李玉華 鄧天勤 韓立薇黃麗艷 吳穗妹

1.國家衛(wèi)生健康委員會(huì)男性生殖與遺傳重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/廣東省生殖科學(xué)研究所（廣東省生殖醫(yī)院），廣東 廣州 510600；2.深圳市婦幼保健院生殖中心，廣東 深圳 518000

隨著生物技術(shù)的不斷發(fā)展，體外受精-胚胎移植（IVF-EF）技術(shù)在臨床中的應(yīng)用逐漸廣泛，大大提高了不孕癥患者的臨床妊娠率，但在各種因素作用下，仍有部分女性在接受多次優(yōu)質(zhì)胚胎移植后，無法獲得臨床妊娠，出現(xiàn)反復(fù)種植失?。≧IF）的現(xiàn)象，這不僅給患者帶來了沉重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)，也使患者背負(fù)著來自社會(huì)輿論及家庭的雙重壓力，嚴(yán)重影響身心健康［1］。因此，提高臨床妊娠率是當(dāng)前醫(yī)學(xué)界輔助生殖技術(shù)發(fā)展中亟待解決的重難點(diǎn)問題。RIF病因復(fù)雜，有研究指出［2］，女性反復(fù)不孕、反復(fù)流產(chǎn)與子宮內(nèi)膜的炎性改變密切相關(guān)，但是關(guān)于RIF與慢性子宮內(nèi)膜炎的關(guān)系的研究尚不多見?；诖耍狙芯刻接懽訉m內(nèi)膜白細(xì)胞分化抗原38（CD38）、白細(xì)胞分化抗原138（CD138）表達(dá)水平與不明原因RIF的關(guān)系，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 基礎(chǔ)資料 回顧性選取我院與深圳市婦幼保健院生殖中心于2020年1月至2021年3月收治的120例行IVF-EF及單精子卵胞漿內(nèi)顯微注射-胚胎移植（ICSI-ET）助孕的患者的臨床資料，根據(jù)是否獲得妊娠，將行胚胎移植術(shù)≥2個(gè)周期均未獲得妊娠者納入RIF組（72例）、第一周期行IVF-ET/ICSI-ET后獲得妊娠者納入對(duì)照組（48例）。RIF組年齡25～45歲，平均（30.77±3.95）歲；基礎(chǔ)卵泡刺激素（FSH）2～8 mIU/mL，平均（5.48±2.02）mIU/mL。對(duì)照組年齡25～43歲，平均（30.25±3.48）歲；基礎(chǔ)FSH3～8 mIU/mL，平均（5.48±2.12）mIU/mL。兩組一般資料經(jīng)比較無明顯差異（P＞0.05），可比較。納入標(biāo)準(zhǔn)：臨床資料完整者；入組前未使用過激素類藥物者；月經(jīng)周期規(guī)則、基礎(chǔ)內(nèi)分泌無異常者等。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并自身免疫性疾病者；合并其他影響生殖功能疾病者；合并子宮畸形者等。本院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)已審定并批準(zhǔn)實(shí)施此項(xiàng)研究。

1.2 方法 入組后，所有研究對(duì)象均于月經(jīng)干凈2～5d，完善術(shù)前檢查，行宮腔鏡檢查并行子宮內(nèi)膜活檢。術(shù)中宮內(nèi)膜活檢取材位置，根據(jù)慢性子宮內(nèi)膜炎典型表現(xiàn)形式，內(nèi)膜呈草莓癥、微小息肉、太陽癥等典型征象，用活檢鉗精準(zhǔn)取材，免疫組化檢查。陽性判讀標(biāo)準(zhǔn)：漿細(xì)胞膜在CD38、CD138免疫組化染色后，每400倍視野下，子宮內(nèi)膜間質(zhì)中顯示出5個(gè)以上典型漿細(xì)胞，即為陽性，每視野下小于5枚漿細(xì)胞，則顯示陰性。采用免疫組化試劑盒（協(xié)和干細(xì)胞基因工程有限公司；國械注準(zhǔn)20163400781；規(guī)格：50人次/盒）測定。

1.3 觀察指標(biāo) ①比較RIF組與對(duì)照組子宮內(nèi)膜CD38、CD138陽性表達(dá)人數(shù)。②比較RIF組不同種植失敗次數(shù)患者CD38、CD138陽性表達(dá)人數(shù)。③比較RIF組不同種植失敗次數(shù)患者CD38、CD138表達(dá)量。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)軟件分析數(shù)據(jù)，計(jì)數(shù)資料以［例（%）］表示，采用χ2檢驗(yàn)，多組間計(jì)數(shù)資料比較采用χ2趨勢檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 RIF組與對(duì)照組子宮內(nèi)膜CD38、CD138陽性表達(dá)人數(shù) RIF組中，子宮內(nèi)膜CD38、CD138、CD38和CD138表達(dá)為陽性的患者占比高于對(duì)照組（P＜0.05）。見表1。

表1 RIF組與對(duì)照組子宮內(nèi)膜CD38、CD138陽性表達(dá)人數(shù)［例（%）］

2.2 RIF組不同移植失敗次數(shù)患者CD38、CD138陽性人數(shù) 在移植失敗2次的患者中，CD38陽性人數(shù)最高，在移植失敗3次的患者中，CD138陽性人數(shù)最高，在移植失敗＞3次的患者中，CD38和CD138陽性表達(dá)率最高（均P＜0.05）。見表2。

表2 RIF組不同移植失敗次數(shù)患者CD38、CD138陽性表達(dá)率［例（%）］

2.3 RIF組不同移植失敗次數(shù)患者CD38、CD138表達(dá)量 與移植失敗2次的患者比，移植失敗3次、＞3次患者的CD38、CD138表達(dá)量均較高，且移植失?。?次的CD38、CD138表達(dá)量高于移植失敗3次（P＜0.05）。見表3。

表3 RIF組不同移植失敗次數(shù)患者CD38、CD138表達(dá)量

3 討論

在IVE-EF周期中，RIF出現(xiàn)的概率在10%左右，既往針對(duì)該病的研究中，多從免疫功能、機(jī)體代謝水平、子宮解剖結(jié)構(gòu)等角度尋找病因，在篩查出母體免疫水平、機(jī)體代謝等問題后，慢性子宮內(nèi)膜炎引起的胚胎種植失敗引起了醫(yī)學(xué)界的關(guān)注［3］。子宮內(nèi)膜炎的發(fā)病與病原菌微生物感染密切相關(guān)，但慢性子宮內(nèi)膜炎與急性子宮內(nèi)膜炎是不同的病原體感染引起。存在炎癥的子宮內(nèi)膜都有免疫球蛋白抗體分泌及漿細(xì)胞浸潤，子宮內(nèi)膜的免疫環(huán)境被炎性因子破壞，從而促進(jìn)免疫反應(yīng)和炎癥反應(yīng)殺滅精子，導(dǎo)致子宮內(nèi)膜容性下降，胚胎種植、發(fā)育受阻［4］。因此早期發(fā)現(xiàn)慢性子宮內(nèi)膜炎，并采取有效的干預(yù)措施，對(duì)提高RIF患者的妊娠率十分關(guān)鍵。

CD138屬于重組蛋白，是漿細(xì)胞最特異的指標(biāo)，是一種分層上皮與簡單上皮中表達(dá)的跨膜蛋白聚糖，其水平升高提示患者子宮內(nèi)膜出現(xiàn)炎性改變，不利于胚胎移植、發(fā)育，臨床中采用免疫組織化學(xué)染色可最大幅度提升漿細(xì)胞的檢出率，其檢驗(yàn)結(jié)果大多提示機(jī)體存在慢性子宮內(nèi)膜炎癥的發(fā)生，其陽性表達(dá)率越高可導(dǎo)致患者的種植失敗次數(shù)越多［5-6］。CD38屬于定位于膜上的糖蛋白，在細(xì)胞及組織中均可被檢測到，尤其是在有絲分裂原活化淋巴細(xì)胞、分泌免疫球蛋白的漿細(xì)胞中含量較高，其可通過調(diào)控細(xì)胞鈣離子，對(duì)細(xì)胞生長、胰島素釋放、T細(xì)胞激活產(chǎn)生影響，進(jìn)而發(fā)揮免疫抑制作用，其水平升高可促進(jìn)炎性因子表達(dá)，加重炎癥反應(yīng)［7］。漿細(xì)胞是不具備分化增值能力的終末細(xì)胞，由B淋巴細(xì)胞分化增殖生成，在正常子宮內(nèi)膜中，B淋巴位于內(nèi)膜基底層，且占比較少。當(dāng)子宮內(nèi)膜出現(xiàn)炎性改變時(shí)，B淋巴細(xì)胞在內(nèi)膜功能層浸潤、聚集，導(dǎo)致內(nèi)膜功能層出現(xiàn)漿細(xì)胞浸潤。

本研究結(jié)果顯示，RIF組CD38、CD138、CD38或CD138表達(dá)為陽性的患者占比均高于對(duì)照組，且在RIF組患者中，移植失敗次數(shù)越多，CD38或CD138陽性表達(dá)率也越高，提示子宮內(nèi)膜炎性改變的程度越嚴(yán)重，胚胎種植越困難，種植失敗次數(shù)越多。

綜上，CD38、CD138在不明原因RIF患者體內(nèi)呈高陽性表達(dá)率，且隨著其水平升高，種植失敗次數(shù)就越多，可將其作為對(duì)行IVF-EF及ICSI-ET助孕的患者胚胎種植結(jié)局的評(píng)估指標(biāo)，臨床中可通過檢測CD38、CD138水平變化，輔助制定防治不明原因RIF措施，值得臨床中進(jìn)一步推廣應(yīng)用。