鐘萍 張軍 凌華

近30年來(lái)我國(guó)肺癌死亡率增加了465%，其中非小細(xì)胞肺癌(Non small cell lung cancer，NSCLC)占80%～85%[1]。既往研究表明，即便是Ⅰ期患者，手術(shù)治療后仍有30%死于癌癥的復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移[2]。故NSCLC的早期診斷和治療非常關(guān)鍵。糖類抗原(Carbohydrate antigen 125，CA125)在癌變后，其血清含量會(huì)升高[3]；基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑-1(Tissue inhibitor of metalloproteinase-1，TIMP-1)可特異性地與MMP-9結(jié)合，并抑制其活性，從而對(duì)腫瘤的生長(zhǎng)表現(xiàn)為負(fù)性調(diào)節(jié)作用[4]；淀粉樣蛋白A(serum amyloid，SAA)不僅與淀粉樣變有關(guān)，還與惡性腫瘤存在著密切關(guān)系[5]。國(guó)內(nèi)已有部分研究表明，上述血清指標(biāo)均對(duì)于NSCLC具有較好的診斷價(jià)值，并認(rèn)為可能會(huì)促進(jìn)NSCLC患者腫瘤的侵襲、轉(zhuǎn)移[3-5]，但目前尚缺乏大量臨床研究去證實(shí)。故本研究旨在探討NSCLC的臨床病理特點(diǎn)、預(yù)后情況與血清CA125、TIMP-1、SAA水平之間的關(guān)系。

資料與方法

一、一般資料

回顧性分析本院2016年5月—2018年12月診治的96例NSCLC患者(研究組)臨床資料。納入標(biāo)準(zhǔn)：①均符合NSCLC診斷標(biāo)準(zhǔn)[6]，具體如下：既往存在長(zhǎng)期吸煙史或不良空氣環(huán)境生活史；臨床癥狀以咳嗽、咯血、胸痛、肺部炎癥等為主；常規(guī)胸片或CT檢查顯示肺部存在毛刺、分葉、密度不均的腫塊；支氣管鏡檢查提示存在異型細(xì)胞。②均在治療前1周采用電化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)血清CA125，采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)血清TIMP-1、SAA水平；③患者臨床資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：①繼發(fā)轉(zhuǎn)移性肺癌患者；②檢查時(shí)發(fā)現(xiàn)合并其他惡性腫瘤者；③隨訪(2019年2月—2021年2月)過(guò)程中的失訪人員。另選擇同期本院收治的肺部良性病變患者102例(A組)以及健康體檢者98例(B組)，三組研究對(duì)象均衡可比(P>0.05)(見(jiàn)表1)。本研究已經(jīng)本院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)(2022-05-13)，患者均知情同意。

表1 三組研究對(duì)象一般資料對(duì)比

二、研究方法

比較A組、B組以及研究組對(duì)象血清CA125、TIMP-1、SAA水平；收集研究組患者性別、年齡、TNM分期、病理類型、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、分化程度等臨床病理特征，并分析上述血清指標(biāo)與研究組患者臨床病理特征的關(guān)系；研究組患者均參照相關(guān)指南給予4～6個(gè)療程化療，化療方案：肺鱗癌患者采用多西他賽聯(lián)合順鉑方案：于化療前1 d靜脈滴注地塞米松(吉林敖東藥業(yè)集團(tuán)延吉股份有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字H22022888)8mg，2次/d，連用3d；并于化療第1d靜脈滴注多西他賽(揚(yáng)子江藥業(yè)集團(tuán)有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字H20213629)70 mg/m2，化療第2～4d靜脈滴注順鉑(云南植物藥業(yè)有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字H53021678)75mg/m2。肺腺癌患者采用培美曲塞聯(lián)合順鉑方案：化療前1d靜脈滴注地塞米松4 mg，2次/d，連用3d；并于化療第1d靜脈滴注培美曲塞(吉斯美(武漢)制藥有限公司/吉斯美(武漢)制藥有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字H20213204)500 mg/m2，化療第2～d天靜脈滴注順鉑75 mg/m2。均完成2年隨訪調(diào)查，以總生存時(shí)間(OS，疾病診斷到末次隨訪或患者死亡時(shí)間)作為觀察終點(diǎn)，根據(jù)患者預(yù)后狀態(tài)分為生存組和死亡組，比較兩組患者血清CA125、TIMP-1、SAA水平，并采用Cox回歸分析影響NSCLC患者預(yù)后的因素。

三、實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)

清晨抽取空腹靜脈血5 mL(其中研究組、A組入院次日，B組體檢當(dāng)日)。以400 r/min 10 min的條件進(jìn)行離心分離，取上層清液于4℃冷凍保存。血清CA125水平采用電化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)，液相試劑為M11單克隆抗體，固相試劑為OC125單克隆抗體，儀器選用全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀(深圳邁瑞醫(yī)療，型號(hào)為CL-6000i)，取樣品50 μl、液相試劑50 μl、固相試劑250 μl，于37℃溫浴7 min。沖洗，然后加入堿性雙氧水激發(fā)反應(yīng)，檢測(cè)發(fā)光強(qiáng)度，其強(qiáng)度與樣品濃度成正比。血清TIMP-1、SAA水平采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)，具體操作步驟為，在微孔反應(yīng)板中每孔加入待檢標(biāo)本50 μl，設(shè)陰陽(yáng)性對(duì)照各2孔、空白1孔，加入相應(yīng)試劑；每孔加入酶結(jié)合物，37℃孵育30 min，洗板5次；每孔加顯色劑，37℃孵育15 min；每孔加終止液1滴，采用酶標(biāo)儀讀數(shù)。

四、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

SPSS20.0統(tǒng)計(jì)軟件分析數(shù)據(jù)。性別為計(jì)數(shù)資料，以n(%)表示，行χ2檢驗(yàn)，進(jìn)一步兩兩比較行分割χ2檢驗(yàn)；血清CA125、TIMP-1、SAA水平均為計(jì)量資料，以表示，三組間比較行單因素-方差分析，進(jìn)一步兩兩比較行LSD-t檢驗(yàn)；不同病理特征以及預(yù)后患者的血清CA125、TIMP-1、SAA水平比較行t檢驗(yàn)；采用Cox風(fēng)險(xiǎn)回歸模型篩選影響DLBCL預(yù)后的危險(xiǎn)因素，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

一、三組研究對(duì)象血清CA125、TIMP-1、SAA水平比較

研究組患者血清CA125、TIMP-1、SAA水平均顯著高于A組、B組(P<0.05)(見(jiàn)表2)。

表2 三組研究對(duì)象血清CA125、TIMP-1、SAA水平比較

二、血清CA125、TIMP-1、SAA水平與臨床病理特征關(guān)系

不同性別、年齡、病理類型以及分化程度患者血清CA125、TIMP-1、SAA水平比較無(wú)顯著差異，不同淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況患者血清CA125水平比較無(wú)顯著差異(P>0.05)。但淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者血清TIMP-1、SAA水平高于無(wú)轉(zhuǎn)移患者，Ⅲ～Ⅳ期患者血清CA125、TIMP-1、SAA水平高于Ⅰ～Ⅱ期患者(P<0.05)(見(jiàn)表3)。

表3 血清CA125、TIMP-1、SAA水平與臨床病理特征關(guān)系

三、不同預(yù)后患者血清CA125、TIMP-1、SAA水平比較

死亡組患者血清CA125、TIMP-1、SAA水平均顯著高于生存組(P<0.05)(見(jiàn)表4)。

表4 不同預(yù)后患者血清CA125、TIMP-1、SAA水平比較

四、NSCLC患者預(yù)后影響因素Cox回歸分析

以NSCLC是否死亡(死亡=1，生存=0)為因變量，以患者年齡(<60歲=1，≥60歲=2)、性別(男=1，女=2)、病理類型(鱗癌=1，腺癌=2)、分化程度(中、高分化=1，低分化=2)、TNM分期(Ⅰ～Ⅱ期=1，Ⅲ～Ⅳ期=2)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(有=1，無(wú)=2)、血清CA125、TIMP-1以及SAA水平(直接代入實(shí)際檢測(cè)水平值)為自變量，單因素以及多因素Cox回歸分析均證實(shí)CA125、TIMP-1、SAA水平的異常升高、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及Ⅲ～Ⅳ期均是導(dǎo)致NSCLC患者預(yù)后差的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(P<0.05)(見(jiàn)表5)。

表5 NSCLC患者預(yù)后影響因素Cox回歸分析

討 論

近年來(lái)，隨著細(xì)胞和分子生物學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，人們對(duì)于NSCLC的發(fā)病、侵襲和轉(zhuǎn)移機(jī)制的研究不斷深入，并取得了一些階段性的研究成功。但NSCLC的發(fā)病率和死亡率仍未有明顯下降。故探索和研發(fā)新的血清腫瘤標(biāo)志物對(duì)于NSCLC的診斷以及預(yù)后評(píng)估至關(guān)重要。NSCLC的發(fā)生發(fā)展與多種癌基因和抑癌基因有關(guān)，同時(shí)該癌癥還具有分階段變化的獨(dú)特生物學(xué)行為特點(diǎn)。

腫瘤標(biāo)志物存在或者水平變化可較好的反映腫瘤的性質(zhì)、發(fā)生、發(fā)展等[7]。CA125首次被發(fā)現(xiàn)是在1981年，通過(guò)卵巢漿液性腺囊瘤與骨髓瘤雜交獲得，主要儲(chǔ)存于細(xì)胞內(nèi)，在正常人血清中含量極低。但一旦人體組織或細(xì)胞發(fā)生惡變，可立刻進(jìn)入血液系統(tǒng)中。SAA主要由肝細(xì)胞分泌，是一種急性時(shí)相反應(yīng)蛋白，主要運(yùn)載高密度脂蛋白。研究發(fā)現(xiàn)，SAA與細(xì)胞粘附、增殖有關(guān)，并在部分惡性腫瘤中扮演重要角色[8-9]。燕丕宏[10]等人研究將SAA與CA125、CEA等血清腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合用于肺癌診斷，結(jié)果顯示均可較好的鑒別肺部的良、惡性腫瘤，但聯(lián)合的效果更好。本研究以健康者、肺部良性病變以及NSCLC三組對(duì)象為基準(zhǔn)，分別對(duì)其血清CA125、SAA水平進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果顯示研究組患者血清CA125、SAA水平均顯著高于A組、B組，與上述研究結(jié)果相一致，綜合分析上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果，血清CA125、SAA可能在NSCLC組織中起到癌基因的作用。進(jìn)一步對(duì)NSCLC患者臨床病理特征以及預(yù)后進(jìn)行分析，顯示淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者血清SAA水平高于無(wú)轉(zhuǎn)移患者，Ⅲ～Ⅳ期患者血清CA125、SAA水平高于Ⅰ～Ⅱ期患者，死亡組患者血清CA125、SAA水平均顯著高于生存組，同時(shí)Cox回歸分析均證實(shí)CA125、SAA水平的異常升高均是導(dǎo)致NSCLC患者預(yù)后差的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，提示血清CA125、SAA水平均與NSCLC的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。分析上述結(jié)果產(chǎn)生原因，CA125主要在細(xì)胞內(nèi)合成和儲(chǔ)存，NSCLC的發(fā)生會(huì)對(duì)正常細(xì)胞組織結(jié)構(gòu)產(chǎn)生破壞，從而導(dǎo)致其中儲(chǔ)存的CA125大量被釋放至血液中，同時(shí)血清CA125的半衰期較短，故CA125水平變化可較好的反映腫瘤的近期變化狀態(tài)[11-12]。血清SAA可通過(guò)抑制腫瘤細(xì)胞與基質(zhì)蛋白的結(jié)合，誘導(dǎo)MMPs的表達(dá)，從而在腫瘤的轉(zhuǎn)移、浸潤(rùn)中發(fā)揮重要作用[13]。

TIMP-1是肺癌組織中常見(jiàn)的腫瘤標(biāo)志物，可參與講解細(xì)胞外基質(zhì)的調(diào)節(jié)過(guò)程，從而增強(qiáng)腫瘤的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移。李佳[14]等人通過(guò)將肺癌與健康者體內(nèi)血清TIMP-1、NNP-9水平進(jìn)行比較分析，發(fā)現(xiàn)兩者可相互作用，共同參與肺癌的發(fā)生、侵襲、轉(zhuǎn)移。本研究結(jié)果顯示研究組患者血清TIMP-1水平均顯著高于A組、B組，提示血清TIMP-1可能也在NSCLC組織中起到癌基因的作用。本研究還發(fā)現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、Ⅲ～Ⅳ期患者血清TIMP-1水平均較高，Cox回歸分析也證實(shí)TIMP-1異常升高，是導(dǎo)致NSCLC患者預(yù)后差的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。筆者認(rèn)為，TIMPs是MMPs的抑制劑，可能是通過(guò)與后者結(jié)合降低其活性，從而對(duì)MMPs降解基底膜的過(guò)程產(chǎn)生抑制作用，從而抑制腫瘤細(xì)胞沿著缺損的基底膜以及空隙進(jìn)行浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移[15]。

綜上所述，血清CA125、TIMP-1、SAA水平與NSCLC患者臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等臨床病理特征密切相關(guān)，其表達(dá)水平增高，是患者預(yù)后差的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。本研究需進(jìn)一步完善和改進(jìn)，增加體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)，深入探索CA125、TIMP-1、SAA在NSCLC發(fā)生發(fā)展中的作用機(jī)制。