趙云堂，李慶華，夏桂林

（1.云南省麗江市永勝縣六德鄉(xiāng)農(nóng)業(yè)綜合服務(wù)中心，云南 永勝 674213；2.云南省麗江市動物疫病預(yù)防控制中心，云南 麗江 674100；3.云南省麗江市永勝縣動物疫病預(yù)防控制中心，云南 永勝 674200）

他留烏骨雞主產(chǎn)于麗江市永勝縣，中心產(chǎn)區(qū)為永勝縣六德傈僳族彝族鄉(xiāng)，2010年1月15日，他留烏骨雞被列入國家畜禽遺傳資源名錄，2011年錄入《中國畜禽遺傳資源志·家禽志》，屬肉蛋兼用型品種。2014年起永勝縣開展了他留烏骨雞保種基地建設(shè)，在六德鄉(xiāng)建設(shè)了保種場，保種場在新城疫和高致病性禽流感的防控工作中雖然按照縣動物疫病預(yù)防控制中心提供的免疫程序開展預(yù)防免疫，但由于防控不當，死雞、淘汰雞現(xiàn)象普遍，制訂適合保種場的免疫程序已刻不容緩。因此，2016年4～8月我們在六德鄉(xiāng)他留文化產(chǎn)業(yè)公司保種場開展了雞新城疫和高致病性禽流感H9抗體檢測。

1 材料與方法

1.1 試驗地點及動物選擇試驗地點在六德鄉(xiāng)他留文化產(chǎn)業(yè)公司保種場，該場位于云南省麗江市永勝縣六德鄉(xiāng)營山村委會，雞場位于遠離村莊的荒山中，距主干公路5km，占地面積240畝，衛(wèi)生防疫制度，飼養(yǎng)管理制度建全，執(zhí)行良好，試驗開始時存欄他留烏骨雞28000羽。

試驗動物選擇該場2016年4月10日孵化出殼的2000羽他留烏骨雞。按如下免疫程序接種（見表1）。

表1 他留烏骨雞種保種場現(xiàn)行免疫程序

1.2 試驗材料雞新城疫病毒血凝抑制試驗（HI）抗原、陽性血清購自青島易幫生物工程有限公司，批號2016002；禽流感病毒H9亞型血凝抑制試驗（HI）抗原、陽性血清購自哈爾濱維科生物技術(shù)開發(fā)公司，批號2016003。

1.3 試驗方法及檢測標準對2016年4月10日剛出殼的雛雞中隨機選擇200羽單獨飼養(yǎng)組成試驗組，在1、5、10、15、21、28、35、42、56、64、91、120、180日齡隨機抽取32羽從翅靜脈采血，分離血清后冷凍，送縣動物疫病預(yù)防控制中心，采用血凝（HA）與血凝抑制試驗（HI）分別開展新城疫抗體檢測和高致病性禽流感H9抗體檢測。檢測標準分別為新城疫診斷技術(shù)GB/T16550-2008和高致病性禽流感診斷技術(shù)GB/T18936-2003。

1.4 試驗數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析在檢測結(jié)果中去掉一個最大值和一個最小值，要求最大值和最小值差≥3時方可進行最大差異化處理，試驗數(shù)據(jù)采用EXCEL進行分析，結(jié)果用平均值±標準差表示。

2 結(jié)果與分析

在雞場實施現(xiàn)行免疫程序情況下，不同日齡雞新城疫和禽流感H9抗體監(jiān)測結(jié)果（見表2）。

表2 他留烏骨雞種保種場雞新城疫、禽流感H9抗體檢測結(jié)果

2.1 不同日齡雞新城疫抗體監(jiān)測結(jié)果監(jiān)測結(jié)果表明：在雛雞階段（1～28日齡）1日齡為6.12log2、5日齡為6.69log2、10日齡為5.66log2、15日齡為4.97log2、21日齡為4.69log2，說明該批他留烏骨雞1～7日齡雞新城疫母源抗體較高，保種場母雞群雞新城疫免疫效果好。但7日齡以后至21日齡雞新城疫抗體均為下降趨勢，證實7日齡免疫后沒有產(chǎn)生足夠的抗體，分析原因7日齡使用新支二聯(lián)苗滴鼻或滴眼免疫是通過黏膜免疫而起作用，但體液內(nèi)的抗體檢測效果卻不好；另外，新支+禽流感H9+法氏囊病油苗免疫后抗體產(chǎn)生緩慢，有較長時間的空白期。21日齡使用雞新城疫活疫苗免疫7d后抗體隨即上升，并能長時間維持較高水平，此后，使用聯(lián)苗點眼也能保持較高水平，這可能得益于7日齡免疫時細胞產(chǎn)生的記憶作用。對1～180日齡雞新城疫抗體檢測結(jié)果表明：21日齡進行雞新城疫加強免疫是必須的。

2.2 不同日齡雞禽流感H9抗體檢測結(jié)果檢測結(jié)果表明：1日齡出殼雞禽流感H9抗體最高為7.75log2，5日齡為7.71log2，此后至35日齡禽流感H9抗體一直處于下降階段，7日齡使用新支+禽流感H9+法氏囊病油苗免疫基本沒有產(chǎn)生免疫應(yīng)答，35日齡使用新城疫+禽流感H9二聯(lián)油苗免疫后又開始緩慢上升，50日齡采用禽流感H5+H9二價活疫苗第3次加強免疫后抗體很快升高，并長時間維持上升趨勢，到120日齡時最高為7.78log2，180日齡時仍達7.57log2。因此建議禽流感免疫最好使用二價活疫苗。

3 討論與小結(jié)

3.1 試驗證實雛雞出殼后不論是雞新城疫還是禽流感H9母源抗體都在10日齡前維持較好水平，隨雛雞日齡的增大，母源抗體的水平也逐漸下降，雞新城疫、禽流感H9亞型母源抗體水平35日齡已基本消失。因此，雞場確定免疫程序的首免日齡，既要避開母源抗體的高峰期，又不能遲于母源抗體保護臨界值。

3.2 從試驗結(jié)果看出雛雞新城疫抗體1～5日齡逐漸升高，這與雛雞吸收卵黃囊內(nèi)抗體有關(guān)。隨著卵黃囊的消失，母源抗體逐漸下降，而7日齡免疫后沒有產(chǎn)生足夠的抗體，21日齡降到4.69log2，所以雞新城疫二次免疫在21日齡為佳。21日齡免疫后抗體持續(xù)上升，期間35日齡使用新城疫+禽流感H9二聯(lián)油苗免疫、110日齡使用新支二聯(lián)活苗（ND7+IB120)、新支減三聯(lián)油苗免疫均對雞新城疫抗體的影響不大，到120日齡后又呈下降趨勢。因此，120～130日齡進行第三次免疫能獲得長時間保護，到180日齡時抗體水平還可達到7.46log2，進入下次免疫周期。

禽流感H9抗體在7日齡免疫后有1周的上升期，此后15～35日齡逐漸下降，到基本消失，因此，應(yīng)在14日齡時開展首次免疫。35日齡、50日齡2次免疫后呈連續(xù)上升趨勢，到120日齡仍能維持高峰，180日齡時保持在7.57log2，所以120～130日齡使用新城疫、禽流感（H9亞型）二聯(lián)活疫苗免疫即可順利進入下次免疫周期。

3.3 根據(jù)試驗結(jié)果結(jié)合當?shù)厮魹豕请u保種場現(xiàn)有防疫工作實際，推薦適合的免疫程序（見表3）。

表3 他留烏骨雞保種場推存免疫程序

使用疫苗接種應(yīng)充分考慮雞場的生物安全措施，只有完善的生物安全措施，才能使雞群獲得更長的免疫保護期。

3.4 臨床監(jiān)測抗體是確定免疫時間最可靠、最直接的依據(jù)建議他留烏骨雞種保種場每年要定期開展免疫抗體監(jiān)測，適時調(diào)整免疫程序，科學、合理做好防控，逐步開展疫病凈化，達到凈化示范場目標。