隨韶璞，張海濤，朱廣琴

（徐州生物工程職業(yè)技術(shù)學院，江蘇 徐州 221000）

產(chǎn)氣莢膜梭菌（Clostridium perfringens）是一種厭氧性的革蘭氏陽性細菌，因具有莢膜而得名[1]。它作為一種重要的人獸共患病原菌，廣泛存在于動物的食物和糞便、天然水體及土壤中，能引發(fā)人和動物食物中毒、氣性壞疽、壞死性腸炎等多種疾病[2]。正常情況下產(chǎn)氣莢膜梭菌不致病，但在不利條件下，如養(yǎng)殖環(huán)境差、管理不良、飼料突然改變或搭配不當?shù)?，容易造成畜禽消化系統(tǒng)功能紊亂，有益菌群減少，產(chǎn)氣莢膜梭菌數(shù)量增加，繼而產(chǎn)生毒素引發(fā)疾病[3]。產(chǎn)氣莢膜梭菌外毒素種類較多，但以4種外毒素最為主要，分別是α、β、ε和ι，據(jù)此可將產(chǎn)氣莢膜梭菌分為5種毒素型，分別是A型、B型、C型、D型、E型[4]。近年來，隨著人們對梭菌毒素的深入研究，發(fā)現(xiàn)產(chǎn)氣莢膜梭菌至少還存在另外14種毒素，其中β2（cpb2）和腸毒素（cpe）與人和動物疾病有著密切關(guān)系[5-7]。羊腸毒血癥是由D型產(chǎn)氣莢膜梭菌引發(fā)的一種急性、非接觸性、傳染性疾病[8]，死亡率高，且起病急，羊發(fā)病后具體癥狀為：糞便呈黏性黃褐色，病羊站立不穩(wěn)、低頭拱背等。一旦羊群發(fā)病，會給養(yǎng)羊業(yè)造成極大的經(jīng)濟損失[9]。養(yǎng)殖人員須及時做好防控措施，杜絕羊腸毒血癥的蔓延和肆虐，從而保障經(jīng)濟效益。

1 發(fā)病情況

2021年10月徐州市某養(yǎng)殖場山羊發(fā)病，病羊消瘦，發(fā)病2～3 d后拉稀，呼吸困難，繼而死亡。

2 臨床癥狀

羔羊3～15日齡拉黃色黏性糞便，呼吸困難，精神萎靡，體溫略高（38～39 ℃）。20日齡開始表現(xiàn)為四肢軟弱無力，站立不起，消瘦。

3 剖檢結(jié)果

病羊剖檢可見腸鼓氣，腸黏膜脫落，十二指腸和空腸段呈現(xiàn)不同程度的出血；腎臟腫大且質(zhì)脆。死亡較長時間的病羊腎臟切開之后，皮質(zhì)部質(zhì)地較軟，呈軟泥狀，髓質(zhì)部較皮質(zhì)部稍堅實；肺淤血、水腫，呈深紅色；胃內(nèi)充滿大量未消化飼料。

4 病理組織學檢查結(jié)果

取病變明顯的腸、腎臟、肺臟、肝臟、心臟和脾臟等組織制作石蠟切片染色，進行病理組織學檢查。結(jié)果可見小腸黏膜上皮呈現(xiàn)大量的壞死脫落，黏膜下層出現(xiàn)水腫、疏松，固有層小血管擴張充血，大量淋巴細胞浸潤（圖1）。腎臟髓質(zhì)部小血管擴張充血、出血。腎臟腎小管上皮細胞嚴重變性、壞死（圖2），部分腎小管上皮細胞發(fā)生脂肪變性（圖3）。肺臟肺泡腔內(nèi)可見水腫液以及少量淋巴細胞、嗜中性白細胞和巨噬細胞等炎性細胞浸潤（圖4），局部肺泡內(nèi)存在脫落的肺泡上皮細胞和大量紅細胞。肝臟肝血竇擴張，含有程度不等的紅細胞，部分肝細胞發(fā)生輕度脂肪變性（圖5），匯管區(qū)部位的肝細胞壞死，形成了大小不等的凝固性死灶，并有淋巴細胞浸潤。心內(nèi)膜下心肌纖維發(fā)生渾濁腫脹，胞漿淡染，心肌細胞顆粒變性（圖6）。心肌纖維之間組織結(jié)構(gòu)疏松，水腫（圖7）。脾臟內(nèi)彌散性分布大量紅細胞，脾小體結(jié)構(gòu)消失，淋巴細胞數(shù)量減少（圖8）。

圖1 小腸黏膜大量淋巴細胞浸潤

圖2 腎小管上皮細胞嚴重變性

圖3 腎小管上皮細胞發(fā)生脂肪變性

圖4 肺泡腔內(nèi)炎性細胞浸潤

圖5 肝細胞輕度脂肪變性

圖6 心肌細胞顆粒變性

圖7 心肌纖維間組織結(jié)構(gòu)疏松

圖8 脾臟內(nèi)淋巴細胞數(shù)量減少

5 討論

診斷山羊產(chǎn)氣莢膜梭菌病的方法多樣，包括涂片、厭氧菌培養(yǎng)、免疫學ELISA法、單克隆抗體法、基因芯片法等，其中，涂片法操作簡單，但特異性和敏感性均不高，如果僅靠涂片有可能引起誤診；厭氧菌培養(yǎng)準確性較高，但花費時間較長，并且容易受到其他因素的影響，比如操作不當會造成假陰性結(jié)果[10-11]。免疫學ELISA方法需要酶標儀等特殊設備，不僅敏感性和特異性不高，且非特異反應容易影響結(jié)果，因此使用限制極大[12]。單克隆抗體法的特異性雖高，但敏感性較低[13]?；蛐酒瑱z測可靠性雖強，但價格昂貴，且關(guān)于產(chǎn)氣莢膜梭菌的芯片也較少，因此該方法尚不能普及[13-14]。由此看來，在實際生產(chǎn)中，采用病理組織學檢查結(jié)合涂片顯微鏡觀察法診斷山羊產(chǎn)氣莢膜梭菌病是一種較為可靠的方法。

近年來，由產(chǎn)氣莢膜梭菌引起的腸毒血癥在世界各地蔓延，呈全球流行態(tài)勢，給各國畜禽養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展帶來嚴重危害[15]。產(chǎn)氣莢膜梭菌毒素耐酸不耐熱，且易被胰蛋白酶和胃蛋白酶分解，由于母畜分泌的初乳有對胰蛋白酶起到抑制作用的成分，所以幼齡動物比成年動物更易染病。研究發(fā)現(xiàn)，綿羊較容易被產(chǎn)氣莢膜梭菌感染，特別是2～12月齡且膘情良好的羊只，而山羊被感染報道較少。羊只染病具有季節(jié)性，以夏秋兩季高發(fā)[16]。D型產(chǎn)氣莢膜梭菌可引發(fā)羊腸毒血癥，又稱為軟腎病或類快疫，病變腎臟腫大、出血，質(zhì)地變軟，呈現(xiàn)典型的“軟腎”癥狀[17-18]，和本病例出現(xiàn)癥狀一致。研究顯示，本病的另一特征性病變是腸胃內(nèi)充滿氣體和液體內(nèi)容物，十二指腸內(nèi)存在出血點，且腸黏膜充血、出血或潰瘍，導致腸壁呈現(xiàn)紅色，因此俗稱“紅腸子”[19]，解剖發(fā)現(xiàn)死亡山羊也有此特點。感染產(chǎn)氣莢膜梭菌β毒素的動物主要病變部位是空腸，而十二指腸常無明顯變化。家畜空腸感染產(chǎn)氣莢膜梭菌β毒素后，表現(xiàn)空腸黏膜出血性壞死，腸壁變薄，進而引發(fā)腸壁破裂和腸穿孔，空腸近端常伴有出血灶，以及黏膜壞死，被感染空腸常在微細血管內(nèi)發(fā)現(xiàn)血栓，這可能是因為十二指腸中含有較高水平的胰蛋白酶，胰蛋白酶受到胰蛋白酶抑制劑抑制，對毒素的分解作用減弱，進而增加了壞死性腸炎的發(fā)病概率[20]。上述各臟器的病理變化與本病例中觀察到的基本一致，因此可以確定病羊感染由產(chǎn)氣莢膜梭菌引起的羊腸毒血癥。本次剖檢結(jié)果顯示，病羊腎臟切開后，沒有灰白色漿液流出，組織也沒有發(fā)生嚴重氣腫。此外，本病例中存在一些不同的病變，病羊的心肌表現(xiàn)為不同程度的變軟，還發(fā)現(xiàn)2只病羊的腿肌變?yōu)榛野咨?。此外該養(yǎng)殖場飼養(yǎng)員曾診斷病羊為硒中毒，但經(jīng)檢測硒濃度，未發(fā)現(xiàn)硒超標，并且產(chǎn)氣莢膜梭菌感染不會引起腿肌“白肌病”癥狀，因此腿肌的這種變化是否存在其他感染或應激還有待進一步研究。

6 防治措施

6.1 提高飼養(yǎng)管理水平

飼喂優(yōu)質(zhì)飼料，滿足羊的營養(yǎng)需要。羊舍應建于地勢相對較高的位置，以利于保持干燥。嚴禁霜草地帶放牧，飼料保持多樣化，合理搭配，以保證羊只的營養(yǎng)需要，提高羊只的抵抗力。控制飼料中蛋白質(zhì)的含量，不能過高也不能過低[21]。

6.2 加強環(huán)境衛(wèi)生消毒

勤打掃羊舍，保持干燥、清潔，注意通風，以防因圏內(nèi)NH3等氣體濃度過高，導致羊只抵抗力下降，從而誘發(fā)羊只梭菌病[22]。注意提高羊舍環(huán)境水平，養(yǎng)殖設施應定期殺菌消毒，杜絕有害病原菌的傳播，降低羊群發(fā)病率。一旦發(fā)現(xiàn)患病羊只，應及時隔離，避免疾病大面積傳播[9,23]。

6.3 預防免疫

根據(jù)所在地區(qū)該病的發(fā)生規(guī)律、流行特點和疫苗的免疫特性，制定符合本羊場的免疫程序，在每年春、秋兩季給羊只接種“羊快疫、猝狙、腸毒血癥、羔羊痢疾”四聯(lián)菌苗[24-25]。