飲食。實(shí)驗(yàn)期間使用標(biāo)準(zhǔn)棒狀動物飼料飼養(yǎng)小鼠。首日三次灌胃后持續(xù)觀察14 d，并記錄實(shí)驗(yàn)過程中小鼠的臨床狀態(tài)、毒性反應(yīng)及死亡情況。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時，摘眼球采血，進(jìn)行血常規(guī)檢查。血常規(guī)檢查指標(biāo)包括白細(xì)胞計(jì)數(shù)（WBC）、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)（RBC）、血紅蛋白濃度（HGB）、血小板計(jì)數(shù)（PLT）、紅細(xì)胞壓積（HCT）、中性粒細(xì)胞百分比（Neu%）、淋巴細(xì)胞百分比（Lym%）、單核細(xì)胞百分比（Mon%）、嗜酸性粒細(xì)胞百分比（Eos%）、嗜堿性粒細(xì)胞百分比（Bas%）。取血后進(jìn)行大體解剖檢查，稱量心、肝、脾和腎的絕對重量，運(yùn)用式（1）計(jì)算臟器指數(shù)；同時進(jìn)行HE染色，分析組織病理變化情況。

1.2.3 28 d經(jīng)口毒性試驗(yàn)[26]

SPF級健康SD大鼠60只，經(jīng)適應(yīng)性喂養(yǎng)4 d后，將雌雄大鼠隨機(jī)分為正常組（NC）、光動力組（PDT）、未光動力組（NP），每組20只，雌雄各半，分別灌胃蒸餾水、光動力處理的牡蠣、未光動力處理的牡蠣，灌胃劑量均為10 g/kg·bw，灌胃體積10 mL/kg·bw（此時牡蠣干粉濃度為0.18 g/mL），每天一次，連續(xù)灌胃28 d。實(shí)驗(yàn)期間各組大鼠食用普通棒狀動物飼料，自由攝食與飲水，每天觀察并記錄大鼠的行為表現(xiàn)、飲食、中毒程度及死亡情況；每3 d稱量一次大鼠體重和攝食量，并及時換算灌胃劑量。實(shí)驗(yàn)?zāi)┢?，對各組大鼠進(jìn)行尿常規(guī)檢查。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時，眼眶采血、分離血清檢測大鼠血清生化指標(biāo)；腹主動脈取全血，測定血常規(guī)指標(biāo)；取心、肝、脾、腎、睪丸和卵巢稱重，計(jì)算臟器指數(shù)；進(jìn)行病理學(xué)檢查，觀察臟器組織結(jié)構(gòu)及細(xì)胞形態(tài)。

1.3 統(tǒng)計(jì)分析

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均以（Mean±SEM）表示，運(yùn)用GraphPad Prism 8.0軟件作制圖，SPSS 22.0軟件統(tǒng)計(jì)分析。用單因素方差分析方法（One-Way ANOVA）分析，同時進(jìn)行LSD組間比較。以p＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果與分析

2.1 急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)

2.1.1 小鼠一般臨床狀態(tài)和LD50

實(shí)驗(yàn)期間，各組小鼠行為表現(xiàn)、自主活動、飲水?dāng)z食、被毛、分泌物等均未見異常，無死亡或任何中毒反應(yīng)癥狀出現(xiàn)。由表1可知，光動力處理牡蠣的LD50＞40 g/kg bw，參照急性毒性分級表[25]，屬于實(shí)際無毒級別。

表1 光動力處理牡蠣對小鼠LD50的影響 Table 1 Effect of photodynamically treated oysters on LD50 of mice

2.1.2 對小鼠體重和食物利用率的影響

2.1.3 對小鼠血常規(guī)的影響

喂養(yǎng)期間，記錄各組小鼠灌胃后14 d的攝食量及體重，計(jì)算食物利用率，計(jì)算方法如公式（4）。如表2所示，與NC組和NP組相比，PDT組雌、雄小鼠體重增量、攝食量以及食物利用率均不存在顯著差異（p＞0.05）。表明光動力處理牡蠣未對小鼠體重和攝食產(chǎn)生不良影響。

表2 光動力處理牡蠣對小鼠食物利用率的影響 Table 2 Effect of photodynamically treated oysters on food utilization rate in mice

血常規(guī)檢測很多指標(biāo)對機(jī)體內(nèi)許多病理改變都有敏感反應(yīng)，可反應(yīng)一些血液學(xué)疾病和機(jī)體組織器官的病變情況，以評估受試物在動物體內(nèi)的毒性[27]。小鼠血常規(guī)檢測結(jié)果如表3所示。PDT組雄性小鼠中性粒細(xì)胞百分比（Neu%）與NC組相比顯著增加，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p＜0.05），但與NP組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p＞0.05），且其百分含量在正常參考范圍內(nèi)（6.5%～50%）。NP組雄性小鼠嗜酸性粒細(xì)胞百分比（Eos%）與NC組相比顯著增加，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p＜0.05），但與PDT組相比沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p＞ 0.05），且其百分含量在正常參考范圍內(nèi)（0～7.5%）。結(jié)合其他檢測指標(biāo)綜合分析認(rèn)為，上述變化不具有毒理學(xué)意義。其余血常規(guī)各項(xiàng)指標(biāo)，包括白細(xì)胞計(jì)數(shù)（WBC）、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)（RBC）、血紅蛋白濃度（HGB）、紅細(xì)胞壓積（HCT）、血小板計(jì)數(shù)（PLT）、淋巴細(xì)胞百分比（Lym%）、單核細(xì)胞百分比（Mon%）、嗜堿性粒細(xì)胞百分比（Bas%），各實(shí)驗(yàn)組之間都不具有顯著性差異（p＞0.05）。綜上，光動力處理牡蠣對小鼠血常規(guī)各項(xiàng)指標(biāo)未產(chǎn)生顯著影響。

表3 光動力處理牡蠣對小鼠血常規(guī)的影響 Table 3 Effect of photodynamically treated oysters on hematological parameters in mice

2.1.4 對小鼠臟器指數(shù)的影響

臟器指數(shù)可在一定程度上體現(xiàn)各臟器的功能強(qiáng)弱和病變情況[28]。表4為各組小鼠的臟器指數(shù)。與NC組和NP組相比，PDT組小鼠的心臟、肝臟、脾臟和腎臟指數(shù)均無顯著性差異（p＞0.05），說明光動力處理牡蠣未對小鼠的主要臟器組織產(chǎn)生不良影響。

表4 光動力處理牡蠣對小鼠臟器指數(shù)的影響 Table 4 Effect of photodynamically treated oysters on organ index of mice

2.1.5 組織病理學(xué)檢查

實(shí)驗(yàn)結(jié)束，先對各組小鼠進(jìn)行大體解剖，檢查心、肝、脾、胃、腸道以及生殖腺等組織器官的外形、顏色及大小，均未見異常改變。之后對各組小鼠的心、肝、脾、腎等主要器官進(jìn)行組織病理學(xué)分析。由圖1可見，NC組和NP組相比，PDT組小鼠的受檢臟器均未觀察到明顯病理變化。

2.2 28 d經(jīng)口毒性試驗(yàn)

2.2.1 對大鼠生長發(fā)育和食物利用率的影響

中毒癥狀、體重、攝食及飲水等臨床表現(xiàn)可以反應(yīng)動物的生長狀態(tài)[29]，能夠表征受試物對大鼠的大體毒性效應(yīng)。實(shí)驗(yàn)過程中，受試大鼠未見異常體征，無死亡或任何毒性反應(yīng)癥狀出現(xiàn)；與NC組和NP組相比，大鼠攝食飲水、活動狀況等臨床指標(biāo)均無顯著差異。由圖2可知，各組大鼠體重均呈穩(wěn)步增長趨勢，且雄鼠的體重增長速度明顯大于雌鼠。同時，各組大鼠的食物利用率無顯著性差異（p＞0.05），見表5。以上結(jié)果表明大鼠的臨床狀態(tài)良好，光動力處理牡蠣對大鼠的生長發(fā)育和食物利用率未產(chǎn)生不良影響。

表5 光動力處理牡蠣對大鼠食物利用率的影響 Table 5 Effect of photodynamically treated oysters on food utilization rate in rats

2.2.2 對大鼠尿常規(guī)的影響

尿液可以反映機(jī)體代謝情況，尿常規(guī)檢查能夠了解受試動物腎臟代謝、機(jī)體酸堿平衡、營養(yǎng)等生理狀況，作為腎臟和泌尿道疾病的征兆[30]。各組大鼠尿液外觀呈澄清透明狀，未見異常。由表6可知，與NC組和NP組相比，PDT組大鼠尿液相對密度（SG）、pH值、隱血（BLD）、尿蛋白（PRO）、白細(xì)胞（WBC）、葡萄糖（GLU）、亞硝酸鹽（NIT）、尿膽原（URO）、膽紅素（BIL）和維生素C（VC）指標(biāo)均無顯著性差異（p＞0.05）。以上結(jié)果表明，光動力處理牡蠣對大鼠的泌尿系統(tǒng)和腎臟功能未造成不良影響。

表6 光動力處理牡蠣對大鼠尿常規(guī)的影響 Table 6 Effect of photodynamically treated oysters on urine index in rats

2.2.3 對大鼠血常規(guī)的影響

測得大鼠血常規(guī)結(jié)果見表7。與NC組和NP組相比，PDT組大鼠血常規(guī)各項(xiàng)檢測指標(biāo)均未表現(xiàn)出明顯差異（p＞0.05）。上述結(jié)果表明，光動力處理牡蠣對大鼠血液學(xué)未產(chǎn)生不利影響。

表7 光動力處理牡蠣對大鼠血常規(guī)的影響 Table 7 Effect of photodynamically treated oysters on hematological parameters in rats

2.2.4 對大鼠血清生化的影響

血清生化是評估藥物對動物毒性作用的重要指標(biāo)，相關(guān)指標(biāo)不僅能夠檢測靶器官毒性，而且可以預(yù)測毒性即將發(fā)生時的變化[31]。測得大鼠血清生化指標(biāo)結(jié)果見表8。與NC組和NP組相比，PDT組大鼠的葡萄糖（GLU）、總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、總蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、和谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）、肌酐（CRE）、尿酸（UA）和尿素氮（BUN）指標(biāo)沒有顯著差異，不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p＞0.05）。由此說明，光動力處理牡蠣對大鼠的血糖血脂調(diào)節(jié)功能、肝功及腎功等都無明顯損害作用。

表8 光動力處理牡蠣對大鼠血清生化的影響 Table 8 Effect of photodynamically treated oysters on Serum chemistry profile in rats

2.2.5 對大鼠臟器指數(shù)的影響

各組大鼠臟器指數(shù)分析結(jié)果見表9。與NC組和NP組相比，PDT組大鼠的心臟、肝臟、脾臟、腎臟、睪丸和卵巢指數(shù)均無顯著性差異（p＞0.05）。因此，光動力處理牡蠣對大鼠主要的組織器官沒有產(chǎn)生不良影響。

表9 光動力處理牡蠣對大鼠臟器指數(shù)的影響 Table 9 Effect of photodynamically treated oysters on organ index of rats

2.2.6 對大鼠組織病理學(xué)的影響

實(shí)驗(yàn)完成后，對各組大鼠進(jìn)行大體解剖檢查，肉眼觀察胃、心、肝、脾、腸、肺、腎、胸腺、睪丸、卵巢等臟器的外觀形態(tài)，發(fā)現(xiàn)各器官組織形態(tài)正常，未見組織有異常改變。同時，分別對心、肝、脾、腎、睪丸和卵巢進(jìn)行組織病理學(xué)分析，如圖3所示，各臟器組織均未出現(xiàn)異常病變。

3 討論

3.1 目前，光動力技術(shù)在食品領(lǐng)域中多應(yīng)用于殺菌與保鮮，普遍認(rèn)為該技術(shù)是安全無毒的，但對于具體光敏劑介導(dǎo)光動力技術(shù)的毒理學(xué)研究甚少，而安全性是任何新技術(shù)首先考慮的因素。本研究以《食品安全性毒理學(xué)評價程序》（GB 15193.1-2014）為依據(jù)，對姜黃素介導(dǎo)光動力處理的牡蠣開展了急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)以及28 d經(jīng)口毒性試驗(yàn)[32]。姜黃素作為天然著色劑，其添加量應(yīng)符合《食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)》（GB 2760-2014）中的限量標(biāo)準(zhǔn)[33]。本課題組之前的研究表明，光動力組牡蠣的姜黃素富集量為0.152 mg/g牡蠣肉，符合食品中姜黃素添加標(biāo)準(zhǔn)，且姜黃素介導(dǎo)的光動力處理后可以保留牡蠣的外觀和風(fēng)味[15,34]。因此，食品安全應(yīng)用中，理想的光敏劑不僅可以產(chǎn)生較好的殺菌效果，而且要安全無毒和毒副產(chǎn)物低、天然且對感官品質(zhì)無不利影響[35,36]?；谥袊用衿胶馍攀硨毸?019版）中水產(chǎn)品每日推薦攝入量（40～75 g）以及人均日攝入量[37,38]，建立本研究牡蠣灌胃劑量。在急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)中運(yùn)用最大灌胃劑量法，灌胃劑量為40 g/kg·bw，相當(dāng)于成人一天食用192 g牡蠣，可在經(jīng)口接觸情況下，研究受試物短期內(nèi)所產(chǎn)生的健康危害信息，并依此對急性毒性進(jìn)行分級。28 d經(jīng)口毒性試驗(yàn)灌胃劑量為10 g/kg·bw，相當(dāng)于成人每天食用牡蠣96 g，重復(fù)給藥28 d，以期觀察連續(xù)接觸受試物后產(chǎn)生的毒性效應(yīng)，了解受試物劑量-反應(yīng)關(guān)系，并確定毒作用靶器官，進(jìn)一步評價光動力處理牡蠣的經(jīng)口安全性。研究結(jié)果表明，在本實(shí)驗(yàn)條件下，NC組、PDT組和NP組之間的攝食量和體重增量基本相同，且實(shí)驗(yàn)期間小鼠和大鼠的體重均保持穩(wěn)定增長，可以初步判斷牡蠣和姜黃素降解產(chǎn)物對實(shí)驗(yàn)動物的攝食及生長發(fā)育無不良影響。在28 d經(jīng)口毒性實(shí)驗(yàn)中，尿常規(guī)、血常規(guī)及血清生化等指標(biāo)結(jié)果證明了大鼠的主要器官特別是代謝排毒器官肝臟和腎臟未受損。上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果均表明姜黃素介導(dǎo)的光動力處理牡蠣是安全無毒的。這一方面是因?yàn)榻S素本身無毒，同時也說明牡蠣富集姜黃素以及光降解過程中均未產(chǎn)生其他明顯有毒物質(zhì)。

3.2 值得注意的是，相對于其他檢測指標(biāo)，急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)中PDT組雄性小鼠的中性粒細(xì)胞百分比（Neu%）與NC組相比顯著增高，但是由于同組雌性小鼠增加不明顯，且在28 d經(jīng)口毒性試驗(yàn)中該變化趨勢也不適用，因此認(rèn)為不具有毒理學(xué)意義。另外一組具有顯著性差異的參數(shù)是嗜酸性粒細(xì)胞百分比（Eos%），急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)中NP組雄性小鼠與NC組相比顯著增加，PDT組介于NP組和NC組之間。在其他試驗(yàn)組中雖然無顯著性差異，但是都有相同的規(guī)律。推測這可能是因?yàn)樵趦龈商幚磉^程中寄生蟲卵未被完全殺死導(dǎo)致部分小鼠感染寄生蟲，而姜黃素對寄生蟲有一定的殺滅作用[39]，因此PDT組嗜酸性粒細(xì)胞百分比相對NP組有所降低。但由于各組嗜酸性粒細(xì)胞百分比的值都在參考范圍內(nèi)（0～7.5%），產(chǎn)生該現(xiàn)象的原因還需要進(jìn)一步探討。

4 結(jié)論

綜上所述，在實(shí)驗(yàn)劑量范圍內(nèi)，本文初步證實(shí)了姜黃素介導(dǎo)的光動力處理牡蠣不具有急性毒性和亞急性毒性作用，具有較高的食用安全性，為該技術(shù)在貝類加工中的推廣應(yīng)用提供更為全面的科學(xué)依據(jù)。然而，本研究只是對姜黃素介導(dǎo)光動力處理牡蠣的動物毒性進(jìn)行了初探，后續(xù)尚需要開展遺傳毒性、亞慢性、生殖毒性乃至人體實(shí)驗(yàn)探究其食用安全性。另外，本文使用的光動力殺菌技術(shù)，其光敏劑、光源以及光照強(qiáng)度均基于課題組的前期研究進(jìn)行設(shè)計(jì)。在光動力技術(shù)實(shí)際研究與應(yīng)用中，為達(dá)到最佳的殺菌效果，往往會選擇不同的光敏劑、穿透力強(qiáng)的光源或光照強(qiáng)度等，這些因素的改變是否會導(dǎo)致毒性作用的變化，仍需進(jìn)一步探究。